Name: ve Cefoperazone-tedavi edilmiş fare modeli klinik olarak ilgili Clostridium difficile Gerilme R20291 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Keşfedin Clostridium difficile enfeksiyonunun cefoperazone fare modelini R20291 suşu ile. Bu protokol klinik hastalık izleme, bakteri sayımı, toksin sitotoksisite ve histopatolojik değişiklikleri içerir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, her ikisi de bu makalede kullanılan C. difficile R20291 sporları için Wellcome Trust Sanger Enstitüsü'nden Trevor Lawley'e ve Vero hücreleri için Kuzey Carolina Eyalet Üniversitesi Veterinerlik Fakültesi'nden James S. Guy'a teşekkür eder. Hayvan histopatolojisi, Chapel Hill'deki Kuzey Carolina Üniversitesi'ndeki LCCC Hayvan Histopatolojisi Çekirdek Tesisi'nde, Traci Raley ve Amanda Brown'ın özel yardımı ile gerçekleştirildi. LCCC Hayvan Histopatolojisi Çekirdeği, kısmen UNC Lineberger Kapsamlı Kanser Merkezi'ne bir NCI Merkez Çekirdek Destek Hibesi (2P30CA016086-40) ile desteklenmektedir. Ayrıca Vincent Young, Anna Seekatz, Jhansi Leslie ve Cassie Schumacher'e Vero hücre sitotoksisite test protokolü hakkındaki yararlı tartışmalar için teşekkür ederiz. JAW, NIH tarafından T32OD011130 Ruth L. Kirschstein Ulusal Araştırma Hizmeti Ödülü Araştırma Eğitimi hibesi tarafından finanse edilmektedir. CMT, NIH'nin NIGMS tarafından K01GM109236 metabolomikte kariyer geliştirme ödülü ile finanse edilmektedir.

