Name: sertliği ölçme Ex Vivo Fare aorta (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: Öğrenin fare aortası izolasyonu ve AFM ile elastik modül ölçümü yöntemlerini. Bu protokol damar biyomekaniği ve kardiyovasküler hastalık araştırmalarında nanometre ölçeğinde hassas sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

AFM analizi, Pennsylvania Kas Enstitüsü ve Pennsylvania Üniversitesi, Perelman Tıp Fakültesi, Translasyonel Tıp ve Terapötik Enstitüsü tarafından desteklenen enstrümantasyon üzerinde gerçekleştirildi. Bu çalışma NIH hibeleri HL62250 ve AG047373 tarafından desteklenmiştir. YHB, Amerikan Kalp Derneği'nden doktora sonrası burs ile desteklendi.

Bu çalışmada hayvan çalışmaları Pennsylvania Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komiteleri tarafından onaylandı. Yöntemi onaylanmış talimatlarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir. 1. Fare ve Aort izolasyonu hazırlanması <ol><li> periton boşluğu içine - (2 mg / kg 1) - (- 100 mg / kg 80), ksilazin (8, 10 mg / kg) ve ketamin asepromazin bir fare anestezisi. Bir kuyruk tutam testi ile anestezi onaylayın. Fare tamamen uyuşturulduktan sonra, servikal dislokasyon ile fare euthanize. </li><li> Sırtında fare yerleştirin ve bir diseksiyon kurulu fare pin. % 70 ile karın bölgeyi temizleyin (v / v) etanol mendil. </li><li> orta çizgisinde cildi çimdik ve karın orta ölçekli mikrocerrahi makas ile küçük bir başlangıç ​​kesi yapmak. forseps ile cilt tutarken, sternum karın deri ve periton kesmek için orta ölçekli mikrocerrahi makas kullanın. </li><li> b kaburga kesiporta ölçekli mikrocerrahi makas ile oth taraf. Dikkatle küçük boyutlu mikrocerrahi makas ile akciğerler ve karaciğer kaldırmak ve kalp ve aort bırakın. Bir mikroskop fare ve diseksiyon tahtası aktarın. </li><li> küçük forseps ile aort çevreleyen yağ kavrayın ve küçük bir makas kullanın dikkatle aort etrafında yağ kesip. </li><li> Yavaşça, forseps ile aorta kapmak sadece abdominal aorta üzerinde, çıkan aort ve inen aort sonunda başka bir kesimin başında küçük boyutlu mikrocerrahi makas ile bir kesim yapmak. </li><li> (Kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS) 1 x fosfat tamponlu tuzlu su ihtiva eden bir 60-mm çanak kesilerek aort aktarın. </li><li> küçük boyutlu mikrocerrahi makas kullanarak aort kalan yağ dokusu uzak teşrih devam ediyor. uzunlamasına aorta açmak için küçük bir makas kullanın. </li><li> İnen aorta ve aorti küçük bir parça (~ 2 x 4 mm) kesmek için, küçük ölçekli mikrocerrahi makas kullanınAFM analizi c kemer (Şekil 1). 60 mm&#39;lik plastik tabak doku yerleştirin ve PBS damla nemli tutmak. </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54630/54630fig1.jpg" /> Şekil 1:. Bir fare Farklı Aort Bölümleri Yer gösteriliyor An Image aort diyaframa kalbinden izole edildi ve inen aort küçük bir kısmı ve aortik ark elastik modüle belirlemek için kullanıldı. Ölçek çubuğu, 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54630/54630fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> AFM Ölçümleri 2. Hazırlama Doku Örnekleri <ol><li> Dikkatlice aort dokunmadan laboratuvar silin kullanarak PBS kaldırmak. doku luminal tarafı yukarı bakacak şekilde emin olun. </li><li> Yavaşça eklenti tarafından plakaya açılan aorta her bir ucunu tutkal<html> 5 ing - jel yükleme ucu siyanoakrilat yapıştırıcı madde 10 ul (Şekil 2). Not: sıkıca her bir ucunda doku bağlamak için gerekli olan tutkal miktarı deneysel olarak tespit edilmelidir. Aort Bu işlem sırasında gergin olmadığı önemlidir. </li><li> katlanmış veya yüzer değil emin olmak için yapıştırılmış aort kontrol edin. aort tutkal hava kurutulduktan sonra (30-60 sn), nazikçe PBS ekleyin ve örnek daldırın. Not: - Doku analiz için hazırlanmıştır edilirken gerçekleştirilebilir Preparasyon AFM (5 3 adım). </li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54630/54630fig2.jpg" /> Şekil 2: Bir Aort Segment Karikatür Siyanoakrilat Yapıştırıcı kullanarak 60 mm Kültür Bulaşık üzerine yapıştırılmış siyanoakrilat yapıştırıcı AFM ölçümleri için hazırlık aort numunenin kenarına uygulanmaktadır..com / files / ftp_upload / 54630 / 54630fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. 3. Probe yükleniyor <ol><li> Sonda yük standın üzerine bir sıvı sonda tutucu monte edin. </li><li> Cımbız kullanarak, küresel uçlu bir silisyum nitrür AFM probu (0.06 N / m konsol) kaydırın prob tutucu (biz 1-mikron çaplı SiO2 parçacık kullanmış ancak daha büyük boyutlarda da kullanılabilir). AFM probu sıkıca prob tutucuya tespit olduğundan emin olun. </li><li> AFM kafa monte Z-tarayıcı üzerine sonda yuvasını ve prob tutucu sıkıca bağlı olduğundan emin olun. </li></ol> 4. Prob Lazer hizalama <ol><li> AFM yazılımını açın. Yazılımın deneme türünü seçin, Deney Kategori sıvısında Modu İletişim sıvı ve Deney Modu İletişim Mode, Deney Grubu İletişim için. Yük exp tıklayınyazılım eriment; Bu lazer açılacaktır. </li><li> 50 mm &#39;lik cam taban çanak damıtık su 3 ml ilave edilir ve lazer ayar biriminin sahnede çanak yerleştirin. Bu birim konsol sırtına lazer ışınını odaklama sürecini kolaylaştırır. </li><li> lazer hizalama ünitesi üzerindeki lazer hizalama ünitesi ve güç üzerine dik bir pozisyonda AFM baş takın. AFM ucunda bir damlacık oluşturulması için damıtılmış suyun yaklaşık 50 ul ekle. </li><li> AFM ucu çanak su ile temas yapar böylece joystick&#39;i