Name: Yanal Kronik Kranial Pencere Hazırlık sağlar İn Vivo Farelerde Distal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı takiben Gözlem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Öğrenin, farelerde distal orta serebral arter tıkanıklığı sonrası in vivo gözlem için yanal kronik kranial pencere hazırlama tekniğini. Bu yöntem, inme sonrası akut ve kronik değişikliklerin uzunlamasına intravital mikroskopi ile incelenmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

VP, Charité - Universitätsmedizin Berlin ve Berlin Sağlık Enstitüsü tarafından finanse edilen Charité Klinik Bilim İnsanı Programı'nın bir katılımcısıdır. TB, SNSF PostDoc Mobility bursiyeridir. Yazarlar, EinsteinStiftung / A-2012-153'ten PV'ye hibe desteği almaktadır.

ETİK TABLOSU: Hayvan denekleri deneyler geçerliyse, Landesamt für Gesundheit und Soziales, Berlin, Almanya (G0298 / 13) ve GELİYORUM kriterlerine göre belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı. 12-haftalık erkek C57BL / 6J farelerine, bu çalışmada, 10 kullanılmıştır. 1. Yanal Kronik Kranial Pencere Hazırlık <ol><li> ketamin (90 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) deri altından enjeksiyonu ile anestezi gerçekleştirin. Bir ağrı uyaran yeterli sedasyon test edin. </li><li> % 70 etanol ile cerrahi aletler ve cerrahi alan sterilize edin. </li><li> Bir kemirgen tıraş makinesi kullanarak gözlere boyundan kafa derisi saç kaldırmak. </li><li> stereotaktik çerçeve içinde başını düzelt. </li><li> dehidratasyonu önlemek için her iki göze deskpantenol göz merhemi kullanın. </li><li> tüm tüyleri ve% 74.1 etanol 3 kat ve% 10 2-propanolol ile sterilize etmek için cerrahi bölgeyi temizleyin. </li><li> Bir orta hat gerçekleştirinBir neşter kullanılarak gözlere boyun kesi. </li><li> 4 çadırlaşması dikişlerle flep span. </li><li> Temporal kas başlar noktaya bir neşter ile kapalı kazıyarak sol hemisfer dikkatlice periosta çıkarın. NOT: Bu hazırlık da cam kapak giderir diş yapıştırıcı, iyi bir yapışma alanı oluşturmak için hizmet vermektedir. </li><li> Bir mikrotur kullanarak kemik kapağının ağız kafatası inceltilerek 4 mm çapında bir fronto-parietal kranyotomi gerçekleştirin. Isı yaralanmasını önlemek için delerken tuzlu su çözeltisi uygulayın. </li><li> kanüller ile kemik flep yükseltmek ve microforceps kullanarak çıkarın. </li><li> tuzlu su çözeltisi ile dikkatlice ve yoğun yıkayınız. </li><li> O kıvama sahip ve akışkan olmayana kadar diş tutkal karıştırın (yani, tutkal artık Konuları üretmek olmamalıdır). Kraniotomi etrafındaki kemik üzerine yerleştirin. </li><li> Hazırlanan tutkal 6 mm çaplı bir cam kapak yerleştirin ve inci ile sabitleyinDiş tutkal e geri kalanı. o su geçirmez olduğundan emin olun. tutkal forseps ile test ederek sert kurutulur ve kadar bekleyin. NOT: Ek sulama kür sürecini hızlandırır. </li><li> tenting sütür çıkarın ve cilt dikişlerle yarayı kapatmak. </li><li> fare kanadını deri yukarı çekin. Bir iğne subkutan yerleştirin ve yavaşça sıvı dengesi için steril tuzlu subkutan 0.5 ml yerine. </li><li> Ameliyat sonrasında, 90 dakika süre ile ısıtıldı geri kafeste hayvanları tutmak. hayvanlar gözetimsiz bırakarak önce tamamen uyanık kadar bekleyin. hayvanlar tamamen diğer hayvanlarla bir kafes onları dönmeden önce iyileşene kadar bekleyin. </li><li> Adım 1.16 tarif edildiği gibi, yaklaşık 12 saat sonra deri altından tuz hacmi ikame tekrarlayın. </li><li> Her ameliyat (örneğin, parasetamol (10 mg / ml) ya da diğer steroidal olmayan anti-enflamatuar ilaçlar) sonra ağız boşluğu içine sonda ile veya doğrudan analjezi uygulanır. </li><li> kontrol<html> Her gün ameliyat sonrası hayvanların durumu ve her zaman bir Petri-çanak, basit yemek yapmak ve ameliyat sonrası kritik kilo kaybını önlemek için katta hayvan yiyecek püre sağlarlar. NOT: intravital mikroskopi kafatası pencere hazırlandıktan sonra ilk günü yapılabilir. </li><li> izofluran anestezi uygulayın ve bir kafa tutucu hayvan düzeltin. cilt sütür açın ve pamuk tomurcukları ve steril tuzlu su ile pencereyi temizleyin. 