Name: Multipl Skleroz Fare Modeli Progressive Nörolojik Engellilik Ölçümü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Öğrenin, Rotarod testi ile TMEV enfekte farelerde ilerleyici nörolojik engelliliği ölçmek için optimize edilmiş protokolü. Bu yöntem, multipl skleroz tedavilerinin etkinliğini değerlendirmede objektif veri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu çalışmalar için kullanılan farelere gösterdikleri uzman bakımı için Dartmouth'daki Karşılaştırmalı Tıp ve Araştırma Merkezi (CCMR) personeline teşekkür eder. Yazarlar ayrıca Emily Clough'a mükemmel idari desteği için teşekkür ediyor.

Tüm hayvan çalışmaları Dartmouth Tıp Geisel Okulu&#39;nda Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından incelenen ve onaylanan protokoller kullanır. 1. Fare Modeli <ol><li> TMEV Bağlı Demyelinizan Hastalığının indüksiyon <ol><li> rahat bir çalışma alanı için raftan 4- 6 haftalık dişi SJL / jhan fareler içeren kafesleri taşıyın. Klinik ve histolojik hastalığın bireysel değerlendirilmesi için izin vermek için (bir kulak etiketi veya kulak yumruk gibi) fareler işaretleyin. </li><li> 29-gauge insülin şırınga ve iğne içine PBS; TMEV enfekte stok (PFU 2 x 10 6 plak oluşturucu birim) 30 ul çizin. </li><li> Anestezi gazı makinesini hazırlayın: prosedürün süresince oksijen ve izofluran yeterli miktarda varlığını sağlamak için sistemi kontrol ediniz. </li><li> 1 l / dk akış ölçer açın. indüksiyon odasına hayvan koyun ve üst mühür. va açma% 3,5 porizer ve yatarak kadar hayvan izleyin. </li><li> odasından gelen hayvan çıkarın ve yeterli anestezi sağlamak için Kapkaççı kısma fare test edin. Güçlü bir tutam yanıt eksikliği yeterli anestezi gösterir. </li><li> % 70 izopropil alkol ile enjeksiyon bölgesini temizleyin. </li><li> Serbest enjeksiyon (Şekil 1) sağ serebral hemisferde içine TMEV bulaşmasını stokunun 30 ul enjekte edilir. Enjeksiyon yeri yaklaşık yarım göz ve kulak hattı arasında sadece orta hat kapalı. </li><li> (- 5 dk genellikle 3) holding kafes kez tamamen uyanık ve hareketli fare dönün. </li><li> Hastalığın gelişme bir hızla bağlı olarak, 3 ila 6 ay TMEV enfeksiyonundan sonra kan kaybından ya da kardiyak perfüzyon fareler öldürülür. </li></ol></li></ol> 2. rotarod Analizi <ol><li> rotarod Aparatı <ol><li> önce TMEV enfeksiyon deney fareleri onları tanımak içinMakine ve normal bazal denge koordinasyon ve motor kontrolünü değerlendirmek için. </li><li> -5 Günlerde adaptasyon protokolü sonrası enfeksiyon (; yani, 5 gün TMEV enfeksiyondan önce dpi) başlatın. </li><li> fareler onları ortama uyum sağlamak amacıyla, en az 30 dakika önce rotarod için test için test odasına gelmesini bekleyin. </li><li> Rotarod ünitesi ve bilgisayar hem de takılı ve birbirlerine (Şekil 2) bağlı olduğundan emin olun. </li><li> Tablo 1 &#39;de tarif edildiği gibi, -5 dpi eğitim protokolü parametrelerle rotarod önceden ayarlanmıştır. </li><li> tarih ve kimlik bilgileri ile çalışma dosyasını kaydedin. </li><li> Rotarod bitişik bir tabloya raftan test edilecek kadro içeren kafesi hareket ettirin. Fareler genellikle 4 mangaları test edilmektedir. </li><li> operatörden uzak bakan, kuyruk tarafından fare Pick up ve çubuk üzerine yerleştirin. Dördüncü fare aracılığıyla saniye tekrarlayın. Fare fal halindetüm fareler konumuna gelene kadar ls veya atlar, rotarod üzerindeki şeritte geri yerleştirin. Herhangi fareler operatörü yüz etrafında dönerse görmezden. </li><li> Bütün fareler yükledikten sonra, denemeyi başlatmak için &quot;Enter&quot; tuşuna basın. sayaçlarını otomatik olarak başlayacak gözlemlemek ve her kulvar için ekranda dakika (rpm) dönmeler. <ol><li> Her bir hayvan, çubuk düştükçe, hayvan çubuk üzerinde kalan düşme zaman çubuğun hızı, hem de süreyi kaydedin. çubuk geçen hayvan çubuk montaj düştü kadar dönmeye devam edecektir. </li></ol></li><li> Tüm fareler düşmüş sonra, çubuk herhangi bir dışkı boli ve idrar çıkarmak için bir doku kullanın. İdrar ve dışkı maddesinin bulunması, kavrama farelerin çubuğu yeteneğini etkileyebilir. <ol><li> 3 dakikalık bir dinlenmeden sonra, farelere üçüncü deneme sonra ikinci ve vermek. Tek deneme başına maksimum zaman 240 saniyedir. Her test gündüz 3 çalışmaların toplam yönetme. </li></ol></li><li> evlerine kafesine fareler dönün ve tekrar rafa onları geri. Deneysel oturumun sonunda, makinenin kapalı tüm dışkı çıkarmak için sabun ve su ile rotarod temizleyin. </li><li> etanol% 70 ile temiz taban plakasını silin. dezenfekte etmek için klor dioksit ile tüm makineyi aşağı püskürtün. </li><li> 4 -, - 3, 2 - ve - günlerde 1 PI, Tablo 1 &#39;de tarif edildiği gibi, uygun bir eğitim protokolü parametrelerle rotarod önceden ayarlanmış ve tekrar 2.1.12 2.1.2 adımları tekrarlayın. </li><li> Bazal önlemleri alındıktan sonra, TMEV ile fareleri enfekte. 