November 6th, 2016
Burada gömülü, etiketli tohum şeritler ve tetrazolyum klorür (TZ) canlılık testi kullanılarak tarla koşullarında tohum hayatta kalma, çimlenme ve dormansi değerlendirmek için bir protokol mevcut.
Bu prosedürün genel amacı, zaman içinde tarla koşullarında tohum çimlenmesini, ölüm oranını ve uyku halini doğrudan gözlemlemek ve ölçmektir. Bu yöntem, tohum ekolojisi alanında, farklı türlerin veya türlerin ekotiplerinin, bireysel fidelerin bir sonraki neslin popülasyonuna nasıl katkıda bulunduğu gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Veya, kalıcı toprak tohum bankasına tek tek tohumlar.
Bu tekniğin temel avantajı, herhangi bir sayıda deneysel tasarımın, türün, tedavinin veya çıkarma tarihinin sahada kolayca konuşlandırılabilmesi ve haftalar ila aylar süren gömülmeden sonra tam bir kopya olarak geri alınabilmesidir. Başlamak için, her tohum şeridi için 20 x 105 cm'lik bir kumaş şeridi kesin. Bir mezura kullanarak, şeridin üzerindeki bölmeleri işaretleyin.
Kumaşı ikiye katlayın ve kısa bir uca yapıştırıcı uygulamak için yüksek sıcaklıkta bir tutkal tabancası kullanın. Yapıştırıcının hafifçe soğumasını bekleyin ve ardından bir sızdırmazlık oluşturmak için iki tarafı birbirine bastırın. Katlanmış kenardan açık kısa uca kadar her bölme işareti boyunca tutkal çizgileri yerleştirin.
Bölmeler arasında deliksiz contalar yapmak için iki kumaş tarafını tutkal çizgileri boyunca birbirine bastırın. Her şerit için bölmelere rastgele tohum çapraz türleri atayın. Ardından, her bölmeye tek tip sayıda tohum sayın ve yerleştirin.
Plastik bir bahçe dart kullanarak, bölmeyi bir tohum türü ile etiketleyin. Bölmeyi güvenli bir şekilde kapatmak için tutkal tabancasını kullanın. Şerit boyunca ilerleyin, tohum ceplerini tek tek doldurun, etiketleyin ve kapatın, tüm şerit dolana ve mühürlenene kadar.
Devam etmeden önce bölmeler arasındaki boşlukları kontrol edin ve gerektiği gibi yapıştırıcıyı düzeltin. Mezar denemelerini yapmak için, önce deneysel tasarıma dayalı olarak şeritleri barındırmak için belirtilen derinliğe kadar araziler kazın. Tohum şeritlerini toprağa yerleştirin ve üzerlerini toprakla örtün.
Daha sonra, metal örgü donanım bezini, gömülü tohum parsellerinden her iki tarafta 10 cm daha büyük bir panele kesin. Örgü kumaşın kenarlarını toprakla kapatın. Bu kaplama, tohum yuvası yapan yırtıcıları dışlamalıdır.
Son olarak, yazılı kayıtları tamamlamak için kaldırma tarihi ve renk kodlu etiketli renkli plastik arsa etiketlerini site konumuna yerleştirin. Belirlenen kaldırma tarihinde, söz konusu tohumları kazın. Şeritleri nemli tutmak için ıslak gazeteye sarın ve taşımak için bir soğutucuya koyun.
Laboratuvara girdikten sonra, bölmelerde tohumlar görünene kadar yabancı kir ve kalıntıları temizlemek için şeritleri suyla durulayın. Makas kullanarak her seferinde bir bölmeyi kesin. Mevcut tüm çimlenmiş tohumları sayın ve çıkarın.
Açıkça ölü tohumları sayın ve çıkarın. Son olarak, kalan tüm çimlenmemiş tohumları toplayın ve bunları bir Petri kabındaki etiketli ıslak bir kurutma kağıdına yerleştirin. Çimlenmeye izin vermek için bulaşıkları bir hafta boyunca bir büyüme odasına koyun.