24 saat sonra, kafa penceresi görüntüleme sağlayan bir zaman noktası ile, beyin omurilik sıvısı ile doldurulmalıdır. Kurulan mikroskopi protokollerini 18 ile görüntüleme gerçekleştirin. </li></ol> 2. Distal MCAO NOT: MCAO prosedürü CW hazırlandıktan sonra yaklaşık 5 d yapılmalıdır. Bu vuruş kaynaklı bağışıklık reaksiyonu ile CW hazırlanması nedeniyle bağışıklık reaksiyonu girişimi en aza indirir. &quot;Src =&quot; / files / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg &quot;/&gt; Distal MCAO 1. Genel Bakış Şekil. A. Bu op önce gemiler hakkında güzel bir bakış niteliğindedir. İlk iki kutuplu temas sonrasında B. gemiler. İkinci bipolar temas sonrasında C. gemiler. D. tamamen şimdi kapalı gemiler, ilgili genel bakış. Alt büyütme ile E. Final bakış. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54701/54701fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol><li> Veteriner kadrosu (danışarak bir anestezi maskesi ve uygun bir anestezik rejimi kullanılarak fareler, uyuşturan, örneğin 1.5 ile indüksiyon - 2/3 N 2 O ve 1/3 O 2&#39;de% 1.5 izofluran üzerinden -% 2 izofluran ve 1.0 ile bakım bir buharlaştırıcı). </li><li> (Tıraş ve saç kaldırmak ve uygun bir madde ile deri ve çevredeki kürk dezenfekteörneğin,% 70 etil alkol), ve daha sonra da kurutulur. </li><li> 36.5 ° C &#39;de farelerin vücut ısısını korumak ameliyat sırasında ± 0.5 ° C. fare rektal sıcaklığına göre ısıtılmış bir geribildirim kontrollü ısıtma yastığı, şiddetle tavsiye edilir. </li><li> lateral pozisyonda hayvan yerleştirin. Anestezi maskesi burun düzeltmek ve 1.0 izofluran konsantrasyonu ayarlamak -% 1.5. </li><li> Her iki Gözleri ıslak merhem (deskpantenol) uygulayın. </li><li> CW hazırlanması için yapılan cilt kesisi kullanın. </li><li> Cildi nazikçe ayırmak ve altında zamansal kas tespit. </li><li> yüksek frekanslı jeneratör enerjisini ayarlayın (5-7 W) ve bipolar modunu kullanın. </li><li> elektrokoagülasyon forseps kullanın ve dikkatli tamamen kas çıkarmadan, bir kas flep oluşturma, kafatası zamansal kas çıkarın. </li><li> Temporal bölgenin rostral kısmında şeffaf kafatası altında MCA tespit retro orbita dorsall sinüs. MCA çatallanma tespit edilemezse, gemi en rostral belirlemeye çalışın. </li><li> sürekli ısı hasarı önlemek için sulama yaparken bir mikrotur ile MCA şube üzerinde ince kafatası. </li><li> kanüller ile kemik kaldırın ve mikroforcepslerle çıkarın. </li><li> 5 W. - 3 yüksek frekanslı jeneratör enerjisini azaltmak </li><li> yukarıdan arter yaklaşın ve yavaşça gemi kaldırmadan her iki tarafta çift kutuplu forseps ile dokunun. </li><li> damar çatallanma proksimal ve distal arter koagüle. </li><li> 30 saniye bekleyin ve sonra kan akımı kalıcı kesintiye emin olmak için hafifçe arter dokunun. Bir rekanalizasyon görülmektedir eğer elektro tekrarlayın. </li><li> Mümkünse, kemik defekti kapamak için kas ekleme 1 ya da 2 dikiş ile zamansal kas sabitleyin. </li><li> Yarayı dikin ve ısıtmalı kurtarma kutunun içine hayvan yerleştirin. hızlı uçucu ANEST sonra Genel olarak, hayvanlar kurtarmalerine. </li><li> Adım 1.16 tarif edildiği gibi hacimli ikamesi için, steril tuzlu su deri altından 0.5 mL uygulanır. </li><li> Ameliyattan sonra hayvanlar 90 dakika süre ile ısıtıldı geri kafes içinde kalmak için izin verir. hayvanlar gözetimsiz bırakarak önce bilinçli kadar bekleyin. Onlar tamamen iyileşti zaman sadece diğer hayvanlarla bir kafese onları geri. </li><li> 12 saat sonra, adım 1.16 açıklandığı gibi, ses ikame tekrarlayın. </li><li> Içme suyu (örneğin, parasetamol (10 mg / ml) ya da diğer steroidal olmayan anti-enflamatuar ilaçlar) ile ve ameliyat sonrası analjezi uygulanır. </li><li> Ameliyat sonrası her gün hayvanların sağlık durumunu kontrol edin. yeme kolaylaştırmak ve ameliyat sonrası kilo kaybı en aza indirmek için katta bir petri kabındaki püresi hayvan yiyecek sağlamak. </li></ol> 3. Sham Tedavisi <ol><li> Yukarıda da dahil olmak üzere CW maruz orta serebral ar koagüle yok hazırlık-hariç açıklanan adım 1 ve 2&#39;ye aynı bütün prosedürleri uygulayınakü. </li></ol>

