Name: Döner disülfür Çapraz bağlı misellerin Üretimi için basit ve etkin Yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Öğrenin, hidrojen peroksit aracılı oksidasyon kullanarak ilaç yüklü disülfid çapraz bağlı misellerin basit ve etkili sentez protokolünü. Bu yöntem, kanser tedavisinde hedefe yönelik ilaç teslimi için stabil nano-formülasyonlar üretmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, editöryal yardımı için Bayan Alisha Knudson'a teşekkür eder. Ayrıca NIH/NCI (3R01CA115483, KSL'ye), Savunma Bakanlığı PRMRP Ödülü (W81XWH-13-1-0490, KSL'ye), NIH/NCI (1R01CA199668, YL'ye) ve NIH/NICHD'den (1R01HD086195, YL'ye) gelen mali desteği de kabul etmek isterler.

Etik ifadesi: Dişi atimik çıplak fareler (Nu / Nu suşu), 6-8 haftalık, satın alınan ve AAALAC yönergelerine göre patojensiz şartlar altında tutulur ve herhangi bir deney öncesinde en az 4 gün boyunca ortama alışmaları sağlandı edildi. Tüm hayvan deneyleri kurumsal kurallarına uygun olarak gerçekleştirilir ve California, Davis Üniversitesi&#39;nde Hayvan Kullanım ve Bakım Yönetim Danışma Kurulu tarafından onaylanan protokol sayılı 07-13119 ve sayılı 09-15584 göre edildi. TD PEG 5K Cys 1. sentezi 4 -Ebes 8 -CA 8 <ol><li> Yuvarlak tabanlı bir şişe içinde, buz üzerinde, susuz dimetilformamid (DMF) ve soğuk 10-20 ml MeO-PEG 5K -NH 2 (2 g, 0.4 mmol) çözülür. </li><li> Bir cam kabın içinde, 3 eşdeğer çözülür. 1-hidroksi-6-kloro-benzotriazol (HOBt), 3 eşd. N, N &#39;diizopropilkarbodiimid (DIC) ve 3 eşdeğer. Susuz D içinde (Fmoc) 2 Lys-OH,MF (10-15 mi). Manyetik bir karıştırma plakası üzerinde 15-20 dakika karıştırılır. </li><li> MeO-PEG 5K -NH 2. buz banyosu alınır ve oda sıcaklığında gece boyunca, reaksiyon karışımı karıştırıldı içeren reaksiyon balonuna karışımı ekleyin. </li><li> Ince tabaka kromatografisi (TLC) 16 ve Kaiser testi 17, reaksiyonun tamamlandığını teyit (san renkli serbest NH2 olmadığını gösterir). Reaksiyon şişesine buz soğukluğunda eter 200 ml ekleyerek polimer ürün 1 (MeO-PEG 5K -Lys (nH-Fmoc) 2) çökelmesi. santrifüj yoluyla çöktürülmüş polimer (6 6,000 xg&#39;de dk ve 4 ° C) ayırın. <ol><li> TLC gerçekleştirmek için, silika jel ile kaplanmış TLC plakaları ile ilgili örnekleri nokta. diklorometan / metanol kullanarak (9: 1) mobil faz olarak. TLC plakaları gelişmekte sonra UV lamba altında noktalar dikkate alınmalıdır. Bir de sıcak bir plaka üzerinde amin noktalar görselleştirmek için boyama reaktif ninhidrin kullanabilirsiniz. </li><li> Kaiser test, Kaiser reaktifi içeren cam tüp numune biraz yerleştirin. 5 dakika boyunca 100 ° C&#39;de ısı ve renk değişimi (çözeltinin rengi san kalırsa, daha sonra reaksiyon tamamlandı) arayın. </li></ol></li><li> Susuz DMF (10-20 mL) içinde bir ürün yeniden çözülür ve çöktürme ve santrifüjleme (adım 1.4) tekrar edin. </li><li> daha sonra tekrar adım 1.5 ve buz soğukluğunda eter ile polimerin çökeltilmesi üç kez yıkayın. </li><li> Temiz bir tepkime şişesine, polimer çökelti 1 transferi ve kalıntı eter uzaklaştırılmış yüksek vakum kaynağına şişesi bağlayın. </li><li> Hazırlama ve% 20, yaklaşık 20-30 ml ekleyin (h / h) DMF içinde 4-metil-piperidin 1 ara polimer için. Tam çözünme gerçekleşene kadar karıştırılır. 3 saat reaksiyondan. </li><li> TLC 16 gerçekleştirin ve Kaiser testi (mavi renk ücretsiz NH 2 varlığını onaylar) 17 (adım 1.4) completio onaylamak içinReaksiyonun n. Reaksiyon tamamlandıktan ise ürünün 1 (1.4-1.6 adımlar) için belirtildiği gibi, eter yağış geçin. </li><li> Polimer ürünü 2 (MeO-PEG 5K-Lys (NH2) 2), bir vakum altında kurutulur. </li><li> (1.1-1.7 adımlar) ürünü 3 oluşturmak için ara 2 üzerine (Fmoc) 2 Lys-OH-kavrama bir tur daha yürütmek (MeO-PEG 5K Lys (Lys (NH-Fmoc) 2) 2). (1.8-1.10 adım) Fmoc grupları (4, MeO-PEG 5K-Lys (Lys (NH2) 2) 2) ve bir çift (Fmoc) Lys (Boc) (1.1-1.7 adım) -OH de korumak üçüncü nesil dendritik polilisin oluşturur (5, MeO-PEG 5k -Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys (Boc)) 4) PEG zincirinin bir ucunda dört Boc ve Fmoc grubu ile sona erdirildi. </li><li> Bir reaksiyon şişesine, ara elde edilen polimeri 5 aktarın. olarakdiklorometan (DCM), 1 (h / h) trifloroasetik asit (TFA): eparate Reaksiyon şişesi, 1 hazırlayın. Polimer 5, ara 1 TFA / DCM (h / h) karışımı bir 1: 15-20 ml ilave edilir. Polimer tamamen eriyene kadar karışım karıştırılır. ilave bir 3 saat daha karıştırılır. </li><li> TLC 16 gerçekleştirin ve Kaiser testi reaksiyonun tamamlandığını teyit etmek için 17 (adım 1.4) (mavi renk ücretsiz NH 2 varlığını onaylar). Reaksiyon tamamlandıktan Bir zor akışlı bir çözelti elde edilene kadar hava ile polimerin in TFA / DCM karışımı buharlaşır. Ürünün 1 (1.4-1.6 adımlar) için belirtildiği gibi, eter yağış devam edin. Vakum altında - (((Fmoc) Lys (NH2)) 4 -Lys-Lys 2 MeO-PEG 5k) polimerik ürünün 6 kurutun. </li><li> Bir tepkime şişesi içine 6 ara transfer polimeri. 8 eşdeğer ihtiva eden susuz DMF yaklaşık 40 ml kullanın. N, N--diisopropylethylamiNE (DIEA) polimeri 6 ara madde çözülmesi için. Bir cam kabın içinde, 12 eşdeğer çözülür. HOBt, 12 eşd. DIC, 12 eşd. susuz DMF 20-25 ml arasında (Fmoc) Cys (Trt) -OH. 10-15 dakika boyunca sallayın ve 6 içeren reaksiyon balonuna Reaksiyon karışımı ekleyin. Gecede reaksiyonu çalıştırın. </li><li> TLC 16 ve Kaiser testi ile reaksiyonun tamamlandığını teyit (adım 1.4 bkz sarı bir renk bilgilerini NH2 olmadığını gösterir) 17. ((Fmoc) Lys - - ((Fmoc) Cys Reaksiyon tamamlandıktan halinde ürün 1 (adım 1.4-1.6) için tarif edilen şekilde, ürün 7 (MeO-PEG 5K -Lys-Lys 2 izole etmek için, eter çökelmeye devam (Trt))) 4. </li><li> Ürünü 8 elde etmek için, adım 1.8&#39;de de belirtildiği gibi, on 7 Fmoc de-koruma gerçekleştirin (- (Lys (NH 2) - PEG 5K Lys-Lys 2 (Cys (NH 2) (Trt))) 4). Çift (Fmoc) -PEG 2 -Suc-OH ( &quot;Ebes&quot; bağlayıcı, 24 eşi.), Bir HOBt için yukarıda belirtilen prosedür kullanılarak ara polimer / DIC aracılı bağlanma ile ilgili ara madde 9 (MeO-PEG 5K -Lys-Lys-Lys 2 4 elde etmek için - (Cys (trt) ) 4 (Ebes (NH-Fmoc)) 8). </li><li> Ara 10 almak için Fmoc de koruma bir tur daha (1.6-1.8 adımlar) gerçekleştirin (MeO-PEG 5K Lys-Lys 2 Lys 4 - (Cys (Trt)) 4 (Ebes (NH 2)) 8). </li><li> Bir tepkime şişesi içine polimerin ara madde 10 aktarılır ve çözünmesi susuz DMF (yaklaşık 30-40 mi) ilave edin. Başka bir reaksiyon şişesine ise 24 eşdeğer çözülür. Susuz DMF (daha önce yayınlanmış prosedüre göre hazırlandı) CAOSu (20-30 mi), 18. 48 eşdeğer ekleyin. ve N, N-diizopropiletilamin ve 10-15 dakika boyunca karışmaya bırakıldı. 10 içeren reaksiyon balonuna içine içeriğini aktarın ve reaksiyon çalıştırmak o izinvernight. </li><li> TLC 16 ve Kaiser testi ile reaksiyonun tamamlandığını teyit (adım 1.4 bkz sarı bir renk bilgilerini NH2 olmadığını gösterir) 17. (Cys (Trt)) 4 -Ebes - Reaksiyon tamamlandıktan ise ürünün 1 (1.4-1.6 adımlar) ürünü 11 izole etmek (MeO-PEG 5K Lys-Lys 2 Lys 4 belirtildiği gibi, eter yağış devam 8 -CA 8). de-iyonize su içinde diyaliz ve beyaz bir toz elde etmek için örnek liyofilize. </li><li> Bir tepkime şişesi içine, ara polimerin 11 yerleştirin. Hazırlama ve polimer çözeltisi içine, TFA / 1,2-etanditiol (EDT) / trietilsilan (TIS) 20 ml / H2O (94 / 2.5 / 1 / 2.5, v / v) karışımı ekleyin. Tam çözünme gerçekleşene kadar karışım karıştırılır. 