Name: Intrarenal enjeksiyon Escherichia coli Piyelonefritli Sıçan Modelinde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Keşfedin piyelonefrit cerrahi modelini böbrek pelvisine direkt bakteri enjeksiyonu ile. Bu yöntem, Escherichia coli ile böbrek enfeksiyonu patogenezini ve tedavi stratejilerini güvenilir şekilde araştırmanızı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, NIH/NIDDK K12 DK100014 (Lan Lu), Case Comprehensive Cancer Center (NIH/NCI P30 CA43703) ve Clinical and Translation Science Collaborative of Cleveland'ın (NIH/NCATS UL1 TR000439) desteğini kabul etmek ister.

Tüm hayvan çalışmaları, Case Western Reserve Üniversitesi&#39;nde onaylanmış Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) protokollerine göre gerçekleştirildi. Aşağıda tarif edilen cerrahi işlemin süresi yaklaşık 45-60 dk&#39;dır. MR işlemi her zaman noktası için yaklaşık 15 dakika sürer. 1. Anestezi <ol><li> İntra-peritoneal enjekte edilebilir anestezi uygulamadan önce hayvanın taşınmasını ve kısıtlanmasını kolaylaştırmak için oksijen ile karıştırılmış% 2 izofluran seti olan izofluran bölmesindeki sıçana anestezi uygulayın. </li><li> İzofluran&#39;a maruz bırakıldıktan 3-5 dakika sonra, hayvanın anestezi altında olup olmadığını kontrol edin ve parmak sıkışmasına tepki göstermeyin. </li><li> İntra peritoneal bir ksilazin ve ketamin karışımı ile sedat sıçanı: 75 mg / kg ketamin / 10 mg / kg xylazin. İntra peritoneal enjeksiyon yaparken, bağırsağın veya diğer hayati organların parçalarının delinmediğinden emin olmak için iğneyi geri çekin. </li><li> benTopikal ağrı kesici sağlamak için insizyon alanına subkutanöz olarak 2 mg / kg bupivakain konulmalıdır. </li></ol> 2. Cerrahi Alanın Hazırlanması <ol><li> Ameliyat için kullanılmadan önce cerrahi aletleri ve malzemeleri sterilize edin ve sterilite için cerrahi yastığa yerleştirin. Çoğu araç ve gereç otoklavlanabilir ve tekrar kullanılabilir. </li><li> Tüm cerrahi işlemler için steril eldiven kullanın. </li><li> Hayvanın sağ tarafındaki kürkü tıraş etmek için elektrikli tıraş bıçağı kullanın. Hayvanı kaburga kafesinin altından arka bacağın üst kısmına traş için büyük saçsız alan sağlayacak şekilde tıraş edin. </li><li> Hayvanı, steril bir cerrahi yastığa yerleştirerek dezenfekte edilen bölgeyi çevredeki alanlardan ayırın. </li><li> Cildinizi povidon iyot veya betadin gibi bir dezenfektan ile ovun. Cerrahi alanın merkezinde ovma işlemine başlayın ve dairesel bir şekilde dışarıya doğru hareket ettirin. Yeni bir povidon iyot veya betadin silinerek en az üç kez tekrarlayın. </li&gt; <li> İyot emilirse toksik olabilir, cilt berrak oluncaya kadar cerrahi alanı% 70 alkollü çubuk ile ovun. </li></ol> 3. Cerrahi İşlem <ol><li> Bu işlemi aseptik koşullar altında koruyun. </li><li> Anestezi altındaki hayvanı sağ yan yüzü yukarı bakacak şekilde sol yanal dekübitüs pozisyonunda sıcak bir ısıtma yatağına yerleştirin. NOT: Hipotermiyi önlemek için hayvanın çekirdek vücut ısısını 35-37 ° C&#39;de tutmak için özen gösterilmelidir. Bu ısıtma yatağı, aseptik koşulları korumak için gerektiğinde sterilize edilmelidir. </li><li> Kaburga kafesini hissedin ve kaburga kafesinin altından başlayan steril bir boy 10 kestane bıçağı kullanarak küçük 2-3 cm sağ dorsal retroperitoneal kesi yapın. </li><li> İnsizyonun her iki yanında uzunlamasına steril gazlı bez koyun. </li><li> Karın boşluğunu görselleştirmek ve erişmek için subkutanöz dokuyu, yağ ve kasları parçalayın. Daha derinlere nüfuz edebilmek için kıvrımlı bıçaklı Mayo makas kullanınRasyonunu yara haline getirin ve kalın dokuları kesin. </li><li> Karaciğer açıkça görünür ve erişilebilir olduğunda, karaciğeri yukarıya doğru geri çekmek için künt forseps kullanın. </li><li> Öte yandan başka bir çift künt forseps kullanmak, sağ böbrekleri ortaya çıkararak karın boşluğunun hemen dışına oturur. </li><li> Böbrek yerlerine tutturmak için işaretçisiyle parmağınızı ve sol elinizin başparmağını kullanın. Sağ elle, steril bir şırınga ile böbrek leğene (beyaz bir kabarcık olarak görülen) 15 ° C&#39;de 0.1 ml UTI89 E. coli solüsyonu (1 x 10 8 -1 x 10 9 