kullanarak, AFM baş aşağı indirin. iletişim çanak AFM ucu ile su arasında yapılmaması durumunda kontak yapılıncaya kadar, hafifçe çanak yükseltmek. AFM ucu hizalama biriminin LCD ekranda görünümünde yani odak, parlaklık ve XY konumunu ayarlayın. </li><li> AFM baş lazer konumlandırma düğmeleri ayarlayarak AFM prob ucuna lazer nokta yerleştirin. varsaymak ayarlamak, AFM kafasına detektör konumlandırma düğmeleri kullanarak0 ve -1 V arasında değerler kadar fotodiyot iyon dikey saptırma için elde edilir ve ~ 0 V yatay saptırma için elde edilir. </li><li> Lazer toplamı sinyali maksimize emin olmak için kontrol edin. Gerekirse, adımı tekrarlayın 4.5 AFM ucunda lazer ışını ve maksimum toplam sinyalini elde etmek fotodiyot pozisyon konumunu yeniden ayarlamak için. NOT: adım 4.5 tekrarlanır bile maksimum toplamı sinyali elde etmek prob tutucu AFM probu yeniden konumlandırmak için gerekli olabilir. </li></ol> 5. AFM Probe Sapma Duyarlılık ve Bahar Constant kalibre <ol><li> Bir forsepsi ile 60 mm kültür kaplarına bir çizik yapın ve saf su ile çanak doldurun. Numune tutucu plaka üzerinde kültür çanak yerleştirin. Bu durumda, bir ters mikroskop motorlu XY tarama sahnede çanak monte edin. </li><li> o görüntüleme sırasında güvenli tutmak için plaka üstünde manyetik plaka tutucu yerleştirin. </li><li> tıklayın <strong&gt; Neredeyse en yüksek konuma AFM baş yukarı taşımak için yazılıma Navigasyon menüsünde &#39;Up&#39; ok AFM prob çanak dokunmayın emin olmak için. NOT: AFM ucu kırılma önler bu adım çok önemlidir. </li><li> mikroskop sahnede AFM baş yerleştirin. </li><li> plaka üzerinde sıfırdan odaklanmak mikroskop kullanın. Joystick&#39;i kullanın, ya da yavaş ve dikkatli PBS içine AFM probu düşürmek için, Navigasyon menüsünden &#39;down&#39; oku tıklatın. Biraz plaka sıfırdan yukarıdaki baş pozisyonu. NOT: AFM başın başlangıç konumu numunesi yakın ise, önemli ölçüde azalacaktır zaman meşgul. </li><li> çekici önce, AFM ucunda lazer ışını ve gerektiğinde maksimum TOPLA sinyalini elde etmek fotodiyot pozisyon konumunu yeniden ayarlayın. </li><li> Kurulum menüsünde Değiştir Probe tıklayarak bir ipucu türünü seçin. </li&gt; <li> Parametreleri kontrol edin ve parametrelerini ayarlamak düğmesini tıklayın: 256 1 Hz, Numune / hattına, 0 Tarama Hızı Tarama Boyutu ve Sapma Ayar Noktası 20 nm. Engage tıklayın. Sonda plaka yüzeyi ile temas edene kadar Engage Durum penceresi açık kalacaktır. Prob katıldıktan sonra, Rampa tıklayın. </li><li> Parametreleri Tara Araç Çubuğu menüsünde Mode Expanded ve set seçeneğini tıklayın: 2 Hz Rampa Oranı, nm 500 ile 1 mikron Rampa Boyutu, 256 Numune Sayısı, İpucu Radius 500 nm, 0.5 (Numune Poisson Oranı malzemesini varsayar ölçülecek 20 ila 100 nm Karşılıklı ve tetikleme eşiğini 0 ila Tip yarım açı, Tetik modu), mükemmel sıkıştırılamaz. </li><li> obta için Rampa Çubuğu menüsünde Rampa Sürekli tıklayınplaka (Şekil 3A) üzerine bir kuvvet eğrisi. Bu kuvvet eğrisinin, saptırma hata kanal 1 olarak ayarlayın. NOT: Bu yazılım z pozisyonuna karşı dikey saptırma olarak sonuçları grafik sağlayacaktır. <ol><li> Kuvvet eğrisinin sol veya sağ ucunda tıklayın ve kuvvet eğrisi (Şekil 3A, kesik kırmızı çizgiler) lineer bir bölgeyi kapsayacak şekilde imleci sürükleyin. düz bir çizgi ile uygun olması eğimli bölgenin sınırlarını işaretlemek için bu iki satır kullanın. </li></ol></li><li> Araç Çubuğu Rampa seçeneğini seçiniz ve Update Duyarlılığı tıklayın. değerini kaydedin ve bu adımı dört kez daha tekrarlayın. Araç Çubuğu Kalibre seçin ve ardından Dedektörü tıklayın. Giriş Saptırma duyarlılık kutusuna beş ölçümün ortalama bir değer. </li><li> AFM baş yükseltmek için 3 kez - 2 Çekme tıklayın. Bu adım önlemek için önemlidirAFM ucu ve termal ayar işlemi sırasında plaka arasındaki etkileşim. Araç Çubuğu Termal Melodisi tıklayın. </li><li> Dikdörtgen konsollar için V şeklindeki konsollar için 1.144 ve 1.106 100 kHz (Bu bilgiler üreticinin katalog temin edilebilir) ve Eğilme Duyarlılık Düzeltme - Termal 1 Tune Aralığı ayarlayın. </li><li> Termal Dinle menüsünde, termal ayar eğrisi (Şekil 3B) elde etmek için Veri Al&#39;ı tıklatın. AFM yazılımı kullanarak, yer kırmızı montaj için sınırlarını tanımlamak için grafiğin kenarından fareyi sürükleyerek (Şekil 3B görüldüğü gibi) eğrisinin iki tarafında kesikli çizgiler. Seçin ya Lorentz (Hava) veya daha iyi verilere uygun olduğu bağlı Basit Harmonik osilatör (Akışkan) modeli. </li><li> Fit Veri ardından Bahar K hesaplayın ve bu değeri kaydetmek tıklayın. Yenidenyay sabiti kalibrasyon sağlamaktadır birkaç kez turba ve ortalama değeri kullanın. Birkaç kez çekin tıklayın. </li><li> mikroskop aşamasından AFM baş kaldırmak ve hizalama ünitesinde üzerine yerleştirin. mikroskop aşamasından çanak çıkarın. </li></ol><img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54630/54630fig3.jpg" /> Şekil 3: AFM Sondalar kalibrasyonu Kullanılan AFM Kuvvet Eğrileri. (A) temsilci AFM kuvvet eğrisi (kalibrasyon eğrisi). Dikey kırmızı arasındaki kuvvet eğrisinin uzatma bölümü çizgileri konsol saptırma duyarlılığını belirlemek için kullanılmıştır kesik. (B), daha önce 20 açıklanan konsolun yay sabitini hesaplamak için kullanılan basit bir harmonik osilatör uygun grafik. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54630/54630fig3large.jpg" target="_blank">Görüntülemek için tıklayınız Bu rakamın daha büyük bir versiyonu.