Name: Subretinal Space erişim için bir alternatif ve Onaylı Enjeksiyon Yöntemi yoluyla Bir transkleral Posterior Yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Öğrenin farelerde subretinal enjeksiyon tekniği ile retinal dejenerasyon tedavileri için viral vektör ve farmakolojik ajanların etkili teslimatını. Minimal hasar ve hızlı iyileşme sağlayan bu yöntem oftalmolojide yeni stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Harold ve Pauline Price Oftalmoloji Kürsüsü ve Jules Stein Göz Enstitüsü'nün MBG'ye, NEI Core hibesini (EY00331-43) SN'ye verdiği desteği minnetle kabul ediyoruz. Araştırma kısmen Sakaria ailesinden SN ve MGB'ye cömert bir hediye ve Körlüğü Önleme Araştırmaları'ndan Oftalmoloji Bölümü'ne sınırsız bir hibe ile desteklendi. Berkeley Optometri Okulu'ndan Charlotte Yiyi Wang'a subretinal enjeksiyonların ilk OCT görüntülerini elde ettiği için teşekkür ederiz.

Hayvanlar: Los Angeles, California Üniversitesi (UCLA) yetiştirilen Yabani tip C57Bl / 6J fareler. 17 haftalık ve erkek ve dişi fareler dahil - Bütün hayvanlar 11 arasında idi. Tüm fareler grubu yerleştirilmiştir, yiyecek ve su ad libitum 12:12 aydınlık / karanlık döngüsünde tutuldu. Bütün deneyler Oftalmik ve Vision Research Hayvanların Kullanım UCLA ve Vizyon Araştırma Derneği ve Oftalmoloji Tablosu kurumsal kurallarına uygun olarak yapıldı. NOT: Tüm ilaçlar ve enjekte ajanlar Amerika Birleşik Devletleri Farmakopesi (USP) notu bulunmaktadır. 1. Cerrahi Hazırlık <ol><li> tuzlu karışımı 100 mg / kg ketamin ve 8 mg / kg ksilazin ve intraperitoneal enjeksiyonu ile fare anestezisi. Fare hiçbir ayak tutam veya kornea dokunmatik refleksleri böyle bir derinliğe anestezi uygulayınız. </li><li> Bir dolaşan su pedi ile 37.0 ° C vücut ısısını korumak. </li><li> % 2.5 fenilefrin göz d öğrencileri dilateROPS ve trim bıyık görselleştirme kolaylaştırmak için. Bıyık nedenle, bıyık o gözle bloklar açık erişim, değil bıyık tabanına sadece bir bölümünü kaldırmak gerekir kırparak, fare önemli duyusal girdi sağlamaktadır. Bizim tecrübelerimize göre, fareler bu işlemden sonra normale iyileşme göstermektedir. Metilselüloz göz uygulayın kuruluğunu önlemek ve anestezi kaynaklı geçici katarakt 13 en aza indirmek için düşer. </li><li> Cerrahi (yani, betadin ve etanol veya sıcak boncuk) öncesinde aletleri sterilize. </li><li> Görselleştirme yapılacaksa, steril bir ortamda seyreltilmiş fluoresein (% 0.01,% 0.9 tuz kullanılarak) hazırlayın (örneğin, biyo-güvenlik kabini) (aşağıdaki bölüm 3). </li></ol> 2. Enjeksiyon Sitesi Hazırlama <ol><li> Uygun enjeksiyon hacmi (örneğin, 0,3-1,0 ul) ile bir şırınga (örneğin, 5 ul şırınga) hazırlayın. </li><li> Göz di açıkça görülebilir yukarı bakacak ve böylece fare yerleştirinmikroskop ssecting. </li><li> Yavaşça ince uçlu forseps ile zamansal konjonktivayı tutam. kavisli Vannas makas kullanılarak yaklaşık 90 derecelik bir çember boyunca bir kesi olun. </li><li> altta yatan Tenon kapsülü ile adımı yineleyin 2.3. </li><li> burundan dünya dönerken ince uçlu forseps ile çevreleyen bağ dokusu rezeke. optik sinir yaklaşık 0,5 mm zamansal enjeksiyon yerinde doğru çalışın. retro-orbital sinüs bozmamak için büyük özen kullanın. </li></ol> 3. Sklerotomi ve Subretinal Enjeksiyon NOT: Bu prosedür öğrenme sırasında% 0.9 Saline% 0.01 floresein enjeksiyon görselleştirme yardımcı olmak için kullanılması tavsiye edilir. floresein topografik dağılımı etkili bir fundus görüntüleme (aşağıda bölüm 4&#39;e bakınız) ile belgelenebilir. <ol><li> yavaşça 22.5 derecelik oftalmik bıçak ile Göz yuvası çizilerek enjeksiyon yerinde küçük bir skleral kesi yapmak. Bu kesi shouSadece iğne ucu sklera geçmesine izin verecek kadar büyük olması ld. </li><li> 5 açılı eğimli 33 G iğne (takın -. Konik bakan ve retinaya açılı paralel olan sklerotomili içine 10 ° (istenilen hacim enjekte örneğin, öğrenme amaçlı% 0.01 Floresein 0.3 1.0 ul). Not: iyice her enjeksiyondan önce müsait bir çözücü ve DI suyla art arda yıkama ile temizlenerek şırınga sterilliğini korumak. </li><li> İğneyi hareket ettirmeden ve hatta basınçla pistonu yavaşça (over ~ 3 saniye) basın. NOT: İğne subretinal alan olduğunda Medyumu ederken, hafif bir direnç hissedilecektir. İğne sklera veya RPE nüfuz etmediği takdirde iğne retina ve yüksek direnç deler eğer minimum dirençle hiçbir olacaktır. </li><li> geri akışı en aza indirmek için iğne çekilerek önce birkaç saniye bekleyin. </li><li> Steril tamponlu tuzlu su ile göz durulayın ve göz h sağlamakgeri normal pozisyonuna döndürülmüş olarak. </li></ol> OCT ve Fundus Görüntüleme tarafından Retina Dekolmanı 4. Değerlendirme <ol><li> enjeksiyondan hemen kalitesini değerlendirmek için enjeksiyondan sonra ve uygun zamanda Ekim görüntüleme gerçekleştirmek retinal yapıyı değerlendirmek için gerekli post-enjeksiyon işaret ediyor. Not: Benzer çalışmalarda OKT kullanımına