Name: Kurtarma Zamanı Artan ve Sınırlı Enflamatuar Yanıtları içinde Vagus sinir stimülasyonu Mekanizmaları Eğitim için LPS İdaresi Azalmış (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Keşfedin vagus sinir stimülasyonunun enflamatuar yanıtlar üzerindeki etkilerini ve kolinergik anti-enflamatuar yolaktaki mekanizmaları fare modelinde. Bu cerrahi teknik nöroimmünoloji araştırmaları için uygulanabilir bir yöntem sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışma, İsveç Araştırma Konseyi, İsveç Romatizma Derneği, Karolinska Enstitüsü Vakıfları, Stockholm İl Meclisi, Wallenberg Vakfı ve GV 80 Yıllık Araştırma Vakfı tarafından desteklenmiştir. Yazarlar ayrıca el yazmasını düzelttiği için Hannah Aucott'a teşekkür eder.

Tüm hayvan deneyleri bakımı ve Karolinska Enstitüsünde, Stockholm yerel Etik Komitesi tarafından onaylanmış hayvanların kullanımı için kurallarına göre yapılmıştır. Yerel Etik Komitesi hayvan bakımı konusunda Avrupa Birliği direktiflerini takip eder. NOT: cerrahi (6 saat ile 1 saat karşı) ve LPS seviyesi (15 mg / kg karşı 2 mg / kg) enjekte sonra orijinal protokolden temel değişiklikler iyileşme süresi vardır. Aksi takdirde, ameliyattan kendisiyle ilgili farklı ayarlar değiştirilmedi. 1. Stimulation Malzeme hazırlama <ol><li> Bilgisayar ve uyarıcı elektrot (Şekil 1A) ile bağlantılı veri toplama sistemi açın. </li><li> Acknowledge programına girin. </li><li> 5 mg / 1 x PBS içinde ml, kısım o konsantrasyonda LPS bir stok çözeltisi hazırlandı ve -20 ° C&#39;de saklayın. Deney günü, bir kısım Çözülme ve bir ade hazırlamakağırlığına göre, hayvana, yaklaşık 100 ul enjekte etmek için bir LPS (0.5 mg / ml) quate örneği. </li></ol> 2. Anestezi Hayvan hazırlanması <ol><li> C57BL / 6 fareleri kullanın. , 12 saat aydınlık / karanlık döngüsü ile iklim kontrollü şartlar altında onları korumak, onlara standart kemirgen yemi yem ve onlara istedikleri kadar su verir. </li><li> Deney günü yaklaşık 25 g ağırlığında fareler üzerinde ameliyat gerçekleştirin. NOT: enflamatuar reaksiyonların neden olduğu zaman, düzenli kontrolleri ve hayvanlarda klinik reaksiyonların gözlemler gerçekleştirmek için özellikle önemlidir. Hayvan durumu etik kriterleri sağlamadığı takdirde CO2 inhalasyonuyla ötenazi erken gereklidir. </li><li> anestezik makineyi ayarlayın. <ol><li> boru doğru bağlandığını ve herhangi bir şekilde zarar görmemiş olduğundan emin olun. havalandırmalı alan düzgün çalıştığından emin olun. izofluran şişe anahtarı filtreyi bağlayın ve Vapo doldurmakizofluran yeterli bir miktarı ile Rizer. </li><li> Gaz arzı (hava ve oksijen) açın ve şişeler deney için yeterli gaz içerdiğinden emin olun. Üç yollu konnektör sonra indüksiyon odasına veya maske izofluran akışını göndermek mümkün olduğunu. </li></ol></li><li> indüksiyon odasına üç yönlü konektörü çevirin. ev kafesten bir fare seçin ve odasına hayvan yerleştirin. 1.0 L / dakika, oksijen ve 1.0 L / dak hava akış düzenleme ayarlayın. % 5 - 4 izofluran konsantrasyonu ayarlayın. </li><li> anestezi istenen seviyeye ulaşıldığında, anestezi istenilen düzeyde ulaşıldığında, cerrahi alan tıraş ve maskeye odasından hayvan taşımak. Maske akışına üç yönlü konektörü çevirin. 