arasında konsantrasyon) enjekte edin 15 . NOT: Bakteriyel titreyi referans 15&#39;de açıklandığı gibi hazırlayın. </li><li> İnokulumun periton içerisine akmasını önlemek için iğne üzerine emilebilir bir hemostat şerit yerleştirin. İğneyi yavaşça böbrek pelvisinden çekin. NOT: Çevredeki dokuları delmemeye veya enfekte etmemeye özen gösterilmeli ve bu da hedef dışı enfeksiyona neden olmaktadır.Ons ve / veya komplikasyonlar. </li><li> Karın boşluğuna geri koymadan önce böbrekleri normal tuzlu su ile iyice durulamak için daha büyük bir şırınga kullanın. </li></ol> 4. Sütürler Not: Dokularda gömülecek sütür, absorpsiyon yapılmayan 4-0 örgülü dikiş olmalıdır. Emilebilir veya monofilament sütürler vücut yüzeyleri için kullanılabilir. <ol><li> Kan akışının engellenmesini önlemek için dikişleri eşit ve doku kenarına mümkün olduğunca yakın yerleştirin; Tipik olarak kenardan en fazla 0,3 cm uzaklıkta olmalıdır. </li><li> Deriyi tutun ve bir çift güzel dişli forseps kullanarak hafifçe döndürün ve cildi delmek için hazırlıklı olarak iğne tutucusunu öne eğik bir konuma çevirin. </li><li> İğneyi döndürmek ve deriden geçirmek için bilekleri sarkıtarak iğneyi cildin tam kalınlığına doğru itin. </li><li> İşlemi yapan kişiye en yakın cilt kenarı için bu işlemi tekrarlayın. </li><li> sıkmakDoku kenarlarına karşı koyacak kadar sütürler. Herhangi bir sıkılaştırma kan dolaşımını engelleyecek, yavaş yara iyileşmesi ve çatlamaya neden olabilir. </li><li> Dikdörtgen düğümleri kullanarak sütürü sanki basit bir kesilen dikişmiş gibi sıkın, ancak kısa şerit kesilir, yaklaşık 3-4 mm&#39;lik bir kuyruk bırakılır. </li><li> İlk dikiş bağlandıktan sonra, ilk dikiş yaklaşık 3 mm uzaklıkta ikinci bir dikiş yerleştirmeye hazırlanın ve devam eden dikişe devam edin. </li><li> İnsizyonun sonuna gelindiğinde, son dikişi tamamen içeri doğru çekmeyin. Bunun yerine, dikiş kapağının distal ucunu birbirine bağlamak için iğne tutacağı ile burada tutulan ilmek kısa şerit olarak kullanın. </li><li> Bağlama kravatlarını kullanarak dikiş ipliğini kare düğümlerle birbirine bağlayın. Bu, 3 ucun tamamlanmış düğümden uzak uca yapışmasına neden olur. </li></ol> 5. Hayvan Kurtarma <ol><li> Anestezi tersine çevirmek için ameliyattan sonra intra-peritoneal olarak 2.1 mg / kg Yohimbine enjekte edin. bir3-5 saat sonra nimalslerin cerrahi prosedürden tamamen iyileşmesi bekleniyor. </li><li> Hayvanı ısıtma yastığı (hipotermiden kaçınmak için) ve ameliyat sonrası emici yumuşak yatak takımı üzerinde tutun. </li><li> Normal beslemeye geri dönene kadar oral veya parenteral sıvılar ile rehidrasyon sağlayın (24 saat içinde). Dehidrasyon etkilerini sınırlandırmak için ameliyattan hemen sonra yaklaşık 0.6 ml normal salin solüsyonunu peritoneal olarak enjekte edin. </li><li> IACUC tarafından onaylanmış Hayvan Bakımı ve Kullanım Protokolünde tarif edildiği gibi analjezi sağlayın. Ağrı tedavisi için subkütan 5 mg / kg karprofen enjekte edin. </li><li> İnsizyonları düzenli olarak şişlik, eksüda, ağrı veya delinme için izleyin. </li></ol> Manyetik Rezonans Görüntüleme yoluyla 6. Doğrulama <ol><li> Yüksek alanlı küçük hayvan MRI tarayıcılarında i n vivo MRI deneyleri yapın. </li><li> Oksijen içinde% 3 izofluran ile anestezi indükleyin ve izobasöre doğru böbrek ile yerleştirin.Radyofrekans bobini yedi. Bir nosekondan görüntüleme prosedürü boyunca sürekli olarak% 1-2 izofluran anestezi uygulanan hayvanlara sağlayın. NOT: Şekil l&#39;de gösterilen in vivo MR görüntüleri için sıçan boyutunda hacim bobini (iç çap = 72 mm) kullanıldı. </li><li> Her hayvanın solunum hızını (40-60 nefes / dakika) ve çekirdek vücut sıcaklığını (35 ± 1 ° C) korumak için bir hayvan izleme ve kontrol sistemi kullanın. </li><li> Hem enfekte hem de kontrol böbreklerinin yüksek çözünürlüklü, eksenel T2 ağırlıklı görüntüleri elde etmek için çok dilimli, çok eko-spinli bir eko MR görüntü alımı kullanın. Tipik MR görüntüleme parametreleri, tekrar süresi = 5.000 ms, eko süresi = 40 ms, dilim kalınlığı = 2.0 mm, düzlemsel uzaysal çözünürlük = 200 μm, 3 sinyal ortalamaları ve 8 dakikalık bir edinme zamanıdır. </li></ol>