4 saat reaksiyondan. TLC 16 ile reaksiyonun tamamlandığını onaylayın. </li><li> Davlumbaz altında, içine hava üflemek polimer-TFA / EDT / TIS / H 2çözelti kadar Ç karışımı viskoz hale gelir. Ürünün 1 (1.4-1.6 adımlar) için tarif edilen şekilde nihai ürün, 12 (PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8) izole etmek için, eter çökeltme geçin. asetonitril içinde çözülür ve beyaz bir toz elde etmek için bu liyofilize edin. </li></ol> PTX-yüklü misellerin 2. Hazırlık <ol><li> Standart buharlaştırma yöntemi kullanılarak bir PTX yüklü PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 misel hazırlayın. <ol><li> Kloroform, 1 ml (CHCI3) &#39;de PTX farklı bir miktarda (1-9 mg) ile TD 20 mg eritin. Homojen kuru polimer film elde edilmesi için bir döner buharlaştırıcı kullanılarak çözücüyü çıkarın. gerektiğinde ilaç yüklü misellerin oluşumunu sağlamak için, 40 kHz, 30 dakika süreyle sese tabi tutularak ve ardından girdap fosfat-tamponlu salin (PBS) ile 1 ml film sulandırın. </li><li> % 3 (a / a) H2O 2 (1 eşdeğer 6 ul ekle. FRTD&#39;de tiol grupları oksitleyebileceğini) tiyol gruplar ee. Ellman testi 19 ile gösterildiği gibi serbest tiol gruplarının seviyesi, sabit bir düşük değerli kalır kez daha fazla karakterizasyon için misel solüsyonu kullanın. </li><li> örnek sterilize etmek için 0.22 mikron filtre ile çözüm Filtre. 9 kez asetonitril eklenmesi ve sonikasyon 10 dakika gerçekleştirerek miseller uyuşturucu serbest bıraktıktan sonra, bir HPLC sistemine 20 miseller yüklenen ilaç miktarını analiz edin. mobil faz olarak asetonitril / su ile HPLC için bir C18 sütunu kullanın. </li><li> HPLC alan değerleri ve 11, standart ilaç konsantrasyonları arasındaki kalibrasyon eğrisine göre ilaç yüklemesine hesaplayın. NOT: yükleme verimliliği ilk ilaç içeriğine miseller yüklenen ilaç oranı olarak tanımlanır. </li></ol></li></ol> Misellerin 3. Karakterizasyonu <ol><li> m büyüklüğü ve büyüklük dağılımını ölçmekdinamik ışık saçılımı (DLS) alet 29 icelles. oda sıcaklığında ölçümleri gerçekleştirmek ve 1 mg / ml olarak misel konsantrasyonu tutun. NOT: parçacık boyut analizi gerçekleştirmek boş olarak PBS kullanın ve sonra gerçek örnekler için partikül büyüklüğü kaydetmek için. numuneler için üç nüsha olarak okumaları alın ve sonra okumaları ortalama. </li><li> Daha önce tarif edildiği gibi 13,21, ABD Doları, önce ve bir hidrofobik flüoresan sonda olarak piren ile çapraz bağlama sonra, PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 kritik misel konsantrasyonu (CMC) ölçmek için floresan spektrumu kullanın. NOT: Genellikle, misel konsantrasyonu 5 × 10 -7 5 × 10 -4 M. aralıkları </li></ol> ya da indirgeme maddeleri, SDS misellerin 4. Stabilite <ol><li> sodyum dodesil sülfat stok çözeltileri (SDS) çözeltisi (7.5 mg / ml) ve PBS içinde disülfid çapraz bağlı miseller (1.5 mg / ml) hazırlayın. Daha sonra, uNihai SDS konsantrasyonu olan bir çözelti karışımı yapmak stok solüsyonları şarkı 2.5 mg / ml ve misel konsantrasyonu 1.0 mg / ml olan. </li><li> ile ya da 10 mM glutatyon (GSH) varlığı olmadan önceden belirlenen zaman aralıklarında misel çözeltilerinin (adım 3.1 belirtildiği gibi) boyutu ve boyut dağılımı ölçülür. </li></ol> 5. Hemoliz tayininde <ol><li> Toplanan daha önce yayınlanmış prosedür 11 ve çıplak farelerde taze sitratlı kan kullanılarak PTX yüklü çapraz bağlı miseller (PTX-DCMs) göre hazırlandı PTX yüklü olmayan çapraz bağlı miseller (PTX-NCMs) hemolitik potansiyelini değerlendirir kuyruk peçe. <ol><li> % 2&#39;lik bir nihai konsantrasyona PBS ile hücre pelletleri yeniden askıya daha sonra, 10 dakika boyunca 1000 x g&#39;de kan numunesi (1.0 mi) bir santrifüj ile kırmızı kan hücreleri toplamak PBS ile uygun üç kez yıkayın ve. </li></ol></li><li> Farklı konsantrasyonlarda (0.2 ve 1.0 ile birlikte eritrosit süspansiyonu 200 ul karıştırınmg PTX-NCMs ve PTX-DCMS, / ml), sırasıyla, bir kuluçka çalkalayıcı içinde 37 ° C&#39;de 4 saat inkübe edilir. </li><li> 5 dakika boyunca 3.000 xg&#39;de misel-eritrosit karışımları santrifüj. 96 oyuklu bir plakaya her numunenin süpernatant 100 ul aktarın. Bir mikro-plaka okuyucusu kullanmak sureti ile 540 nm de üstte yüzen madde içindeki serbest hemoglobin absorbansı ölçülür. Not: Triton-100 (% 2) ve PBS ile inkübe eritrositler sırasıyla pozitif ve negatif kontroller olarak kullanılacak. RBCs yüzde hemoliz aşağıdaki formülle hesaplanır: RBC hemoliz = (OD örneği - OD negatif kontrol) / (OD pozitif kontrol - OD negatif kontrol)% 100 ×. </li></ol>