0.25 L / dak, oksijen ve 0.25 L / dak hava akış düzenleme ayarlayın. <ol><li> % 2.5 - 1.5 izofluran konsantrasyonu ayarlayın. ameliyat edilen başlamadan önce refleks kontrolü ve solunum oranı ile anestezi seviyesini kontrole. </li></ol></li><li> yapışkan bant kullanılarak çalışma tezgahına fare bacakları sabitleyin. Hayvanın burun hala dikkatle maskesi yerleştirilmiş olduğundan emin olun. </li></ol> Vagus sinirinin 3. Cerrahi ve stimülasyonu <ol><li> % 70 etanol ile cerrahi alan dezenfekte edin. </li><li> bir neşter kullanarak dikkatli bir şekilde boyun (yaklaşık olarak 1 ila 1.5 cm&#39;lik bir kesi) seviyesinde cilt insizyon. Not: Protokolde, cerrahi prosedür SHAM çalışan hayvanlar için burada biter. Gerçekten de, sadece bir metal araç ile sinir dokunmadan önce bir dereceye kadar uyarır olduğu gösterilmiştir. LPS az miktarda kullanıldığında nedenle, daha doğru bir ameliyat kontrol hayvanı almak için, bu adımda ameliyatı durdurun. </li><li> mikroskop (12,5X objektif) yardımı ile, kesme forseps kullanılarak karotid arterden sol vagus sinirinin izole edilmesi. İlk cilt ve yağ tabakalarını kaldırarak sternocleidomastoid kas bulun ve sonra onu geri çekmeksinir ve arter hem arkasında forseps koymak sipariş. Not: Sinir ve arter yakın birbirine yapışık olarak aşağıdaki adımı, oldukça zordur. Nedenle, gemiyi kesip hayvanı öldürmek çok kolaydır. Bununla birlikte, sinir ve arter arasında çok dikkatli bir şekilde forseps yerleştirerek, sonunda ayrı ve sinirinin izole edilmesi mümkündür. </li><li> Vagus sinir altında elektrot (Şekil 1B) yerleştirin. iğne elektrot oldukça uzun, yani sinir stimülasyonu sırasında hafifçe hareket etse bile, her zaman elektrot ile temas halinde olacaktır. </li><li> (Sitokin seviyeleri üzerinde okunması için, yani, aşağı regüle etkisini ölçmek için), bir şırınga yardımı ile LPS intraperitonal (ip) enjeksiyon (2 mg / kg) uygulayın. </li><li> uyarı başlatılmadan önce 5 dakika bekleyin. </li><li> Onaylama programında, düğmeye basılması ile 5 V ve 1 Hz, 5 dakika için vagus siniri stimüle eder. </li><li> Yenidenelektrodu taşımak ve cerrahi dikiş ipliğinin ile hayvanın yarasını sütür. </li><li> sipariş iyileşmesini geliştirmek ve enfeksiyonlara karşı korumak için de yaranın üzerine bir yok Sting Bariyer Film (NSBF) püskürtün. </li></ol> Hayvan 4. Kurtarma <ol><li> Ameliyattan sonra uyanış ve kurtarma için geri kafesine hayvan taşımak. vücut ısısını korumak için kızıl ötesi ışık altında, tam bilinç kazanmış kadar hayvan izlemek için emin olun. </li><li> Hayvan analizi için kurban öncesi 6 saat süreyle kafesine geri alalım. Not: Vagus siniri, uyarım etkisi çok hızlı ve aynı zamanda (en fazla 48 saat için) uzun ömürlü olduğu gösterilmiştir, bu nedenle iyileşme süresi çalışma gereksinimlerine göre deneyi tarafından ayarlanabilir. </li></ol> Daha fazla analiz için 5. Kurban <ol><li> Bir CO2 uygulama cihazına bağlanmış bir kafeste hayvan yerleştirin. </li><li> 5 Cihazı ayarlamaCO2 inhalasyonu -min döngüsü. </li><li> Ötanazi yapılır, ilgi organları toplamak doğrudan daha fazla analiz için kuru buz üzerinde dondurma (örneğin, bir fare TH1 ile dalak özleri sitokin düzeylerinin ölçülmesi / TH2 9-Plex tahlili) 3. </li></ol>