6 gün pi iyileşme süresini bekleyin. </li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2"> Protokol </td><td rowspan="2"> Test günü </td><td rowspan="2"> Sıklık </td><td rowspan="2"> Başlangıç hızı (rpm) </td><td rowspan="2"> maksimumHızı (rpm) </td><td> Hızlanma </td><td> denemeler </td><td> ITI </td></tr><tr><td> (rpm / sn) </td><td> (N x sn) </td><td> (dakika) </td></tr><tr><td rowspan="4"> Eğitim </td><td> - 5 dpi </td><td> 1 gün </td><td> 1 </td><td> 12 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 sn </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 4 dpi </td><td> 1 gün </td><td> 1 </td><td> 13 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 sn </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 3 dpi </td><td> 1 gün </td><td> 1 </td><td> 14 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 sn </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 2; - 1 dpi </td><td> 1 gün </td><td> 5 </td><td> 40 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 sn </td><td> 3 </td></tr><tr><td rowspan="2"> Deneysel </td><td> +7 Itibaren 50 dpi </td><td> 2 hafta </td><td>5 </td><td> 40 </td><td> 30/05 </td><td> 3x240 sn </td><td> 3 </td></tr><tr><td> +51 Itibaren 150 dpi </td><td> 1 hafta </td><td> 5 </td><td> 40 </td><td> 30/05 </td><td> 3x240 sn </td><td> 3 </td></tr></tbody></table> Tablo 1: Eğitim ve Deneysel Protokolleri rotarod Parametreleri. <ol start="2"><li> Rotarod Deneysel Protokol <ol><li> Tablo açıklandığı gibi 7 dpi üzerinde, uygun deneysel protokol parametreleri ile rotarod önceden ayarlanmış 1. Tekrarlayın 2.1.10 için 2.1.2 adımları. </li><li> Deneme içerisinde 3. sonunda, her fare tartmak ve bilgi formunda vücut ağırlığının not edin. Temiz ve adımlar 2.1.11 ve 2.1.12 göre rotarod dezenfekte. </li><li> yukarıda tarif edildiği gibi, 6 hafta boyunca haftada iki defa fareler test edin. Aynı experimenta ile haftada bir kez fareler, 8,9 (fareler büyük olasılıkla bir plato safhasına ulaşan aldığınız) testi 6 hafta sonral protokolü. Gerçek test protokolü belirli bir hastalık seyrine bağlı olarak, 150 gün ortalama sürer. </li></ol></li><li> Nörolojik Fonksiyonel İndeksi <ol><li> Bir tablo dosyasına ham veri ihracat ve sonuçları analiz eder. </li><li> Çalışma süresi (Şekil 3A) olarak Ekspres veriler: bu normal çalışma süresi artı pasif rotasyon süresi eksi dönme gecikme süresi (Tablo 2) 10. Günde üç çalışmanın ortalama çalışma süresini hesaplayın. </li><li> Nörolojik fonksiyonel indeksi (Şekil 3B NFI) gibi verileri ifade eder. <ol><li> Her bir fare temel performans eşiğini hesaplayabilir. Bazal performans eşiği + 15 + 45 pi 6,7 güne çalışan tüm zamanların ortalaması olarak belirlenmiştir. </li><li> Belirli bir fare 6,7 bazal performansı eşik bölü üç en son ortalama çalışma süreleri ortalaması olarak UOE hesaplayın &lt;/ Sup&gt;. NOT: 135 sn, o fare için NFI olarak günün + 72 fare, + 76 için çalışan kez test ve + 79 pi 55 sn, 45 sn ve 50 sn ve aynı fare için temel zaman ise 79 dpi üzerinde [(45 + 50 + 55) / 3] / 135 veya 0.37 olacak. </li></ol></li><li> Tek bir deney için bir nüfus değerine göre NFI verileri ayarlayın: (Şekil 3C adjNFI) ayarlanmış bir NFI gibi veri ifade eder. <ol><li> Bu belirli bir günde plasebo ile tedavi edilen grup ile elde edilen ortalama NFI göre NFI değerine bölünmesiyle adjNFI hesaplayın. </li></ol></li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> dönem </td><td> Tanım </td></tr><tr><td> Normal çalışma süresi </td><td> Fare aktif dönen çubuk üzerinde çalışan harcadığını toplam süre, yani gecikme düşmeye. </td></tr><tr><td> Pasif rotasyon zamanı </td><td> birmontaj zaman fare pasif rotasyon modunda çubuk üzerinde kalmıştır. </td></tr><tr><td> Rotasyon gecikme süresi </td><td> Fare pasif rotasyon modu sırasında çubuk üzerinde kalan süre </td></tr><tr><td> Pasif dönüş modu </td><td> Fare çubuk kapmak ve ambulate zorunda kalmadan döndüğünde. </td></tr><tr><td> Toplam oturum süresi </td><td> toplam süre fare oturumu sırasında dönen çubuk üzerinde kalır. </td></tr><tr><td> Baseline performans </td><td> Ön hasar motoru performansı asgari performans eşiğini belirlemek için değerlendirilir. </td></tr><tr><td> Nörolojik fonksiyon indeksi (NFI) </td><td> Her fare motor performansı karşılaştırır klinik endeksi, yani kendi performansını en üst için herhangi bir zamanda, çalışma süresi. </td></tr><tr><td> Düzeltilmiş nörolojik fonksiyon indeksi (adjNFI) </td><td> Bir normalizasyon işlemi bir nüfus değeriyle NFI verileri değiştirmek uygulandığındaTek deney. </td></tr><tr><td> Nüfus değeri </td><td> Belirli bir günde sahte tedavi edilen grupta elde edilen ortalama NFI değeri. </td></tr></tbody></table> Tablo 2: Nörolojik Değer Düşüklüğü belirlememize Benimsenen rotarod Parametrelerinin Tanımları.