<ol><li>Mukherjee, D., Patil, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+the+global+burden+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and the global burden of stroke.</a> World Neurosurg. 76 (6), Suppl 85-90 (2011).</li>
<li>Ebinger, M., Prüss, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+use+of+ambulance-based+thrombolysis+on+time+to+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%3A+a+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Effect of the use of ambulance-based thrombolysis on time to thrombolysis in acute ischemic stroke: a randomized clinical trial.</a> JAMA. 311 (16), 1622-1631 (2014).</li>
<li>Ebinger, M., Lindenlaub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prehospital+thrombolysis%3A+a+manual+from+Berlin%5BTitle%5D)+AND+%22J+vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Prehospital thrombolysis: a manual from Berlin.</a> J vis Exp. (81), e50534(2013).</li>
<li>Bogousslavsky, J., Van Melle, G., Regli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lausanne+Stroke+Registry%3A+analysis+of+1%2C000+consecutive+patients+with+first+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The Lausanne Stroke Registry: analysis of 1,000 consecutive patients with first stroke.</a> Stroke. 19 (9), 1083-1092 (1988).</li>
<li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> J Vis Exp. (47), (2011).</li>
<li>Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Stroke.</a> Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).</li>
<li>Meairs, S., Wahlgren, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+priorities+for+the+next+decade--A+representative+view+of+the+European+scientific+community%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrovasc+Dis%22%5BJournal%5D)">Stroke research priorities for the next decade--A representative view of the European scientific community.</a> Cerebrovasc Dis. 22 (2-3), 75-82 (2006).</li>
<li>Rosamond, W., Flegal, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2007+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2007 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 115 (5), 69-171 (2007).</li>
<li>Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+science+of+stroke%3A+mechanisms+in+search+of+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The science of stroke: mechanisms in search of treatments.</a> Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).</li>
<li>Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathobiology+of+ischaemic+stroke%3A+an+integrated+view%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view.</a> Trends Neurosci. 22 (9), 391-397 (1999).</li>
<li>Dirnagl, U., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Found+in+Translation%3A+Preclinical+Stroke+Research+Predicts+Human+Pathophysiology%2C+Clinical+Phenotypes%2C+and+Therapeutic+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Found in Translation: Preclinical Stroke Research Predicts Human Pathophysiology, Clinical Phenotypes, and Therapeutic Outcomes.</a> Stroke. , (2014).</li>
<li>Prinz, V., Hetzer, A. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+heralds+secondary+nigral+lesion+after+brain+ischemia+in+mice%3A+a+secondary+time+window+for+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">MRI heralds secondary nigral lesion after brain ischemia in mice: a secondary time window for neuroprotection.</a> J Cereb Blood Flow Metab. , (2015).</li>
<li>Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+polished+and+reinforced+thinned-skull+window+for+long-term+imaging+of+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Holtmaat, A., Bonhoeffer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li>
<li>Iadecola, C., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microcircualtion--fantastic+voyage%3A+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The microcircualtion--fantastic voyage: introduction.</a> Stroke. 44 (6), Suppl 1 83(2013).</li>
<li>Blinder, P., Tsai, P. S., Kaufhold, J. P., Knutsen, P. M., Suhl, H., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cortical+angiome%3A+an+interconnected+vascular+network+with+noncolumnar+patterns+of+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosc%22%5BJournal%5D)">The cortical angiome: an interconnected vascular network with noncolumnar patterns of blood flow.</a> Nat Neurosc. 16 (7), 889-897 (2013).</li>
<li>Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Drew, P. J., Nishimura, N., Schaffer, C. B., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+microscopy+as+a+tool+to+study+blood+flow+and+neurovascular+coupling+in+the+rodent+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 32 (7), 1277-1309 (2012).</li>
<li>Cabrales, P., Carvalho, L. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+of+the+mouse+brain+microcirculation+using+a+closed+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy of the mouse brain microcirculation using a closed cranial window.</a> J Vis Exp. (45), (2010).</li>
<li>Rosell, A., Agin, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+mice%3A+are+we+ready+to+assess+long-term+functional+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Distal occlusion of the middle cerebral artery in mice: are we ready to assess long-term functional outcome.</a> Transl Stroke Res. 4 (3), 297-307 (2013).</li>
<li>Dorand, R. D., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+intravital+thinned+skull+and+cranial+window+approaches+to+study+CNS+immunobiology+in+the+mouse+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Intravital%22%5BJournal%5D)">Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex.</a> Intravital. 3 (2), (2014).</li>
<li>Balkaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).</li>
<li>Balkaya, M., Kröber, J., Gertz, K., Peruzzaro, S., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+long-term+functional+outcome+in+a+murine+model+of+mild+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterization of long-term functional outcome in a murine model of mild brain ischemia.</a> J Neurosci Methods. 213 (2), 179-187 (2013).</li>
<li>Freret, T., Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+deficits+after+distal+focal+cerebral+ischemia+in+mice%3A+Usefulness+of+adhesive+removal+test%5BTitle%5D)+AND+%22Beh+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: Usefulness of adhesive removal test.</a> Beh Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).</li>
<li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RODENT+STROKE+MODEL+GUIDELINES+FOR+PRECLINICAL+STROKE+TRIALS+%281ST+EDITION%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Stroke+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">RODENT STROKE MODEL GUIDELINES FOR PRECLINICAL STROKE TRIALS (1ST EDITION).</a> J Exp Stroke Trans Med. 2 (2), 2-27 (2009).</li>
<li>Florian, B., Vintilescu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse%3A+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke. 35 (7), 1720-1725 (2004).</li>
<li>Shin, H. K., Nishimura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).</li>
<li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice%3A+a+redox+sensitive+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism.</a> Neuroreport. 13 (11), 1431-1435 (2002).</li>
<li>Gertz, K., Priller, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+activity+improves+long-term+stroke+outcome+via+endothelial+nitric+oxide+synthase-dependent+augmentation+of+neovascularization+and+cerebral+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Physical activity improves long-term stroke outcome via endothelial nitric oxide synthase-dependent augmentation of neovascularization and cerebral blood flow.</a> Circ Res. 99 (10), 1132-1140 (2006).</li>
<li>Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bench+to+bedside%3A+the+quest+for+quality+in+experimental+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26 (12), 1465-1478 (2006).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