<ol><li>Nathan, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12490957">Points of control in inflammation.</a> Nature. 420 (6917), 846-852 (2002).</li>
<li>Rosas Ballina, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acetylcholine-synthesizing+T+cells+relay+neural+signals+in+a+vagus+nerve+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Acetylcholine-synthesizing T cells relay neural signals in a vagus nerve circuit.</a> Science. 334 (6052), 98-101 (2011).</li>
<li>Le Maître, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+vagus-mediated+immunosuppression+in+microsomal+prostaglandin+E+synthase-1+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Other+Lipid+Mediat%22%5BJournal%5D)">Impaired vagus-mediated immunosuppression in microsomal prostaglandin E synthase-1 deficient mice.</a> Prostaglandins Other Lipid Mediat. 121 (Part B), 155-162 (2015).</li>
<li>Borovikova, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+nerve+stimulation+attenuates+the+systemic+inflammatory+response+to+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vagus nerve stimulation attenuates the systemic inflammatory response to endotoxin.</a> Nature. 405 (6785), 458-462 (2000).</li>
<li>Olofsson, P. S., Rosas-Ballina, M., Levine, Y. A., Tracey, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rethinking+inflammation%3A+neural+circuits+in+the+regulation+of+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Rethinking inflammation: neural circuits in the regulation of immunity.</a> Immunol. Rev. 248 (1), 188-204 (2012).</li>
<li>Pavlov, V. A., Tracey, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+circuitry+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">Neural circuitry and immunity.</a> Immunol Res. 63 (1-3), 38-57 (2015).</li>
<li>Huston, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Splenectomy+inactivates+the+cholinergic+antiinflammatory+pathway+during+lethal+endotoxemia+and+polymicrobial+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Splenectomy inactivates the cholinergic antiinflammatory pathway during lethal endotoxemia and polymicrobial sepsis.</a> J. Exp. Med. 203 (7), 1623-1628 (2006).</li>
<li>Rosas-Ballina, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2504833/">Splenic nerve is required for cholinergic anti-inflammatory pathway control of TNF in endotoxemia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105 (31), 11008-11013 (2008).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotinic+acetylcholine+receptor+alpha7+subunit+is+an+essential+regulator+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nicotinic acetylcholine receptor alpha7 subunit is an essential regulator of inflammation.</a> Nature. 421 (6921), 384-388 (2003).</li>
<li>Pavlov, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+muscarinic+cholinergic+regulation+of+the+systemic+inflammatory+response+during+endotoxemia%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Central muscarinic cholinergic regulation of the systemic inflammatory response during endotoxemia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103 (13), 5219-5223 (2006).</li>
<li>Pavlov, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+acetylcholinesterase+activity+controls+systemic+cytokine+levels+through+the+cholinergic+anti-inflammatory+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav.+Immun%22%5BJournal%5D)">Brain acetylcholinesterase activity controls systemic cytokine levels through the cholinergic anti-inflammatory pathway.</a> Brain Behav. Immun. 23 (1), 41-45 (2009).</li>
<li>Rosas-Ballina, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xanomeline+suppresses+excessive+pro-inflammatory+cytokine+responses+through+neural+signal-mediated+pathways+and+improves+survival+in+lethal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav.+Immun%22%5BJournal%5D)">Xanomeline suppresses excessive pro-inflammatory cytokine responses through neural signal-mediated pathways and improves survival in lethal inflammation.</a> Brain Behav. Immun. 44, 19-27 (2014).</li>
<li>Bellinger, D. L., Lorton, D., Lubahn, D., Felten, D. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBellinger%2C+DL+%22Psychoneuroimmunology%22">Psychoneuroimmunology</a>. Ader, R., Felten, D. L., Cohen, N. 55, Academic. San Diego. 55-112 (2001).</li>
<li>Andersson, U., Tracey, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+rheumatoid+arthritis%3A+treating+inflammation+with+computerized+nerve+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrum%22%5BJournal%5D)">A new approach to rheumatoid arthritis: treating inflammation with computerized nerve stimulation.</a> Cerebrum. 2012, 3(2012).</li>
<li>Ono, S. J., Nakamura, T., Miyazaki, D., Ohbayashi, M., Dawson, M., Toda, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12789214">Chemokines: Roles in leucocyte development, trafficking, and effector function.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 111 (6), 1185-1199 (2003).</li>
<li>Silvestre-Roig, C., Hidalgo, A., Soehnlein, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+heterogeneity%3A+implications+for+homeostasis+and+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Neutrophil heterogeneity: implications for homeostasis and pathogenesis.</a> Blood. , (2016).</li>
<li>Matteoli, G., Boeckxstaens, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vagal+innervation+of+the+gut+and+immune+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">The vagal innervation of the gut and immune homeostasis.</a> Gut. 62, 1214-1222 (2013).</li>
<li>Pereira, M. R., Leite, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+involvement+of+parasympathetic+and+sympathetic+nerve+in+the+inflammatory+reflex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The involvement of parasympathetic and sympathetic nerve in the inflammatory reflex.</a> J. Cell. Physiol. 231, 1862-1869 (2016).</li>
<li>Levine, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurostimulation+of+the+cholinergic+anti-inflammatory+pathway+ameliorates+disease+in+rat+collagen-induced+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Neurostimulation of the cholinergic anti-inflammatory pathway ameliorates disease in rat collagen-induced arthritis.</a> PLoS One. 9 (8), e104530(2014).</li>
<li>Huston, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcutaneous+vagus+nerve+stimulation+reduces+serum+high+mobility+group+box+1+levels+and+improves+survival+in+murine+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Transcutaneous vagus nerve stimulation reduces serum high mobility group box 1 levels and improves survival in murine sepsis.</a> Crit. Care Med. 35 (12), 2762-2768 (2007).</li>
<li>Yuan, H., Silberstein, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+nerve+and+vagus+nerve+stimulation%2C+a+comprehensive+review%3A+Part+II%5BTitle%5D)+AND+%22Headache%22%5BJournal%5D)">Vagus nerve and vagus nerve stimulation, a comprehensive review: Part II.</a> Headache. 56 (2), 259-266 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