<ol><li>Lipton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theiler%27s+virus+infection+in+mice%3A+an+unusual+biphasic+disease+process+leading+to+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Theiler's virus infection in mice: an unusual biphasic disease process leading to demyelination.</a> Infect Immun. 11, 1147-1155 (1975).</li>
<li>Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPachner%2C+AR+%22A+Primer+of+Neuroimmunological+Disease%22">A Primer of Neuroimmunological Disease</a>. , Springer. New York. (2012).</li>
<li>Rustay, N. R., Wahlsten, D., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+genetic+susceptibility+to+ethanol+intoxication+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Assessment of genetic susceptibility to ethanol intoxication in mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2917-2922 (2003).</li>
<li>McGavern, D. B., Zoecklein, L., Drescher, K. M., Rodriguez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+neurologic+deficits+in+a+chronic+progressive+murine+model+of+CNS+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of neurologic deficits in a chronic progressive murine model of CNS demyelination.</a> Exp Neurol. 158, 171-181 (1999).</li>
<li>Zoecklein, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+comparison+of+demyelinating+disease+induced+by+the+Daniel%27s+strain+and+BeAn+strain+of+Theiler%27s+murine+encephalomyelitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Direct comparison of demyelinating disease induced by the Daniel's strain and BeAn strain of Theiler's murine encephalomyelitis virus.</a> Brain Pathol. 13, 291-308 (2003).</li>
<li>Gilli, F., Li, L., Campbell, S. J., Anthony, D. C., Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+B-cell+depletion+in+the+Theiler%27s+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of B-cell depletion in the Theiler's model of multiple sclerosis.</a> J Neurol Sci. 359, 40-47 (2015).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+FTY720+in+the+Theiler%27s+virus+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of FTY720 in the Theiler's virus model of multiple sclerosis.</a> J Neurol Sci. 308, 41-48 (2011).</li>
<li>Homanics, G. E., Quinlan, J. J., Firestone, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+and+behavioral+responses+of+inbred+C57BL%2F6J+and+strain+129%2FSvJ+mouse+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Be%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic and behavioral responses of inbred C57BL/6J and strain 129/SvJ mouse lines.</a> Pharmacol Biochem Be. 63, 21-26 (1999).</li>
<li>Balkaya, M., Krober, J. M., Rex, A., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cerebr+Blood+F+Met%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cerebr Blood F Met. 33, 330-338 (2013).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Columbus+Instruments+Rotamex-5+Manual%22">Columbus Instruments Rotamex-5 Manual</a>. , 1-33 (2005).</li>
<li>Dunham, N. W., Miya, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+note+on+a+simple+apparatus+for+detecting+neurological+deficit+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Pharm+Ass%22%5BJournal%5D)">A note on a simple apparatus for detecting neurological deficit in rats and mice.</a> J Am Pharm Ass. 46, 208-209 (1957).</li>
<li>Ulrich, R., Kalkuhl, A., Deschl, U., Baumgartner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Machine+learning+approach+identifies+new+pathways+associated+with+demyelination+in+a+viral+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Machine learning approach identifies new pathways associated with demyelination in a viral model of multiple sclerosis.</a> J Cell Mol Med. 14, 434-448 (2010).</li>
<li>Lynch, J. L., Gallus, N. J., Ericson, M. E., Beitz, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nociception%2C+sex+and+peripheral+nerve+innervation+in+the+TMEV+animal+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Analysis of nociception, sex and peripheral nerve innervation in the TMEV animal model of multiple sclerosis.</a> Pain. 136, 293-304 (2008).</li>
<li>Pirko, I., Johnson, A. J., Lohrey, A. K., Chen, Y., Ying, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+gray+matter+T2+hypointensity+correlates+with+disability+in+a+murine+model+of+MS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Deep gray matter T2 hypointensity correlates with disability in a murine model of MS.</a> J Neurol Sci. 282, 34-38 (2009).</li>
<li>Oleszak, E. L., Chang, J. R., Friedman, H., Katsetos, C. D., Platsoucas, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theiler%27s+virus+infection%3A+a+model+for+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Theiler's virus infection: a model for multiple sclerosis.</a> Clin Microbiol Rev. 17, 174-207 (2004).</li>
<li>McCarthy, D. P., Richards, M. H., Miller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+multiple+sclerosis%3A+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+Theiler%27s+virus-induced+demyelinating+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of multiple sclerosis: experimental autoimmune encephalomyelitis and Theiler's virus-induced demyelinating disease.</a> Methods Mol Biol. 900, Clifton, N.J. 381-401 (2012).</li>
<li>International Mouse Phenotyping Resource of Standardised Screens. , Available from:
 Rotarod. https://www.mousephenotype.org/impress/protocol/158/12 (2016).</li>
<li>Bohlen, M., Cameron, A., Metten, P., Crabbe, J. C., Wahlsten, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calibration+of+rotational+acceleration+for+the+rotarod+test+of+rodent+motor+coordination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Calibration of rotational acceleration for the rotarod test of rodent motor coordination.</a> J Neurosci Methods. 178, 10-14 (2009).</li>
<li>Hopkins, M. E., Bucci, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpreting+the+effects+of+exercise+on+fear+conditioning%3A+the+influence+of+time+of+day%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Interpreting the effects of exercise on fear conditioning: the influence of time of day.</a> Behav Neurosci. 124, 868-872 (2010).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bazı kısıtlamalara rağmen, rotarod performans testi, motor fonksiyon ve disfonksiyonu TMEV-İER yanı sıra farelerde sakatlık ilerlemesi üzerine farmakolojik müdahalelerin etkisini değerlendirmek için önemli bir araç temsil eder. Rotarod testi ilk kemirgenler 11 nörolojik defisit ölçmek için bir araç olarak 1957 yılında tanımlanmıştır. Kemirgenler dönen hızını artırma ile dönen bir çubuk üzerinde yürümek ve yere düşmesini önlemek için denemek zorunda. düşmeye gecikme kaydedilir ve m...