İnme 1 dünya çapında uzun süreli sakatlık ve ölüm başlıca nedenleri arasındadır. Akut tedavi, hızlandırmak ve inme sonrası iyileşmeyi artırmak için yeni yaklaşımlar ve mekanizmaları araştıran ötesinde bir asal tıbbi gol 7 kalır. Deneysel inme araştırmacılar sıklıkla fokal serebral iskemi kemirgen modelleri kullanır. Aslında, geçici veya kalıcı MCAO uyaran modelleri hastalarda 4 fokal serebral iskemi en yaygın türlerinden biri taklit. MCA proksimal oklüzyon yanı sıra, uzak MCAO cerrahi tı...

İnme, dünya çapında uzun süreli sakatlık ve ölümlerin başlıca nedenleri arasındadır1 ve koroner kalp hastalığından sonra ikinci sırada yer almaktadır. Ek olarak, inme, uzun süreli sakatlığın birincil nedenidir ve muazzam sosyoekonomik etkisinin altını çizmektedir6-8. Akut tedavinin ötesinde, inme sonrası iyileşmeyi hızlandırmak ve geliştirmek için yeni yaklaşımların ve mekanizmaların araştırılması temel tıbbi hedef olmaya devam etmektedir7. 
Son birkaç on yılda, deneysel inme araştırmalarından elde edilen veriler, iskemi9,10 tarafından tetiklenen karmaşık patofizyolojik kaskadların anlaşılmasına önemli ölçüde katkıda bulunmuştur. Eksitotoksisite, apoptoz, peri-enfarktüs depolarizasyonu ve inflamasyon, fokal serebral iskemiyi takiben hücre ölümünün en önemli mediatörleri olarak tanımlanmıştır. Ayrıca, serebral iskeminin hayvan modelleri kullanılarak, önemli kavramlar, tanı yöntemleri ve terapötik yaklaşımlar geliştirilmiş ve doğrulanmıştır (örneğin, "penumbra" ve tromboliz)11.
Deneysel inme modellerinin mevcudiyeti, non-invaziv görüntüleme modaliteleri (örneğin, manyetik rezonans görüntüleme (MRI), bilgisayarlı tomografi veya lazer benek kontrast analizi) ile birleştirildiğinde, araştırmacının iskemik hakaretin neden olduğu hiperakut ve kronik patofizyolojik değişiklikleri uzunlamasına bir şekilde araştırmasını sağlar12. Gelişen lezyonun uzay-zamansal profilini incelemenin yanı sıra, nöronal plastisiteye benzeyen değişiklikler araştırılabilir ve fonksiyonel sonuçlar ve histolojik bulgularla ilişkilendirilebilir. Son birkaç yıl içinde, serebral iskemi modelleri ve kraniyal pencereler13 yoluyla in vivo mikroskopi kombinasyonu kullanılarak daha fazla metodolojik ilerleme kaydedilmiştir. Bu yeni teknikler, araştırmacıların fokal serebral iskemiyi takiben akut, subakut ve kronik fazlarda büyük analitik güçle nörovasküler üniteyi hücresel ve moleküler düzeyde analiz etmelerine olanak tanır14. Ayrıca, mikrodolaşım dinamiklerinin in vivo mikroskopi görüntülemesi, serebral mikrovasküler fonksiyon ve anjiyomimarinin önemli patofizyolojik önemi olan yeni yönlerini ortaya çıkarmıştır15-17. 
Bu protokolde, sagital sinüsün lateralinde kronik bir CW preparatının nasıl yapılacağını ve pencerenin altında distal inmenin cerrahi olarak nasıl indükleneceğini sunuyoruz. Bu fare modeli, epi-aydınlatıcı, konfokal lazer taraması ve iki fotonlu intravital mikroskopi yoluyla fokal serebral iskemiyi takiben akut, subakut ve kronik değişikliklerin sıralı görüntülenmesine uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>Binoküler cerrahi mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop için ışık kaynağı</td><td>Zeiss</td><td>CL 6000 Rektal</td> problu LED <td></td></tr><tr><td>ısıtma yastığı</td><td>FST</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktik çerçeve</td><td>Kopf</td><td>Model 930</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran için anatezi sistemi</td><td>Draeger</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abott</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont forseps #5</td><td>FST</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont forseps #7</td><td>FST</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Bipolar Forseps</td><td>Erbe</td><td>20195-501</td><td></td></tr><tr><td>Bipolar Forseps&nbsp;</td><td>Erbe&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 20195-022</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikro matkap</td><td>FST&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 18000-17&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İğne tutucu</td><td>FST</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>5-0 ipek sütür</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7-0 ipek sütür</td><td>Feuerstein,Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-0 ipek sütür</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Veteriner Kurtarma Odası</td><td>Peco Hizmetleri</td><td>V1200</td><td></td></tr></tbody></table>

yanal kronik kranial pencere hazırlık sağlar İn vivo farelerde distal orta serebral arter tıkanıklığı takiben gözlem