</a> Ex Vivo Elastik Modülü Ölçme <ol><li> mikroskop sahnede aort doku içeren 60 mm kültür çanak yerleştirin ve manyetik plaka tutucu plaka sabitleyin. </li><li> mikroskop sahnede AFM baş yerleştirin. AFM prob aorta ile temas etmediğinden emin olun ama nazikçe PBS ile temas eder ve bir menisküs oluşturur. Gerekirse, hizalama ünitedeki AFM baş koyun ve sonra, teması önlemek mikroskop sahnede AFM baş yerleştirmek için yeterli açıklık kalmayıncaya kadar Çekme tıklayın. </li><li> Şuraya tıklayın. Yavaşça AFM probu düşürmek, joystick kullanarak veya ok &#39;Aşağı&#39; düğmesini tıklayarak aort üzerinde konsol bulmak için. Gerekirse AFM kafasına detektör konumlandırma düğmeleri kullanarak fotodiyot konumunu ayarlayın. </li><li> Konsol aorta ile temas kurmaya izin Engage seçeneğini tıklayın. </li><li> Bir kereAort devreye girer, piezo merkezi istikrarlı olmasını sağlamak ve Rampa tıklayın. Piezo merkezi dalgalanan ise, bu yanlış bir angajman sonucu olabilir. prob çekin ve küçük artışlarla fotodiyot üzerine lazer ofset dikey artırmak (~ 0.5 V) ve yeniden meşgul. <ol><li> Sonda çok örnek yüzeyinin üzerinde ise de, elle yakın örnek yüzeyine probu düşürmek yeniden çekici önce. Önceki adımlar dalgalanmayı ortadan kaldırmak yoksa, prob alışverişi deneyin. </li></ol></li><li> 3 um, Bağıl Trigger Mode ve 100 nm Tetik Eşik Rampa Boyutu ayarını ve Rampa Sürekli tıklayın. prob ve numune arasındaki temas noktası Z rampa döngüsünün ¾ alt yaklaşık merkezinde meydana gözlemleyin. Bu gözlenmez ise, örnek boşa gerektiği gibi Rampa boyutunu ayarlamak ve örnek yeniden meşgul. </li><li>Menü Bar Mikroskop tıklayın ve ardından Ayarlar Engage. SPM 30 mikron Çekme değiştirin. Rampa Araç Çubuğu menüsünde Rampa Sürekli tıklayın. </li><li> Kuvvet eğrisi gözlemledikten sonra, Menü çubuğundaki yakalama tıklatın ve Dosya adı yakalayın. biten &quot;.000&quot; (bu ek yakalanan dosyalar 1 ile sayısındaki artış sağlayacak) ile istenen dosya adı girin. belirlenmiş-klasörü seçin ve verileri kaydetmek. </li><li> Yakalama Araç Çubuğu menüsünde yakalama tıklayın. Sonra Şuraya çekiniz ve tıklayın. Aort başka alana konsol konumlandırmak için Joystick veya yazılım kontrollerini kullanın (sonraki başlangıçta ölçülen noktaya; Şekil 4). </li><li> , Rampa Engage tıklayın ve sırasıyla, Sürekli Rampa. Kuvvet eğrisi gözlemledikten sonra, Durdur &#39;u tıklatın </stRong&gt; ve ardından yakalayın. </li><li> 6.10 - yineleyin 6.9 adımları. . Alan başına yakalama en az 5 ölçümleri, Şekil 4 Not gösterildiği gibi: Bu tipik olarak 15 toplama - Şekil 4 &#39;de gösterildiği gibi, sırasıyla, her bir doku 5 farklı yerle - 3 ila 25 güç eğrileri. </li></ol><img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54630/54630fig4.jpg" /> . Şekil 4: Genel sertliğini elde etmek her arter - 5 farklı yerlerde (5 Alanları 1 -) - 3 25 kez Cantilever Yaklaşıyor ve Doku Hizalama (Alan 1) Cartoon Bu AFM ölçümü 15 kadar tekrarlanır doku numunesi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54630/54630fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 7. Veri analizi <ol><li> Açık kuvvet eğrisi analizi yazılımı. </li><li> ClTran bulun ve menü çubuğunda Aç ve dosya üzerinde çift tıklayın analiz edilecek. </li><li> Saptırma duyarlılığını, Sabit Bahar, İpucu Radius, İpucu Yarım Açısı ve Poisson oranını kontrol etmek için araç çubuğu menüsünden Değiştir Kuvvet Parametreleri tıklayın. Parametreler yanındaki kutuyu işaretleyin ve yeni değer sütununa doğru değerleri girin değiştirmek için. Sonra Çalıştır &#39;ı tıklatın. </li><li> Kuvvet eğrileri gürültülü ise Yön 0 inci 3 ve Filtre Order, Ortalama Puan uzatın için, Boxcar Filtre tıklayın ve girdileri ayarlayın. Verileri düzeltmek için Yürüt düğmesini tıklatın. </li><li> Menü çubuğundaki Temel Düzeltme tıklayın ve 1 st Yön uzatın için girdiler, Force Plot Birimleri, Ayırma Tipi, Düzeltme Sipariş ayarlamak ve Temel Kaynak Extend </stRong&gt; uzatmak için. Kuvvet eğrisinin düz kısmı kapsayacak şekilde dikey noktalı mavi çizgiler ayarlayın ve sonra Çalıştır &#39;ı tıklatın. </li><li> Araç çubuğu menüsünden girinti tıklayın ve uyulmuş değişkeni davranın Point Esaslı, Temas Noktası Algoritma İletişim Genişletilmiş, sığdır Yöntem Aktif Eğrisi için girdi ayarlamak, No yapışma Gücü Max Kuvvet Fit Sınır% 30, Min Kuvvetleri Fit Sınırının için ekleyin % 0 ve Hertz (Spherical) sığdır Modeli. NOT: Bizim ölçümlerinde, ucu ve örnek (retraksiyon eğrisinde konsolun olumsuz sapma) arasında önemli yapışma nadiren gözlenmiştir. Bu yapışma görülen durumlarda, uygun bir model (DMT ya JKR) analiz 18,19 için kullanılmalıdır. </li><li> Young modülü değerlerini kaydedin. 3 Her Young (elastik) modülü analiz- Şekil 4 &#39;de gösterildiği gibi birbirine küçük mesafede alınan 5 alanı (alan başına 5 kuvveti eğrileri). NOT: eserler kaldırmak Young modülüne&gt; 100 kPa hariç tutmak için (normalde ~ toplam ölçümlerin% 10) analizinden. </li><li> 3 her biri için bir ortalama Young Modülü değerini hesaplayın - (ölçülmüştür) 5 alanları ve bir bütün olarak aort için ortalama bir esneklik modülüne hesaplamak için bu değerleri kullanır. NOT: En az 3 ve daha sık 4-6 ayrı aorta arteriyel sertlik doğru bir şekilde değerlendirmesini elde etmek için kullanılır. Nihai sonuçlar, &quot;n&quot; bağımsız deneyin ortalama ± SEM olarak çizilmiştir. gerekli aorta tam sayısı, tabii ki, gerekli hassasiyet düzeyine bağlı olacaktır. </li></ol>