<ol><li>Saliba, W., Barnett-Griness, O., Rennert, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+between+obesity+and+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">The association between obesity and urinary tract infection.</a> Eur J Intern Med. 24 (2), 27-31 (2012).</li>
<li>Semins, M., Shore, A., Makary, M., Weiner, J., Matlaga, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+obesity+on+urinary+tract+infection+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">The impact of obesity on urinary tract infection risk.</a> Urology. 79 (2), 266-269 (2011).</li>
<li>Zilberberg, M., Shorr, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secular+trends+in+gram-negative+resistance+among+urinary+tract+infection+hospitalizations+in+the+United+States%2C+2000-2009%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Control+Hosp+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Secular trends in gram-negative resistance among urinary tract infection hospitalizations in the United States, 2000-2009.</a> Infect Control Hosp Epidemiol. 34 (9), 940-946 (2013).</li>
<li>Whiting, D., Guariguata, L., Weil, C., Shaw, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IDF+diabetes+atlas%3A+global+estimates+of+the+prevalence+of+diabetes+for+2011+and+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Res+Clin+Pract%22%5BJournal%5D)">IDF diabetes atlas: global estimates of the prevalence of diabetes for 2011 and 2030.</a> Diabetes Res Clin Pract. 94 (3), 311-321 (2011).</li>
<li>Wild, S., Roglic, G., Green, A., Sicree, R., King, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+diabetes%3A+estimates+for+the+year+2000+and+projections+for+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of diabetes: estimates for the year 2000 and projections for 2030.</a> Diabetes Care. 27 (5), 1047-1053 (2004).</li>
<li>Ma, D., Gulani, V., Seiberlich, N., Liu, K., Sunshine, J., Duerk, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/nature/journal/v495/n7440/full/nature11971.html">Magnetic resonance fingerprinting.</a> Nature. 495 (7440), 187-192 (2013).</li>
<li>Lu, L., Sedor, J., Gulani, V., Schelling, J., O'Brien, A., Flask, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+diffusion+tensor+MRI+to+identify+early+changes+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Use of diffusion tensor MRI to identify early changes in diabetic nephropathy.</a> Am J Nephrol. 34 (5), 476-482 (2011).</li>
<li>Rosen, D., Hooton, T., Stamm, W., Humphrey, P., Hultgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+intracellular+bacterial+communities+in+human+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Detection of intracellular bacterial communities in human urinary tract infection.</a> PLoS Med. 4 (12), e329(2007).</li>
<li>Torine, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urinary+tract+infection%3A+diabetic+women%27s+strategies+for+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Nurs%22%5BJournal%5D)">Urinary tract infection: diabetic women's strategies for prevention.</a> Br J Nurs. 20 (13), 791-792 (2011).</li>
<li>Rosen, D., Hung, C., Kline, K., Hultgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptozocin-induced+diabetic+mouse+model+of+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Streptozocin-induced diabetic mouse model of urinary tract infection.</a> Infect Immun. 76 (9), 4290-4298 (2008).</li>
<li>Larsson, P., Kaijser, B., Mattsby-Baltzer, I., Olling, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+for+ascending+acute+pyelonephritis+caused+by+Escherichia+coli+or+proteus+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">An experimental model for ascending acute pyelonephritis caused by Escherichia coli or proteus in rats.</a> J Clin Pathol. 33 (4), 408-412 (1980).</li>
<li>Gupta, R., Ganguly, N., Ahuja, V., Joshi, K., Sharma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ascending+non-obstructive+model+for+chronic+pyelonephritis+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An ascending non-obstructive model for chronic pyelonephritis in BALB/c mice.</a> J. Med. Microbiol. 43 (1), 33-36 (1995).</li>
<li>Fernandes, P., Shipkowitz, N., Bower, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+for+studying+the+pathogenesis+and+treatment+of+pyelonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Murine models for studying the pathogenesis and treatment of pyelonephritis.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 224, 35-51 (1987).</li>
<li>Kaye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+water+diuresis+on+spread+of+bacteria+through+the+urinary+tract%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">The effect of water diuresis on spread of bacteria through the urinary tract.</a> J. Infect. Dis. 124 (3), 297-305 (1971).</li>
<li>Fierer, J., Tainer, L., Braude, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteremia+in+the+pathogenesis+of+retrograde+E.+coli+pyelonephritis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Bacteremia in the pathogenesis of retrograde E. coli pyelonephritis in the rat.</a> Am. J. Pathol. 64 (2), 443-456 (1971).</li>
<li>Nickel, J., Olson, M., Costerton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+experimental+bacterial+prostatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection%22%5BJournal%5D)">Rat model of experimental bacterial prostatitis.</a> Infection. 19 (3), S126-S130 (1991).</li>
<li>Hagberg, L., Engberg, I., Freter, R., Olling, S., Eden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ascending%2C+unobstructed+urinary+tract+infection+in+mice+caused+by+pyelonephritogenic+Escherichia+coli+of+human+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Soc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin.</a> Am Soc Microbiol. 40 (1), 273-283 (1983).</li>
<li>Kurosaka, Y., Ishida, Y., Yamamura, E., Takase, H., Otani, T., Kumon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-surgical+rat+model+of+foreign+body-associated+urinary+tract+infection+with+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A non-surgical rat model of foreign body-associated urinary tract infection with Pseudomonas aeruginosa.</a> Microbiol. Immunol. 45 (1), 9-15 (2001).</li>
<li>Anderson, B., Jackson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyelitis%2C+an+important+factor+in+the+pathogenesis+of+retrograde+pyelonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Pyelitis, an important factor in the pathogenesis of retrograde pyelonephritis.</a> J Exp Med. 114 (3), 375-384 (1961).</li>
<li>Anderson, J. <a target="_blank" href="http://journals.sagepub.com/doi/pdf/10.1177/003591576205500601">Vesico-ureteric reflux.</a> J R Soc Med. 55 (6), 419-426 (1962).</li>
</ol>