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Fokal serebral iskemi (yani, iskemik inme) nöronal fonksiyon ciddi bir kaybı ve dolayısıyla motor ve zihinsel engelli bir dizi yol açan başlıca beyin yaralanmaya neden olabilir. Inme 1 dünya çapında uzun süreli sakatlık ve ölüm başlıca nedenleri arasında olduğu gibi yüksek prevalans, ciddi bir sağlık yükünü oluşturmaktadır. nöronal fonksiyonu geri kazanımı, çoğu durumda, sadece kısmi vardır. Şimdiye kadar, tedavi seçenekleri oldukça nedeniyle trombolitik 2,3 dar zaman penceresi, özellikle de sınırlıdır. inme kurtarma hızlandırmak için yöntemlerin belirlenmesi birinci sınıf bir tıbbi hedef olmaya devam; Ancak, bu toparlanma sürecine yetersiz mekanistik anlayışlar tarafından engellenmiştir. Deneysel inme araştırmacılar sıklıkla fokal serebral iskemi kemirgen modelleri kullanır. Akut fazda ötesinde, inme araştırma giderek serebral iskemi aşağıdaki-sub akut ve kronik fazda odaklanmıştır. Çoğu inme araştırmacılar uygulamak kalıcı veya tranfarelerde ya da sıçanlarda MCA&#39;nın SIENT oklüzyonu. Hastalarda, MCA tıkanıklıklar iskemik inme 4 en sık nedenleri arasındadır. Filament modelini kullanarak MCA proksimal oklüzyon yanı sıra, uzak MCA cerrahi tıkanması, deneysel inme araştırma 5. en sık kullanılan model muhtemelen. MCA dalı (lenticulo-striat arterlerin dallanma kadar) distalinde Tıkanıklığı tipik striatum yedek ve öncelikle neokorteks etkiler. Gemi tıkanıklığı kalıcı veya geçici olabilir. uzun dönem sonuçları açısından lezyon hacmi ve çok düşük mortalite oranları yüksek tekrarlanabilirlik bu modelin başlıca avantajları vardır. Burada, sagital sinüs kronik kafa penceresi (CW) hazırlık yanal gerçekleştirmek için, ve daha sonra nasıl bir kraniotomi yaklaşımı kullanarak pencerenin altında bir uzak inme neden cerrahi olarak nasıl gösterilmektedir. Bu yaklaşım ile iskemi sonrası akut ve kronik değişikliklerin sıralı görüntüleme için uygulanabilirKonfokal lazer tarama ve iki foton intravital mikroskopi epi-aydınlatıcı.

Zaman çizelgesi ve temsili sonuçları Şekil 2 ve 3'te gösterilmiştir. Superior sagittal sinüs (Şekil 2 B, C, D), deneyimli bir cerrah tarafından gerçekleştirilen çok düşük mortalite ve morbidite oranı sonuçları için küçük bir kafatası pencere yanal ile kafa pencere hazırlama. 10 hayvanların hepsi hayatta ve tüm kronik CW bile 28 gün ameliyattan sonra, yüksek kaliteli görüntüleme için kullanılabilir. yara enfeksiyonları veya başka komplika...

distal orta serebral arter dalı (MCAO) Cerrahi tıkanması, deneysel inme araştırmalarında sıkça kullanılan bir modeldir. Bu el yazması farelerde boyuna intravital mikroskopi için bir fırsat sunuyor yanal kafatası pencere takılması, birlikte kalıcı MCAO temel tekniğini açıklar.

Yanal Kronik Kranial Pencere Hazırlık sağlar İn Vivo Farelerde Distal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı takiben Gözlem