Theiler ensefalomiyelit virüsü Sıçangil (TMEV) sürekli sıçangil merkezi sinir sistemi (CNS) enfekte eden bir nörotropik tek iplikli RNA virüsüdür. duyarlı farelerde, TMEV enfeksiyonu TMEV kaynaklı demiyelinizan hastalıkları (TMEV-IDD) olarak bilinen bir immün aracılı, kronik progresif demiyelinasyon hastalığı, neden olur. Farelerin Deneysel enfeksiyon, multipl skleroz (MS), progresif formları görülene benzeyen bir hastalık seyri alır. akut dönemde ve kronik fazda: TMEV-ATT iki farklı aşamadan ile karakterizedir. Akut faz hafif, genellikle subklinik ensefalit 1,2 olduğunu. İkinci, kronik faz enfeksiyondan sonra yaklaşık bir ay başlayan, demiyelinizasyon, enflamasyon ve aksonal hasar 1,2 ile karakterize yavaş ilerleyen sakatlık oluşmaktadır. farelerde gözlenen zayıflık spastisite ve bazen şiddetli tonik spazmlar ile ilişkilidir. Şu anda medicatio olduğundanns hastalarda ilerici engeli iyileştirecek, araştırmacılar özellikle hastalığın ilerlemesi üzerinde hastalık modifiye ilaçların etkilerini izlemek için optimal bir hayvan modeli temsil TMEV-İER tarafından ilgi vardır. Bununla birlikte, farelerde ve MS hastalarında, sakatlık ilerlemesinin izlenmesi, uzun zaman süreleri boyunca sürekli klinik gözlem gerektirir. Farelerde, sakatlık ilerlemesi için uzun vadeli izleme rotarod performans testi ile yapılabilir. Rotarod performans testi gibi kemirgenler koordinasyon, denge ve yorgunluk gibi motorlu ilişkili işlevleri değerlendiren bir standart davranış testtir. Fareler sürekli ivme altında dönen bir dönüm çubuk, kendi dengesini korumak için var; Bu çubuk kaydedilir arasındaki süre gecikme düşmesi. Nörolojik disfonksiyon Hayvanlar kontroller sürece dönen çubuk üzerinde duramayan ve dönme hızı aştığında normalde düşüyorlar onlarınMotor kapasitesi. hayvanlar var daha nörolojik bozukluk, er onlar çubuk düşmek ve kısa zaman gecikme olduğunu. Geleneksel görsel skorlama sistemleri üzerinden rotarod testinin avantajı bir hedef oluşturur ki, ölçülebilir değişken zamanlı gecikme-sonuçta tedaviler ve deneysel prosedürler 3 etkilerini ölçmek için istatistiksel analizler için kullanılabilir. Dartmouth Nöroimmünoloji (Loni) Laboratuvarı, fareler için makine ile onları tanımak için ve normal &quot;taban&quot; denge koordinasyon ve motor kontrolünü 4 değerlendirmek için onlar önce TMEV enfeksiyonuna test edilir bir adaptasyon protokolü, tabi tutulur, 5. temel kurulur ve fareler TMEV bulaşmış sonra, birkaç aylık bir süre boyunca bir veya iki kez bir hafta test edilir. Gerçek test protokolü dolayısıyla bir değerlendirmesini sağlayan, 150 gün ortalama sürerdemiyelinizan hastalık tüm kurs boyunca denge, koordinasyon ve motor kontrol düşüş. yüzlerce TMEV-IDD ve plasebo ile tedavi edilen fareler, Dartmouth nörolojik fonksiyon bozukluğu için şu ana kadar test edilmiştir. Bu fareler, çeşitli bağışıklık tedavileri almış, ancak hiçbir farmakolojik madde sekel progresyonu 6,7 iyileştirmede etkili olduğu tespit edilmiştir. Bu makale ve ilgili protokol TMEV-IDD fareler tarafından görüntülenen ilerleyici nörolojik bozukluğu karakterize açıklanmıştır. Özel olarak, iletişim kuralı rotarod testi kullanılarak TMEV-IDD farelerde nörolojik engeli çalışmak için genellikle uygun olduğuna inanılan özel test parametrelerinin öneriler vardır. Bu prosedür değerlendirmek için bir temel (1) MS gibi ilerleyici nörolojik durumların tedavisinde amaçlayan tedaviler test etmek için progresif MS ve (2) yararlılığını bu fare modelinde alaka sağlar. Açıktır ki,Rotarod testi ve mevcut optimize test parametreleri ve protokol TMEV-IDD fare modelinde ilerleyici nörolojik engeli tespit sadece yararlı değildir, ama aynı zamanda, nörodejeneratif hastalıkların ve diğer virüs kaynaklı ve / veya genetik fare modellerinde bozuklukları ortaya çıkarılmasında yararlıdırlar.