2000&#39;li yılların başında keşfinden beri OTP mekanizmaları iyice çalışılmıştır. Şimdi yolunun iyi bir resim var ve özellikle de hedef organ, dalak, çok verimli bir ekip olarak NE, hafıza T hücrelerinin, ACH ve makrofajlar çalışma inflamatuar mediatörler 2 aşağı düzenleyen nerede. Ayrıca, yakın zamanda tabii ki CAP 3 aktivasyonundan sonra dalak ACh salgılanması için zorunlu bir bileşenidir, özellikle fareler, işlevsel bir prostaglandin sisteminin önemini, PGE2,</sub...

Doğuştan bağışıklık organizmaların geniş bir alanda enfeksiyonlara ve hastalıklara karşı savunma derhal ilk satırı sağlar. Bu tehlike ortadan kaldırmak için primer bağışıklık tepkisi başlatır değil, ama aynı zamanda aktif hale patojen-spesifik bir şekilde ikincil bağışıklık karşılıklarını gerçekleştirir adaptif bağışıklık eğitiminde önemli bir rol oynar. Enflamasyon sırayla enfeksiyon alanına diğer bağışıklık hücrelerini çekme kabiliyetine sahip ve bu tür kızarıklık, şişlik, ağrı, fonksiyon kaybı ve ateş gibi inflamasyon kardinal belirtileri, ikna etmek sitokin ve kemokin bir bolluk, tarafından orkestra edildiği . süresi ve inflamasyon yoğunluğu çeşitli faktörlere bağlıdır, ancak iltihap çözme ve homeostazı geri kronik iltihaplı hastalıkların başlamasını önlemek için önemli bir adımdır. nörobilim ve immünoloji alanında son gelişmeler iltihaplanmayı kontrol etmek muazzam bir terapötik potansiyeli olan belirli sinirsel mekanizmaları açığa çıkarılmamışhem merkezi sinir sisteminde hem de çevresinde amasyon. Bu mekanizmalardan biri, otonom sinir sisteminin 4, 5 tarafından tahrik edilen enflamatuar refleks olarak bilinen kolinerjik, anti-enflamatuar yolu (CAP) olup. Şu anda, inflamatuar mediatörler, merkezi sinir sistemine iltihabı durumuna ilişkin sinyaller duyu sinirleri aktive ve gönderme olduğu düşünülmektedir. Bir refleks yanıt sonra efferent vagus siniri tarafından etkinleştirilir. CAP anatomik detayları kapsamlı bir çalışma iki sinir oluşan bir parasempatik-sempatik modeli, vagus siniri ve dalak sinir sırasıyla 6 ortaya çıkarmıştır. CAP, aktive kolinerjik efferent vagus siniri henüz keşfedilecek bir mekanizma ile adrenerjik dalak sinir aktivasyonu ile sonuçlanan, çölyak-mezenterik ganglion sona erer. Bu şekilde aktive edilmiş dalak sinir, iç bilinmektedirbeyaz maddesinde bağışıklık hücreleri yakın, marjinal bölge ve CAP 7, 8, dalak, asil ve zorunlu organın kırmızı pulpunda vate. Dalak sinir uçlarından norepinefrin (NE) dalak T lenfositleri üzerinde eksprese gelen β 2 adrenerjik reseptörlere bağlanır. Bu da, bu şekilde sitokin üretimi ve iltihap 2 sınırlayıcı makrofajlar üzerinde α7 nikotinik asetilkolin reseptörleri (a7nACh), aktive kolin asetil transferazı (ChAT) aracılık ettiği asetilkolin (Ach) salınmasını tetikler. Sonuç olarak, sinir sistemi, periferik dokularda inflamasyonu düzenleyen ve yerel immün homeostasisi geri mümkün olduğu açıktır. yolunun Adından da anlaşılacağı gibi, ACh sistemi bu nöro-immün düzenleyici yolunun işleyişi için merkezi öneme sahiptir. İlginç bir şekilde, mekanizma aktivasyonuna katılanCAP çevresi ve merkezi sinir sisteminde, farklı gibi görünmektedir. Dalakta nikotinik reseptörlerin önemi (α7nAChR) daha önce 9 gösterilmiştir edilmiş olsa da, muskarinik reseptörleri (mAChR) yolu 10, 11 merkez aktivasyonu için zorunludur. Öldürücü murin endotoksemi sırasında Daha yakın zamanda, merkezi olarak hareket eden M1 muskarinik agonist periferik olarak verilmesi önemli ölçüde bastırdı serumu ve dalak tümör nekroz faktörü α (TNFa), 12 sinyal sağlam vagus siniri ve dalak sinir gerekli bir eylem. Ayrıca, prostaglandin E 2 yoksun fareler (PGE2) Vagus sinir uyarımına yanıt mümkün değildi ve serum ve dalak 3 sitokin LPS ile uyarılan salımını aşağı regüle yoktu son göstermiştir. Bu nedenle, CAP aynı zamanda ana ACh pathw dışındaki sistemler tarafından düzenlenir olabiliray. Vagus siniri, çünkü vücut dolanımı tabii gibi seçildi, karaciğer, akciğer, dalak, böbrek ve bağırsak 13 de dahil olmak üzere başlıca organların innerve. Bu büyük innervasyon ve vagus sinirinin çok kuvvetli immünosupresif etkisi göz önüne alındığında, CAP terapötik potansiyeli enflamatuar durumların geniş bir kapak olabilir. Uyuşturucu gövdeye eklenmiş Vagus siniri, elektriksel olarak (ya da mekanik olarak) geleneksel tedaviye voltaj ve frekans, aksine üzerinde kontrolü ile, aktive edilmiş olabilir. Denemeler kronik enflamasyonu 14 tedavisinde VNS klinik önemi test etmek için, örneğin, romatizma hastalarında halen devam etmektedir. Özet olarak, nöro-immün iletişim ve enflamasyon düzenleme geleneksel tedaviye olası bir alternatif tedavi sağlayacaktır araştırma, halen vardır. Bu nedenle, vagus sinirinin analizi stimülasyonn farklı innerve organlardaki etkisi ancak kronik enflamasyon hayvan modellerinde potansiyel terapötik etki de karakterizasyonu, kesinlikle verilerini kullanarak elde edilmesi ve yeni potansiyel tedavi edici hedefler için umut ediyorum. Tracey ve meslektaşları 4 tarafından geliştirilen özgün metodoloji nedeniyle (LPS öldürücü dozda yoluyla) inflamatuvar yanıt aşırı uyarılması ve CAP aktivasyonu ve okuma-out arasında çok kısa bir zaman aralığına araştırma alanımızla aktarılmamıştır edilemedi. Mevcut yazıda, orijinal protokole yapılan değişiklikleri sunacak sitokin seviyeleri üzerinde iki farklı yöntemler karşılaştırın ve hedef organ (dalak) yeni ve karşı gözlem vurgulamaktadır.