<ol><li>Kothapalli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+Protection+by+ApoE+and+ApoE-HDL+Linked+to+Suppression+of+ECM+Gene+Expression+and+Arterial+Stiffening%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular Protection by ApoE and ApoE-HDL Linked to Suppression of ECM Gene Expression and Arterial Stiffening.</a> Cell Rep. 2, 1259-1271 (2012).</li>
<li>Liu, S. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+metalloproteinase-12+is+an+essential+mediator+of+acute+and+chronic+arterial+stiffening%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Matrix metalloproteinase-12 is an essential mediator of acute and chronic arterial stiffening.</a> Sci Rep. 5, 17189(2015).</li>
<li>Lakatta, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+arterial+aging+and+the+epidemic+of+systolic+hypertension+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Central arterial aging and the epidemic of systolic hypertension and atherosclerosis.</a> J Am Soc Hypertens. 1, 302-340 (2007).</li>
<li>Stehouwer, C. D. A., Henry, R. M. A., Ferreira, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterial+stiffness+in+diabetes+and+the+metabolic+syndrome%3A+a+pathway+to+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Arterial stiffness in diabetes and the metabolic syndrome: a pathway to cardiovascular disease.</a> Diabetologia. 51, 527-539 (2008).</li>
<li>Steppan, J., Barodka, V., Berkowitz, D. E., Nyhan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Stiffness+and+Increased+Pulse+Pressure+in+the+Aging+Cardiovascular+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiol+Res+Pract%22%5BJournal%5D)">Vascular Stiffness and Increased Pulse Pressure in the Aging Cardiovascular System.</a> Cardiol Res Pract. 2011, 263585(2011).</li>
<li>Duprez, D. A., Cohn, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterial+stiffness+as+a+risk+factor+for+coronary+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Atheroscler+Rep%22%5BJournal%5D)">Arterial stiffness as a risk factor for coronary atherosclerosis.</a> Curr Atheroscler Rep. 9, 139-144 (2007).</li>
<li>Mitchell, G. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterial+Stiffness+and+Cardiovascular+Events%3A+The+Framingham+Heart+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Arterial Stiffness and Cardiovascular Events: The Framingham Heart Study.</a> Circulation. 121, 505-511 (2010).</li>
<li>Sutton-Tyrrell, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+Aortic+Pulse+Wave+Velocity%2C+a+Marker+of+Arterial+Stiffness%2C+Predicts+Cardiovascular+Events+in+Well-Functioning+Older+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Elevated Aortic Pulse Wave Velocity, a Marker of Arterial Stiffness, Predicts Cardiovascular Events in Well-Functioning Older Adults.</a> Circulation. 111, 3384-3390 (2005).</li>
<li>Klein, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-Cycle+Control+by+Physiological+Matrix+Elasticity+and+In+Vivo+Tissue+Stiffening%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell-Cycle Control by Physiological Matrix Elasticity and In Vivo Tissue Stiffening.</a> Curr Biol. 19, 1511-1518 (2009).</li>
<li>Bae, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+FAK-Cas-Rac-lamellipodin+signaling+module+transduces+extracellular+matrix+stiffness+into+mechanosensitive+cell+cycling%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+signal%22%5BJournal%5D)">A FAK-Cas-Rac-lamellipodin signaling module transduces extracellular matrix stiffness into mechanosensitive cell cycling.</a> Sci signal. 7, ra57(2014).</li>
<li>Thyberg, J., Hedin, U., Sjölund, M., Palmberg, L., Bottger, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+differentiated+properties+and+proliferation+of+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of differentiated properties and proliferation of arterial smooth muscle cells.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 10, 966-990 (1990).</li>
<li>Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Regulation+of+Vascular+Smooth+Muscle+Cell+Differentiation+in+Development+and+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular Regulation of Vascular Smooth Muscle Cell Differentiation in Development and Disease.</a> Physiol Rev. 84, 767-801 (2004).</li>
<li>Huynh, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-Related+Intimal+Stiffening+Enhances+Endothelial+Permeability+and+Leukocyte+Transmigration%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Age-Related Intimal Stiffening Enhances Endothelial Permeability and Leukocyte Transmigration.</a> Sci Transl Med. 3, 112ra122(2011).</li>
<li>Safar, M. E., Levy, B. I., Struijker-Boudier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Perspectives+on+Arterial+Stiffness+and+Pulse+Pressure+in+Hypertension+and+Cardiovascular+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Current Perspectives on Arterial Stiffness and Pulse Pressure in Hypertension and Cardiovascular Diseases.</a> Circulation. 107, 2864-2869 (2003).</li>
<li>Raffetto, J. D., Khalil, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+metalloproteinases+and+their+inhibitors+in+vascular+remodeling+and+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Matrix metalloproteinases and their inhibitors in vascular remodeling and vascular disease.</a> Biochem Pharmacol. 75, 346-359 (2008).</li>
<li>Muller, D. J., Dufrene, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+force+microscopy+as+a+multifunctional+molecular+toolbox+in+nanobiotechnology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Nanotechnol%22%5BJournal%5D)">Atomic force microscopy as a multifunctional molecular toolbox in nanobiotechnology.</a> Nat Nanotechnol. 3, 261-269 (2008).</li>
<li>Hsu, B. Y., Bae, Y. H., Mui, K. L., Liu, S. -L., Assoian, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+E3+Inhibits+Rho+to+Regulate+the+Mechanosensitive+Expression+of+Cox2%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein E3 Inhibits Rho to Regulate the Mechanosensitive Expression of Cox2.</a> PLoS ONE. 10, e0128974(2015).</li>
<li>Johnson, K. L., Kendall, K., Roberts, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+Energy+and+the+Contact+of+Elastic+Solids%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+Lond+A%22%5BJournal%5D)">Surface Energy and the Contact of Elastic Solids.</a> Proc R Soc Lond A. 324, 301-313 (1971).</li>
<li>Derjaguin, B. V., Muller, V. M., Toporov, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+contact+deformations+on+the+adhesion+of+particles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Colloid+Interface+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of contact deformations on the adhesion of particles.</a> J Colloid Interface Sci. 53, 314-326 (1975).</li>
<li>Hutter, J. L., Bechhoefer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calibration+of+atomic-force+microscope+tips%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Sci+Instrum%22%5BJournal%5D)">Calibration of atomic-force microscope tips.</a> Rev Sci Instrum. 64, 1868-1873 (1993).</li>
<li>Pries, A. R., Secomb, T. W., Gaehtgens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endothelial+surface+layer%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch+EJP%22%5BJournal%5D)">The endothelial surface layer.</a> Pflugers Arch EJP. 440, 653-666 (2000).</li>
<li>Pogoda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depth-sensing+analysis+of+cytoskeleton+organization+based+on+AFM+data%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Depth-sensing analysis of cytoskeleton organization based on AFM data.</a> Eur Biophys J. 41, 79-87 (2012).</li>
<li>Mendez, M. G., Restle, D., Janmey, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vimentin+Enhances+Cell+Elastic+Behavior+and+Protects+against+Compressive+Stress%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Vimentin Enhances Cell Elastic Behavior and Protects against Compressive Stress.</a> Biophys J. 107, 314-323 (2014).</li>
<li>Moreno-Flores, S., Benitez, R., Md Vivanco,, Toca-Herrera, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+relaxation+and+creep+on+living+cells+with+the+atomic+force+microscope%3A+a+means+to+calculate+elastic+moduli+and+viscosities+of+cell+components%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Stress relaxation and creep on living cells with the atomic force microscope: a means to calculate elastic moduli and viscosities of cell components.</a> Nanotechnology. 21, 445101(2010).</li>
<li>Darling, E. M., Topel, M., Zauscher, S., Vail, T. P., Guilak, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscoelastic+properties+of+human+mesenchymally-derived+stem+cells+and+primary+osteoblasts%2C+chondrocytes%2C+and+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Viscoelastic properties of human mesenchymally-derived stem cells and primary osteoblasts, chondrocytes, and adipocytes.</a> J Biomech. 41, 454-464 (2008).</li>
<li>Dimitriadis, E. K., Horkay, F., Maresca, J., Kachar, B., Chadwick, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Elastic+Moduli+of+Thin+Layers+of+Soft+Material+Using+the+Atomic+Force+Microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Determination of Elastic Moduli of Thin Layers of Soft Material Using the Atomic Force Microscope.</a> Biophys J. 82, 2798-2810 (2002).</li>
<li>Mahaffy, R. E., Shih, C. K., MacKintosh, F. C., Käs, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+Probe-Based+Frequency-Dependent+Microrheology+of+Polymer+Gels+and+Biological+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+Lett%22%5BJournal%5D)">Scanning Probe-Based Frequency-Dependent Microrheology of Polymer Gels and Biological Cells.</a> Phys Rev Lett. 85, 880-883 (2000).</li>
<li>Amin, M., Le, V. P., Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+Testing+of+Mouse+Carotid+Arteries%3A+from+Newborn+to+Adult%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mechanical Testing of Mouse Carotid Arteries: from Newborn to Adult.</a> J Vis Exp. , e3733(2012).</li>
<li>Laurent, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expert+consensus+document+on+arterial+stiffness%3A+methodological+issues+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Expert consensus document on arterial stiffness: methodological issues and clinical applications.</a> Eur Heart J. 27, 2588-2605 (2006).</li>
<li>Plodinec, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nanomechanical+signature+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Nano%22%5BJournal%5D)">The nanomechanical signature of breast cancer.</a> Nat Nano. 7, 757-765 (2012).</li>
<li>Raman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+nanomechanical+properties+of+live+cells+using+multi-harmonic+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Nano%22%5BJournal%5D)">Mapping nanomechanical properties of live cells using multi-harmonic atomic force microscopy.</a> Nat Nano. 6, 809-814 (2011).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