Tohumları inceleyin ve çimlenmiş olanları belirleyin ve sayın. Bu tohumlar tarla koşullarında çimlenmediği için bunları canlı ancak çimlenmemiş olarak kaydedin. Tetrazolyum klorür kullanarak canlılığı test etmek için kalan tohumları ikiye bölün.
Bir yarısını, embriyo ve endosperm görünecek şekilde bir Petri kabına yerleştirin. Tohum yarımlarını kaplayacak kadar tetrazolyum klorür ekleyin. Çanağı üç saat boyunca 30 santigrat dereceye ayarlanmış bir inkübatöre yerleştirin.
Son olarak, tohum yarımlarını değerlendirin. Embriyonun kırmızı lekelenmesini gösteren tohumlar çimlenebilirken, lekelenmemiş tohumlar ölüdür. Bu grafik, ayçiçeği mahsulü yabani melez türlerinin sonbaharın sonlarında gömüldükten sonraki ilk çıkarma tarihinde çimlenmesini göstermektedir.
Çapraz tipler, mahsul alel yüzdeleri artırılarak düzenlenir ve her çaprazlama için anne ebeveyni belirtilir. Genel olarak, daha düşük mahsul alel yüzdeleri, sonbaharın sonlarında uyumsuz çimlenmeyi azalttı. Erken ilkbaharda çıkarmada, tüm genotipler yüksek çimlenmeye sahipti, ancak çimlenmemiş veya ölü tohumların sayısında önemli ölçüde farklılık gösterdi.
Özellikle, mahsul anne ebeveyni olan melez tiplerin ölüm oranı daha yüksekken, maternal yabani melez tiplerinin çimlenmemiş kalma olasılığı daha yüksekti. İlkbaharda, bazı çapraz türler için çimlenme azaldı. Bu muhtemelen, daha erken çimlenen çapraz türler için mezar şeritleri içindeki tohum ölümlerinden kaynaklanmaktadır.
Buna göre, mahsul anne ebeveynleri tarafından üretilen daha mahsul benzeri melez türler için ölüm oranı daha yüksekti. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik tasarıma bağlı olarak birkaç saat içinde monte edilebilir. Şeritlerin değerlendirilmesi tipik olarak bölme başına sadece birkaç dakika sürerken, ayrıca büyüme odasında ve TZ'de inkübasyonda zaman alır. Bu prosedürü denerken, yalnızca büyüme odasından geçen ve daha sonra TZ testi ile uygulanabilir olduğu belirlenen tohumların gerçekten uykuda olarak kabul edilebileceğini hatırlamak önemlidir.
Büyüme odasında çimlenen tohumlar çimlenmemiş olarak kabul edilir. Bu prosedürü takiben, tohum sağkalımının tohum çıkışı ve yaşam döngüsünün tamamlanması anlamına gelip gelmediği gibi ek soruları yanıtlamak için fide çalışmaları gibi paralel olarak çalışan diğer yöntemler de yapılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, tohum çimlenmesi, ölüm oranı ve uyku hali ile ilgili bir tarla değerlendirmesinin nasıl yapılacağını iyi anlamış olmalısınız.
Tetrazolyum klorürün tahriş edici olduğunu ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman eldiven giymek gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Bu protokol, saha koşullarında tohum yaşam süresi, çimlenme ve dormansitesi değerlendirmek için etiketli tohum şeritleri ve canlılık testi kullanan bir yöntem sunmaktadır. Bu, araştırmacıların zaman içinde tohum davranışını nicellemelerine olanak tanır ve tohum ekolojisi anlayışına katkıda bulunur.
This method enables direct observation of seed germination, dormancy, and mortality under field conditions, providing quantitative data critical for target validation in agricultural biotechnology. By assessing seed behavior over time, it supports mechanistic de-risking of traits related to stand establishment and persistence. The approach enhances predictive confidence in early discovery by linking genetic variation to field-relevant phenotypes.
The method integrates into the discovery continuum from hypothesis testing to lead identification by providing field-based phenotypic data on seed survival traits.