Yazarların başka bir açıklaması yoktur.

Kemirgenlerde artan akut pyelonefrit (örn. Fare ve sıçanlar) transüretral kateterizasyon ile üretilebilir. 16 , 17 , 18 Bu transüretral enfeksiyon yöntemi, invazif olmadığı ve artan enfeksiyonun insan patofizyolojisini taklit ettiği için avantajlıdır. 17 , 18 , 19 , 20 Bununla birlikte, bu yö...

Kemirgen modelleri, piyelonefrit ve idrar yolu enfeksiyonları (UYE) de dahil olmak üzere çok sayıda insan hastalık bulgusu üzerinde çalışmak için kullanılmıştır. İYE&#39;ler küresel bir sağlık sorunudur ve her yaştan çocukları, erkekleri ve kadınları etkileyebilir. 1 , 2 , 3 ĐYE&#39;lerin başlangıç ​​tezahürü sistit içerir ve infüzyon üretere yükselirse böbrek enfeksiyonu (pyelonefrit) izlenebilir. Aynı zamanda, diyabet prevalansı dünya çapında 400 milyon kişiye yaklaşıyor. 4 , 5 Obezite olan veya tip 2 diabetes mellitus olan hastalarda İYE insidansı, 4 kez daha yüksek olabilir ve bu da tekrarlayan İYE enfeksiyonu (rUTI), sepsis, piyelonefritten renal fibrozis ve mesane disfonksiyonu riskinde artışa neden olur. 6 , 7 , 8 KemirgenModeller, ĐYE&#39;lerin incelenmesinde önemlidir, çünkü mevcut antibiyotik terapileri sadece ĐY &lt;hasta alt kümesinde kalıcı, önleyici bir yanıt üretmektedir. Klinik İYE bakımını iyileştirmek için anahtar adımlar akut enfeksiyondan inflamasyona, fibroza yol açan rUTI mekanizması ve patofizyolojik süreçlerinin yanı sıra tip 2 diabetes mellitusun etkisini anlamaktır. Hayvan modellerini geliştirmenin amacı, hastalık ilerlemesinin ve terapötik müdahalelerin daha doğru bir şekilde değerlendirilmesini sağlayan teknikler geliştirmektir. Sıçanlarda ve / veya farelerde böbrek hasarının patofizyolojisini, antibiyotik tedavisinin etkilerini ve diğer ĐYE&#39;lerin doğal seyrini incelemek için pyelonefriti indüklemek için çeşitli farklı yaklaşımlar kullanılmıştır. Retrograd İYE&#39;nin kurulması için ortak bir yaklaşım, transüretral kateterizasyondur. 10 , 11 , 12 , 13 &lt;/ Sup&gt; Bu yöntem, bakterileri üretra yoluyla anestezi altındaki hayvanlardaki idrar torbasına sokar. Bu teknik insan pyelonefritini yakından taklit ederken, pyelonefrit enfeksiyonunun asıl insidansı ve büyüklüğü, aşılama sırasında veya hemen sonrasında spontan üreterik reflü eksikliği veya üriner boşalma dahil olmak üzere çok faktör nedeniyle aşırı değişkenlik gösterebilir. 11 Sonuç olarak, yükselen pyelonefrit enfeksiyonunu indüklemedeki deneysel değişkenlik böbrek enfeksiyonlarını ve terapötik stratejileri incelemek için bu modelin faydasını kısıtlayabilir. Bu rapor, E. coli&#39;nin sıçan böbreğine doğrudan enjekte edildiği cerrahi bir pyelonefrit fare modelini tanımlamaktadır. Bu sıçan modelinin invaziv olmasına rağmen, böbreklere verilen E. coli miktarı, etkili bir şekilde kontrol edilerek sağlam bir böbrek enfeksiyonu ve enflamasyon sağlar. 14 Bu prosedür dahilinde ayrıca,In vivo Manyetik Rezonans Görüntüleme (MRI) ile bu indüklenen renal enfeksiyonların boylamsal olarak izlenebileceği.

