P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Neonatal inme, çalışmayı mümkün kılmak için tutarlı fokal yaralanma paternlerine ve yüksek tekrarlanabilirliğe sahip translasyonel bir model gerektiren erken beyin hasarının önemli bir nedenidir. Bu çalışmada, tam terim eşdeğeri kemirgenlerde hemorajik olmayan, tek taraflı fokal iskemi-reperfüzyon hasarı oluşturmak için ayrıntılı cerrahi prosedür anlatılmaktadır.

Yenidoğan sıçanlarda geçici orta serebral arter tıkanıklığının genel amacı, tam süreli yenidoğanlarda translasyonel bir inme modeli sağlamaktır. Bu yöntem, gelişmekte olan beyindeki yaralanma ve onarım mekanizmalarını ve bunları farklı terapötik stratejilerle nasıl değiştirebileceğimizi anlayarak neonatal iskemik beyin hasarı alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, yenidoğanlarda fokal arteriyel iskemik inmenin fizyolojik olarak doğru bir modelini sağlaması ve ayrıca insan yenidoğanlarda yaralanma ilerlemesinin önemli bir parçası olan bir reperfüzyon bileşeni içermesidir.

Bu modelin görsel olarak gösterilmesi çok önemlidir, çünkü bu ameliyatın adımlarını öğrenmek çok zor olabilir. Arteriyel anatominin iki boyutlu temsilleri, sıçandaki 3 boyutlu dallanmanın karmaşık doğasını her zaman yeterince göstermez. 19 ila 21 gram arasında olduğundan emin olmak için yavruyu tartarak başlayın.

Yavruyu onaylanmış protokollere göre solunan izofluran kullanarak uyuşturduktan sonra, ayak sıkışmasına yanıt olmadığından emin olun. Cerrahi aşamada bir ısıtma yastığı kullanarak vücut yüzey sıcaklığını koruyun. Hayvanı omuz bölgeleri boyunca bantla sırtüstü pozisyonda sabitleyin.

Ön servikal bölgeyi %70 etanol ile temizlemek için steril pamuklu çubuklar kullanın, ardından bir çubuk povidon iyot çözeltisi uygulayın. Daha sonra, planlanan insizyon bölgesine lokal olarak% 0.25 bupivakain sızın. Ardından, bir stereoskop ile çalışırken, ortak karotis arteri ortaya çıkarmak için orta hat beş ila yedi milimetre ön servikal insizyon yapın.

Boşluğu açık ve arteri açıkta tutmak için iki ila dört ekartör yerleştirin. Ardından, iç karotis arteri, oksipital arteri ve dış karotid arteri bulun. Net bir görüş elde etmek için arterlerdeki bağ dokusunu ve yağı çıkarın.

6-0 ipek örgülü dikiş ipini 1,5 santimetre kestikten sonra, tek telleri çekerek dikişi açın. Tek tellerin düzgün olduğundan ve yıpranmadığından emin olun. Dikiş ipliğini 45 derecelik forseps içinde tutarken, forsepsleri ICA altında bir yay şeklinde süpürün, böylece uçlar ICA ve OA arasında ortaya çıkar. Ardından, dikiş ipliğinin ucunu tutun ve ucuna erişimi kolay olacak şekilde çekin.

İpliği forsepsten serbest bırakın ve önceki hareketi tersine çevirerek forsepsleri ICA'nın altından geri çekin. ICA'nın etrafına, CCA'dan ayrıldığı yere en yakın tabana geçici bir bağ bağlayın. ICA'yı yanal olarak dikkatlice geri çekin, ardından geri çekilen ipliği insizyonun karşısındaki taraftaki aksilla bölgesinin yakınındaki fazla deriye sabitlemek için bir klips kullanın.

Bir sonraki adıma geçmeden önce geri çekilen ipliğin kan akışını durduracak kadar gergin olduğundan emin olun. Arter düz ve soluk olmalıdır. Başka bir örgüsüz sütür telini kavramak için 45 derecelik bir forseps kullanın ve daha önce olduğu gibi ICA'nın altına ve etrafına sarın.

