Bir Küçük Hayvan Modelinde Arteriovenöz (AV) Döngü Anjiogenez ve Vaskülarize Doku Mühendisliği Eğitim için

Bu mikrocerrahi yaklaşımın genel amacı, aksioli, vaskülarize ve translatable dokuların mühendisliği için bir arteriyovenöz döngü oluşturmak ve vaskülarizasyonun in vivo ve izole edilmiş ve iyi karakterize edilmiş ortamlarda analiz edilmesidir. Bu yöntemle, bireysel hastanın gereksinimlerine göre uyarlanmış farklı türde aksiolly vaskülarize doku üretimi için kendi bedenlerimizi canlı biyo reaktörler olarak kullanabiliriz. Bu tekniğin temel avantajı, üretilen dokunun vasküler erişimi ile çevrilebilmesi ve anında oksijen ve besin maddeleri sağlamak için alıcının yanındaki yerel damarlara bağlanabilmesidir.

Doku mühendisliği çalışmalarına ek olarak, bu yöntem canlı bir organizmadaki anjiyostenoz süreçleri hakkında bilgi sağlayabilir. Kanser anjiyogenezi gibi patolojik durumlara da uygulanabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, milimetre altı damarın mikro anastomozu gibi ameliyatın yüksek karmaşıklığı nedeniyle mücadele edeceklerdir.

Bu yöntem fikri ilk olarak, önemli bir donör tarafı hareketliliği yaratan atholo vaskülarize doku nakli gerektiren büyük doku defektlerine sahip klinik vakalarla karşı karşıya kaldığımızda aklımıza geldi. Uygun anesteziyi onayladıktan sonra, ilaç dozlarını hesaplamak için fareyi tartın. Ardından, anestezi altındayken kuruluğu önlemek için göz merhemi sürün.

Ağrı kesici ilaçlar ve antibiyotikler verdikten sonra, fareyi bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin ve sürekli izofluran uygulayın. Ardından, bir ayak parmağı tutamını kullanarak anestezi seviyesini yeniden onaylayın. Mümkünse, farenin anestezi seviyesini kontrol etmek için nabız oksimetresi de kullanın.

Arka bacakların iç taraflarını tıraş ederek devam edin. Ve sonra cerrahi alanı alternatif betadin ve alkol fırçaları ile dezenfekte etmek. Ardından arka bacakları açın ve yapışkan bantla sabitleyin.

Son olarak, fareyi cerrahi mikroskop altına yerleştirin ve örtün. Steril prosedürleri kullanarak ameliyata devam edin. Bir neşter kullanarak üst dizden kasıklara kadar uzunlamasına bir kesi ile sol uyluğun ortasındaki cildi açın.

Daha sonra, diseksiyon makası ve mikro forseps kullanarak, deri altı dokusunu ve fasyayı yaklaşık üç santimetre uzunluğunda katmanlar halinde kesin. Femoral vasküler demet kasıktaki pelvik arterden dize maruz kaldığında durun. Daha sonra, yönetici dokusu, makas ve mikro forseps kullanarak damarları ayırın ve yönetici dokusunu çıkarın.

Gerektiğinde, elektrik pıhtılaşması kullanarak yan dalları pıhtılaştırın. Tamamlandığında, ameliyat edilen alanı nemli bir kompres ile örtün ve işlemi farenin sağ tarafında tekrarlayın. Şimdi, ilk prosedür simetrik olarak tamamlandıktan sonra, venüs greftinin toplanmasına başlayın.

İlk olarak, yaklaşık bir ila 1.5 santimetrelik bir greft elde etmek için proksimal ve distal uçlarda elektrik pıhtılaşması kullanarak sağ femoral veni bağlayın. Ardından, venüs greftini mikro forseps ile çıkarın. Venüs greftinin açıklığını genişletmek için damar genişletici kullanın.

Ardından, venüs greftini bir irrigasyon kanülü kullanarak bir haperin solüsyonu ile yıkayın. Etli grefti sol uyluğa aktarın ve sağ taraftaki alanı nemli bir kompres ile örtün. Daha sonra, sol taraftaki femoral veni bir miko damar klempi ile kasık bölgesinde yakın bir şekilde bağlayın.