<table><tbody><tr><td>Emici Ped</td><td>Fisher</td><td>14-127-47</td><td></td></tr><tr><td>Steril Pamuklu Gazlı Bez Ped</td><td>Fisher</td><td>22-415-469</td><td></td></tr><tr><td>Lateks Cerrahi Eldivenler</td><td>Henry Schein Hayvan Sağlığı</td><td>21540</td> Kavisli Mayonez Makas Fisher S17341 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Düz Künt Foreceps</td><td>Fisher</td><td>08-895</td><td></td></tr><tr><td>Neşter Sapı&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>08-913-5</td><td></td></tr><tr><td>Steril Neşter Bıçakları</td><td>Fisher</td><td>53220</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Luer-Lok Şırınga</td><td>BD Biosciences</td><td>309628</td><td>Bakteriyel enjeksiyonlar için</td></tr><tr><td>20 ml Luer-Lok Şırınga&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>301031</td><td>Tuzlu su yıkama için</td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Seneca Medical</td><td>240267</td><td></td></tr><tr><td>23 G 3/4 inç. İğne&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>305143</td><td></td></tr><tr><td>30 G 1 inç İğne&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>305128</td><td></td></tr><tr><td>U-100 İnsülin Şırıngası</td><td>Exel International&nbsp;</td><td>25846</td><td>İlaç enjeksiyonları için</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Henry Schein Hayvan Sağlığı</td><td>050033</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Henry Schein Hayvan Sağlığı</td><td>33197</td><td>Enjekte Et IP</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Patterson Veteriner Hekimi&nbsp;</td><td>07-881-9413</td><td>IP</td></tr><tr><td>Yohimbin (Atipamezol)</td> Enjekte <td>Edin: Patterson Veteriner Hekimi&nbsp;</td><td>07-867-7097</td><td>Ameliyat sonrası IP enjekte</td></tr><tr><td>edin Bupivakain (Marcaine)</td><td>Patterson Vetrinary&nbsp;</td><td>07-890-4584</td><td>İnsizyon bölgesine SQ enjekte edin&nbsp;</td></tr><tr><td>4-0 Kromik Bağırsak Sütürü</td><td>Ethicon Inc.</td><td>U203H</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Örgülü Vicryl Sütür</td><td>Ethicon Inc.</td><td>J304H</td><td></td></tr><tr><td>1 ml SubQ Şırınga</td><td>BD Biosciences</td><td>309597</td><td></td></tr><tr><td>E. coli&nbsp; UTI89 veya CFT073 ATCC</td><td></td><td>700928</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Emilebilir Hemostat Ethicon</td><td>Inc.</td><td>ETH1951CS&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Biospec 9.4T MRG&nbsp;</td><td>Bruker&nbsp;</td><td>94/20 USR</td><td></td></tr></tbody></table>

