The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

Shiang-Jong Tzeng

doi:10.3791/54582

İzolasyon, Farklılaşma ve Niceleme İnsan Kanı B Hücreleri Antikor salgılayan: ELISPOT Hümoral Bağ...

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

İzolasyon, Farklılaşma ve Niceleme İnsan Kanı B Hücreleri Antikor salgılayan: ELISPOT Hümoral Bağışıklık bir Fonksiyonel Göstergesi'nin olarak

Full Text

16,020 Views

08:26 min

December 14, 2016

DOI: 10.3791/54582-v

Shiang-Jong Tzeng¹

¹Graduate Institute of Pharmacology, College of Medicine,National Taiwan University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

İnsan periferik kanı, humoral immün yanıtın değerlendirilmesi için yaygın olarak kullanılır. Burada, insan B hücrelerini periferik kandan izole etme, insan B hücrelerini kültürde antikor (Ab) salgılayan B hücrelerine (ASC'ler) ayırma ve bir ELISpot testi ile toplam IgM ve IgG-ASC'leri numaralandırma yöntemleri açıklanmaktadır.

Bu ELISpot metodolojisinin genel amacı, kandan İnsan Antikoru salgılayan B hücrelerinin miktarının belirlenmesine izin vermektir. Bu yöntem, biyomedikal alanda B hücrelerinin immünolojisi ve aşı araştırmaları ile ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, anti-kor salgılayan B hücrelerinin tek hücre düzeyinde tespit edilmesine ve ölçülmesine izin vermesidir.

Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan bir yüksek lisans öğrencisi olan Tsung-Chih Tseng olacak. Potasyum takviyeli EDTA içeren 15 ml'lik bir tüpe median kübital venden 10 ml'lik bir kan örneği alındıktan hemen sonra, pıhtı oluşumunu önlemek için tüpü birkaç kez ters çevirin. Daha sonra, oda sıcaklığında beş dakikalık bir inkübasyon için hücrelere 35 ml otoklavlanmış kırmızı kan hücresi lizis tamponu ekleyin.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

Immunology Sayı 118 Tıp İnsan tedavisinde hümoral immünite periferal kan mononükleer hücreleri B hücre İzolasyon farklılaşma antikor salgılayan hücreler enzim-bağlı immünospot enzime bağlı Immunoabsorbance deneyi akım sitometrisi