<ol><li>Antibiotic Resistance Threats in the United States. , U.S.D.o.H.a.H. Services. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/ar-threats-2013-508.pdf">http://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/ar-threats-2013-508.pdf</a> (2013).</li>
<li>Lessa, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+Clostridium+difficile+Infection+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Burden of Clostridium difficile Infection in the United States.</a> New England Journal of Medicine. 372, 825-834 (2015).</li>
<li>Gerding, D. N., Lessa, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+Clostridium+difficile+infection+inside+and+outside+health+care+institutions%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Dis+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of Clostridium difficile infection inside and outside health care institutions.</a> Infect Dis Clin North Am. 29, 37-50 (2015).</li>
<li>Dubberke, E. R., Olsen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+Clostridium+difficile+on+the+healthcare+system%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Burden of Clostridium difficile on the healthcare system.</a> Clin Infect Dis. 55, Suppl 2 88-92 (2012).</li>
<li>Kociolek, L. K., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breakthroughs+in+the+treatment+and+prevention+of+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Breakthroughs in the treatment and prevention of Clostridium difficile infection.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2016).</li>
<li>Kelly, C. P., LaMont, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile--more+difficult+than+ever%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile--more difficult than ever.</a> N Engl J Med. 359, 1932-1940 (2008).</li>
<li>Louie, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fidaxomicin+versus+vancomycin+for+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Fidaxomicin versus vancomycin for Clostridium difficile infection.</a> N Engl J Med. 364, 422-431 (2011).</li>
<li>Bartlett, J. G., Onderdonk, A. B., Cisneros, R. L., Kasper, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clindamycin-associated+colitis+due+to+a+toxin-producing+species+of+Clostridium+in+hamsters%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+infectious+diseases%22%5BJournal%5D)">Clindamycin-associated colitis due to a toxin-producing species of Clostridium in hamsters.</a> The Journal of infectious diseases. 136, 701-705 (1977).</li>
<li>Kelly, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+reproducibility+of+the+NAP1%2FB1%2F027+epidemic+strain+R20291+in+the+hamster+model+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Improving the reproducibility of the NAP1/B1/027 epidemic strain R20291 in the hamster model of infection.</a> Anaerobe. , (2016).</li>
<li>Kuehne, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+toxin+A%2C+toxin+B%2C+and+CDT+in+virulence+of+an+epidemic+Clostridium+difficile+strain%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+infectious+diseases%22%5BJournal%5D)">Importance of toxin A, toxin B, and CDT in virulence of an epidemic Clostridium difficile strain.</a> The Journal of infectious diseases. 209, 83-86 (2014).</li>
<li>Bartlett, J. G., Onderdonk, A. B., Cisneros, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clindamycin-associated+colitis+in+hamsters%3A+protection+with+vancomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Clindamycin-associated colitis in hamsters: protection with vancomycin.</a> Gastroenterology. 73, 772-776 (1977).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+Clostridium+difficile-associated+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A mouse model of Clostridium difficile-associated disease.</a> Gastroenterology. 135, 1984-1992 (2008).</li>
<li>Lawley, T. D., Young, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+to+study+Clostridium+difficile+infection+and+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Murine models to study Clostridium difficile infection and transmission.</a> Anaerobe. 24, 94-97 (2013).</li>
<li>Best, E. L., Freeman, J., Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+for+the+study+of+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Models for the study of Clostridium difficile infection.</a> Gut Microbes. 3, 145-167 (2012).</li>
<li>Reeves, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+microbiome+dynamics+and+pathogen+dynamics+in+a+murine+model+of+Clostridium+difficile+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">The interplay between microbiome dynamics and pathogen dynamics in a murine model of Clostridium difficile Infection.</a> Gut Microbes. 2, 145-158 (2014).</li>
<li>Owens, R. C., Donskey, C. J., Gaynes, R. P., Loo, V. G., Muto, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial-associated+risk+factors+for+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial-associated risk factors for Clostridium difficile infection.</a> Clin Infect Dis. 46, Suppl 1 19-31 (2008).</li>
<li>Theriot, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cefoperazone-treated+mice+as+an+experimental+platform+to+assess+differential+virulence+of+Clostridium+difficile+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Cefoperazone-treated mice as an experimental platform to assess differential virulence of Clostridium difficile strains.</a> Gut Microbes. 2, 326-334 (2011).</li>
<li>Martin, J. S., Monaghan, T. M., Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile+infection%3A+epidemiology%2C+diagnosis+and+understanding+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile infection: epidemiology, diagnosis and understanding transmission.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2016).</li>