örnekler, daha önce 7,14 tarif edilmiştir. <ol><li> Ayarlayın ve enjeksiyon siteyi hedef Ekim görüntüyü aynı hizaya getirin. enjeksiyon yeri orta hat ve optik sinir başı temporal 0,5 mm olmalıdır. optimal merkezli dekolmanı çerçevesinin dışında ise gerekli ya da değil tekrarlayın. </li></ol></li><li> Retina dekolmanı görselleştirmek ve en-yüz fundus görüntüleme 7,14 ile enjeksiyon alanını boya. Not:, OCT görüntüleme sistemi mevcut değilse, uygulama için bir vektör ile floresan bir miktar enjeksiyon floresein anjiyo gerçekleştiren bir fundus kamera ile görselleştirme sağlayacakAynı uyarma dalga boyları kullanarak ve filtreler engelleme grafisi. hiper-floresan lokalize alanlar damarsal altında görünecek ve subretinal alan doğru hedeflenmiş ise damarsal keskin ve belirgin sınırları olacaktır. enjeksiyondan bleb kenarı hipo floresan hiper geçiş ile sınırları çizilmiş olacaktır. Çeşitli enstrümanlar fare için bu yeteneği sağlar; Burada kullanılan enstrümantasyon başka yerde 14 tarif edilmiştir. </li></ol> 5. Post-operatif Bakım <ol><li> Enjekte gözün kornea yüzeyine üçlü antibiyotik göz krem ​​kalın bir kat uygulayın. </li><li> kurtarma için temiz yalnız kafeslerde fareler yerleştirin. Onlar tamamen iyileşti kadar ameliyat geçiren fareler bir araya etmeyin. </li><li> Anestezi kurtarma sırasında solunum ve sıcaklığını izlemek. Onlar sternum yatma koruyabilirsiniz kadar hayvan izleyin. </li><li> Ek uygun post-operatif izleme gerçekleştirmekve ameliyat sonrası ağrı tedavisi için karprofen bir deri altı enjeksiyon (5 mg / kg) de dahil olmak üzere tedavi. </li></ol> Elektroretinografi tarafından Retina Fonksiyonun 6. Değerlendirmesi (ERG) <ol><li> ERG analiz ön enjeksiyon gerçekleştirmek ve uygun zamanlarda retina fonksiyonlarını değerlendirmek için gerektiği gibi enjeksiyon sonrası. Enjeksiyon subretinal boşluğa yapılmış ise, retina dekolmanı 72 saat içinde çözmelidir. <ol><li> Daha önce 14,15 açıklandığı gibi önce ve enjeksiyondan sonra retina fonksiyonlarını değerlendirmek için standart ERG tekniklerini kullanın. </li></ol></li></ol> 7. 3D İmar ve Bleb Hacim Ölçümü NOT: yüksek kontrast görüş çerçevesinde tüm dekolmanı kapsayan birlikte Ekim taramaları kullanım için optimum olan. ImageJ / Fiji 17,18 ve Imaris kullanıldı, ancak diğer yazılım kullanılabilir. <ol><li> ilgi b-tarama İhracat, ImageJ / Fiji ve kırpma (Görüntü&gt; Kırpma) Ekim sc bölümü ithalatBir dikdörtgen seçim aracı kullanılarak modellenmiştir edilecek. <ol><li> Kontrast ayarlayın (Görüntü&gt;&gt; Parlaklık / Kontrast ayarlama) ve bir çizgi ile iki bölüm bağlayarak herhangi bir eksik sınırları betimlemek. </li><li> fotoreseptör tabakası RPE yayılan çizgi aracı (tutma vardiya) ile düz bir çizgi çizin. Tedbir (Ölçü&gt; Analiz) çizgisinin uzunluğu adımı 7.8 için maksimum dekolmanı boyutu elde etmek için. </li></ol></li><li> İthalat &quot;Gray RGB&quot; eklentisi ve MATLAB Compiler Runtime kullanılarak (Malzeme Tablo bakınız) 3D-rekonstrüksiyon yazılımı çerçeveleri kırpılmış. </li><li> Ekim tarama (x, y, z) kalibrasyon parametrelerini kullanarak (Görüntü Özellikleri altında) voksel boyutunu ayarlayın. </li><li> dördüncü kanal oluşturmak için, her kanala eşit ağırlık ile (Görüntü Özellikleri altında) &quot;RGB Gray&quot; eklentisi, yürütün. Orijinal Kırmızı-Yeşil-Mavi kanalları silin. </li><li> kontrast değişikliği kullanarak gri kanal ters çevirin. Mağaza Görüntü. </li><li> &quot;Bir Ekle&#39;yi tıklayınew yüzeyi &quot;3D-Görünüm sekmesinde düğme ve yüzey yaratma güdümlü 4 adım süreci başlar. <ol><li> Yüzey seviye detay (adım 4 1) ayarlayın. NOT: Bizim tecrübelerimize göre 12,0 8.0 en etkili menzili oldu. </li><li> (Arka plan seçimi altında) maksimum küre boyutunu 7.1.2 ölçülen maksimum dekolmanı boyutu biraz daha az olarak ayarlayın. gri kanal inversiyon (adım 4 2) yüzey oluşturmak ve geri. </li><li> retinanın dış olumsuz alanlarda ve dekolmanı yüzey teması (4 adım 3) gelmiyor bu yüzden maksimum değere eşik ayarlayın. </li><li> Voksellerden sayısına filtre tipini ayarlayın ve büyüklüğüne göre dekolmanı sitede negatif boşluk izole. yüzeyi (adım 4 4) bitirin. NOT: sıyrılma yüzeyinin hacmi istatistikleri sekmesinde hacim altında bulunur. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Garoon, R. B., Stout, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+ocular+gene+therapy+and+advances+in+treatment+of+inherited+retinal+diseases+and+exudative+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Update on ocular gene therapy and advances in treatment of inherited retinal diseases and exudative macular degeneration.</a> Curr Opin Ophthalmol. 27 (3), 268-273 (2016).</li>
<li>Pierce, E. A., Bennett, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Status+of+RPE65+Gene+Therapy+Trials%3A+Safety+and+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">The Status of RPE65 Gene Therapy Trials: Safety and Efficacy.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 5 (9), a017285(2015).</li>