AFM girinti hücre ve dokuların sertliği (esneklik katsayısı) karakterize etmek için kullanılabilir. Bu yazıda fare azalan aort ve aort arkı izole etmek ve bu arter bölgelerin ex vivo elastik modüle belirlemek için ayrıntılı adım adım protokolleri sağlar. Biz şimdi özetlemek ve bu yazıda anlatılan yöntemin teknik konuları ve sınırlamaları tartışmak. Çeşitli teknik konular izolasyonu ve bunların küçük ve ince yapısı verilen fare aorta analizinde ortaya çıkabilir. temizlenen arterler u...

Arterlerin biyomekanik özellikleri, kardiyovasküler hastalık (KVH) ve yaşlanmada kritik bir belirleyicidir. Kolesterolden bağımsız majör bir risk faktörü ve CVD'nin ilerlemesi için bir gösterge olan arteriyel sertlik, vasküler yaralanma, ateroskleroz, yaş ve diyabet1-8 ile artar. Arteriyel duvar sertleşmesi, vasküler düz kas hücrelerinin9-12 artmış farklılaşması, göçü ve proliferasyonu ile ilişkilidir. Ek olarak, artmış arteriyel sertlik, gelişmiş makrofaj adezyonu1, endotel geçirgenliği ve lökosit transmigrasyonu13 ve damar duvarının yeniden şekillenmesi14,15 ile ilişkilendirilmiştir. Bu nedenle, KVH veya yaşlanmada arteriyel sertleşmeyi önleyebilecek tedaviler, yüksek kan kolesterolünü azaltarak KVH'yi tedavi eden mevcut farmakolojik müdahaleleri tamamlayabilir. 
AFM, çeşitli fiziksel ve biyolojik uygulamalar için kullanılan güçlü bir analitik araçtır. AFM, yüksek çözünürlüklü görüntüleri elde etmek ve dokular ve hücreler1,2,10,16,17 gibi yumuşak biyolojik numunelerin biyomekanik özelliklerini nano ölçekli seviyelerde büyük bir doğrulukla karakterize etmek için giderek daha fazla kullanılmaktadır. AFM'nin önemli bir avantajı, canlı hücrelerle kullanılabilmesidir.
Bu makale, AFM kullanarak fare arterlerinin elastik modülünü ex vivo ölçme yöntemimizi açıklamaktadır. Açıklanan yöntem, 1) fare arterlerini (inen aort ve aort arkı) nasıl düzgün bir şekilde izole ettiğimizi ve 2) bu dokuların elastik modülünü AFM ile nasıl ölçtüğümüzü gösterir. Arterlerdeki yüksüz elastik modüllerin ölçümleri, vasküler yaralanma, KVH ve yaşlanmaya yanıt olarak meydana gelen hücre dışı matriksteki (ECM) değişikliklerin aydınlatılmasına yardımcı olabilir.