intrarenal enjeksiyon escherichia coli piyelonefritli sıçan modelinde

Intrarenal Injection of Escherichia coli in a Rat Model of Pyelonephritis

Piyelonefrit, böbreğin bakteriyel bir enfeksiyonudur ve en sık Escherichia coli'den kaynaklanır. Tekrarlayan enfeksiyonlar, sonuçta böbrek fonksiyonunun azalmasına neden olan önemli böbrek iltihabına ve fibroza neden olabilir. Piyelonefritin daha iyi klinik yönetimi ve önlenmesi başlatılmadan önce, ilerleme, nüks ve terapötik etkinlik mekanizmalarını incelemek için güvenilir bir hayvan modeli oluşturulmalıdır. Transüretral enfeksiyon modeli, insan piyelonefritini yakından taklit eder, ancak bakterileri böbreğe taşımak için üretral reflüye dayanması nedeniyle önemli farklılıklar gösterir. Burada, sıçan renal pelvisine bakteri enjeksiyonları yapmak için ayrıntılı bir cerrahi protokol sağlanmış ve non-invaziv Manyetik Rezonans Görüntüleme (MRG) ile onaylanmıştır. Bu protokolü kullanarak, hayvanlar istenen bir E. coli bakteri konsantrasyonuna doğrudan maruz kalır ve yeterli ameliyat sonrası bakım ile cerrahi prosedürden tamamen iyileşebilir. Bu, salin (sahte) kontrolleriyle karşılaştırma için deney hayvanı modellerinin müteakip boylamsal MRG değerlendirmelerini kolaylaştırır. Bu doğrudan uygulama yaklaşımını kullanarak, enfeksiyonun şiddeti kontrol edilebilir ve ilerlemenin mekanik çalışmaları ve yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için uygulanabilir.

Tıbbi görüntüleme teknikleri, İYE'yi ve terapötik etkinliği invaziv olmayan bir şekilde değerlendirme fırsatı sunar. Bu nedenle, MR 1-2 x 10 7 UTI89 E. coli'nin enjeksiyonundan sonra akut enfeksiyon uyarılmasını doğrulamak için ve ameliyat öncesi ve sonrası böbrek değişiklikleri görselleştirmek için kullanılmıştır. Şekil 1a-b , giderek artan böbrek enfeksiyonu bölgesini gösterir (sarı oklar). Enfeksiyon sonrası postoperatif 1. ve 4. günlerde her bir h...

Bu el yazması, Escherichia coli'nin renal pelvise doğrudan intrarenal enfeksiyonu kullanan bir sıçan cerrahi piyelonefrit modelini tanımlamaktadır. Deneysel prosedür, piyelonefritin patogenezinin yanı sıra ilişkili inflamasyon ve fibrozisin patogenezini incelemek için kullanılabilir.

Intrarenal enjeksiyon Escherichia coli Piyelonefritli Sıçan Modelinde

Pyelonephritis is a bacterial infection of the kidney and is most commonly caused by Escherichia coli. Recurrent infections can cause significant renal ...