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

Bu prosedürün genel amacı, kalıcı orta serebral arter tıkanıklığı ile birlikte bir lateral kraniyal pencerenin hazırlanmasıdır. Farelerde uzunlamasına intravital mikroskopiyi kolaylaştırmak için. Bu yöntem, serebellar iskemi araştırması alanındaki temel soruların araştırılmasına ve yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Bu tekniğin en büyük avantajı, inme sonrası akut ve kronik değişikliklerin in vivo görüntülemesini sunmasıdır. Onaylanmış bir hayvan protokolüne göre anestezi uygulayarak başlayın. Ayak parmağı çimdikleme gibi bir ağrı uyaranı uygulayarak ve bir reaksiyonun olmadığına dikkat ederek cerrahi bir anestezi düzlemine ulaşıldığından emin olun.Ardından, kürkü boyundan gözlere çıkarmak için bir kemirgen tıraş makinesi kullanın. Farenin kafasını Stereotaksik bir çerçeveye sabitleyin. Daha sonra dehidrasyonu önlemek için gözleri oftalmik merhem ile örtün.Tüm tüyleri almak için traş edilmiş alanı temizleyin ve kafa derisini% 74.1 etanol ve% 10 tüp Propranolol olmak üzere üç uygulama ile sterilize edin. Steril bir neşter kullanarak, boyundan gözlere orta hat kesisi yapın. Daha sonra deri flebini dört çadır dikişi ile kaplayın.Ardından, kafatasının sol tarafındaki periosteuumu dikkatlice kazıyın. Ve temporal kasın başladığı noktaya kadar çıkarın. Şimdi kemik flebinin kenarındaki kafatasını inceltmek için bir mikro matkap kullanın.Dört milimetre çapında bir frontoparietal kraniotomi oluşturmak için. Isı yaralanmasını önlemek için delme sırasında tuzlu su çözeltisi uygulayın. Delindikten sonra, kemik flebini kanüllerle yükseltin ve mikro forseps kullanarak çıkarın.Alanı tuzlu su çözeltisi ile dikkatli ve yoğun bir şekilde sulayın. Diş yapıştırıcısını uygun kıvama gelene kadar karıştırın. Daha sonra kraniyotomi çevresindeki kemiğe uygulayın.Hazırlanan yapıştırıcının üzerine altı milimetre çapında bir kapak camı yerleştirin. Ve diş yapıştırıcısının geri kalanıyla sabitleyin. Sulama, kürleme sürecini hızlandırır ve contanın su geçirmez olmasını sağlar.Kurumuş ve sert olduğundan emin olmak için diş yapıştırıcısını forseps ile inceleyin. Yapıştırıcı sertleştikten sonra, çadır dikişlerini çıkarın ve yarayı cilt dikişleriyle kapatın. Sıvı dengesi için deri altına 0,5 mililitre steril salin uygulayın.Ameliyattan sonra, anesteziden kurtulana kadar hayvanı ısıtılmış bir kurtarma kafesinde izleyin. Hayvanı diğer hayvanlarla birlikte bir kafese geri koymadan önce tamamen iyileştiğinden emin olun. Ameliyattan sonra daima analjezi uygulayın.Burada, içme suyuna mililitre başına 10 miligram asetaminofen eklenir. Yemek yemeyi basitleştirmek ve ameliyattan sonra kritik kilo kaybını önlemek için her zaman yere yerleştirilmiş bir petri kabında püre haline getirilmiş hayvan yemi sağlayın. Kraniyal pencere hazırlığından sonraki ilk gün intravital mikroskopi yapılabilir.