Daha sonra dallanmadan önce femoral veni distal olarak üst dizde pıhtılaştırın. Anastomoz için, venüs greftinin proksimal ucunu venin proksimal ucuna 11-0 dikişli uçtan uca bir teknik kullanarak birleştirin. İlk iki dikişi saat 12 ve saat altı pozisyonlarına yerleştirerek başlayın.

Daha sonra ön taraftaki bu noktalar arasına iki ila üç dikiş daha atın. Ve sonra arka tarafa iki ila üç dikiş daha koyun. Döngü damarlarının anastomozu, protokolün en kritik adımıdır.

Döngü damarlarının kapanma riskini azaltmak için dikişlerin mümkün olduğunca doğru bir şekilde yapıldığından emin olmak önemlidir. Daha sonra, femoral arteri bir mikro damar kelepçesi ile bağlayın ve femoral venin bağlanmasına benzer şekilde elektronik pıhtılaşma kullanın. Devam etmeden önce, ilmekli damarların bükülmediğinden emin olun.

Ardından, daha önce gösterildiği gibi aynı dikiş tekniğini kullanarak venüs greftinin distal ucunu arterin proksimal ucu ile anastomoz edin. İkinci anastomozdan sonra, intravenöz olarak 25 iu heparan uygulayın. Şimdi, döngü kaplarının bükülmediğini iki kez kontrol edin ve ardından kelepçeleri çıkarın.

Döngüyü yaklaşık beş dakika gözlemleyin, sızıntı ve açıklığı kontrol edin. Açıklık varsa, döngü genişleyecek ve arterin nabzı görünür olacaktır. Gözlem sırasında, vasküler spazmları önlemek için damarlara papaverin sürün.

Daha sonra, implantasyon odasını matris karışımının ilk yarısı, yaklaşık yarım milleter ile önceden doldurun. Ardından, ilmeği implantasyon odasına gömün. Hazne girişini iki pıhtı fibrin ile kapatın ve hazneyi toplam bir milileter hacmi için matris karışımının ikinci yarısı ile doldurun.

Şimdi, hazneyi uyluğun üzerine önceden sabitleyin, hazneyi kapağıyla kapatın ve kapağı emilmeyen bir 6-0 sütür ile sabitleyin. Ardından, implantasyon odasını ek bir emilmeyen 6-0 sütür ile uyluğa sabitleyin. Elektrik pıhtılaşması kullanarak herhangi bir kanamayı durdurun.

Son olarak emilebilir 4-0 dikişlerle cildi kapatın ve yarayı alüminyum sprey ile kapatın. Kemik dokusu mühendisliği amaçları için, küçük hayvan sıçanı AV döngü modeline bir dizi farklı kemik ikamesi implante edildi. 3 boyutlu mikro bilgisayarlı tomografi kullanılarak vaskülarizasyon gözlendi.

İşlenmiş bir sığır cancellus kemik matrisinin altı hafta boyunca prevaskülarizasyonu, enjekte edilen osteoblastların üstün sağkalımına yol açtı. İlmekler, implantasyondan sonra çeşitli zaman noktalarında hasat edildi, bölümlere ayrıldı ve boyandı. Örneğin, H ve E boyama, mezenkimal kök hücrelerle bir beta trikalsiyum fosfat hidroksiapatit kemik ikame edicisinin kullanılmasının altı hafta içinde birçok damar bağlantısı ile sonuçlandığını gösterdi.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa beş ila altı saat içinde yapılabilir. Bu prosedürü takiben, geniş bir koşul alanını incelemek için çok çeşitli farklı hücre faktörleri veya anti implante edilebilir. Bu teknik aynı zamanda büyük bir hayvan koyun venüs döngüsü modelinde de işe yarar.

Bu nedenle, araştırmacıların klinik olarak anlamlı miktarlarda büyük vaskülarize dokular üretmesine izin vermelidir. Bu model, patolojik koşullar altında vazularizasyonu inceleme fırsatı sağlayabilir. Örneğin, tümör damar ağı oluşumu sırasında çeşitli büyüme faktörlerinin ve hücrelerin etkileri araştırılabilir