<ol><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+in+medicine%3A+therapeutic+applications+and+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles in medicine: therapeutic applications and developments.</a> Clin. Pharmacol. Ther. 83, 761-769 (2008).</li>
<li>Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+Delivery+of+Cancer+Drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Med%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle Delivery of Cancer Drugs.</a> Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).</li>
<li>Iyer, A. K., Khaled, G., Fang, J., Maeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+enhanced+permeability+and+retention+effect+for+tumor+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Disc.+Today+Targets%22%5BJournal%5D)">Exploiting the enhanced permeability and retention effect for tumor targeting.</a> Drug Disc. Today Targets. 11, 812-818 (2006).</li>
<li>Morachis, J. M., Mahmoud, E. A., Almutairi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+chemical+strategies+for+therapeutic+delivery+by+using+polymeric+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Physical and chemical strategies for therapeutic delivery by using polymeric nanoparticles.</a> Pharmacol. Rev. 64, 505-519 (2012).</li>
<li>Kamaly, N., Xiao, Z., Valencia, P. M., Radovic-Moreno, A. F., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+polymeric+therapeutic+nanoparticles%3A+design%2C+development+and+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Targeted polymeric therapeutic nanoparticles: design, development and clinical translation.</a> Chem. Soc. Rev. 41, 2971-3010 (2012).</li>
<li>Li, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversibly+stabilized+multifunctional+dextran+nanoparticles+efficiently+deliver+doxorubicin+into+the+nuclei+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Reversibly stabilized multifunctional dextran nanoparticles efficiently deliver doxorubicin into the nuclei of cancer cells.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48, 9914-9918 (2009).</li>
<li>Miyata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Block+catiomer+polyplexes+with+regulated+densities+of+charge+and+disulfide+cross-linking+directed+to+enhance+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Block catiomer polyplexes with regulated densities of charge and disulfide cross-linking directed to enhance gene expression.</a> J. Am. Chem. Soc. 126, 2355-2361 (2004).</li>
<li>Chan, Y., Wong, T., Byrne, F., Kavallaris, M., Bulmus, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid-labile+core+cross-linked+micelles+for+pH-triggered+release+of+antitumor+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Acid-labile core cross-linked micelles for pH-triggered release of antitumor drugs.</a> Biomacromolecules. 9, 1826-1836 (2008).</li>
<li>Rijcken, C. J., Snel, C. J., Schiffelers, R. M., van Nostrum, C. F., Hennink, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrolysable+core-crosslinked+thermosensitive+polymeric+micelles%3A+synthesis%2C+characterisation+and+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Hydrolysable core-crosslinked thermosensitive polymeric micelles: synthesis, characterisation and in vivo studies.</a> Biomaterials. 28, 5581-5593 (2007).</li>
<li>Talelli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Core-crosslinked+polymeric+micelles+with+controlled+release+of+covalently+entrapped+doxorubicin%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Core-crosslinked polymeric micelles with controlled release of covalently entrapped doxorubicin.</a> Biomaterials. 31, 7797-7804 (2010).</li>
<li>Xiao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-assembling+nanoparticle+for+paclitaxel+delivery+in+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A self-assembling nanoparticle for paclitaxel delivery in ovarian cancer.</a> Biomaterials. 30, 6006-6016 (2009).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+size-tunable+nanocarrier+system+for+targeted+anticancer+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">A novel size-tunable nanocarrier system for targeted anticancer drug delivery.</a> J. Control. Release. 144, 314-323 (2010).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-defined%2C+reversible+disulfide+cross-linked+micelles+for+on-demand+paclitaxel+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Well-defined, reversible disulfide cross-linked micelles for on-demand paclitaxel delivery.</a> Biomaterials. 32, 6633-6645 (2011).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-defined%2C+reversible+boronate+crosslinked+nanocarriers+for+targeted+drug+delivery+in+response+to+acidic+pH+values+and+cis-diols%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Well-defined, reversible boronate crosslinked nanocarriers for targeted drug delivery in response to acidic pH values and cis-diols.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 51, 2864-2869 (2012).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+smart+and+versatile+theranostic+nanomedicine+platform+based+on+nanoporphyrin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">A smart and versatile theranostic nanomedicine platform based on nanoporphyrin.</a> Nat. Commun. 5, (2014).</li>