<table><tbody><tr><td>BioScope Catalyst AFM sistemi</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse TE 200 ters mikroskop</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Silisyum nitrür AFM probu</td><td>Novascan Technologies</td><td>PT. SI02. SN.1</td><td>0.06 N/m konsol; 1 ve mikro; m SiO2 parçacık</td></tr><tr><td>Dumont #5 forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-10</td><td>Bkz. bölüm 1.4</td></tr><tr><td>Dumont #5SF forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11252-00</td><td>Bkz. bölüm 1.8</td></tr><tr><td>İnce Makas-ToughCut</td><td>İnce Bilim Aletleri</td><td>14058-11</td><td>Bkz. bölüm 1.4 (orta boy)</td></tr><tr><td>Vannas-T&uuml; bingen yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15008-08</td><td>Bkz. bölüm 1.6 (küçük boy)</td></tr><tr><td>60 mm TC ile muamele edilmiş hücre kültürü kabı</td><td>Corning</td><td>353004</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salini, 1x</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td>Kalsiyum ve magnezyum içermez</td></tr><tr><td>Krazy Glue anında çok amaçlı sıvı</td><td>Krazy Glue</td><td>KG58548R</td><td>Bölüm 2.2'ye bakın</td></tr><tr><td>Jel yükleme uçları, 1 - 200 & mikro; l</td><td>Fisher</td><td>02-707-139</td><td>Bkz. bölüm 2.2</td></tr><tr><td>Uç Cımbız</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>78092-CP</td><td>Bkz. bölüm 3.2</td></tr><tr><td>50 mm, şeffaf duvar cam alt tabakları</td><td>TED PELLA</td><td>14027-20</td><td>Bkz. bölüm 4.4</td></tr></tbody></table>

sertliği ölçme<em&gt; ex vivo</ematomik kuvvet mikroskobu kullanma&gt; fare aorta

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Arteriyel sertleşme önemli bir risk faktörüdür ve kardiyovasküler hastalık için biomarker ve yaşlanma bir özelliğidir. Atomik kuvvet mikroskopisi (AFM), sert (plastik, cam, metal, vs.) herhangi bir alt-tabaka üzerinde hücrelere yüzeyleri arasında değişen çeşitli malzemeler için viskoelastik mekanik özelliklerini karakterize etmek için çok yönlü bir analiz aracı. Yaygın hücre sertliğini ölçmek için kullanılan, daha az sıklıkla aorta sertliğini ölçmek için kullanılmıştır. Bu yazıda, yüksüz fare arterlerin ex vivo elastik modülü ölçmek için temas modunda AFM kullanarak işlemleri anlatacağım. Biz fare aorta izolasyonu için prosedürü tarif ve sonra AFM analizi için ayrıntılı bilgi sağlar. Bu lazer ışını uyumu, yay sabiti ve AFM prob sapma duyarlılığı kalibrasyonu ve kuvvet eğrileri elde edilmesi için adım adım yönergeler içerir. Biz aynı zamanda veri analy için ayrıntılı bir protokol sağlarkuvvet eğrilerinin sis.

<html> Şekil 5A 6 aylık, erkek C57BL / 6 fare azalan (torakal) aorta bir faz kontrast görüntü gösterir. AFM konsol doğrudan dokuda üzerinde yer alıyor ve girinti hazır. Şekil 5B ve 5C temas modunda AFM girinti ile elde edilen temsili kuvvet eğrileri göstermektedir. Şekil 5B ve 5C gösterilen yeşil çizgiler bir küre için Hertz modeli kullanılarak elde en uygun eğrileri temsil etmektedir. Metinde tarif edildiği gibi Şekil 5D,</stron...

Aortların fareden izolasyonu ve atomik kuvvet mikroskobu kullanılarak elastik modüllerinin ölçümü için ayrıntılı protokoller sunuyoruz.

sertliği ölçme<em&gt; Ex Vivo</emAtomik Kuvvet Mikroskobu Kullanma&gt; Fare aorta