<li>Tolmachova, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+expression+of+Rab+escort+protein+1+following+AAV2-mediated+gene+delivery+in+the+retina+of+choroideremia+mice+and+human+cells+ex+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Functional expression of Rab escort protein 1 following AAV2-mediated gene delivery in the retina of choroideremia mice and human cells ex vivo.</a> J Mol Med (Berl). 91 (7), 825-837 (2013).</li>
<li>Nork, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+anatomic+consequences+of+subretinal+dosing+in+the+cynomolgus+macaque%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Functional and anatomic consequences of subretinal dosing in the cynomolgus macaque.</a> Arch Ophthalmol. 130 (1), 65-75 (2012).</li>
<li>Ye, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+Biodistribution+Evaluation+in+Cynomolgus+Macaques+of+rAAV2tYF-PR1.7-hCNGB3%2C+a+Recombinant+AAV+Vector+for+Treatment+of+Achromatopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">Safety and Biodistribution Evaluation in Cynomolgus Macaques of rAAV2tYF-PR1.7-hCNGB3, a Recombinant AAV Vector for Treatment of Achromatopsia.</a> Hum Gene Ther Clin Dev. , (2016).</li>
<li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-Corneal+Subretinal+Injection+in+Mice+and+Its+Effect+on+the+Function+and+Morphology+of+the+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Trans-Corneal Subretinal Injection in Mice and Its Effect on the Function and Morphology of the Retina.</a> PLoS One. 10 (8), e0136523(2015).</li>
<li>Engelhardt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+morphological+analysis+of+the+subretinal+injection+of+retinal+pigment+epithelium+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Vis+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional and morphological analysis of the subretinal injection of retinal pigment epithelium cells.</a> Vis Neurosci. 29 (2), 83-93 (2012).</li>
<li>Lambert, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+AAV2.COMP-Ang1+suppresses+choroidal+neovascularization+and+vascular+endothelial+growth+factor+in+a+murine+model+of+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Subretinal AAV2.COMP-Ang1 suppresses choroidal neovascularization and vascular endothelial growth factor in a murine model of age-related macular degeneration.</a> Exp Eye Res. 145, 248-257 (2016).</li>
<li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garcia Garrido, M., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods Mol Biol. 935, 343-349 (2013).</li>
<li>Nusinowitz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+visual+function+in+the+rd12+mouse+model+of+Leber+Congenital+Amarousis+%28LCA%29+after+gene+replacement+therapy+to+restore+retinal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Cortical visual function in the rd12 mouse model of Leber Congenital Amarousis (LCA) after gene replacement therapy to restore retinal function.</a> Vision Res. 46 (22), 3926-3934 (2006).</li>
<li>Huang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+morphological+analysis+of+the+subretinal+injection+of+human+retinal+progenitor+cells+under+Cyclosporin+A+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Functional and morphological analysis of the subretinal injection of human retinal progenitor cells under Cyclosporin A treatment.</a> Mol Vis. 20, 1271-1280 (2014).</li>
<li>Maguire, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+gene+transfer+for+Leber%27s+congenital+amaurosis%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of gene transfer for Leber's congenital amaurosis.</a> N Engl J Med. 358 (21), 2240-2248 (2008).</li>
<li>Ridder, W. 3rd, Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Causes+of+cataract+development+in+anesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Causes of cataract development in anesthetized mice.</a> Experimental Eye Research. 75 (3), 365-370 (2002).</li>
<li>Ridder, W. H. 3rd, Nusinowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+visual+evoked+potential+in+the+mouse--origins+and+response+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">The visual evoked potential in the mouse--origins and response characteristics.</a> Vision Res. 46 (6-7), 902-913 (2006).</li>
<li>Matynia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsically+photosensitive+retinal+ganglion+cells+are+the+primary+but+not+exclusive+circuit+for+light+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Intrinsically photosensitive retinal ganglion cells are the primary but not exclusive circuit for light aversion.</a> Experimental Eye Research. 105, 60-69 (2012).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
</ol>