<table><tbody><tr><td>Bilgisayar</td><td></td> <td>Toshiba-Herhangi</td> <td>bir bilgisayar aslında</td></tr><tr><td>uyumludur MP-150 veri toplama sistemi</td><td>Biopac Systems</td><td>MP150WSW</td><td></td></tr><tr><td>Accept yazılımı</td><td>Biopac Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fareler C57Bl / 6</td><td>Charles River Anestezik</td><td></td><td></td></tr><tr><td>makinesi</td><td>Simtec Mühendislik</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tıbbi oksijen tüpü</td><td>AGA</td><td>107563</td><td></td></tr><tr><td>Medikal hava şişesi&nbsp;</td><td>AGA</td><td>108639</td><td></td></tr><tr><td>Vetfluran (1.000 mg / g)</td> <td>Virbac</td><td>137317</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>Salin</td><td>Merck Millipore</td><td>1024060080</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5493</td> Kullanılan konsantrasyon Şırınga için <td>10 kez seyreltilmiş</td></tr><tr><td>Şırınga (1 ml)</td><td>BD Plastipak</td><td>303172</td><td></td></tr><tr><td>İğneler 23 G</td><td>KD-FINE</td><td></td> 900284 <td>0,6 x 30 mm (mavi)</td></tr><tr><td>Mikrodiseksiyon forseps (kavisli)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon makası</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z265969</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi sütür 4-0</td><td>Ethicon</td><td>G667G</td><td></td></tr><tr><td>Ötenazi ünitesi</td><td>Euthanex Smartbox</td><td>EA-32000</td><td></td></tr><tr><td>Cavilon No Sting Bariyer Filmi</td><td>3M Health Care</td><td>3346N</td><td></td></tr><tr><td>TH1/TH2 9-Plex tahlil, ultra hassas kit</td><td>MesoScale Discovery</td><td>K15013C-1</td><td></td></tr><tr><td>Uyarıcı elektrot cihazı</td><td>Biopac Systems</td><td>STIMSOC</td><td></td></tr><tr><td>Aesculap Isis tıraş makinesi</td><td>Agnthos</td><td>GT420</td><td></td></tr><tr><td>R70</td><td></td><td></td><td>Lantmannen, Stockholm, İsveç'ten kemirgen diyeti</td></tr></tbody></table>

kurtarma zamanı artan ve sınırlı enflamatuar yanıtları içinde vagus sinir stimülasyonu mekanizmaları eğitim için lps İdaresi azalmış

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

Enflamasyon, sitokinleri ve diğer inflamasyon mediatörlerini serbest bırakan aktive makrofajlar, monositler ve diğer bağışıklık hücrelerinin aracılık ettiği enfeksiyon ve doku hasarına lokal bir yanıttır. Uzun bir süredir, humoral ve hücresel mekanizmalar, immün yanıtı düzenlemedeki rolleri nedeniyle incelenmiştir, ancak immünoloji ve sinirbilim alanındaki son gelişmeler, ilginç terapötik potansiyele sahip spesifik nöral mekanizmaları da çözmüştür. Kolinerjik antienflamatuar yol (CAP) olarak adlandırılan, doğuştan gelen bağışıklık tepkilerini ve iltihabı çok güçlü bir şekilde kontrol etmek için tanımlanmıştır. 2000'li yılların başında, Tracey ve işbirlikçileri vagus sinirini uyaran ve yolun etkisini taklit eden bir teknik geliştirdiler. Metodoloji, kalp atış hızı değişkenliğinin deregülasyonu gibi aşırı stimülasyonun herhangi bir yan etkisinden kaçınmak için vagus sinirinin düşük voltaj ve frekansta elektriksel stimülasyonuna dayanmaktadır. Stimülasyon için elektrikli cihazlar artık mevcuttur, bu da laboratuvarda metodolojinin kurulmasını kolaylaştırır. Bu araştırmanın amacı, prostaglandinlerin OTP'ye potansiyel katılımını araştırmaktı. Ne yazık ki, daha önceki denemelere dayanarak, indüklenen enflamatuar yanıt ya çok yüksek ya da enzimatik metabolizma özellikleri için uygun olmadığı için orijinal protokolü kullanamadık. Orijinal cerrahi protokolünün farklı ayarları çoğunlukla değişmeden kaldı, ancak enflamatuar indüksiyon ve fedakârlıktan önceki zaman noktası ile ilgili koşullar amaçlarımıza uyacak şekilde iyileştirildi (yani, CAP'ın daha sınırlı inflamatuar yanıtlarda katılımını araştırmak için). 
Burada sunulan orijinal protokolün değiştirilmiş versiyonu, vagus sinir stimülasyonu ve analizi arasında daha uzun bir zaman aralığı içerir, bu da inflamatuar yanıtların daha düşük bir indüksiyonu ile ilişkilidir. Ek olarak, enjekte edilecek lipopolisakkaritlerin (LPS) seviyesini düşürürken, dalakta mekanik özelliklerle ilgili yeni gözlemlerle de karşılaştık.

