Subretinal Space erişim için bir alternatif ve Onaylı Enjeksiyon Yöntemi yoluyla Bir transkleral Posterior Yaklaşım

Bu çalışmanın genel amacı, viral vektörleri, farmakolojik ajanları hedeflemek veya farelerde subretinal boşluğa pluripotent kök hücreleri indüklemek için kullanılabilecek yeni bir subretinal enjeksiyon tekniğini tanımlamaktır. Bu yöntem, retina dejenerasyonları için yeni terapötik müdahalelerin etkinliğinin değerlendirilmesi gibi görme bilimi ve oftalmoloji alanlarındaki temel soruları yanıtlayabilir. Bu tekniğin ana avantajı, yüksek etkinlik, minimum hasar ve retina yapısı ve fonksiyonunun hızlı bir şekilde geri kazanılması ile subretinal boşluğa materyal iletmek için kullanılabilmesidir.

Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan bir teknisyen olan Sachin P olacak. Bu işleme başlamak için, görselleştirmeyi kolaylaştırmak için anestezi uygulanmış bir farenin bıyıklarını kesin ve hayvanın vücut ısısını bir sirkülasyon su pedi ile 37 santigrat derecede tutun. Daha sonra, öğrencilerini% 2.5 fenilefrin göz damlası ile genişletin.

Ardından, kuruluğu önlemek ve anestezik kaynaklı geçici kataraktları en aza indirmek için metilselüloz göz damlası uygulayın. Ameliyattan önce aletleri sterilize edin. Daha sonra, seyreltilmiş floreseini bir biyogüvenlik kabininde hazırlayın.

Şırıngayı uygun miktarda floresein ile doldurun. Ardından, hayvanın derin anestezi aldığından emin olmak için bir ayak parmağını çimdikleyin ve fareyi, enjekte edilecek göz yukarı bakacak ve diseksiyon mikroskobunda net bir şekilde görülebilecek şekilde konumlandırın. Temporal konjonktivayı bir çift ince uçlu forseps ile nazikçe sıkıştırın.

Ardından, kavisli Vannas makasını kullanarak yaklaşık 90 derecelik çevresel bir kesi yapın. Altta yatan Tenon'un kapsülü üzerindeki işlemi tekrarlayın. Bundan sonra, küreyi nazal olarak döndürürken, çevredeki bağ sorununu ince uçlu forsepslerle rezeke edin.

Optik sinirden yaklaşık 0,5 milimetre uzaktaki enjeksiyon bölgesine doğru çalışın ve retroorbital sinüsü bozmamak için büyük özen gösterin. Kritik bir adım, gözün kendisine veya ilgili yapılara zarar vermeden, özellikle orbital kan kesesine zarar vermekten kaçınarak, gözün döndürülmesini gerektiren enjeksiyon bölgesini açığa çıkarmaktır. Bu prosedürde, göz kapağını 22,5 derecelik bir oftalmik bıçakla nazikçe çizerek enjeksiyon bölgesinin sklerasında küçük bir kesi yapın.

Bu kesi, iğnenin ucunun skleradan geçmesine izin verecek kadar büyük olmalıdır. Daha sonra, eğimli 33 gauge iğneyi, eğimi bakacak ve retinaya paralel açılı olarak sklerotomiye yerleştirin. Pistona eşit basınçla yavaşça bastırarak istenen miktarda %0,01 floresein enjekte edin.

İğne subretinal boşlukta olduğunda, pistona basarken hafif bir direnç hissedileceğini unutmayın. İğne retinayı delerse direnç olmaz, ancak iğne sklera veya RPE'ye nüfuz etmezse yüksek direnç olur. Bir diğer kritik adım, subretinal boşluğu hedef alan enjeksiyondur.

Bu, nörosensoriyel retinadan vitreus boşluğuna nüfuz etmeden gerçekleştirilmelidir. Geri akışı en aza indirmek için iğneyi çekmeden önce birkaç saniye bekleyin. Daha sonra, gözü steril tuzlu su ile durulayın ve gözün normal konumuna geri döndüğünden emin olun.

Daha sonra, enjekte edilen gözün kornea yüzeyine kalın bir kat üçlü antibiyotikli oftalmik krem uygulayın. Daha sonra, fareyi kurtarma için temiz bir yalnız kafese yerleştirin. Anestezi iyileşmesi sırasında solunumunu ve sıcaklığını izleyin ve sternal yaslanmayı koruyup koruyamayacağını kontrol edin.

Ameliyat sonrası ağrı yönetimi için deri altı carprofen enjeksiyonu da dahil olmak üzere ek uygun ameliyat sonrası izleme ve tedavi gerçekleştirin. İşte enjeksiyon bölgesindeki kubbe şeklindeki blebin 3 boyutlu bir rekonstrüksiyonu. Kubbe şeklindeki bleb daha sonra retina dekolmanı derecesini ve kenarlarını göstermek için yoğun beyaz renkle doldurulur.

OCT'den retina kesitleri beyaz renkte görülebilirken, RPE ve fotoreseptörler seviyesindeki sıvı dolu boşluk siyah görünür. Ve bu şekilde, maksimal retina dekolmanı bölgesindeki temsili OCTB taramaları enjeksiyon öncesi, enjeksiyondan 10 dakika sonra ve enjeksiyondan dört hafta sonra gösterilmiştir. Bu görüntü, 0.3 mikrolitrelik bir enjeksiyondan düz bir blebin oluşumunu ve çözünürlüğünü göstermektedir.

Ve bu görüntü 0.5 mikrolitrelik bir enjeksiyondan kubbeli bir blebin oluşumunu ve çözünürlüğünü gösterirken, bu resim bir mikrolitrelik enjeksiyondan kubbeli bir blebin oluşumunu ve çözünürlüğünü göstermektedir. Son olarak, burada enjeksiyon bölgesinde ciddi koroid skarlaşması ve retina incelmesine bir örnek verilmiştir. Retinalar, bleb çözünürlüğünden sonra normal fonksiyonlarını korurlar.

Dokuz aydınlatma yoğunluğunda, 0.3 mikrolitre, 0.5 mikrolitre ve 1 mikrolitre enjeksiyonlar için enjeksiyon öncesi ve enjeksiyondan dört hafta sonra skotopik çubuk aracılı tepkiler için dalga formları gösterilmiştir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik göz başına 10 ila 15 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, başlamadan önce gözlerin sağlığını değerlendirmek önemlidir.

Kornea veya lens opaklığı olan gözleri veya bu prosedürün çok zor olacağı derin gözleri hariç tutun. Bu işlemi takiben, enjeksiyonun kalitesini değerlendirmek için OCT ve fundus görüntüleme gibi diğer yöntemler de yapılabilir.