Yazarların hiçbirinin herhangi bir ticari açıklaması yoktur.

Subretinal enjeksiyonları viral vektörlerin teslimat için tercih edilen yöntem ve fotoreseptör ve temel araştırma ve klinik tedavisinde hem de RPE işlemek için hücre kökenli tedavisi kaynaklanıyor. hastalarda, subretinal enjeksiyonları genellikle doğrudan görselleştirme ile iğne ile, pars plana bir ön sklerotomili retinanın bir arka çekirdek vitrektomi ve penetrasyon yapılır. Göz Psödofakik zaten olmadıkça katarakt oluşumu erken gerçekleşmesi için en vitrektomi prosedürleri gibi, yaygındır. Farelerde, retina altı enjeks...

Subretinal enjeksiyonları fotoreseptör ve altta yatan RPE 1,2 üzerindeki etkilerini incelemek için farelerin retina hücresel ve viral ajanlar sunan birincil yolu vardır. Farelerde en subretinal enjeksiyon protokolleri transkorneal veya ekvatora bir transkleral enjeksiyon sitesi anterior (Şekil 1) kullanın. Bu yaklaşım nicklemek ve lens bileşke bulanıklığı, retinada ve iris, retina kanaması, önemli retina dekolmanı ve kalıcı subretinal ödem 3-9 camsı, penetrasyon bütünlüğünün bozulması içeren doğal kollateral hasara neden olabilir. Deneysel manipülasyonlar terapötik girişimlerin 3,7,10,11 etkilerini değerlendirmek amacıyla bu etkileri aşmak gerekir. Bu çalışma, bu komplikasyonları önler posterior transkleral enjeksiyon yöntemi ayrıntılı bir açıklamasını ve doğrulama sağlayan travmayı en aza indirir ve alt hedefleme yüksek bir başarı oranına sahiptirretina alanı. Farelerde subretinal alan hedefleme Enjeksiyonlar genellikle gerçekleştirmek çok zordur ve çoğu araştırmacı vektör yanlış bir konuma teslim edilir veya önemli retina hasarı tam retina dekolmanı 6 örneğin, var olduğu başarısız girişimleri yüksek frekanslı karşılaşıyoruz. Çünkü enjeksiyon komplikasyonlar analize dahil gözlerin sayısı genellikle fare çalışmalarında rapor değil, ama bizim kendi deneyim ve diğer araştırmacılar ile tartışmaya başarısız enjeksiyon sayısı% 50 kadar yüksek olabilir ve deneyime bağlı olarak değişebilir ve enjeksiyonları gerçekleştiren araştırmacının yetenekleri. Enjeksiyon başarısı genellikle direkt fundus görüntüleme ve / veya optik koherens tomografi (OKT) 7,9 değerlendirilir. Farelerde subretinal enjeksiyon için yüksek başarı oranları ile kolayca hakim yöntem deneme hızlandırmak ve tre klinik öncesi çalışmalarda maliyetini düşürebilirABD&#39;de körlüğün başlıca nedenleridir retina hastalıkları için atments. Arka, burada açıklanan transkleral subretinal enjeksiyon tekniği klinik ve klinik öncesi protokoller 9,12 bir uyarlamasıdır. enjekte edilen farelerde yapılan girişimsel olmayan tanı değerlendirmeler hafif ve son derece lokalize hasara göstermek ve ek teminat objektif, retina ve RPE hasarı yoksundur. böylece bu çalışmalarla ilgili maliyetlerin azaltılması, - (% 90 ya da daha iyi 80) Ayrıca, nispeten daha az uygulama ile, bir deneyci yüksek başarı oranı ile bu sonuçlar elde edebilirsiniz. Bu prosedür klinik öncesi çalışmalarda fotoreseptör ve / veya RPE, hücresel viral veya farmakolojik tedavi edici girişimler sunmak için ve kolayca deneysel müdahaleleri değerlendirmek için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Hamilton Model 62 RN SYR</td><td>Hamilton</td><td>87942</td><td>Şırınga x 1</td></tr><tr><td>Hamilton İğne 33 G, 1.0", 20 DERECE, nokta 3 (304 paslanmaz çelik)</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td>İğneler x 6</td></tr><tr><td>Vannas Kavisli Makas</td><td>Ted Pella, INC.</td><td>1347</td><td>5 mm Bıçak</td></tr><tr><td>22.5 Derece Mikrocerrahi Bıçağı</td><td>Wilson Oftalmik A.Ş.