TNFa ve interlökin-1 P (IL-1β) Düzeyi LPS Doz Cerrahisi sonra Zaman Atl Artan ve Azalan sonra Daha önce gösterildiği gibi, orijinal protokol kullanılarak, ki burada VNS TNFa seviyelerini ve IL-1 p (360.0 ± 40.21 ug / mg (39.7 ± 10.8 pg / VNS de mg, p &lt;0.001 versus SHAM içinde 169.3 ± 24.9 ug / mg) azalır intraperitoneal LPS enjeksiyonundan (15 mg / kg) (Şekil 2A) sonra dalak VNS içinde 191.7 ± 27.2 ug / mg, p ...

Vagus sinir stimülasyonunun periferik inflamasyonu azaltmada güçlü bir etkinliği olduğu kanıtlanmıştır. Burada, sınırlı inflamatuar yanıtlarda kolinerjik antiinflamatuar mekanizmaların daha ileri incelemelerine olanak tanıyan modifiye bir vagus sinir stimülasyon protokolü sunuyoruz.

Kurtarma Zamanı Artan ve Sınırlı Enflamatuar Yanıtları içinde Vagus sinir stimülasyonu Mekanizmaları Eğitim için LPS İdaresi Azalmış

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

Bu cerrahi müdahalenin genel amacı, enflamatuar durumlarda vagus siniri stimülasyonunun etkisini gözlemlemektir. Kolinerjik anti-enflamatuar yol olarak adlandırılan farklı mekanizmaları ve hücreleri analiz etmek ve anlamak. Bu yöntem, Feinstein Enstitüsü'ndeki Kevin Tracey laboratuvarında geliştirilmiştir.Yöntem, nöroimmünoloji alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Son gelişmeler sinir ve bağışıklık sistemleri arasında yakın bir bağlantı kurmaktadır. Bu tekniğin en büyük avantajı, bir laboratuvarda kolayca kurulabilmesidir.Ancak hayvan bakımı ve ameliyat protokolü ile ilgili önemli kurallara uyulması gerekmektedir. Vagus sinirinin tüm vücut boyunca dolaşan seyri ve çeşitli hayvan modellerinde bilgileri aşağı düzenleme yeteneği, stimülasyonunun birçok enflamatuar hastalığın tedavisinde yararlı olabileceğini düşündürmektedir. Genellikle bu tekniğe yeni olan kişiler, mikroskobik gözlem altında vagus sinirini karotis arterden tanımlamak ve izole etmek için mücadele edeceklerdir.Ancak, başlangıçta zor olsa da, zaman ve pratikle daha kolay hale gelir. Bilgisayarı ve uyarıcı elektroda bağlı veri toplama sistemini açarak başlayın. Veri toplama ve analiz yazılımını başlatın.Daha sonra mililitre lipopolisakkarit veya LPS başına 5 miligramlık bir alikot uygulayın ve tuzlu su ile mililitre başına beş miligram sıfır noktasına seyreltin. Bir indüksiyon odasında 25 gramlık bir fareyi uyuşturun. İstenilen anestezi seviyesine ulaşıldığında, hayvanı odadan maskeye taşıyın.Maskeyi beslemek için üç konektörü çevirin ve akış regülatörünü ayarlayın. Cerrahi işleme başlamadan önce doğru refleks kaybı ve dakikada yaklaşık 100 nefeslik düzenli solunum hızı ile cerrahi bir anestezi düzlemi olup olmadığını kontrol edin. Fare uygun şekilde uyuşturulduktan sonra, farenin bacaklarını yapışkan bantla tezgaha sabitleyin.Hayvanın burnunun hala maskeye dikkatlice yerleştirildiğinden emin olun. Cerrahi alanı