<table><tbody><tr><td>Fareler SJL/JCrHsd 4 ila 6 haftalık</td><td>Envigo</td> <td># 052</td><td></td></tr><tr><td>TMEV virüs stoğu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzofluran buharlaştırıcı</td><td>Harvard Aparatı</td> <td># 340471</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin Şırıngaları U- 100 29 g x 0.5 cc</td> BD <td># 328203</td><td></td><td>RS-232</td></tr> ve <tr>Yazılım <td>Columbus Instruments</td> <td>ile Fareler için Rotamex-5 4 Şeritli Rota-Rod</td><td>#0890M</td><td></td></tr></tbody></table>

multipl skleroz fare modeli progressive nörolojik engellilik Ölçümü

Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

Theiler Murin Ensefalomiyelit Virüsü (TMEV) ile intraserebral enfeksiyondan sonra, duyarlı SJL fareleri, multipl sklerozun (MS) ilerleyici formlarına benzer klinik özelliklere sahip kronik-ilerleyici bir demiyelinizan hastalık geliştirir. Fareler, çoklu aparatlar ve protokollerle değerlendirilebilen motor ve duyusal fonksiyon kaybı ile ilerleyici sakatlık gösterir. Bunlar arasında, Rotarod performans testi çok yaygın bir davranış testidir, avantajı objektif ölçümler sağlamasıdır, ancak genellikle basit ve basit olduğu varsayılarak kullanılır. Bazı MS modellerinde kullanılan ve oldukça öznel olan görsel puanlama sistemlerinin aksine, Rotarod testi, objektif, ölçülebilir, sürekli bir değişken (yani sürenin uzunluğu) üretir ve neredeyse mükemmel değerlendiriciler arası uyumlara izin verir. Bununla birlikte, laboratuvarlar arası güvenilirlik yalnızca çeşitli test parametrelerinin tekrarlanması durumunda elde edilir. Bu yazıda, çubuğun boyutu, hızı ve ivmesi gibi belirli test parametrelerinin önerileri; hayvanlara verilen eğitim miktarı; ve veri işleme, Rotarod testi için sunulmuştur.