</td><td>91204</td><td></td></tr><tr><td>Ketaj&nbsp;</td><td>Phoenix</td><td>NDC 57319-609-02</td><td>Ketamin</td></tr><tr><td>Anased</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>NDC 61311-482-10</td><td>Ksilazin</td></tr><tr><td>Floresein %10 AK-Fluor</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-253-10</td><td>100 mg / ml</td></tr><tr><td>%0.9 Tuzlu USP</td><td>Hospira</td><td>NDC 0409-4888-50</td><td>%0.9 NaCl</td></tr><tr><td>Antibiyotik Merhem</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-235-35</td><td>Oftalmik</td></tr><tr><td>Su Sirkülasyon Pompası</td><td>Gaymar</td><td>TP-500 T/Pompa&nbsp;</td><td>P / N 07999-000</td></tr><tr><td>sd-OCT</td><td>Bioptigen</td><td>R-Serisi</td><td>Ticari</td></tr><tr><td>Fundus Kamera</td><td>Phoenix Araştırma Laboratuvarları</td><td>MICRON III</td><td></td></tr><tr><td>Cımbız Tip 3</td><td>Ted Pella, INC.</td><td>5385-3SU</td><td></td></tr><tr><td>% 2.5 Fenilefrin</td><td>Paragon BioTeck</td><td>NDC 42702-102-15</td><td>Oftalmik</td></tr><tr><td>IMARIS8</td><td>Bit Düzlemi</td><td></td><td>Sürüm 8.1.2</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td>V1.8.0_77</td></tr><tr><td>Hypromellose&nbsp; %2.5</td> <td>Goniovisc</td><td>AX0401</td><td>Metilselüloz</td></tr><tr><td>Göz Damlası (Durulama)</td><td>Bausch & Lomb</td><td></td><td>Tuzlu Su</td></tr><tr><td>Çözeltisi Mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000</td><td>Mikroskop</td></tr><tr><td>Işık kaynağı</td><td>Fostec</td><td>P/N 20520</td><td>Işık kaynağı</td></tr></tbody></table>

subretinal space erişim için bir alternatif ve onaylı enjeksiyon yöntemi<i&gt; yoluyla</i&gt; bir transkleral posterior yaklaşım

An Alternative and Validated Injection Method for Accessing the Subretinal Space via a Transcleral Posterior Approach

Subretinal enjeksiyonları başarıyla doğrudan fotoreseptör maruz kalma ve retina pigment epitel (RPE) sahiptir interfotoreseptör / subretinal bölmeye proteinlerin terapötik girişimlerin viral ajanlar, ve hücreleri sunmak için insanlar ve kemirgenler hem de kullanılmıştır. plazminojen subretinal enjeksiyonları yanı sıra son klinik öncesi ve klinik çalışmalarda ileri retina hastalığı olan bireylerin viral vektörlerin ve kök hücreleri sunma güvenliğini ve / veya etkinliğini göstermiştir. retina hastalıkları, özellikle de kalıtsal retinal distrofilerin fare modelleri, bu tedavilerin test etmek için gereklidir. Kemirgenlerde en yaygın enjeksiyonundan retinaya bir anterior küçük transkorneal ya transkleral kesiler kullanmaktır. Bu yaklaşımla, enjeksiyon iğnesi altında yatan RPE ve yerleştirilmesine bozarak nörosensöriyel retina nüfuz kolayca nick lens, lens kesafeti ve non-invaziv IMAGI bozulmasını nedenng. Bir transkleral yoluyla subretinal alan erişme, posterior yaklaşım bu sorunları önler: iğne retina penetrasyon olmadan, optik sinir yaklaşık 0.5 mm sklerasına geçer ve vitrözü kesintiye önler. Tali hasar odak sklerotomili ve geçici, seröz retina dekolmanı etkileri ile bağlantılı olduğu sınırlıdır. yöntemin basitliği, göz yaralanması en aza indirir hızlı retina yatıştırıldı ve iyileşme sağlar ve düşük başarısızlık oranı vardır. retina ve RPE minimal hasar etkinliğinin net değerlendirme ve terapötik ajanların kendilerini doğrudan etkileri için izin verir. Bu yazıda, viral vektörler, farmakolojik ajanlar hedef yüksek etkinlik, en az hasar ve hızlı bir iyileşme ile farelerde retina altı alana hücreleri ya da uyarılmış pluripotent kök (IPS) kök hücreler için kullanılabilecek yeni bir retina altı enjeksiyon tekniği tarif etmektedir.