<li>Belenki, B. G., Gankina, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thin-Layer+chromatography+of+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Thin-Layer chromatography of polymers.</a> J. Chromatogr. A. 141, 13-90 (1977).</li>
<li>Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C. D., Cook, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Color+test+for+detection+of+free+terminal+amino+groups+in+the+solid-phase+synthesis+of+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides.</a> Anal. Biochem. 34, 595-598 (1970).</li>
<li>Pandey, P. S., Rai, R., Singh, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+cholic+acid-based+molecular+receptors%3A+head-to-head+cholaphanes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Soc.%2C+Perkin+Trans+1%22%5BJournal%5D)">Synthesis of cholic acid-based molecular receptors: head-to-head cholaphanes.</a> J. Chem. Soc., Perkin Trans 1. , 918-923 (2002).</li>
<li>Riddles, P. W., Blakeley, R. L., Zerner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reassessment+of+Ellman%27s+reagent%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Reassessment of Ellman's reagent.</a> Methods Enzymol. 91, 49-60 (1983).</li>
<li>Ahuja, S., Rasmussen, H. Overview of HPLC method development for pharmaceuticals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAhuja%2C+S+%22HPLC+Method+Development+for+Pharmaceuticals%22">HPLC Method Development for Pharmaceuticals</a>. , Separation Science and Technology; 8. Elsevier Academic Press Inc. 1-11 (2007).</li>
<li>Li, Y., Pan, S., Zhang, W., Du, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+thermo-sensitive+core-shell+nanoparticles+for+targeted+paclitaxel+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Novel thermo-sensitive core-shell nanoparticles for targeted paclitaxel delivery.</a> Nanotechnology. 20 (6), 065104(2009).</li>
<li>Kato, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide+cross-linked+micelles+for+the+targeted+delivery+of+vincristine+to+B-cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Disulfide cross-linked micelles for the targeted delivery of vincristine to B-cell lymphoma.</a> Mol. Pharm. 9, 1727-1735 (2012).</li>
<li>Lu, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+glutathione+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of glutathione synthesis.</a> Mol. Aspects Med. 30, 42-59 (2009).</li>
<li>Xiao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22OA02%22+peptide+facilitates+the+precise+targeting+of+paclitaxel-loaded+micellar+nanoparticles+to+ovarian+cancer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">"OA02" peptide facilitates the precise targeting of paclitaxel-loaded micellar nanoparticles to ovarian cancer in vivo.</a> Cancer Res. 72, 2100-2110 (2012).</li>
<li>Koo, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide-cross-linked+PEG-poly%28amino+acid%29s+copolymer+micelles+for+glutathione-mediated+intracellular+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Disulfide-cross-linked PEG-poly(amino acid)s copolymer micelles for glutathione-mediated intracellular drug delivery.</a> Chem. Commun. 28, 6570-6572 (2008).</li>
<li>McLellan, L. I., Wolf, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+and+glutathione-dependent+enzymes+in+cancer+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Drug.+Resist.+Update%22%5BJournal%5D)">Glutathione and glutathione-dependent enzymes in cancer drug resistance.</a> Drug. Resist. Update. 2, 153-164 (1999).</li>
<li>Karala, A. R., Lappi, A. K., Saaranen, M. J., Ruddock, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+peroxide-mediated+oxidative+refolding+of+a+protein+at+physiological+pH+and+implications+for+oxidative+folding+in+the+endoplasmic+reticulum%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid.+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Efficient peroxide-mediated oxidative refolding of a protein at physiological pH and implications for oxidative folding in the endoplasmic reticulum.</a> Antioxid. Redox Signal. 11, 963-970 (2009).</li>
<li>Gabizon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicines%3A+closing+the+translational+gap%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicines: closing the translational gap.</a> Lancet. 384, 2175-2176 (2014).</li>
<li>Nanotrac Nanotechnology Particle Size Measurement Solutions. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf">http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf</a> (2006).</li>
</ol>

