Sıçanlarda Karın Aort Konstrüksiyon sayesinde Kardiyak Yaptırma Bir Model

Cerrahi prosedürün genel amacı, miyokard hipertrofisi, yeniden şekillenme ve disfonksiyonu incelemek için basit bir platform sağlamaktır. Bu yöntem, kardiyovasküler hipertrofi ve yeniden şekillenmeyi içeren sinyalizasyon gibi kardiyovasküler alandaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Hipertansif kalp hastalığında yeni terapötik hedeflerin keşfinin yanı sıra.

Bu tekniğin en büyük avantajı, çok basit cerrahi teknikler gerektiren minimal invaziv bir yöntem olması ve yine de sonuçların yüksek oranda tekrarlanabilir olmasıdır. Bu tekniklerin etkileri, hipertansif kalp hastalığı tedavimize kadar uzanır. Abdominal aortun daralması aşırı basınca neden olduğundan ve sonunda kardiyo hipertrofisine, yeniden şekillenmeye ve kalp yetmezliğine yol açar.

Başlamak için, ucu köreltmek için bir honlama taşı kullanarak 22 gauge bir şırınga iğnesi hazırlayın. Daha sonra pense kullanarak iğneyi dik açıyla katlayın. Kurtarma kafesi de dahil olmak üzere gerekli cerrahi malzemeleri hazırlayın ve cerrahi aletleri otoklavlayın.

Sıçanları 200 gram civarında tutun ve onları yiyecek ve suya serbest erişim ile kontrollü bir sıcaklıkta 12 saatlik aydınlık-karanlık döngülerinin altında tutun. Vücut ısısını korumak için fareyi bir ısıtma yastığı ile bir ameliyat platformuna sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Yaranın kürkle temas yoluyla kirlenmesini önlemek için cerrahi alanı tamamen tıraş edin.

Ardından, betadin veya başka bir kaplama reaktifi ile temiz bir şekilde traş edilmiş karnı ovalayın. Daha sonra, bir neşter kullanarak, karnın orta hattı boyunca iki santimetrelik bir kesi yapın. Daha sonra normal tuzlu su kullanarak karın içi organları nemlendirin ve ameliyat sırasında organları nemli tutun.

Pamuk topları kullanarak, inferior vena kava ve posterior peritoneal bölgeyi ortaya çıkarmak için sindirim organlarını dikkatlice yana kaydırın. Daha sonra, inferior vena kavanın yanında ve genellikle solunda bulunan abdominal aortu tanımlayın. Şimdi, forseps ile, altındaki damarları ortaya çıkarmak için peritonu delin.

Renal arterlere bitişik abdominal aortu nazikçe izole edin ve sağ ve sol renal arterlerin kökenleri arasındaki damarın altından sekiz santimetre uzunluğunda 4/0 ipek bir dikiş geçirin. Sütürle gevşek bir çift düğüm atın ve üç milimetre çapında bir halka bırakın. Ardından körelmiş ve bükülmüş 22 gauge iğneyi ilmeğin içine yerleştirin.

Aort ve iğnenin etrafındaki düğümü sıkın ve ardından 0,7 milimetre çapında bir daralma elde etmek için iğneyi hemen çıkarın. 6/0 dikişlerle karın boşluğunu kapatın. Daha sonra kas ve cilt kesilerini kapatmak için basit kesintili dikişler kullanın.

Enfeksiyonu önlemek için cerrahi bölgeyi ovalamak için iyot tentürü kullanın. Ameliyat sonrası ağrıyı önlemek için, hayvanı asetaminofen ile tedavi edin ve serbest hareket ve gıda alımı ile belirtildiği gibi yeterli bilinci yeniden kazanana ve sternal yaslanmayı sürdürene kadar hayvanı yakından gözlemleyin. Ameliyattan 10 hafta sonra fareyi tartın.

Hayvanı uyuşturduktan ve anestezi derinliğini onayladıktan sonra, fareyi metal bir tepsiye yerleştirin. Şimdi, ksifoid sürecinin orta hattı etrafındaki torasik bölgede beş santimetrelik bir kesi yapın. Keskin forseps kullanarak diyaframı delin.

Daha sonra, kalbi ortaya çıkarmak için göğüs kafesini her iki taraftaki orta klaviküler çizgiler boyunca makasla kesin ve çıkarın. Kalbi kalp ve damar sınırları boyunca dikkatlice çıkarın. Ardından dokuyu tutmadan kalbi nazikçe çıkarın.

Aort gövdesini perfüzyon iğnesine bağlayarak kalbi modifiye edilmiş bir Langendorff perfüzyon cihazına monte edin. Daha sonra kalbi perfüze etmek ve kanı yıkamak için Krebs tamponu kullanın. Kalbi tartın ve kalp ağırlığının vücut ağırlığına oranını hesaplayın.

Daha sonra maske takarken organı %4 paraformaldehit içine yerleştirin ve gece boyunca buzun üzerine sabitleyin. Kalp dokusunu sabitledikten sonra, bir doku kesit alma cihazına yerleştirin, iki milimetre kalınlığında dilimler halinde kesin ve bölümleri bir gömme kasetine yerleştirin. Parafin gömme ve metin protokolüne göre ek bölümlere ayırmanın ardından, slaytları 30 dakika boyunca ksilen içeren bir tanka yerleştirerek deparafinize edin.

Daha sonra dokuyu sırayla seyreltilmiş bir alkol serisinde ve ardından damıtılmış suda yeniden sulandırın. Daha sonra, doku bölümlerini tamamen kaplamak için yeterli picrosirius kırmızı solüsyonu kullanın ve bir saat inkübe edin. Ardından slaytları iki kez durulamak için %0,5'lik bir asetik asit çözeltisi kullanın.

Ve numuneleri mutlak alkolde iki kez durulayın. Numuneleri havayla kurutun ve bir kapak kızağı ile sentetik reçineye monte edin. Ardından, slaytları görüntülemek için 200X büyütmede mikroskop altında görünür ışık kullanın.

Son olarak, fibrozun derecesini gösteren toplam alan üzerindeki picrosirius kırmızı pozitif bölgesinin yüzdesini hesaplayın. Burada gösterildiği gibi, abdominal aort daralması ameliyatından sonra kalp hacmi artmıştır. Kardiyak hipertrofinin bir göstergesi olan daha yüksek bir kalp ağırlığının vücut ağırlığına oranı ile gösterildiği gibi.

Picrosirius kırmızı boyama kullanılarak, kollajen içeriği artmış fibrotik miyokard normal alanlardan ayırt edilebilir. Bu boyanmış örneklerde gösterildiği gibi, abdominal aort daralması ameliyatından sonra kardiyak fibroz kontrollere göre artmıştır. Bir kez ustalaştıktan sonra, uygun şekilde yapılırsa ameliyat 30 dakika içinde yapılabilir.

Bu prosedürü takiben, kardiyak fonksiyonla ilgili ek soruları yanıtlamak için eko kardiyografi gibi diğer yöntemler de uygulanabilir. Geliştirildikten sonra bu teknik, hipertansif kalp hastalığı alanındaki araştırmacıların kardiyohipertrofi, yeniden şekillenme ve yetmezliği içeren mekanizmaları keşfetmelerinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, sıçanlarda kardiyohipertrofi ve miyokardiyal yeniden şekillenmeyi indüklemek için abdominal aort daralmasının nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.