<li>Connor, J. R., Johnson, S., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile+infection+caused+by+the+epidemic+BI%2FNAP1%2F027+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile infection caused by the epidemic BI/NAP1/027 strain.</a> Gastroenterology. 136, 1913-1924 (2009).</li>
<li>He, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+and+global+spread+of+epidemic+healthcare-associated+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Emergence and global spread of epidemic healthcare-associated Clostridium difficile.</a> Nat Genet. 45, 109-113 (2013).</li>
<li>Perez, J., Springthorpe, V. S., Sattar, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clospore%3A+a+liquid+medium+for+producing+high+titers+of+semi-purified+spores+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+AOAC+International%22%5BJournal%5D)">Clospore: a liquid medium for producing high titers of semi-purified spores of Clostridium difficile.</a> Journal of AOAC International. 94, 618-626 (2011).</li>
<li>Sorg, J. A., Dineen, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+maintenance+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Laboratory maintenance of Clostridium difficile.</a> Curr Protoc Microbiol. , Chapter 9, Unit9A.1 (2009).</li>
<li>Edwards, A. N., Suarez, J. M., McBride, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+and+maintaining+Clostridium+difficile+in+an+anaerobic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Culturing and maintaining Clostridium difficile in an anaerobic environment.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50787(2013).</li>
<li>George, W. L., Sutter, V. L., Citron, D., Finegold, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+differential+medium+for+isolation+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Selective and differential medium for isolation of Clostridium difficile.</a> J Clin Microbiol. 9, 214-219 (1979).</li>
<li>Knoblaugh, S., Randolph-Habecker, J., Rath, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKnoblaugh%2C+S+%22Comparative+Anatomy+and+Histology%22">Comparative Anatomy and Histology</a>. Dintzis, S. M. , Academic Press. 15-40 (2012).</li>
<li>Ammerman, N. C., Beier-Sexton, M., Azad, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+maintenance+of+Vero+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Growth and maintenance of Vero cell lines.</a> Curr Protoc Microbiol. , Appendix 4, Appendix 4E (2008).</li>
<li>Clostridium difficile Toxin/Antitoxin Kit Cat No.T5000. , TECHLAB. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.techlab.com/wp-content/uploads/2013/06/t5000isert_rev_0307.pdf">http://www.techlab.com/wp-content/uploads/2013/06/t5000isert_rev_0307.pdf</a> (2007).</li>
<li>Theriot, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic-induced+shifts+in+the+mouse+gut+microbiome+and+metabolome+increase+susceptibility+to+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Antibiotic-induced shifts in the mouse gut microbiome and metabolome increase susceptibility to Clostridium difficile infection.</a> Nat Commun. 5, 3114(2014).</li>
<li>Koenigsknecht, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+and+establishment+of+Clostridium+difficile+infection+in+the+murine+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Dynamics and establishment of Clostridium difficile infection in the murine gastrointestinal tract.</a> Infect Immun. 83, 934-941 (2015).</li>
<li>Theriot, C., Bowman, A., Young, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic-Induced+Alterations+of+the+Gut+Microbiota+Alter+Secondary+Bile+Acid+Production+and+Allow+for+Clostridium+difficile+Spore+Germination+and+Outgrowth+in+the+Large+Intestine%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Antibiotic-Induced Alterations of the Gut Microbiota Alter Secondary Bile Acid Production and Allow for Clostridium difficile Spore Germination and Outgrowth in the Large Intestine.</a> mSphere. 1, 00045(2016).</li>
<li>Xiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+catalog+of+the+mouse+gut+metagenome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">A catalog of the mouse gut metagenome.</a> Nature biotechnology. 33, 1103-1108 (2015).</li>
<li>Leslie, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+and+toxin+production+by+Clostridium+difficile+within+human+intestinal+organoids+result+in+disruption+of+epithelial+paracellular+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Persistence and toxin production by Clostridium difficile within human intestinal organoids result in disruption of epithelial paracellular barrier function.</a> Infect Immun. 83, 138-145 (2015).</li>
<li>Stabler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+genome+and+phenotypic+analysis+of+Clostridium+difficile+027+strains+provides+insight+into+the+evolution+of+a+hypervirulent+bacterium%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparative genome and phenotypic analysis of Clostridium difficile 027 strains provides insight into the evolution of a hypervirulent bacterium.</a> Genome Biol. 10, 102(2009).</li>
<li>Valiente, E., Dawson, L. F., Cairns, M. D., Stabler, R. A., Wren, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+new+PCR+ribotypes+from+the+hypervirulent+Clostridium+difficile+027+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Emergence of new PCR ribotypes from the hypervirulent Clostridium difficile 027 lineage.</a> J Med Microbiol. 61, 49-56 (2012).</li>
</ol>