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Bu protokolün genel amacı, fare aortalarının ex vivo elastisite modülünü ölçmek için Atomik Kuvvet Mikroskopisi'nin kullanım prosedürlerini açıklamaktır. Bu yöntem; kardiyovasküler hastalıklar ve yaşlanma gibi vasküler biyomekanik ve hastalık alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olur. Bu tekniğin temel avantajı, AFM'nin arterler ve hücreler gibi yumuşak biyolojik örneklerin biyomekanik özelliklerini nanometre düzeyinde yüksek bir doğrulukla karakterize edebilmesidir.AFM prosedürlerini ben sunacağım, laboratuvarımızdan araştırmacı Dr. Shu-lin Liu ise fare aortalarının nasıl izole edileceğini gösterecek. Başlamak için, beraberindeki metin protokolünde açıklandığı şekilde bir fareyi ötanize edin ve aortaya ulaşana kadar diseke edin. Küçük bir pens yardımıyla aortayı çevreleyen yağı tutun ve aortanın etrafındaki yağları dikkatlice kesip çıkarmak için küçük bir makas kullanın.Ardından, aortayı pensle nazikçe kavrayın ve yükselen aortanın başlangıcından damarı boyunca bir kesik, abdominal aortanın hemen üzerinden inen aortanın sonunda ise başka bir kesik yapın. Diseke edilen aortayı, kalsiyum veya magnezyum içermeyen PBS bulunan 60 milimetrelik bir kaba aktarın. Kap içerisinde, aortadaki kalan tüm yağ dokularını temizlemeye devam edin ve ardından aortayı boylamsal olarak açın.Ardından, Atomik Kuvvet Mikroskobu ile analiz etmek üzere, inen aorttan 2 milimetre x 4 milimetrelik bir parça ve aort arkından aynı boyutta bir parça kesin. Bu doku parçalarını yeni bir 60 milimetrelik plastik kaba yerleştirin ve bir damla PBS içinde nemli tutun. Aorta dokunmadan, doku etrafındaki PBS'yi bir laboratuvar mendili kullanarak dikkatlice temizleyin.Dokunun lüminal tarafının yukarı baktığından emin olun ve açılmış aortun her iki ucunu plakaya nazikçe yapıştırmak için 5 ila 10 µL siyanoakrilat yapıştırıcı kullanın. Bu işlem sırasında aortun gerilmemesi kritik önem taşımaktadır. İşlem tamamlandığında, yapıştırılan aortun katlanmadığından veya yüzmediğinden emin olun.Aort üzerindeki yapıştırıcı 30 ila 60 saniye boyunca havada kurutulduktan sonra, yavaşça PBS ekleyin ve örneği daldırın. Bir cımbız kullanarak, küresel uçlu bir silikon nitrür AFM probunu prob tutucusuna yerleştirin. Ardından, prob tutucusunu AFM başlığının ZScanner yuvasına sıkıca sabitleyin.Ardından, AFM yazılımını açın. Deney Kategorisi'ne gidip Temas Modu'nu seçerek deney tipini belirleyin. Daha sonra, Deney Grubu'na gidip Sıvıda Temas Modu'nu seçin ve son olarak Deney kısmına gidip Sıvıda Temas Modu'nu seçin.Bunlar seçildikten sonra, Deneyi Yükle seçeneğine tıklayın. Bu işlem lazeri açacaktır. Ardından, beraberindeki metin protokolünde açıklandığı şekilde lazeri hizalamak için kullanılacak bir numune hazırlayın.Numuneyi AFM üzerine yerleştirin. Lazer konumlandırma düğmelerini ayarlayarak lazer noktasını AFM probunun ucuna konumlandırın. Ardından, Dikey Sapma değerleri sıfır ile eksi bir volt arasında ve Yatay Sapma sıfıra yakın olana kadar foto diyotun konumunu ayarlamak için dedektör konumlandırma düğmelerini kullanın.Ardından, lazer Toplam Sinyalinin (Sum Signal) maksimize edildiğinden emin olun. Gerektiğinde, maksimum toplam sinyali elde etmek için lazer ışınının AFM ucundaki konumunu ve fotodiyodun konumunu yeniden ayarlayın. Kalibrasyona başlamak için parametreleri kontrol et (check parameters) seçeneğini belirleyin ve Tarama Boyutu (Scan Size) parametresini sıfıra ayarlayın.Tarama Hızını bir hertz olarak ayarlayın. Örnek/Hat değerini 256'ya ve Sapma Ayar Noktasını 20 nanometreye ayarlayın. Ardından Engage seçeneğini seçin.Prob plaka yüzeyiyle temas ettiğinde, Ramp seçeneğine tıklayın. Ardından, tarama araç çubuğu menüsünden genişletilmiş modu seçin ve parametreleri burada gösterildiği gibi ayarlayın. Ramp araç çubuğunda, ramp continuus seçeneğini belirleyin ve plaka üzerinde bir kuvvet eğrisi elde edin.Bu kuvvet eğrisinde, yazılımın sonuçları dikey sapma ile Z pozisyonuna göre grafiklemek itsine olanak sağlamak için Kanal 1'i Deflection Error olarak ayarlayın. Kuvvet eğrisinin sol veya sağ uçlarına tıklayın ve imleci, düz çizgi ile uydurulacak olan kuvvet eğrisinin doğrusal bir bölgesini kapsayacak şekilde sürükleyin. Ardından, araç çubuğunda Ramp seçeneğini belirleyin ve Update Sensitivity üzerine tıklayın.Güncel değeri kaydedin. Ardından, Calibrate seçeneğini belirleyin ve Detector kısmına tıklayın. Beş ölçümden elde edilen ortalama değeri Deflection Sensitivity kutusuna girin.AFM başlığını yükseltmek ve termal ayar işlemi sırasında AFM ucu ile plaka arasındaki etkileşimi önlemek için Withdraw düğmesine iki veya üç kez tıklayın. Ardından, araç çubuğundaki Thermal Tune seçeneğine tıklayın. Thermal Tune aralığını 1 ile 100 kilohertz arasında ayarlayın ve Deflection Sensitivity Correction değerini V şeklinde konsollar için 1.144, dikdörtgen konsollar için ise 1.166 olarak belirleyin.Thermal Tune menüsünde, bir termal ayar eğrisi elde etmek için Acquire Data'ya tıklayın. Ardından, eğrinin her iki yanına kırmızı kesikli çizgiler yerleştirin ve veriye hangisinin daha iyi uyduğuna bağlı olarak Lorentzian veya basit harmonik osilatör modelini seçin. Sonra, Fit Data'ya tıklayın ve bu değeri kaydetmek için Calculate Spring K'yi seçin.Aort dokusu içeren 60 milimetrelik kültür kabını mikroskop tablasına yerleştirin ve plakayı manyetik plaka tutucu ile sabitleyin. Aorta konsol ile temas ettiğinde, piezo merkezinin stabil olduğundan emin olun ve Ramp seçeneğine tıklayın. Ramp boyutunu üç mikrometre, Tetikleme modunu Göreceli ve Tetikleme eşiğini 100 nanometre olarak ayarlayın.Ardından ramp continuous seçeneğini seçin. Prob ile numune arasındaki temas noktasının, Z ramp döngüsünün yaklaşık olarak merkezinde veya alt üçte birlik kısmında gerçekleştiğini gözlemleyin. Eğer bu durum gözlemlenmezse, numuneyle teması kesin, ramp boyutunu gerektiği gibi ayarlayın ve numuneyle yeniden temasa geçin.Ardından, menü çubuğundaki Microscope seçeneğine tıklayın ve Engage Settings öğesini belirleyin. SPM withdraw değerini 30 micrometers olarak değiştirin, ardından OK seçeneğine tıklayın. Kuvvet eğrisini gözlemledikten sonra, menü çubuğundaki Capture seçeneğine tıklayın ve Capture Filename öğesini belirleyin. Sonu OOO ile biten istediğiniz bir dosya adını girin, belirlenmiş bir klasör seçin ve verileri kaydedin.Analize başlamak için kuvvet eğrisi analiz yazılımını açın, analiz edilecek dosyayı yükleyin ve beraberindeki metin protokolünde açıklandığı şekilde verileri düzenleyin ve pürüzsüzleştirin. Ardından, menü çubuğundan Baseline Correction seçeneğini belirleyin ve girişleri burada gösterildiği gibi ayarlayın. Sonra, grafikteki dikey noktalı mavi çizgiyi kuvvet eğrisinin düz kısmını kapsayacak şekilde ayarlayın ve Execute düğmesine tıklayın.Ardından, araç çubuğu menüsünden Indentation seçeneğine tıklayın ve girişleri burada gösterildiği gibi ayarlayın. Bu değerleri kaydedin ve her bir ilgi alanından birbirine yakın mesafelerde alınan beş kuvvet eğrisi ölçerek her bir ilgi alanının Young modülünü analiz edin. Doku örneğinin genel sertliğini belirlemek için, doku içerisindeki örnek alanının beş farklı bölgesinden toplam 25 ölçüme kadar veri alınmalıdır.Bu alanlar, aortik ark ve inen aorta gibi farklı bölgelerdeki dokuları karşılaştırmak için kullanılabilir. Bu grafiklerde, aynı fare aorta örneğinden elde edilen inen aorta ve aortik arkın temsili kuvvet eğrileri gösterilmektedir. Bu verilere dayanarak, her grup için elastik modül hesaplanabilir ve farklı bölgeler veya koşullar arasında karşılaştırma yapmak için kullanılabilir.Bu videoyu izledikten sonra, fare aortasının nasıl uygun şekilde izole edileceği ve elastik modülünün Atomik Kuvvet Mikroskobu (AFM) ile nasıl ölçüleceği konusunda kapsamlı bir bilgi sahibi olacaksınız. Bu prosedürü uygularken, AFM ölçümünün doku izolasyonundan hemen sonra gerçekleştirilmesinin önemli olduğunu unutmamalısınız. Teknikte uzmanlaşıldığında, aort izolasyonu fare başına yaklaşık 45 dakikada tamamlanabilir ve AFM ölçümü ile analizi, doğru şekilde yürütüldüğü takdirde bir buçuk saat içinde bitirilebilir.Bu prosedürün ardından, vasküler yeniden şekillenme veya vasküler düz kas hücre proliferasyonu ile ilgili ek soruları yanıtlamak amacıyla immunofloresans veya proliferasyon analizleri gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