yaklaşım transkleral subretinal enjeksiyonları 0.3 ul (n = 18), 0.5 ul (n = 8) ve% 0.01 fluoresein 1.0 ul (n = 5) enjekte 16 vahşi tip farelerden 31 sağlıklı gözler üzerinde gerçekleştirilmiştir posterior. Bir göz nedeniyle yapısal ve fonksiyonel analiz engelleyen önceden varolan korneal opasite enjeksiyon çıkarılmıştır. Her enjekte göz bu raporda yer almaktadır. Hiçbir istenmeyen retina dekolmanı, vitreus içine retinada veya sızıntı delikler tespit edildi ne de gözlenen herhangi gözlerd...

Subretinal enjeksiyonlar, proteinler ve viral vektörler gibi büyük terapötik ajanları fotoreseptörlere ve retina pigment epiteline iletmek için en yaygın tekniktir. Farelerde, minimum ikincil hasar ve hızlı iyileşme süreleri ile subretinal boşluğu başarılı bir şekilde hedefleyen alternatif bir yöntem burada açıklanmaktadır.

Subretinal Space erişim için bir alternatif ve Onaylı Enjeksiyon Yöntemi<i&gt; yoluyla</i&gt; Bir transkleral Posterior Yaklaşım

Subretinal injections have been successfully used in both humans and rodents to deliver therapeutic interventions of proteins, viral agents, and cells to ...