Peylonefrit'in bu cerrahi sıçan modelinin genel amacı, diğer modellerde kullanılan renal reflü gerektirmeyen bir yöntem sağlamaktır. Bu yöntem, antibiyotik tedavisinin en iyi nasıl uygulanacağı, tekrarlayan enfeksiyonların veya tedaviden sonra nüksetmeye yol açabilecek rezidüel enfeksiyonların etkilerini nasıl izleyebileceğimiz gibi tıp alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, bu modelin, böbrek reflüsü gerektirmeden bakterileri makul ölçüde güvenilir bir miktarda doğrudan böbreğe uygulamasıdır, bu da enfeksiyon açısından bir miktar değişkenlik katabilir.Bu işleme başlamadan önce, bir milyon ila 10 milyon hücre içeren bakteriyel enjeksiyon bolusunu hazırlayın. Fareyi uyuşturduktan ve cildini ameliyata hazırladıktan sonra, kuruluğu önlemek için gözlere veteriner gözü merhemi sürün. Fareyi, sağ kanadı yukarı bakacak şekilde sol dekübit pozisyonunda ısıtılmış bir cerrahi platforma yerleştirin.Cildi bir dezenfektanla ovalayın. Üç kez tekrarlayın ve ardından cilt temizlenene kadar cerrahi bölgeyi %70 alkol takası ile ovalayın. Ameliyata başlamak için, 10 Numara neşter kullanarak, göğüs kafesinin altından başlayarak küçük, iki ila üç santimetrelik sağ dorsal retroperitoneal kesi yapın.Sonunda karın boşluğunu görselleştirmek ve erişmek için deri altı dokusunu, yağı ve kasları diseke ederek devam edin. Karaciğer açıkça görülebilir ve erişilebilir hale geldiğinde, yukarı doğru geri çekmek için körelmiş forseps kullanın. Daha sonra, ikinci bir çift körelmiş forseps kullanarak, sağ böbreği karın boşluğunun hemen dışına oturacak şekilde ortaya çıkarın.Şimdi, baskın olmayan elde enjeksiyon için böbreği konumlandırın. Baskın eli kullanarak, enjeksiyon iğnesini renal pelvis üzerine tam olarak hedefleyin. Ardından, yavaş ve düzenli bir şekilde 0.1 mililitre bakteri veya tuzlu su çözeltisi enjekte edin.Burada salin enjekte ediliyor. Bolus, dokuda beyaz bir baloncuk gibi görünecektir. İğneyi geri çekmeden önce, inokulumun peritona dışarı akışını önlemek için enjeksiyon bölgesinin üzerine emilebilir bir hemostat şeridi yerleştirin.Ardından iğneyi yavaşça dışarı çekin. Şimdi, büyük bir şırınga kullanarak, böbreği normal tuzlu su ile iyice durulayın. Ardından, böbreği karın boşluğuna geri koyun.Cerrahi alan kapatma için vücut dokusunda emilebilir veya monofilament sütürler ve vücut yüzeylerinde 4-0 emilemeyen örgülü sütürler kullanın. Dikişleri yerleştirmek için, cildi kavramak ve hafifçe önlemek için ince dişli forseps kullanarak operatörden en uzak yerden başlayın. Ardından, iğne tutucuyu pronasyonlu bir konuma döndürün ve iğneyi döndürmek ve cildin tam kalınlığı boyunca sürmek için bileği sırtüstü yatırın.Sütürü, doku kenarlarını ortaya çıkaracak kadar sıkın. Daha sıkı olması kan akışını engelleyecek ve böylece yara iyileşmesini yavaşlatacak ve muhtemelen ayrışmaya neden olacaktır. Daha sonra, dikişi kare bir düğüm kullanarak, sanki basit bir kesilmiş dikişmiş gibi bağlayın, ancak sadece kısa iplik kesilir ve üç ila dört milimetrelik bir kuyruk bırakılır.Şimdi, sonraki her bir dikişi bir öncekinden yaklaşık üç milimetre uzağa yerleştirerek, akan dikişe devam edin. Kesinin sonuna ulaşıldığında, son dikişi tamamen çekmeyin. Bunun yerine, iğne tutucu tarafından tutulan halkayı kısa iplik olarak kullanın ve sütür kapağının distal ucunu bağlayın.Şimdi, alet bağlarını kullanarak, kare düğümler kullanarak dikişi bağlayın. Sonuç, tamamlanmış bir düğümden yapışan üç iplik olacaktır. Analjezikler ve 0.6 mililitre peritoneal normal salin enjeksiyonu sağladıktan sonra, emici yumuşak yataklı bir ısıtma yastığı üzerinde anesteziden kurtulurken hayvanı gözlemleyin.İyileşmenin ilk 24 saatinde, normal beslenmeye dönene kadar hayvanı oral veya parenteral sıvılarla rehidrate edin. Daha sonra, insizyonu şişlik, eksüda veya ayrışma açısından düzenli olarak izleyin ve gerektiğinde ağrı için analjezikler sağlayın. Akut peylonefrit enfeksiyonu, kemirgen modeline bir milyon ve 10 milyon UT189 E.coli hücresinin enjeksiyonu ile indüklendi.Böbreğin MRG'si, enjeksiyondan bir ila dört gün sonra enfeksiyon bölgesinde ilerleyici bir artış gösterdi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 30 dakika içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, hayvanların aşırı septik hale gelmediğinden emin olmak için, özellikle insizyon noktalarında, böbrek dışında E.Coli enfeksiyonu belirtilerini izlemek için ameliyattan sonra hayvanları kontrol etmeyi unutmamak önemlidir.Bu prosedürü takiben, enfeksiyon yaşayabilir mi, enfeksiyon ne kadar hızlı büyüyor ve bu tedavi etkili mi gibi ek soruları yanıtlamak için MRI taraması gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

intrarenal-injection-escherichia-coli-rat-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Conover, M. S. ve ark., Fare Modelinde İYİS ve CAUTI'nin Kuruluşu ve Karakterizasyonu. J. Vis. Exp. (2015)Bu video, β-galaktosidaz eksprese eden Escherichia coli ile enfekte olan fare mesane dokusunda hücre içi bakteri topluluklarının (IBC) tespit edilmesini göstermektedir. Doku fiksasyonu, permeabilizasyon ve X-gal ile boyama sonrası, IBC'ler diseksiyon mikroskopu altında mavi nokta olarak görülür ve idrar yolu enfeksiyonu sırasında bakteriyel invaziyanı doğrular.