Y. Li ve K.S.L. tersinir çapraz bağlı misel sistemleri üzerinde bekleyen bir patentin mucitleridir (ABD patent başvurusu 61/485,774). K.S.L., el yazmasında açıklanan nanoterapötikleri geliştirmeyi planlayan LamnoTherapeutics Inc.'in kurucu bilim insanıdır. Geri kalan yazarlar herhangi bir rakip mali çıkar beyan etmemektedir.

Çeşitli nanopartiküller ilaç iletiminde potansiyel kullanım için incelenmiştir. Lipozomal doksorubisin ve paklitaksel (PTX) insan serum albümin nano-agrega kanser tedavisi için FDA tarafından onaylanmış nanotherapeutics arasındadır -yüklü. klinik olarak etkili olmasına rağmen, ancak, bu nanotherapeutics iki boyut açısmdan göreceli olarak &quot;büyük&quot;, ve karaciğer ve akciğer birikme eğilimindedir. nispeten daha küçük partikül boyutları ve daha yüksek ilaç yükü kapasitesine sahip polimerik miseller ilaç iletimi için...

Nanoteknoloji biyomedikal alanlarda 1 bir dizi yararlandı hızlı gelişen bir alandır. Nanopartiküller geleneksel terapötik diğer türleri ile mümkün değildir özellikleri tasarımı ve ayarlama için fırsatlar sağlar. Nano taşıyıcılar, ilaç dolaşım süresini uzatmak, biyolojik ayrışma karşı ilaçların istikrarı geliştirmek ilaç çözünürlüğü sorunları aşmak ve ince ayarlı hedefli ilaç dağıtım ve ko-teslim görüntüleme maddeleri 1,2 için olabilir. Nanopartikül bazlı verme sistemleri Kanser görüntüleme ve tedavisi ümit vaat etmektedir. Tümör vaskülatürlerden makromoleküllere sızan ve gelişmiş geçirgenlik ve tutma (EPR) etkisi 3 ile, tümör bölgelerinde nano-tanecikleri, dolaşımdaki birikmesidir yol açabilir. Aktif bir anti-kanser ilaç taşıyıcılar olarak izlenmektedir birçok nano taşıyıcı (örneğin, lipozomlar, hidrojeller ve polimerik misel) arasında, bir polimerik miseller th geniş bir popülarite kazanmışe son on 4,5. Polimerik miseller, intravenöz uygulama ile ilgili potansiyel unimers içine ayrışma yol kritik misel konsantrasyonu (CMC) altına seyreltilebilen bir termodinamik sistemdir. Çapraz bağlanma stratejileri unimers içine misel ayrışmasını en aza indirmek için istihdam edilmiştir. Ancak, aşırı stabilize miseller böylece genel terapötik etkinlik azaltarak, hedef bölgelerde bırakmadan gelen ilaç engelleyebilir. Çeşitli kimyasal yaklaşımlar yapmak için araştırılmıştır çapraz bağlama redoks yanıt olarak ya da indirgenebilir disülfid bağlarının 6,7 ve pH-parçalanabilen 8 veya hidrolize ester bağları 9,10 olarak dış uyaranlara, için parçalanabilir. Daha önce telodendrimers (TD) olarak adlandırılır tasarım ve dendritik kolik asit (CA) blok ve doğrusal polietilen glikol (PEG) kopolimerleri, aşağıdakilerden oluşan misel nanopartiküllerin sentezi 11-15 bildirmiştir </&gt; Sup. Bu TDS (n = molekül ağırlığı kilodalton (K) Y, kolik asit sayısını (CA) birimleri =), PEG nK -CAy olarak temsil edilir. Bunlar hidrofobik çekirdekte paklitaksel (PTX) ile doksorubisin (DOX) halinde kapsül ilaç küçük olmaları, uzun bir raf ömrü ve yüksek verimlilik ile karakterize edilir. PEG, lisin, ve CA gibi TD yapı blokları, biyolojik olarak uyumlu olan, ve bir PEG korona varlığı retiküloendotelyal sistemleri tarafından misel nanopartiküllerin spesifik olmayan soğurulma engelleyen bir &quot;gizli&quot; Nanopartikül karakteri kazandırabilmektedir. Tiollenmiş doğrusal dendritik polimerler kolaylıkla standart TDS dendritik oligo-lisin omurgasına sistein sokulmasıyla üretilebilir. Bu makalede, TDS hidrofobik çekirdeğin içine disülfit çapraz bağlantı (Şekil 1) verilmesi ile tersine çevrilebilir çapraz bağlanmış miselar ilaç verme sistemi üretimi için, basit bir protokol sunulur.

<table><tbody><tr><td>MeO-PEG 5K-NH 2</td><td>Rapp Polimer</td><td>125000-2</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys (Fmoc) -OH</td><td>Aaptec</td><td>AFK107</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys (Boc) -OH</td><td>Anaspec</td><td>AS-20132</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Cys (Trt) -OH</td><td>Aapptec</td><td>AAC105</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilformamid</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1160-4</td><td></td></tr><tr><td>Etil eter</td><td>Fisher Scientific</td><td>E134-20</td><td></td></tr><tr><td>N, N-Diizopropiletilamin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D125806</td><td></td></tr><tr><td>Trifloroasetik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6508</td><td>Aşındırıcı, dikkatli kullanın</td></tr><tr><td>4-metil piperidin</td><td>Alfa-Aesar</td><td>L-02709</td><td></td></tr><tr><td>Ebes bağlayıcı</td><td>Anaspec</td><td>AS-61924</td><td></td></tr><tr><td>Kolik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1129</td><td></td></tr><tr><td>1,2-Ethanedithiol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>02390</td><td>Çeker ocak içinde tutamak. Kullandıktan sonra eldivenleri ağartın.</td></tr><tr><td>Triizopropilsilan</td><td>Sigma Aldrich</td><td>233781</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform (susuz)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>288306</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen peroksit çözeltisi %30Aaron</td> <td>Industries</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>HoBt-Cl</td><td>Aaptec</td><td>CXZ096</td><td></td></tr><tr><td>DIC</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D125407</td><td></td></tr><tr><td>Dişi atimik çıplak fareler (Nu / Nu suşu), 6&ndash; 8 haftalık Harlan</td><td>(Livermore, CA)</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

döner disülfür Çapraz bağlı misellerin Üretimi için basit ve etkin yaklaşım

A Facile and Efficient Approach for the Production of Reversible Disulfide Cross-linked Micelles