Bu ipliği geri çekme teline yanal olarak yerleştirin. Daha sonra, bağlı ve bağlı olmayan bağlar arasında ortada 0.2 milimetrelik bir arteriyotomi kesin ve bağlı bağa daha yakın bir hata yapın. Şimdi, bir metrik cetvel kullanarak, tıkayıcı sütür olarak 10 milimetre silikon kaplı naylon sütür ölçün.

Reperfüzyon sırasında çıkarılması için sütürü iki ila üç milimetrelik ekstra bir payla kesin. Tıkayıcı sütürü 45 derecelik forseps ile tutun ve ilerlemenin durma noktasını işaretleyerek bir bükülme oluşturmak için düz forseps kullanın. Tıkayıcı sütürü ECA'ya paralel ve başa doğru hedefleyerek arteriyotomiye besleyin.

Büküme ulaşılana kadar dikişi düzgün bir şekilde ilerletin. Ardından, oklüzyon süttürünü sabitlemek için geçici bir bağ bağlamak için retraksiyon ipliğine lateral olarak yerleştirilmiş ipliği kullanın. Ekartör klipsini çıkarın, ardından her iki geçici bağın tellerini kesin ve düğümü çıkarmak için kullanılacak ipliği, sıkmak için kullanılan telden daha uzun bırakın.

Ekartörleri çıkarın ve üç veya dört kesintili sütür oluşturmak için 6-0 örgülü ipek kullanarak boşluğu kapatın. Yavruyu anesteziden çıkarın ve oda havasındaki bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin. Yavruyu, sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar izleyin ve baraja geri göndermeden önce tamamen iyileştiğinden emin olun.

Oklüzyon sırasında, yaralanmanın uygun indüksiyonunu doğrulamak için difüzyon ağırlıklı manyetik rezonans görüntüleme kullanılabilir. Bu görüntüler, geçici MCAO sırasında DW-MRI ile tespit edilen okla gösterilen devam eden iskemik hasarı göstermektedir. MCA'nın tıkanmasından yaklaşık iki saat 50 dakika sonra cerrahi materyaller hazırlanır ve daha önce olduğu gibi uyuşturularak reperfüzyon işlemine başlanır.

Kesilen dikişleri çıkarın ve iki ligatür ve tıkayıcı sütürün kuyruk ucu ile işaretlenmiş olan bağlantı noktasını bulun. Daha uzun ipliği çekerek geçici bağın en yan düğümünü dikkatlice çözün ve dikiş telini boşluktan çıkarın. MCA oklüzyonunu tam olarak takip eden üç saat sonra, tıkayıcı sütürü yavaşça arterden geri çekin.

Direnç olmamalı. Arteriyotomiye baskı uygulamak için forseps kullanın ve ardından kan akışını eski haline getirmek için medial düğümü dikkatlice çözün. Dikiş ipliğini vücuttan çıkardıktan sonra, kanamayı durdurmak için arteriyotomiye hemostatik bir ajan uygulayın.

Arterin orijinal şeklinin ve kırmızı renginin geri dönmesi, ICA kan akışının yeniden sağlandığını doğrular. Ekartörleri çıkarın ve üç veya dört kesintili sütür oluşturmak için 6-0 örgülü ipek kullanarak boşluğu kapatın. Yavruyu anesteziden çıkarın ve ev kafesine geri göndermeden önce daha önce olduğu gibi izleme ile iyileşmesine izin verin.

Yavruları beş gün boyunca her gün kontrol edin. Ağırlıklarını kaydedin ve uygun iyileşme için kesi bölgelerini yakından inceleyin. P-38 hayvanlarından toplanan bu posterior-anteor 50 mikron kresil menekşe lekeli koronal beyin bölümleri, P-10'da üç saatlik bir TMCAO'nun ardından oldukça ciddi yaralanma göstermektedir.

Ok, ipsilateral kist oluşumunu ve azalmış kortikal ve striatal hacmi gösterir. Sol taraftaki yuvarlak delik, kontralateral bir hemisfer tanımlayıcısını temsil eder. Bu prosedürü denerken, bu prosedür kavramsal olarak basit olsa da, başarı ve ustalığın saatlerce optimizasyon ve pratik gerektirebileceğini unutmamak önemlidir.

Bir kez ustalaştıktan sonra, oklüzyon 10 dakikadan daha kısa sürede tamamlanabilirken, reperfüzyon beş dakikadan daha kısa sürede tamamlanabilir.