onaylanmış prosedürlere göre uygun şekilde dezenfekte edin. Daha sonra, boyun hizasında ciltte bire bir nokta beş santimetrelik bir kesi yaptıktan sonra, cerrahi alanı görüntülemek için 12 nokta beş x objektifli bir stereo mikroskop yerleştirin.Forseps ile deri ve yağ katmanlarını çıkararak sternokleidomastoid kasını bulun. Sternokleidomastoid kası geri çekin ve forsepsleri hem sol vagus sinirinin hem de karotis arterin arkasına hareket ettirin. Forsepsleri sinir ve arter arasına çok dikkatli bir şekilde yerleştirerek siniri arterden izole edin.Bu, prosedürde kritik bir adımdır, çünkü sinir ve arter birbirine yakın olduğundan, damarları kesmek ve hayvanları öldürmek çok kolaydır. Bununla birlikte, forsepsleri sinir ve arter arasına çok dikkatli bir şekilde yerleştirerek, sonunda vagus sinirini ayırmak ve izole etmek mümkündür. Şimdi, elektrodu vagus sinirinin altına yerleştirin.İğne elektrot oldukça uzun olduğu için sinir hafifçe hareket etse bile elektrot ile her zaman temas halinde olacaktır. Daha sonra intraperitoneal bir LPS enjeksiyonu yapın ve stimülasyona başlamadan önce beş dakika bekleyin. Beş dakika sonra, edinme yazılımındaki başlat düğmesine basarak vagus sinirini beş dakika boyunca beş volt ve bir hertz'de uyarın.Stimülasyon süresi sona erdiğinde, elektrodu çıkarın ve ardından hayvanın yarasını cerrahi dikiş ipliği ile dikin. İyileşmeyi iyileştirmek ve enfeksiyonlardan korunmak için yaranın üzerine acı çekmeyen bir bariyer filmi püskürtün. Son olarak, hayvanı temiz bir kafese taşıyın ve tam bilincini geri kazanmasını izleyin.Aşağıdaki görüntüler, vagus sinir stimülasyonunu takiben TNF alfa ve IL bir beta seviyeleri üzerinde azalmış LPS konsantrasyonunun ve artan latantanın fedakarlık üzerindeki etkisini göstermektedir. Burada, orijinal paradigmanın, sahte olarak çalıştırılan kontrollere kıyasla hem TNF alfa hem de IL bir betayı önemli ölçüde azalttığı görülebilir. Bu videoda gösterilen protokol, TNF alfa seviyelerini önemli ölçüde azaltır, ancak IL bir beta seviyesini azaltmaz.Burada görüldüğü gibi, LPS enjeksiyonu olmadan altı saatlik bir iyileşme, TNF alfa veya IL bir beta seviyelerini etkilemez. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde yapılırsa yaklaşık 20 dakika içinde yapılabilir. Geliştirildikten sonra bu teknik, nöroimmünoloji alanındaki araştırmacıların önünü açmıştır.Merkezi sinir ve bağışıklık sistemi arasındaki bağlantıyı incelemek. Ayrıca yeni organların vagus sinir innervasyonunu ve kronik enflamatuar hastalıklarda kolinerjik antienflamatuar yolun etkisini inceleyin. Bu videoyu izledikten sonra, vagus sinirini nasıl bulacağınızı, izole edeceğinizi ve uyaracağınızı iyi anlamış olmalısınız.Ayrıca, indüklenen iltihaplanma seviyesinin ve hayvanın iyileşme süresinin dikkate alınması gereken önemli konular olabileceğini unutmayın.