measuring-stiffness-ex-vivo-mouse-aortas-using-atomic-force

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Ekstraselüler matriksin sertliği kuvvetle yapışık hücrelerinin birden fazla davranışları etkiler. Matrix sertliği bir doku boyunca mekansal değişir ve çeşitli hastalık koşullarında değişiklik uğrar. Burada atomik kuvvet mikroskobu microindentation kullanarak fare akciğer dokusunun normal ve fibrotik sertliği mekansal farklılıklar karakterize etmek için yöntemler geliştirmek.

Atomik Kuvvet Mikroskobu kullanarak Akciğer Doku Mikro-Mekanik Karakterizasyonu

Bu kağıt bir atomik kuvvet mikroskobu (AFM) kullanarak microindentation ile canlı hücrelerin mekanik özelliklerini karakterize etmek için bir protokol göstermektedir.

Atomik Kuvvet Mikroskobu kullanarak Yaşam Hücrelerinin Mekanik Özellikleri Ölçme

Farelerde in vivo olarak basınç-çap ilişkisinden aort sertliğini ölçmek için bir teknik tarif ediyoruz. Aort çapı ultrason ile kaydedilir ve aort basıncı katı hal basınç kateteri ile invaziv olarak ölçülür. Kan basıncı kademeli olarak değiştirilir ve elde edilen çap ölçülür.

Artan Aort Katılığa Ölçme İn Vivo Ultrason Kullanımı Farelerde

Biz atomik kuvvet mikroskobu (AFM) kullanarak eklem kıkırdağı hücresel düzeyde erken osteoartritik değişiklikleri araştırmak için bir yöntem saklıt.

Erken Osteoartrit tespit etmek için Atomik Kuvvet Mikroskobu Uygulaması

Normal ve hastalıklı karaciğerde kollajen bakımından zengin alanların elastik modüllerini atomik kuvvet mikroskobu kullanarak ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Polarizasyon mikroskobunun eşzamanlı kullanımı, karaciğer bölümlerinde kollajen bakımından zengin alanların lokalizasyonu için yüksek mekansal hassasiyet sağlar.

Polarizasyon Mikroskobu ile Birleştirilmiş Atomik Kuvvet Mikroskobu Kullanılarak Karaciğer Sertliğinin Ölçülmesi

Yakın zamanda retina kapiller sertleşmesini diyabetle ilişkili retina disfonksiyonu için yeni bir paradigma olarak tanımladık. Bu protokol, fare retina kılcal damarlarının ve subendotel matrisinin retinal endotel kültürlerinden izolasyon adımlarını detaylandırır ve ardından atomik kuvvet mikroskobu kullanılarak sertlik ölçüm tekniğinin bir açıklaması yapılır.

Atomik Kuvvet Mikroskobu Kullanılarak Sertlik Ölçümü için Fare Retina Kılcal Damarlarının ve Subendotelyal Matriksin İzolasyonu

Bu protokolde, aksolotl dokusunun atomik kuvvet mikroskobu (AFM) için nasıl hazırlanacağını ve sağlam ve yenileyici ekstremite kıkırdağında girinti ölçümlerinin nasıl yapılacağını gösteriyoruz.

Sağlam ve Yenileyici Aksolotl Ekstremitelerde Kıkırdak Atomik Kuvvet Mikroskobu Ölçümleri

Biz hücresel bükülme sertliği ölçmek için bir optik tuzak bir kapak kayma yüzeyi bağlı bükme ipliksi bakteri hücreleri için bir protokol mevcut.

Optik Tuzak kullanarak Bakteriyel Hücre Bükme Rijitlik Ölçüm

Bu kağıt kültürü canlı hücreleri mekanik uyarılması için entegre bir atom operasyon okuyucu kuvvet optik görüntüleme mikroskop öğretmeyi hedefliyor. Bir adım-adım protokol sunulmuştur. Mekanik stimülasyonu canlı hücre yanıtı gösteren bir temsilci veri seti sunulmaktadır.

Tümleşik Optik ve Atomik Kuvvet Mikroskobu eğitimi Mekanik Uyarım Canlı Hücre Tepki

Yumurtalık kanseri Ortotopik hayvan modellerinde daha iyi insan hastalığı çoğaltmak ve bu nedenle kanser progresyonu ve tedaviye tümör yanıt anlayışımızı geliştirmek. Bir fare modelinde lusiferaz ifade over tümör hücrelerinin bir İntrabursal enjeksiyon alır. Tedavi ağızdan sonda ile yönetilmektedir. Tümör büyüme...

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Öğrenin fare aortası izolasyonu ve AFM ile elastik modül ölçümü yöntemlerini. Bu protokol damar biyomekaniği ve kardiyovasküler hastalık araştırmalarında nanometre ölçeğinde hassas sonuçlar sağlar.

sertliği ölçme

Daha fazla video keşfet