Bu çalışmanın genel amacı, farelerde viral vektörleri, farmakolojik ajanları veyale indüklenmiş pluripotent kök hücreleri subretinal boşluğa yönlendirmek için kullanılabilecek yeni bir subretinal enjeksiyon tekniğini tanımlamaktır. Bu yöntem, retinal dejenerasyonlar için yeni terapötik müdahalelerin etkinliğinin değerlendirilmesi gibi görme bilimi ve oftalmoloji alanlarındaki temel sorulara cevap verebilir. Bu tekniğin temel avantajı, materyallerin subretinal boşluğa yüksek etkinlikte, minimum hasarla ve retinal yapı ile fonksiyonun hızlı iyileşmesiyle iletilmesini sağlamasıdır.Prosedürü, laboratuvarımdan teknisyen Sachin P gerçekleştirecektir. Bu prosedüre başlamak için, görüntülemeyi kolaylaştırmak amacıyla anestezi altındaki bir farenin bıyıklarını kesin ve hayvanın vücut sıcaklığını sirkülasyonlu bir su pedi ile 37 °C'de tutun. Ardından, göz bebeklerini %2,5'lik fenilefrin göz damlaları ile genişletin.Ardından, kuruluğu önlemek ve anestezik kaynaklı geçici kataraktları en aza indirmek için metilselüloz göz damlaları uygulayın. Ameliyat öncesinde aletleri sterilize edin. Sonrasında, seyreltilmiş floreseni bir biyogüvenlik kabininde hazırlayın.Şırıngayı uygun miktarda flüoresein ile doldurun. Ardından, hayvanın derin anestezi altında olduğundan emin olmak için ayak parmağına sıkıştırma testi yapın ve fareyi, enjeksiyon yapılacak göz yukarı bakacak ve disseksiyon mikroskobunda net bir şekilde görülecek şekilde konumlandırın. Temporal konjunktivayı ince uçlu bir pensle nazikçe sıkıştırın.Ardından, kavisli Vannas makası kullanarak yaklaşık 90 derecelik çevreleyici bir insizyon yapın. Aynı prosedürü alttaki Tenon kapsülü üzerinde tekrarlayın. Bundan sonra, globu nazale doğru döndürürken çevreleyici bağ dokusunu ince uçlu pensetle rezeke edin.Optik sinirden yaklaşık 0.5 milimetre uzaklıktaki enjeksiyon bölgesine doğru ilerleyin ve retro-orbital sinüsü bozmamaya büyük özen gösterin. Kritik bir adım, gözün kendisine veya ilişkili yapılara, özellikle orbital kan kesesine zarar vermeden gözün döndürülmesini gerektiren enjeksiyon bölgesinin açığa çıkarılmasıdır. Bu prosedürde, 22.5 derecelik bir oftalmik bıçakla göz çukurunu nazikçe çizerek enjeksiyon bölgesindeki skleraya küçük bir insizyon yapın.Bu insizyon, iğne ucunun sklera arasından geçmesine izin verecek kadar büyük olmalıdır. Ardından, eğimli ucu retinaya paralel olacak şekilde konumlandırarak 33 gauge iğneyi sklerotomiye yerleştirin. Pistonu yavaşça ve eşit basınçla iterek istenilen miktarda %0,01 floresein enjekte edin.İğne subretinal boşluktayken, pistonla basıldığında hafif bir direnç hissedileceğine dikkat edin. İğne retinayı delerse direnç oluşmaz, ancak iğne sklera veya RPE'ye nüfuz etmezse yüksek direnç hissedilir. Bir diğer kritik adım ise subretinal boşluğu hedefleyen enjeksiyondur.Bu işlem, nörosensör retinayı delip vitreus boşluğuna ulaşmadan gerçekleştirilmelidir. Geri akışı en aza indirmek için iğneyi geri çekmeden önce birkaç saniye bekleyin. Ardından, gözü steril salinle durulayın ve gözün normal konumuna geri döndüğünden emin olun.Ardından, enjeksiyon yapılan gözün kornea yüzeyine kalın bir tabaka üçlü antibiyotikli oftalmik krem uygulayın. Sonrasında, fareyi iyileşmesi için temiz ve tekli bir kafese yerleştirin. Anestezi sonrası iyileşme sürecinde solunumu ve vücut sıcaklığını izleyin ve sternal rekumbensi sürdürüp sürdüremediğini kontrol edin.Ameliyat sonrası ağrı yönetimi için karprofenin deri altına enjeksiyonu da dahil olmak üzere uygun ek postoperatif izleme ve tedavi işlemleri gerçekleştirin. Burada, enjeksiyon bölgesindeki kubbe şeklindeki blebin 3D rekonstrüksiyonu yer almaktadır. Kubbe şeklindeki bleb, retina dekolmanının kapsamını ve sınırlarını göstermek için yoğun beyazla doldurulmuştur.OCT'den elde edilen retinal kesitler beyaz renkte görülürken, RPE ve fotoreseptör seviyesindeki sıvı dolu alan siyah görünmektedir. Bu şekilde, maksimal retinal ayrılmanın olduğu bölgedeki temsilci OCTB taramaları; enjeksiyon öncesi, enjeksiyondan 10 dakika sonrası ve enjeksiyondan dört hafta sonrası için gösterilmiştir. Bu görüntü, 0,3 µL'lik bir enjeksiyon sonucu oluşan düz bir blebin oluşumunu ve çözünmesini göstermektedir.Ve bu görüntü 0,5 µL'lik bir enjeksiyondan kaynaklanan kubbe şeklinde bir bleb oluşumunu ve çözünmesini gösterirken, bu görüntü ise 1 µL'lik bir enjeksiyondan kaynaklanan kubbe şeklinde bir bleb oluşumunu ve çözünmesini göstermektedir. Son olarak, burada enjeksiyon bölgesinde şiddetli koroid skarlaşması ve retinal incelmenin bir örneği yer almaktadır. Bleb çözünmesinden sonra retinalar normal fonksiyonlarını korur.Dokuz farklı aydınlatma yoğunluğunda, 0,3 µL, 0,5 µL ve 1 µL'lik enjeksiyonlar için enjeksiyon öncesi ve enjeksiyondan dört hafta sonraki skotopik çubuk aracılı yanıtların dalga formları gösterilmiştir. Uzmanlaşıldığında, bu teknik göz başına 10 ila 15 dakikada tamamlanabilir. Bu prosedür uygulanırken, işleme başlamadan önce gözlerin sağlık durumunun değerlendirilmesi önemlidir.Kornea veya lens opaklıkları olan gözleri ya da bu prosedürün uygulanmasının çok zor olacağı derin yerleşimli gözleri hariç tutun. Bu prosedürü takiben, enjeksiyonun kalitesini değerlendirmek amacıyla OCT ve fundus görüntüleme gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

an-alternative-validated-injection-method-for-accessing-subretinal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu cerrahi teknik fare gözün subretinal boşluk içine gen terapisi vektörleri ve kök hücrelerinin enjeksiyonu göstermektedir.

Fare Göz içine Gen Terapisi Vektörler ve Kök Hücre Subretinal Enjeksiyon

Kaynak: Park, S. W., et al. Farelerde Gen Tedavisi için Viral Vektörlerin Limbal Yaklaşım-Subretinal Enjeksiyonu Retinal Pigment Epiteli. J. Vis. Uzm. (2015)Video, bir fare modelinde viral vektörlerin retina pigment epiteline (RPE) subretinal enjeksiyonu için yöntemi açıklamaktadır. Anestezi ve göz hazırlığından hassas lentiviral vektör dağıtımına kadar prosedürü detaylandırarak RPE'de gen entegrasyonunu ve ekspresyonunu sağlar.