Nanotıp biyomedikal uygulama için ölçek nanometre parçacıkların eşsiz özelliklerini sürdürür terapi yükselen bir şeklidir. Tedavi sonuçları maksimize etmek ve ilaç ilişkili yan etkileri azaltmak için ilaç dağıtım geliştirilmesi bugünkü Nanotıp taşlarından bazılarıdır. Özellikle nanopartiküller kanser tedavisinde geniş bir kullanım alanı bulmuştur. tasarım, uygulama ve tümör mikro dayalı üretimde esneklik yüksek derecesi Nanoparçacıklar klinik uygulamaya hızlı çeviri daha etkili olduğu tahmin edilmektedir. polimerik misel nano taşıyıcı ilaç verme uygulamaları için popüler bir seçimdir. Bu makalede, iyi tanımlanmış bir amfifilik lineer dendritik kopolimer (telodendrimer, TD) kendini düzenlemesinden göre ilaç yüklü, disülfid çapraz bağlanmış miseller sentezlenmesi için basit ve etkili bir protokol açıklar. TD polietilen gl oluşurHidrofilik segmenti ve çözelti esaslı peptid kimyası kullanılarak bir amin ile sona eren PEG çekirdek oluşturucu hidrofobik yarı parça eklenmiş adım adım bir Tiollenmiş kolik asit küme olarak ycol (PEG). Böyle paklitaksel (PTX) olarak kemoterapi ilaçları, standart bir çözücü buharlaştırma yöntemi kullanılarak yüklenebilir. O 2 aracılı oksidasyon önce TDS ile ilgili serbest tiyol grupları içi misel disülfit çapraz bağlantı oluşturulması için kullanılmıştır. Bununla birlikte, reaksiyon yavaş ve büyük ölçekli üretim için uygun değildi. Son zamanlarda, bir H 2 O 2 aracılı oksidasyon yöntemi daha uygun ve verimli bir yaklaşım olarak araştırılan ve 96 kat daha hızlı daha önce bildirilen yönteme göre daha oldu. Bu yaklaşımı kullanarak, PTX-yüklü, disülfid çapraz bağlanmış nanopartiküller 50 g başarılı dar parçacık boyutu dağılımı ve yüksek ilaç yüklemeli verimle imal edilmiştir. Elde edilen misel çözeltisi stabilitesi örneğin W birlikte kuluçkaya olarak kesintiye koşullar kullanılarak çözümlendiya da indirgeyici bir madde olmayan bir deterjan, sodyum dodesil sülfat, i. bunların olmayan çapraz bağlı karşılıkları ile karşılaştırıldığında ilaç yüklü, disülfid çapraz bağlanmış miseller az hemolitik aktivite göstermiştir.

İlaç yüklü disülfid Çapraz bağlanmış misellerin hazırlanışı ve Karakterizasyonu Amfifilik polimerin PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 kanser ilaç dağıtımı için bir disülfid çapraz bağlanmış miselar sistemi oluşturabilen bir dendritik polimerdir. Yapısal olarak, bu dallı bir poli (lisin-sisteyin-Ebes) omurgası boyunca doğrusal bir PEG molekülünün (hidrofilik etki, molekül ağırlığı 5K) bir ucuna bağlanmış, k...

Kanser ilaçlarını tümör bölgelerine yüksek özgüllük ve azaltılmış yan etkilerle ulaştırmak için nanopartiküllere dayalı yeni yöntemler gereklidir. Burada, hidrojen peroksit aracılı oksidasyon ile kolayca hazırlanabilen ve yükleri serbest bırakmak için indirgeyici bir tümör ortamı altında verimli bir şekilde ayrışabilen disülfür çapraz bağlı miselleri açıklıyoruz.

Döner disülfür Çapraz bağlı misellerin Üretimi için basit ve etkin Yaklaşım

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. ...

Bu prosedürün genel amacı, hedefe yönelik ilaç dağıtımı için ilaç yüklü disülfid çapraz bağlı misellerin sentezlenmesi için basit ve etkili bir protokol sağlamaktır. Bu yöntem, nano tıp alanındaki soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Kararlı nano formülasyonların nasıl etkili bir şekilde üretileceği gibi.Bu tekniğin temel avantajı, disülfid çapraz bağlı miselleri büyük ölçekte kolayca sentezlememize izin vermesidir, bu da hastalarda klinik çalışmalar için son derece arzu edilir. Bu prosedüre başlamak için, yuvarlak tabanlı bir şişeye iki gram monometil sonlu polietilen glikol monoamin ekleyin. Çözmek için on mililitre susuz DMF ekleyin.Buz üzerinde soğutun. Yuvarlak tabanlı bir şişeye üç eşdeğer hidroksi benzotriazol, üç eşdeğer DIC ve üç eşdeğer di-eth-moc korumalı lizin ekleyin. Ardından, on mililitre susuz DMF ekleyin.Karışımı manyetik bir karıştırma plakası üzerinde 20 dakika karıştırın. Daha sonra karışımı, monometil sonlu polietilen glikol içeren yuvarlak tabanlı şişeye ekleyin. Yuvarlak tabanlı şişeyi buz banyosundan çıkarın, ardından gece boyunca oda sıcaklığında karıştırın.Karıştırma tamamlandığında, metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi reaksiyonun tamam

a-facile-efficient-approach-for-production-reversible-disulfide-cross

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Sistein artıkları tiyol grubunun çözücü yönelik analiz etmek için bir...