Yazarların şu anda açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Bu protokol, C. difficile R20291 sporları ile mücadele edilen antibiyotikle tedavi edilen farelerin kilo kaybı, bakteri kolonizasyonu, toksin sitotoksisitesi ve gastrointestinal sistemdeki histopatolojik değişiklikler dahil olmak üzere klinik seyrini karakterize eder. Protokolde ayrıntılara dikkat edilmesinin gerekli olduğu birkaç kritik adım vardır. C. difficile spor inokulumunun doğru hesaplanması kritik öneme sahiptir. Bu hesaplama, bu protokole başlamadan önce birden fazla spor sayımı üzerinde tutar...

Clostridium difficile hayatı tehdit eden ishal 1 neden olan bir anaerobik, gram pozitif, spor oluşturan basildir. C. difficile enfeksiyonu (CDI) yıl 1-4 başına sağlık maliyetlerinde üzerinde 4800000000 $ artmış, insan morbidite ve mortalite ve sonuçları ile ilişkilidir. 2013 yılında, Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezleri kamu sağlığı 1 acil tehlike teşkil ettiğini gösteren, acil antibiyotik direnç riski C. difficile kategorize. Şu anda, antibiyotik vankomisin ile tedavi ve metronidazol CDI 5 için standart bakım olarak kabul edilir. Hastaların 2,5-7% 30 - Ne yazık ki, antibiyotik başarılı tedavi sonrası CDI tekrar 20 meydana gelen, yüksek. Bu nedenle, bu enterik patojene karşı yeni terapötiklerin keşfi gereklidir. C. difficile, ac insan hastalığı yaklaşan bir hayvan modelinde karşı ilaç gruplarına değerlendirmeklinically-İlgili suşu gereklidir. Başlangıçta, Koch Postülatları bir klindamisin ile tedavi edilen Suriye hamster modeli 8 kullanılarak 1977 yılında C. difficile için kurulmuştur. Bu model hala patogenezi 9,10 C. difficile toksin etkilerini araştırmak için bugün kullanılmaktadır. Ancak, CDI Hamster modelinde yüksek mortalite oranları ile sonuçlanır ve CDI 10,11 insanlarda görülebilir kronik sinsi hastalık belirtilerinin yaklaştığı değildir. Araştırmada sıçangil platformlar erişilebilirlik ve reaktif durumuna göre, CDI bir fare modeli uygundur. 2008 yılında, CDI sağlam bir fare modeli klindamisin 12 bir intraperitoneal enjeksiyon, ardından 3 gün bir antibiyotik içme suyu kokteyl (kanamisin, gentamisin, kolistin, metronidazol ve vankomisin) fareler muamele edilmesiyle kurulmuştur. CDI ve şiddetli kolit duyarlı Bu hale fareler. bağlıuygulanan aşı doz ing, klinik belirti ve letalitesinin bir dizi bu model kullanılarak görülebilir. Bu zamandan beri, çeşitli antibiyotik rejimleri C. difficile gastrointestinal sistem kolonize olabilir noktaya kolonizasyon direnci azalan, fare bağırsak Mikrobiyota değiştiren incelenmiştir (En ark gözden geçirdik. Ve Lawley &amp; Young) 13,14. Daha yakın zamanlarda, 5 ya da 10 gün boyunca içme suyu verilen geniş spektrumlu sefalosporinler, sefoperazon, tekrarlanabilir CDI 15 duyarlı fare oluşturur. Üçüncü kuşak sefalosporin verilmesinin insanlarda CDI riski ile ilişkili olduğundan, sefoperazon modelinin kullanımı daha doğru bir hastalık 16 doğal olarak meydana gelen yansıtır. Sefoperazon ile tedavi edilen C. difficile duyarlı fareler C. difficile sporlarının ve klinik olarak değişen suşları çeşitli bitkisel hücreler hem meydan edilmiştiralaka ve virülans 17. Bulaşıcı form olarak C. difficile vejetatif hücreleri kullanılarak özgün çalışmaların bazılarında rağmen, C. difficile sporlarının iletim 18 ana mod olarak kabul edilir. Son on yılda, C. difficile R20291, bir NAP1 / BI / 027 suşu, CDI 19,20 salgınlara neden ortaya çıkmıştır. Biz sefoperazon ile tedavi edilmiş fareler klinik olarak ilgili ve genetik uysal C. difficile suşu, R20291 aşılandığında hastalığın klinik seyrini belirlemeye çalıştık. Bu protokol kilo kaybı, bakteri kolonizasyonu, toksin sitotoksisite ve C. difficile R20291 sporları ile meydan farelerin gastrointestinal sistemde histopatolojik değişiklikler de dahil olmak üzere, klinik seyir ayrıntıları. Genel olarak, bu fare modeli CDI insan hastalığı yaklaştırmak için değerli bir deney platformu olduğunu kanıtlamaktadır. Bu özelliği, fare modeli, etkilerini değerlendirmek için kullanılabilirklinik hastalığın iyileştirilmesi ve C. difficile karşı kolonizasyon direnci restorasyonu yeni tedavi yöntemleri.