Bir Fare Modelinde Viral Vektörlerin Retina Pigment Epiteline Subretinal Enjeksiyonu

Kaynak: Parikh, S., et al. Transkleral posterior yaklaşımla subretinal boşluğa erişim için alternatif ve doğrulanmış bir enjeksiyon yöntemi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, bir farenin subretinal boşluğuna bir floresan boya verme prosedürünü göstermektedir. İşlem, farenin uyuşturulmasını, gözün hazırlanmasını, subretinal boşluğa erişmek için hassas kesiler yapılmasını ve kontrollü bir retina dekolmanı oluşturmak için boyanın enjekte edilmesini içerir. Bu teknik, boyanın hedefe yönelik olarak...

Bir Floresan Boyanın Bir Farenin Subretinal Boşluğuna Verilmesi

Burada, sıçanlarda ve farelerde bir RPE hücresi bolusunu subretinal olarak enjekte etmek için multimedya formatında topluluk tarafından kabul edilen bir protokol sunuyoruz. Bu yaklaşım, retinal dejenerasyonun hayvan modellerinde implantasyon üzerine aşılanmış RPE hücrelerinin kurtarma potansiyellerini, güvenlik profillerini ve hayatta kalma kapasitelerini belirlemek için kullanılabilir.

Süspansiyon Retina pigment epiteli Hücreleri sunun Kemirgenler Subretinal Enjeksiyonları Sahne

Subretinal enjeksiyon, fare gözündeki retina pigment epiteline etkili gen iletimi için kullanılan cerrahi bir tekniktir.  Burada, deneysel farelerde viral vektörlerin retina pigment epiteline subretinal enjeksiyonu için kolay ve tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.

Fareler Retina Pigment Epitel Gen Tedavisi için Viral Vektörler Limbal Yaklaşım-Subretinal Enjeksiyon

Subretinal enjeksiyon kök hücre replasman tedavisi için yaşa bağlı makula dejenerasyonu preklinik çalışmalarda yaygın olarak uygulanmıştır. Görüntülenmeyecektir bu makalede, biz daha az riskli, tekrarlanabilir ve tam olarak değiştirilmiş subretinal enjeksiyon tekniğini hücrelerin sıçan gözlerinin içine sunmak için trans-scleral yaklaşım yoluyla tanımlamak.

Sıçan gözlerinin içine insan retina Pigment epitel hücrelerinin Trans-scleral Subretinal nakli için rafine bir protokol geliştirilmesi

Kriyoprezervasyon sonrası hESC kaynaklı fotoreseptör progenitör hücrelerin hazırlanması ve bu hücrelerin rd10 farelerde retina altı verilmesi için ayrıntılı bir protokol tanımladık.

Rd10 Farelerde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Fotoreseptör Progenitörlerinin Sub-Retinal Verilmesi

Bu protokol, merkezi bir kornea insizyonu ve ön kamaraya uzun bir tünel kullanılarak sıçanlarda intrakameral enjeksiyon için bir tekniği tanımlar. Bu enjeksiyon yöntemi, yanlışlıkla doku hasarına neden olma riskini en aza indirir ve böylece hassasiyeti ve tekrarlanabilirliği artırır.

Yan Etki Riski Düşük Olan Sıçanlarda İntrakameral Enjeksiyon

Bu makale, hem enjeksiyon bölgesini hem de retina dekolmanı alanını kontrol etmek için intraoperatif görselleştirmeyi kullanan sıçanlarda subretinal enjeksiyon yöntemlerini açıklamaktadır.

Sıçanlarda Subretinal Enjeksiyon ve Retina Dekolmanı İntraoperatif Görselleştirmesi

Bu çalışma, terapötiklerin yetişkin sıçanın retina ve optik sinirlerine verilmesi için bir metodoloji sunmaktadır. Ek olarak, yetişkin bir sıçanda optik sinir ve retinanın yukarıdan aşağıya blok koleksiyonu için benzersiz bir doku elde etme yöntemi tanıtılmıştır.

Erişkin Sıçanlarda Oküler Terapötik Uygulama ve İleri Doku Alımı

Subretinal enjeksiyonlar, fotoreseptör ve RPE hastalıkları için terapötiklerin klinik öncesi gelişimi için vazgeçilmez bir tekniktir. Farelerde intraoperatif başarı oranlarını artıran ve retina hasarını en aza indiren optimize edilmiş bir transskleral subretinal enjeksiyon tekniğini tanımladık.

Farede Optimize Edilmiş Minimal İnvaziv Transskleral Subretinal Enjeksiyon Tekniği

Öğrenin farelerde subretinal enjeksiyon tekniği ile retinal dejenerasyon tedavileri için viral vektör ve farmakolojik ajanların etkili teslimatını. Minimal hasar ve hızlı iyileşme sağlayan bu yöntem oftalmolojide yeni stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

Subretinal Space erişim için bir alternatif ve Onaylı Enjeksiyon Yöntemi

Daha fazla video keşfet