Rekombinant Archaeal proteazomlar ve Nondenaturing PAGE ile Proteozom Meclisi İncelenmesi: Durum bir Kombine Yaklaşım

Bu protokol alt birimi yakımının birlikte ve rekombinant proteazom montaj daha kapsamlı bir muayene için karıştırma postlysis alt birimini hem kullanır.

Bu deneyin genel amacı, rekombinant alt birimler ve denatüre olmayan Poliakrilamid Jel Elektroforezi veya PAGE kullanarak proteazom gibi çok proteinli bir kompleksin montajını analiz etmektir. Bu yöntem, proteazom alanında, bu protein kompleksinin montaj yolu boyunca hangi ara türlerle karşılaşıldığı gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, montajın iki paralel yaklaşımla hızlı bir şekilde taranmasına izin vererek, açık ve kapalı yol ara ürünlerinin algılanmasına izin vermesidir. Bu prosedür, metin protokolünde açıklandığı gibi bakteri ifadesi ile başlar. Bakteriyel lizizi gerçekleştirmek için, proteazom alt birimlerinin istenen kombinasyonunu birlikte ifade eden indüklenmiş hücre paletini beş dakika boyunca buz üzerinde çözün. Çözüldükten sonra, paleti 600 mikrolitre Lysis Buffer içinde yeniden askıya alın.