<table><tbody><tr><td>#62 Perisept Sporidiyal Dezenfektan Temizleyici&nbsp;</td><td>SSS Navigator</td><td>48027</td><td>Bu ürün, üretici tarafından önerildiği şekilde seyreltme gerektirecektir</td></tr><tr><td>: 0.22 & mu; m filtre</td><td>Fisherbrand</td><td>09-720-3</td><td>Vero Hücre Testinde test edilen bireysel numuneler için filtre plakasına alternatif</td></tr><tr><td>%0.25 Tripsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>37 ° C'de su banyosunda ısıtılması gerekir; Kullanmadan önce C</td></tr><tr><td>%0,4 Tripan Mavisi</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>%1 Peniciilin/Streptomisin</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>%10 ısıyla etkisiz hale getirilmiş FBS</td><td>Gibco</td><td>16140-071</td><td>37 ° C'de su banyosunda ısıtılması gerekir; C kullanmadan önce</td></tr><tr><td>1 ml plastik şırınga&nbsp;</td><td>BD Tıbbi Malzemeler</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>2 ml Mikro Santrifüj Vidalı Kapak</td><td>Corning</td><td>430917</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu hücre kültürü düz alt plaka</td><td>Costar Corning</td><td>CL3595</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu filtre plakası</td><td>Kırlangıç</td><td>MSGVS2210</td><td></td></tr><tr><td>Yapışkan Conta</td><td>ThermoScientific</td><td>AB-0558</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td>TCCFA plakalarının bir parçası (aşağıya bakınız)</td></tr> <tr><td>Bacto Proteose Peptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211684</td><td>TCCFA plakalarının bir kısmı (aşağıya bakınız)</td></tr><tr><td>Cefoperazone</td><td>MP Bioworks</td><td>199695</td><td></td></tr><tr><td>Cefoxitine</td><td>Sigma</td><td>C47856</td><td>TCCFA plakalarının bir kısmı (aşağıya bakınız)</td></tr><tr><td>Clostridium difficile Antitoksin Kiti</td><td>Tech Labs</td><td>T5000</td><td>Vero Hücre Testi için kontrol olarak kullanılır</td></tr><tr><td>Clostridium difficile Toksin A</td><td>Listesi Biyolojik Laboratuvarlar</td><td>152C</td><td>Vero Hücre Testi için pozitif kontrol</td></tr><tr><td>D-sikloserin</td><td>Sigma</td><td>C6880</td><td>TCCFA plakalarının bir parçası (aşağıya bakınız)</td></tr> <tr><td>Damıtılmış Su</td><td>Gibco</td><td>15230</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 1x Media</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>37 ° C'de su banyosunda ısıtılması gerekir; C kullanmadan önce</td></tr><tr><td>Fruktoz</td><td>Fisher</td><td>L95500</td><td>TCCFA plakalarının bir parçası (aşağıya bakınız)</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Bright-Line, Sigma</td><td>Z359629</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher</td><td>P285-500</td><td>TCCFA plakalarının bir kısmı (aşağıya bakınız)</td></tr><tr><td>MgSO4 (susuz)</td><td>Sigma</td><td>M2643</td><td>TCCFA plakalarının bir parçası (aşağıya bakınız)</td></tr><tr><td>Millex-GS 0.22 & mu; m filtre</td><td>Millex-GS</td><td>SLGS033SS</td><td>TCCFA plakaları için filtre&nbsp;</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S-0876</td><td>TCCFA plakalarının bir parçası (aşağıya bakın)</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S640-3</td><td>TCCFA plakalarının bir parçası (aşağıya bakın)</td></tr><tr><td>10 Numara tek kullanımlık neşter bıçağı</td><td>Miltex, Inc</td><td>4-410</td><td></td></tr><tr><td>PCR Plakaları</td><td>Fisherbrand</td><td>14230244</td><td></td></tr><tr><td>Plastik petri kabı</td><td>Kord-Valmark Marka</td><td>2900</td><td></td></tr><tr><td>Steril plastik L-şekilli hücre serpme</td><td>makinesi Fisherbrand</td><td>14-665-230</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga Step</td><td>Dymax Corporation</td><td>T15469</td><td></td></tr><tr><td>Taurocholate</td><td>Sigma</td><td>T4009</td><td>TCCFA plakalarının bir parçası (aşağıya bakınız)</td></tr><tr><td>Ultra saf damıtılmış su</td><td>Invitrogen</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>664</td><td>Fareler 5 - 8 haftalık olmalıdır</td></tr><tr><td>Olympus BX43F ışık mikroskobu</td><td>Olympus Life Science</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DP27 kamera</td><td>Olympus Life Science</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cellSens Dimension yazılımı&nbsp;</td><td>Olympus Yaşam Bilimleri</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ve cefoperazone-tedavi edilmiş fare modeli klinik olarak ilgili<em&gt; clostridium difficile</em&gt; gerilme r20291