Bu temsili deneyin amacı Daniels (DA) zorlanma ve TMEV Bean suşu tarafından uyarılan nörolojik özürlülük karşılaştırmaktır. Bu çalışmanın amaçları doğrultusunda, 32 kadın SJL farelerinin bir grup (n = 16), TMEV ile intrakranial DA suşu (n = 16) veya fasulye suşu da enfekte edildi ve klinik bulgular, zaman içinde izlenmiştir. 20 farelerin ek bir grup sahte muamele edilmiştir (yani, tuzlu su çözeltisi enjekte edilmiştir intrakranial) ve sağlıklı kontrol grubuna devam eder. <p ...

Bu yazıda, TMEV ile enfekte farelerde ilerleyici nörolojik sakatlığı ölçmek için kullanılan Rotarod performans testi için optimize edilmiş bir test protokolü sunulmuştur.

Multipl Skleroz Fare Modeli Progressive Nörolojik Engellilik Ölçümü

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating ...

Bu prosedürün genel amacı, kronik demiyelinizan hastalıklara sahip farelerdeki ilerleyici nörolojik bozulmayı değerlendirmektir. Bunu, Rotarod testi kullanarak, ilerleyici multipl sklerozun Theilers virüs modelinde uzun süreli nörolojik yetersizliği incelemek için uygun test parametreleri önerileri sunarak gerçekleştiriyoruz. Bu prosedür, fare modelinin ilerleyici demiyelinizasyonla olan ilgisini ve multipl skleroz gibi ilerleyici nörolojik durumların tedavisine yönelik terapilerin test edilmesi için yararlılığını değerlendirebileceğimiz bir temel sağlar.Bu optimize edilmiş testin geleneksel görsel puanlama sistemine göre avantajı, tedavilerin ve deneysel prosedürlerin motor fonksiyonlar üzerindeki uzun vadeli etkilerini nicelendirmek için objektif bir değişken oluşturmasıdır. Bu prosedür, Dartmouth'taki nöroimmünoloji laboratuvarından teknisyen Darlene Royce tarafından gösterilecektir. Bazal denge koordinasyonunu ve motor kontrolü değerlendirmek için, farelerin önce en az 30 dakika boyunca test odasına alışmalarını sağlayarak, adaptasyon protokolünü TMEV enfeksiyonundan beş gün önce başlatın.Fareler alışma sürecindeyken, Rotarod cihazını eksi beş DPI eğitim parametrelerine göre önceden ayarlayın. Ardından, bir fareyi kuyruğundan tutun ve operatöre ters bakacak şekilde çubuğun üzerine yerleştirin. Fare düşerse veya atlarsa, tüm fareler konumlanana kadar onu Rotarod üzerindeki kulvarına geri yerleştirin.Dört fare da yüklendikten sonra, deneyi başlatmak için enter düğmesine basın. Zamanlayıcıların otomatik olarak başladığından emin olun ve her bir kulvar için ekrandaki dakika başına dönüş sayısını gözlemleyin. Ardından, her bir hayvan çubuktan düştüğünde, düşme anındaki çubuğun hızını ve hayvanın çubuk üzerinde kaldığı süreyi kaydedin.Tüm fareler düştükten sonra, idrar ve dışkı varlığı farelerin çubuğu düzgün şekilde kavrama yeteneğini etkileyebileceği için, çubuk üzerindeki tüm dışkı bolilerini ve idrarı bir peçete yardımıyla temizleyin. Üç dakikalık bir dinlenmenin ardından, tek bir deneme için maksimum sürenin 240 saniye olduğu ikinci ve ardından üçüncü bir deneme gerçekleştirin. Her test gününde toplam üç deneme uygulayın.Son olarak, fareleri kendi kafeslerine geri yerleştirin. PI'den önceki dördüncü, üçüncü, ikinci ve birinci günlerde, Rotarod cihazını uygun eğitim protokolü parametreleri ile önceden ayarlayın ve Rotarod deneyini tekrarlayın. Dört ila altı haftalık dişi SJL farelerini içeren kafesleri raftan rahat bir çalışma alanına taşıyarak başlayın.Klinik ve histolojik hastalığın bireysel değerlendirmesine olanak sağlamak için kulak delme yöntemiyle fareleri işaretleyin. Ardından, PBS içindeki TMEV enfeksiyon stokundan 30 µL'yi 29 gauge bir insülin şırıngası iğnesine çekin. Prosedür süresince yeterli miktarda oksijen ve izofluran bulunduğundan emin olarak anestezi gaz cihazını hazırlayın.Hayvanı indüksiyon odasına yerleştirin