Enfekte Bir Fare Mesanesindeki Hücre İçi Bakteri Topluluklarının Görselleştirilmesi

Kaynak: Gupta, K. ve diğerleri. Escherichia coli'nin pielonefrit fare modeline intrarenal enjeksiyonu.  J. Vis. Exp. (2017).Bu video, anestezi altında bir sıçanının böbrek pelvisine intrarenal enjekte edilerek lokal bir böbrek enfeksiyonu indükte edilmesini ve akut pielonefriti modellemesini göstermektedir. Konu, sonraki analizler için tekrarlanabilir in vivo enfeksiyon modeli oluşturmak için gerekli temel cerrahi adımları ve aseptik teknikleri vurgular.

Bir Farenin Böbrek Pelvisine E. coli'nin İntorental Enjeksiyonu

Bu videoda, nükleik asit transfeksiyonu için fare böbreğinin renal pelvisine plazmitlerin hidrodinamik enjeksiyonu protokolünü sunuyoruz. Bu teknik, plazmitleri doku hasarına neden olmadan belirli bölgeye zorla iten yüksek hidrostatik basınç ilkesini kullanarak plazmitlerin organa spesifik olarak verilmesine izin verir.

Hidrodinamik Renal Pelvis Enjeksiyonu: DNA'yı Murin Modelinin Böbrek Hücrelerine Doğrudan Verme Tekniği

Bu videoda, sıçanlarda renal arter yoluyla intrarenal ilaç uygulamasını gösteriyoruz. Bu yöntem, ilaç hedeflemesini, ilaç gücünü iyileştirmede ve sistemik toksisiteyi en aza indirmede faydalıdır.

Sıçanlarda İntrarenal İlaç Dağıtımı: Sıçan Böbreğinde Terapötik İlaçların İntraarteriyel Enjeksiyon Yoluyla Verilmesi İçin Bir Yöntem

Bu videoda, farelerde idrar yolu enfeksiyonu modeli oluşturmak için üropatojenik bakterilerin intravezikal uygulama tekniğini açıklıyoruz. Bu model, üropatojenik bakteriyel enfeksiyonun üriner sistem içindeki yayılımını ve İYE duyarlılığını belirleyen mekanizmaları anlamak için kullanılabilir.

İdrar Yolu Enfeksiyonu Modelinin Oluşturulması: İdrar Yolu Enfeksiyonu Modeli Geliştirmek İçin Farede Üropatojenik Bakterilerin Uygulanması İçin Bir Teknik

Bu video, transüretral kateter damlatma yoluyla bir dişi fare mesanesinde üropatojenik Escherichia coli enfeksiyonunun oluşumunu göstermektedir. Enjekte edilen bakteriler, mesane içinde başarılı bir idrar yolu enfeksiyonu oluşturur ve idrar yolu ile ilgili sağlıkla ilişkili hastalıkları incelemek için değerli bir platform sağlar.

Erkek Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonu Modeli Oluşturmak için Transüretral Kateterizasyon ve Bakteriyel Aşılama

Dişi Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonu Modelinin Oluşturulması

Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli Escherichia coli Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Farelerin transüretral Kateterizasyon kurulan modeli mesane patolojiler, idrar yolu enfeksiyonu, dahil olmak üzere çalışma sağlar ancak yalnızca dişi içinde gerçekleştirilebilir. Burada anlatılan erkek transüretral korumak yeni bir model araştırma cinsiyetler arasında güçlü klinik ve epidemiyolojik farklarına iaretlenmi bir alanı sağlayacaktır.

İdrar yolu enfeksiyonu küçük bir hayvan modeli: erkek ve dişi farelerin transüretral Kateterizasyon

Gizli hücre içi mesane rezervuarları oluşturmak için üropatojenik E. coli (UPEC) transüretral aşılamasının bir fare modeli ve tekrarlayan UPEC İYE'yi indüklemek için G. vajinalis'e mesane maruziyeti gösterilmiştir.  Ayrıca bakterilerin sayımı, idrar sitolojisi ve in situ mesane fiksasyonu ve taramalı elektron mikroskobu için işlenmesi de gösterilmiştir.

Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu

Keşfedin piyelonefrit cerrahi modelini böbrek pelvisine direkt bakteri enjeksiyonu ile. Bu yöntem, Escherichia coli ile böbrek enfeksiyonu patogenezini ve tedavi stratejilerini güvenilir şekilde araştırmanızı sağlar.

Intrarenal enjeksiyon Escherichia coli Piyelonefritli Sıçan Modelinde

Daha fazla video keşfet