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile, anaerobik, gram pozitif, spor oluşturan, artan morbidite ve mortalite ile ilişkili ve buna bağlı olarak halk sağlığı için acil bir tehdit oluşturan enterik bir patojendir. Antibiyotiklerle başarılı bir tedaviden sonra C. difficile enfeksiyonunun (CDI) nüksü yüksektir ve hastaların% 20-30'unda görülür, bu nedenle bu patojene karşı yeni terapötiklerin keşfedilmesini gerektirir. CDI'nın mevcut hayvan modelleri yüksek mortalite oranlarına neden olmaktadır ve bu nedenle CDI'li insanlarda görülen kronik, sinsi hastalık belirtilerine yaklaşmamaktadır. C. difficile'ye karşı terapötikleri değerlendirmek için, klinik olarak ilgili bir suş kullanarak insan hastalığına yaklaşan bir fare modeline ihtiyaç vardır. Bu protokol, klinik olarak anlamlı ve genetik olarak izlenebilir bir suş olan R20291 kullanarak CDI'nin sefoperazon fare modelini ana hatlarıyla belirtir. Bir fare modelinde klinik hastalık izleme, C. difficile bakteri sayımı, toksin sitotoksisitesi ve CDI boyunca histopatolojik değişiklikler için teknikler protokolde ayrıntılı olarak açıklanmıştır. CDI'nin diğer fare modelleriyle karşılaştırıldığında, bu model uygulanan dozda eşit derecede öldürücü değildir ve insan hastalığı ile uyumlu uzun süreli bir klinik enfeksiyon seyrinin gözlemlenmesine izin verir. Bu nedenle, CDI'nin bu sefoperazon fare modeli, yeni terapötiklerin klinik hastalığın iyileştirilmesi ve C. difficile'ye karşı kolonizasyon direncinin restorasyonu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için değerli bir deneysel platform olduğunu kanıtlamaktadır.

temsili bir çalışma sırasında, 5 haftalık C57BL / 6 ağırlık fareleri 5 gün boyunca içme su (0.5 mg / ml) içinde Cefoperazone&#39;un ile önceden işleme tabi tutulmuş ve 2 gün düzenli içme suyu ile yıkayın izin verildi. Farelere 0. günde (Şekil 1A) oral gavaj yoluyla C. difficile R20291 10 5 sporları ile tehdit edildi. Fareler 14 gün boyunca CDI kilo kaybı ve klinik bulgular (uyuşukluk, iştahsızlık, ishal ve kambur duruş) için izlenmiştir. C. diffic...