Sistein Kalıntılarının Solvent Erişilebilirlik Analizi<em&gt; Mısır rayado fino virüsü</emÜretilen&gt; Virüs gibi parçacıklar<em&gt; Nicotiana benthamiana</emVLP&#39;ler için Peptidlerin&gt; Bitkiler ve Çapraz bağlama

Membran-gömülü protein etki arasındaki etkileşimler biyofiziksel ve biyokimyasal çalışmalarda uygun çalışma malzemesi elde edilir ilki birçok teknik sorunlarla karşı karşıya. Bu makale, çözelti nükleer manyetik rezonans (NMR) ve diğer analitik uygulamalar tarafından yapısal analizi için uygun olan disülfid stabilize transmembran peptid komplekslerini üretme ve arıtma için bir protokol açıklanmaktadır.

Yapısal Çalışmaları üretimi disülfid stabilize Transmembran Peptit Kompleksi

Şablon ücretsiz zeminler üzerine makroskobik nanoparçacık-ligand tek katmanlı filmler işlevselleştirmek ve kendine monte Basit, sağlam ve ölçeklenebilir tekniği bu protokol açıklanmıştır.

Şablon-ücretsiz Substratlarm üzerine makroskobik Nanoparçacık-ligand tabakalı Filmler işlevselleştirmek ve Öz-montajı A Tekniği

Bu makale, görünür ışık aracılı dispersiyon polimerizasyonu kullanılarak polimerik kendi kendine monte nanopartiküller üretmek için bir süreci açıklamaktadır. Polimerizasyonu kontrol etmek için düşük enerjili görünür ışığın kullanılması, yüksek katı madde içeriğinde kendi kendine monte edilen solucan benzeri misellerin tekrarlanabilir oluşumuna izin verir.

Photoredox Katalizörü kullanarak görünür ışık aracılığı ile dispersiyon polimerleştirilmesi ile solucan gibi miseller Facile sentezi

Mevcut çalışma yöntemi micellar nanocrystals, nanobiomaterials, gelişmekte olan bir büyük sınıf imal açıklanır. Bu yöntem yukarıdan aşağıya electrospray, aşağıdan yukarıya kendinden montajlı birleştirir ve solvent bazlı yapı denetim. İmalat yöntemi büyük ölçüde süreklidir, yüksek kaliteli ürünler üretmek ve Yapı Denetim ucuz bir yol sahiptir.

Küresel ve solucan şeklinde Micellar Nanocrystals Electrospray, kendinden montajlı birleştirerek ve Solvent Bazlı Yapı Denetim imalatı

Burada hedef lipid bilayers postfusion bilayer içine bu membran proteinlerinin deterjan ücretsiz teslim etmek için ile ultrafast protokollerinden membran proteinlerinin fusogenic proteoliposomes içine sulandırma ve böyle proteoliposomes füzyonu için mevcut. Bu yaklaşımlardan birleşimini karmaşık çok bileşenli Membran sistemleri hızlı ve kolayca kontrollü montaj sağlar.

Deterjan-Alerjik membran proteinlerinin Ultrafast sulandırma tamamlayıcı-Proteoliposomes ücret Fusogenic kullanarak Lipid Bilayers içine.

Helisel peptidler sülfür hayvan zinciri fotoğraf kaynaklı thiol-KD/thiol-yne hydrothiolation kullanarak thioether/vinil inşası için bir iletişim kuralı mevcut.

Thioether/vinil sülfür-gergin helisel peptidler fotoğraf yolu ile indüklenen Thiol-KD/yne Hydrothiolation oluşturmak

Burada, biz thiols bir pot, geçiş metal ücretsiz sentezi mevcut ve aromatik halojenürlerden ve sodyum thiomethoxide, thiol türler kullanarak bir metal-dithiolene ağının tek kristalleri hazırlık tarafından takip tiyoesterlere içinde in situ oluşturulan daha istikrarlı ve uysal thioester.

Bir yarıiletken Gyroidal Metal-kükürt çerçeve kristalleşme için Thiol yapı taşı sentezi

Disulfide bağlantıları uzun birçok proteinlerin yapısını stabilize olduğu bilinmektedir. Bu bağlantıyla stabilize edilmiş multimerik kompleksleri analiz etmek için basit bir yöntem, SDS-PAGE analizinin azaltılması yoluyla yapılır. Burada, bu yöntem, insan kemiği osteosarkomu hücre hattı U-2 OS dutpase nükleer izoformu analiz ederek gösterilmektedir.

Kültürde memeliler hücrelerinde Disulfide bağlantıları ile stabilize Multimeric kompleksleri algılamak için non-azaltma SDS-sayfa analizi ve kimyasal Crosslinking birleştiren

Protokol, sendelenmiş herringbone micromixer microfluidics cihazını kullanarak termosensitli lipozomların hazırlanması için optimize edilmiş parametreleri sunar. Bu aynı zamanda lipozomlar içine doksorubisin ve indosiyanyeşil co-kapsülleme ve kontrollü / tetiklenen ilaç salınımı için doksorubisin fototermal tetiklenen serbest sağlar.

Lysolipid İçeren Sıcaklığa Duyarlı Lipozomların Mikroakışkan Üretimi

Öğrenin, hidrojen peroksit aracılı oksidasyon kullanarak ilaç yüklü disülfid çapraz bağlı misellerin basit ve etkili sentez protokolünü. Bu yöntem, kanser tedavisinde hedefe yönelik ilaç teslimi için stabil nano-formülasyonlar üretmeyi sağlar.

Döner disülfür Çapraz bağlı misellerin Üretimi için basit ve etkin Yaklaşım

Daha fazla video keşfet