İzofluran anestezisini onaylanmış bir protokole göre uygulayın. Hayvanı bir baş tutucuya sabitleyin ve burun konisinin uygun şekilde takıldığından emin olun. Cilt dikişini açın ve pencereyi pamuklu çubuklar ve steril tuzlu su ile temizleyin.24 saat sonra kafatası penceresinin beyin omurilik sıvısı ile doldurulması gerekir ki bu da görüntülemeyi sağlar. Orta serebral arter oklüzyon prosedürünü, kraniyal pencere hazırlığından beş gün sonra, işleme karşı bağışıklık tepkisi azaldığında gerçekleştirin. Burada, MCAO indüksiyonu için kraniyotomi sonrası bir genel bakış gösterilmektedir.İntraoperatif fotoğraf, birinci ve ikinci bipolar temastan sonraki damarları gösterir. Distal MCA tamamen tıkalı görünür. Bu resim, daha düşük büyütme kullanarak son bir genel bakış sağlar.Daha önce olduğu gibi izofluran ile cerrahi anestezi uygulandıktan sonra, göz ve kulak arasındaki bölgedeki kürkü tıraş edin, her iki göze de oftalmik merhem sürün ve cildi ve çevresindeki kürkü daha önce olduğu gibi alkol solüsyonu ile dezenfekte edin. Vücut ısısını korumak için fareyi geri besleme kontrollü bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin. Hayvanı yanal pozisyona getirin ve burnu anestezi maskesine sabitleyin.Kraniyal pencere hazırlığı için yapılan kesiğin derisini nazikçe ayırın ve altındaki temporal kası tanımlayın. Ardından, yüksek frekans jeneratörünün enerjisini ayarlayın ve bipolar modu kullanın. Temporal kası kafatasından dikkatlice kaldırmak için elektrokoagülasyon forseps kullanın ve kası tamamen çıkarmadan bir kas flebi oluşturun.Ardından, temporal alanın rostral kısmındaki şeffaf kafatasının altındaki orta serebral arteri tanımlayın. Retro-orbital sinüse dorsal. Isı hasarını önlemek için sürekli sulama yaparken MCA dalının üzerindeki kafatasını bir mikro matkapla inceltin.Daha sonra kemiği kaldırın ve mikro forseps ile çıkarın. Yüksek frekanslı jeneratörün enerjisini üç ila beş watt'a düşürün. Ardından, artere yukarıdan yaklaşın ve damarı kaldırmadan her iki taraftaki bipolar forseps ile hafifçe dokunun.Otuz saniye bekleyin ve ardından kan akışının kalıcı olarak kesilmesini sağlamak için bipolar forsepsin ucuyla artere hafifçe dokunun. MCA oklüzyonundan sonra, kemik defektini kapatmak için kas girişinde bir veya iki dikişle temporal kası sabitleyin. Daha sonra yarayı dikin ve iyileşene kadar hayvanı ısıtılmış kafese koyun.Bu MRG, sahte ameliyattan 24 saat sonra yapıldı ve herhangi bir lezyonlu kortikal doku göstermedi. İskemiden 24 saat sonra yapılan bu MRG, kronik kraniyal pencerenin altında bulunan bir yıldızla gösterilen iskemik lezyonu açıkça göstermektedir. Bu görüntü, mikrosirkülasyondaki değişiklikleri izlemek için intravital epifloresan görüntülemeyi ve kortikal vaskülatürün iki fotonlu görüntülemesini göstermektedir.İskemiden 24 ve 96 saat sonra MRG ile değerlendirilen enfarktüs hacmi, 24 saatte 13.16 milimetre küp ve 96 saatte 12.2 milimetre küp ortalama lezyon hacmi gösterir. Bir kez ustalaştıktan sonra, kafatası penceresi hazırlığı yaklaşık 30 dakika içinde yapılabilir. Ve yaklaşık 15 dakika içinde MCAO.Bu prosedürü takiben, ek soruları yanıtlamak için MRI veya çift foton mikroskobu gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu yeni teknikler, araştırmacıların bir nörovasküler üniteyi moleküler ve hücresel düzeyde araştırmasına izin verir. Ve en önemlisi, yaşayan beyinde.