Bu protokol klinik olarak ilgili ve genetik uysal gerginlik, R20291 kullanarak Clostridium difficile enfeksiyonu (CDI) sefoperazon fare modeli özetliyor. Klinik hastalık izleme, C. difficile bakteriyel numaralandırma, toksin sitotoksisite ve bir fare modelinde CDI genelinde histopatolojik değişikliklere vurgu protokolde ayrıntılı olarak verilmiştir.

ve Cefoperazone-tedavi edilmiş fare modeli klinik olarak ilgili<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Gerilme R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Bu protokolün genel amacı, klinik hastalık izleme, bakteri sayımı, toksin sitotoksisitesi ve challenge sonrası histopatolojik değişikliklere özel bir vurgu yaparak, Clostridium difficile enfeksiyonu cefoperazon fare modelinin uygulanması için adım adım bir kılavuz sağlamaktır. Bu ayrıntılı protokol, araştırmacıların, bu bakterinin patogenezini incelemek ve yeni terapötik yöntemlere erişmek için temel teşkil eden Clostridium difficile enfeksiyonu fare modelini doğru bir şekilde uygulamalarına yardımcı olacaktır. Bu fare modelini kullanmanın temel avantajı, beş gün boyunca tek bir antibiyotiğe maruz bırakılmanın, fareleri C.difficile kolonizasyonuna ve insan hastalığı ile eş zamanlı, uzun süreli bir klinik enfeksiyon seyrine karşı duyarlı hale getirmesidir.Başlamak için, ilgili C.difficile stok suşunu alın ve vorteksleyin. Bir laminar akış kabininde, stoğu vidalı kapaklı bir tüp içinde steril su ile 25 µL başına 10⁵ spor konsantrasyonuna gelecek şekilde seyreltin. Karışımı spor inokülumu olarak etiketleyin ve tüpü 20 dakika boyunca 65 °C'lik bir su banyosuna yerleştirin.Ardından, laminar akışlı kabinde, ısıtılmış spor inokülümünden 50 µL'yi steril bir mikrosantrifüj tüpüne pipetleyin

cefoperazone-treated-mouse-model-clinically-relevant-clostridium

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Winston, J. A. ve diğerleri. Klâlis olarak Önemli Clostridium difficile Strain R20291 için sefoperazonla tedavi edilmiş fare modeli.  J. Vis. Exp. (2016)Bu video, antibiyotikle önceden tedavi edilmiş farelerin Clostridium difficile sporlarıyla aşılanması prosedürünü göstererek patogenezi ve konak yanıtlarını incelemek için enfeksiyon modeli oluşturulmuştur.

Clostridium difficile enfeksiyonunun fare modeli oluşturulması

Kaynak: Winston, J. A. ve diğerleri. Klâlis olarak Önemli Clostridium difficile Strain R20291 için sefoperazonla tedavi edilmiş fare modeli. J. Vis. Exp. (2016)Bu video, enfekte bir fare modelinden alınan dışkı örneklerinde Clostridium difficile'nin seçici kültür teknikleriyle nicelendirilmesini göstermektedir. Numune toplama, anaerobik işlem, seri seyreltme ve koloni sayımı prosedürlerini özetleyerek bakteriyel kolonizasyon ve konak-patojen etkileşimlerini değerlendirir.

Enfekte Fare Modelinden Dışkı Örneklerinde Clostridium difficile'nin Nicelleştirilmesi

Citrobacter rodentium enfeksiyonu enterik bakteriyel enfeksiyonlar çalışma yanı sıra farelerde bağışıklık yanıtları ve kolit barındırmak için değerli bir model sunar. Bu protokol bariyer bütünlüğünü, patojen yük ve murin infeksiyöz kolit patojen ve konak katkıların tam karakterizasyonu izin histolojik hasar ölçümü özetliyor.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Bulaşıcı Kolit için çalışılması Patojen ve Host Katılımlar

Çok yöntemi görüntüleme küçük hayvan modellerinde bakteri kolonizasyonu eğitim için değerli bir yaklaşımdır. Bu protokol bioluminescent ile farelerin enfeksiyonu...