ve üst kısmı kapatın. Birkaç dakika sonra hayvanı odadan çıkarın ve yeterli anestezi sağlandığından emin olmak için ayağı sıkarak fareyi test edin. Ardından, enjeksiyon bölgesini %70 izopropil alkol ile temizleyin ve 30 µL TMEV enfekte stok çözeltiyi, serbest el enjeksiyonu ile sağ serebral hemisfer içine enjekte edin.Son olarak, fare tamamen uyanık ve hareketli olduğunda onu tutma kafesine geri koyun. Enfeksiyondan sonraki yedinci günde, Rotarod cihazını uygun deneysel parametrelerle ayarlayın ve tüm Rotarod eğitim egzersizini uygun deneysel protokol parametreleri ile tekrarlayın. Her gün yapılan üçüncü denemeden sonra, her bir fareyi tartın ve vücut ağırlığını veri sayfasına not edin.Fareleri sonraki altı hafta boyunca haftada iki kez aynı şekilde test edin. Altı hafta sonra, ortalama 150 deney günü boyunca aynı deneysel protokol ile fareleri haftada bir kez test edin. Ardından, ham verileri analiz edin ve bunları nörolojik fonksiyonel indeks veya NFI olarak ifade edin.Bireysel NFI değerini belirlemek için, her bir farenin temel performans eşiğini, enfeksiyon sonrası 15 ile 45. günler arasındaki tüm koşu sürelerinin ortalaması olarak hesaplayın. Bu işlem, progresif demiyelinizasyon sonucu ortaya çıkan motor performansın değerlendirilmesine olanak sağlamak ve erken ensefalite bağlı olası eksiklikleri hariç tutmak içindir. Ardından, NFI değerini, en güncel üç ortalama koşu süresinin ortalamasının, farenin temel performans eşiğine bölünmesiyle hesaplayın.Son olarak, NFI değerini, plasebo (sham) uygulanan grubun o güne ait ortalama NFI değerine bölerek düzeltilmiş NFI'yi hesaplayın. Bu şekil, TMEV enfekte farelerin, kontrol fareleri ile karşılaştırıldığında nörolojik defisitlerin zamanla anlamlı şekilde arttığını göstermektedir. İki farklı TMEV suşu ile gerçekleşen kronik enfeksiyon, farelerin koşu sürelerini olumsuz etkilemiştir.TMEV ile enfekte edilen farelerin her iki grubunda da NFI değerleri, sham farelere göre anlamlı derecede daha düşüktü. Ayrıca, BeAn suşu ile enfekte edilen fareler ile DA suşu ile enfekte edilen farelerin yetiştirme dönemindeki engellilik ilerlemesi karşılaştırıldığında, tüm zaman noktalarında herhangi bir fark görülmedi. Bu prosedürü takiben, farelerin genel sağlık durumunu hızlıca değerlendirmek amacıyla, sağlama refleksi testi gibi geleneksel görsel skorlama yöntemleri uygulanabilir.Geliştirilmesinin ardından bu teknik, multipl skleroz ve nörodejeneratif hastalıklar alanındaki araştırmacıların, progresif yetersizliğin geciktirilmesinde terapilerin ve diğer müdahalelerin etkinliğini test etmelerine olanak sağlamıştır. Bu videoyu izledikten sonra, farelerde uzun süreli progresif yetersizliğin nasıl değerlendirileceği konusunda kapsamlı bir anlayış kazanmış olacaksınız. Bu prosedür, yalnızca Theiler virüs modelindeki progresif nörolojik yetersizliğin tespit edilmesinde değil, aynı zamanda diğer nörodejeneratif hastalık fare modellerindeki bozulmaların ortaya çıkarılmasında da faydalıdır.

measuring-progressive-neurological-disability-mouse-model-multiple

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Protokoller iki de kurulan motor koordinasyon görevleri, hızlandırılması rotarod ve yatay çubuk, son zamanlarda Oxford geliştirilen iki test, statik çubuklar ve paralel bar sunulmaktadır. Bu testler motoru potansiyel olarak kendi başlarına ilgi bozuklukları yanı sıra davranış diğer alanlarda testlerde değişkenlerin olmak algılayabilir.

Farelerde Motor Koordinasyon Ölçüm

Amiyotrofik lateral skleroz (ALS) için bir fare modelinde klinik ve davranışsal incelenmiştir. Beraberindeki immünohistolojik analizi için bir önkoşul olarak omurilik hazırlanmasında detaylı bir şekilde anlatılır.

Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Multipl skleroz, nörolojik ve nöropsikolojik bozukluk ve sakatlık hassas ölçüm zordur. Biz yeni bir test, Multipl Skleroz Performans Testi (MSPT) hakkında metodolojik ayrıntıları rapor. MS ile ilgili sakatlık nicelikleme hedefine Bu yeni yaklaşım, MS şiddeti hassas, geçerli ölçüm için bilgisayar tabanlı bir platform sağlar.

Multipl Skleroz Performans Testi (MSPT): Bir iPad Tabanlı Engellilik Değerlendirme Aracı

Bu video protokolü, amyotrofik lateral sklerozun transgenik fare modelindeki nöromüsküler eksiklikleri değerlendirmek için hassas, güvenilir ve hızlı bir yöntemi tanımlar.

ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi

Biz, in vivo canlı biyolüminesans ve yakın kızılötesi SJL / J farelerinde multipl skleroz için deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) modelinde optik nevrit ve ensefalit görüntüleme tekniğini göstermektedir.

Farelerde Multipl Skleroz EAE Modeli Optik Nörit ve Beyin Enflamasyon Biyoparlaklık ve Yakın-Kızılötesi Görüntüleme

Kinematik yürüyüş analizi sagittal düzlemde hareket nasıl yürütüleceğini konusunda son derece hassas bilgi verir. Biz yürüyüş açıkları otoimmün aracılı demiyelinizasyon tabi fareler için tanımlamak için bu tekniklerin uygulanması açıklanmaktadır. Bu yöntemler, yürüyüş açıkları Engelli hareket featuring diğer fare modelleri için karakterize etmek için de kullanılabilir.

Sagittal düzlem kinematik yürüyüş analizi MOG35-55 için tabi C57BL/6 farelerde deneysel otoimmun ensefalomiyelit indüklenen

Sinir iletim ölçümü ateş fare modelleri değerlendirmek için yararlı bir araçtır ama sık sık öyle yalnızca hindlimbs siyatik sinir uyarmak için geçerlidir. Burada, bileşik kas aksiyon potansiyeli (CMAP) vivo brakiyal pleksus tarafından innervated fare forelimb kaslarda ölçmek için bir teknik açıklayın.

Vivo Bileşik kas aksiyon potansiyeli Motor nöron hastalığı, fare modellerinde ön ayakları üzerinden elektrofizyolojik ölçümü

MouseWalker (MW) araç kutusunu kullanarak serbestçe yürüyen farelerin lokomotor modelini nicel olarak tanımlamak için ilk video kayıtlarından ve izlemeden niceleme sonrası analize kadar uzanan deneysel bir boru hattı sağlanmıştır. MW sisteminin yararlılığını göstermek için farelerde omurilik kontüzyon yaralanması modeli kullanılmıştır.

Omurilik Yaralanmasının Bir Fare Modelinde Lokomotor Disfonksiyonu Ölçmek için MouseWalker'ı Kullanma

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), multipl sklerozun bir hayvan modeli olarak hizmet eder. Bu makalede EAE'de spinal kord inflamasyonu, demiyelinizasyon ve aksonal yaralanmayı skorlamaya yönelik bir yaklaşım anlatılmaktadır. Ek olarak, canlı farelerde aksonal hasarın değerlendirilmesini kolaylaştıran, fare serumundaki çözünür nörofilament ışık seviyelerini ölçmek için bir yöntem sunulmaktadır.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitte Merkezi Sinir Sistemi İnflamasyonu, Demiyelinizasyon ve Akson Hasarının Skorlanması

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit, multipl sklerozun en yaygın kullanılan murin modellerinden biridir. Mevcut protokolde, her iki cinsiyetten C57BL / 6J fareleri, miyelin oligodendrosit glikoprotein peptidi ile aşılanır ve bu da esas olarak kuyruk ve uzuvların artan parezi ile sonuçlanır. Burada EAE indüksiyonu ve değerlendirme protokolünü tartışıyoruz.

İki Cinsiyette Multipl Sklerozun Modellenmesi: MOG35-55 ile İndüklenen Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit

Bu makale, büyük stroklu farelerde yüksek oranda ötelemeye dayalı ve bağımsız olarak kanıtlanmış fare Vuruş Birimi (mSU) kavramını yürütmek için bir protokol sunar. Ayrıca, farelerde fokal deneysel inme ölçeğinin yürütülmesi için standart bir protokol sağlar, bu da uzun vadede bile tespit edilen inme fokal eksikliklerini değerlendirir.

Translasyonel Fare İnme Çalışmaları için Standartlaştırılmış Nörolojik Skorlama ile Fare Vuruşu Birimi Protokolü

Öğrenin, Rotarod testi ile TMEV enfekte farelerde ilerleyici nörolojik engelliliği ölçmek için optimize edilmiş protokolü. Bu yöntem, multipl skleroz tedavilerinin etkinliğini değerlendirmede objektif veri sağlar.

Multipl Skleroz Fare Modeli Progressive Nörolojik Engellilik Ölçümü

Daha fazla video keşfet