lateral-chronic-cranial-window-preparation-enables-vivo-observation

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video ve tamamlayıcı malzeme, kronik bir...

Fare Visual Cortex İnceltilen kafatası Hazırlık Kronik Görüntüleme

Intravital mikroskopi pial mikrosirkülasyon zamansal ve mekansal hemodinamik ve inflamatuar olayları takip etmek.

Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Bu makalede, orta serebral arterin proksimal bölümlerini görüntülemek için temporal kraniektomi kullanılarak kranyal pencereden sıçan serebral arterlerin görüntülenmesi için bir yöntem açıklanır...

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

inme patofizyolojisini anlamak için, güvenilir modeller kullanmak önemlidir. Farelerde en sık kullanılan inme modellerinden birini anlatacağız Bu yazıda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli olarak adlandırılan reperfüzyon ile (ayrıca lümen içi filament veya sütür modeli olarak adlandırılır).

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Burada, uyanık, baş kısıtlı farelerde beyin hücrelerinin uzunlamasına görüntülenmesi için kronik bir kraniyal pencerenin implantasyonu için bir protokol sunulmaktadır.

Uyanık Farelerde Tekrarlanan In Vivo Görüntüleme için Kraniyal Pencerenin İmplantasyonu

Bu protokol, orta büyüklükte bir enfarktüse ve mükemmel bir hayatta kalma oranına sahip benzersiz bir fare vuruşu modeli gösterir. Bu model, klinik öncesi inme araştırmacılarının iskemi süresini uzatmasına, yaşlı fareleri kullanmasına ve uzun vadeli fonksiyonel sonuçları değerlendirmesine olanak tanır.

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Bu protokol, farelerde büyük, yeniden kapatılabilir, dura koruyan bir kranial pencere oluşturmak için iki aşamalı cerrahi yöntemi tanımlar. Bu teknik, Varsayılan Mod Ağı gibi dağınık, derin beyin ağlarından birkaç hafta boyunca kronik, çok modlu elektrofizyolojik kayıtlar yapılmasını sağlar.

Büyük, yeniden kapatılabilir kranial pencere için cerrahi protokol, fare varsayılan modu ağının uzunlaması, çok modlu elektrofizyoloji kayıtlarını mümkün kılan

Bu çalışmanın amacı, motor ve mekansal hafıza eksikliklerinin deneysel çalışmalarında uygulanmak üzere sıçanlarda kalıcı, seçici orta beyin arter tıkanması uygulanan kraniektomi uygulanacak tekrarlanabilir bir yöntem oluşturmaktır.

Sıçanlarda Orta Beyin Arterinin Seçici ve Kalıcı Tıkanması: Motor ve Mekansal Hafıza Eksikliklerini İnceleme Deneysel Yaklaşımı

Öğrenin, farelerde distal orta serebral arter tıkanıklığı sonrası in vivo gözlem için yanal kronik kranial pencere hazırlama tekniğini. Bu yöntem, inme sonrası akut ve kronik değişikliklerin uzunlamasına intravital mikroskopi ile incelenmesini sağlar.

Yanal Kronik Kranial Pencere Hazırlık sağlar İn Vivo Farelerde Distal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı takiben Gözlem

Daha fazla video keşfet