4D modelli Görüntüleme<em&gt; Citrobacter rodentium</emFarelerde&gt; Enfeksiyonlar

Üriner sistem enfeksiyonlarını (İYE) modelleme yeteneği, bakteriyel patogenezi anlayabilmek ve yeni terapötiklerin geliştirilmesini sağlayabilmek için çok önemlidir. Bu çalışmanın amacı, insanlarda görülen bulguları özetleyen ve tahmin eden deneysel İYE ve kateterle ilişkili İYE'nin fare modellerini göstermektir.

Fare Modelinde Kuruluş ve İYE ve CAUTI Karakterizasyonu

Antibiyotik etkinliği en yaygın olarak öldürme kinetik çalışmaları yapılarak ve koloni oluşturma birimleri (CFU'lar) ölçülerek belirlenir. Taramalı elektron mikroskobunu (SEM) bu standart yöntemlerle entegre ederek, tedavinin farmakolojik etkilerini farklı antibiyotikler arasında ayırt edebiliriz.

Morfolojik Değişiklikleri Karakterize Eden Bir Protokol<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Antibiyotik Tedavisine Yanıt Vermek

Burada, erişkin farelerde intrasisternal enfeksiyon yolu ile meningokok menenjitini tetikleyen bir yöntem tanımlıyoruz. İnokül inosiyal enfeksiyona kadar meningokok enfeksiyonunun adım adım protokolünü sıyoruz; sonra hayvan hayatta kalma kaydetmek ve mindik dokularında bakteri yükleri değerlendirmek.

İntrasisternal Doğum yoluyla Farelerde Meningokok Menenjit Serogroup C Indükleyen

Gizli hücre içi mesane rezervuarları oluşturmak için üropatojenik E. coli (UPEC) transüretral aşılamasının bir fare modeli ve tekrarlayan UPEC İYE'yi indüklemek için G. vajinalis'e mesane maruziyeti gösterilmiştir.  Ayrıca bakterilerin sayımı, idrar sitolojisi ve in situ mesane fiksasyonu ve taramalı elektron mikroskobu için işlenmesi de gösterilmiştir.

Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu

Burada, Bacillus cereus'un kolit üzerindeki olumlu etkilerini düzenlemede bağırsak mikrobiyotasının rolünü araştırmak için antibiyotik kaynaklı yalancı mikrop içermeyen dekstran sülfat sodyum kaynaklı kolit fare modelini oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Bacillus cereus Uygulamasının Kolit Üzerindeki Hafifletici Etkilerinin Bağırsak Mikrobiyota Modülasyonu ile Araştırılması

Erken doğum (37 haftadan &lt; doğum), optimal olmayan önleme ve tedavi seçenekleriyle acil bir küresel sağlık sorunudur. Artan vajinal bakteriyel enfeksiyon kaynaklı erken doğumun bir fare modelini sunuyoruz ve ortaya çıkan yenidoğan morbidite ve mortalitesinin nasıl analiz edileceğini özetliyoruz.

Farelerde Yükselen Vajinal Enfeksiyon, Erken Doğum ve Yenidoğan Morbiditesinin Modellenmesi

Bu protokol, pks+ Escherichia coli farelerinin inflamatuar olmayan koşullarda kolonileşmesi için gerekli adımları, ayrıca kolonizasyonun doğrulanması ve dışkıda pks+ E. coli genişlemesinin değerlendirilmesi için invaziv olmayan yöntemleri tanımlar.

Murine pks+ Escherichia coli ile İltihap Olmayan Koşullarda Kolonizasyon

Keşfedin Clostridium difficile enfeksiyonunun cefoperazone fare modelini R20291 suşu ile. Bu protokol klinik hastalık izleme, bakteri sayımı, toksin sitotoksisite ve histopatolojik değişiklikleri içerir.

ve Cefoperazone-tedavi edilmiş fare modeli klinik olarak ilgili

Daha fazla video keşfet