increased-recovery-time-decreased-lps-administration-to-study-vagus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Vagus sinir stimülasyonu (VNS) davranışları bir dizi değiştirmek için ön beyinde hedeflenen sinaptik plastisite ikna etmek için bir araç olarak ortaya çıkmıştır. Bu protokol korku söndürme bellek konsolidasyonu kolaylaştırmak için VNS uygulamak açıklamaktadır.

Aracı Olarak vagus sinir stimülasyonu Extinction Öğrenme İlgili Pathways Plastisitesi tetikleyebilecek

Bu kağıt başarısız bel cerrahisi hastalarda nöropatik bel ağrısı tedavisi için birden çok sütun bir kurşun ile omurilik stimülasyon kullanan bir yöntem sunar.

Multicolumn-kurşun omurilik stimülasyon başarısız bel cerrahisi hastalarda bel ağrısı tedavisi

Vagus sinir stimülasyonu (VNS) tedaviye dirençli depresyon (TRD) için bir yardımcı tedavi olarak etkili olduğu gösterilmiştir. VNS antidepressive ve antisuicidal etkileri ve yaşam kalitesi gelişmeler yol açar. Bu iletişim kuralı bir adım adım sunar kılavuz yönetimi ve vagus sinir Stimülatörü TRD etkili tedavisi için ayarlama.

Vagus sinir stimülasyonu ek bir Neurostimulation aracı olarak tedaviye dirençli depresyon

Tekniği, potansiyel hedefleri ve uygun yönetim Transkutanöz kulak çevresi vagus sinir stimülasyonu (taVNS) insan kulağının üzerinde metodolojik açıklamasını açıklanmıştır.

Laboratuvar Yönetimi, transkütanöz kulak çevresi Vagus sinir stimülasyonu (taVNS): teknik, hedefleme ve dikkat edilmesi gereken noktalar

Burada uyarılmış ve spontan elektromiyografik potansiyellerin in vivo kronolojik kayıt için implante edilebilir bir sistemin üretimi için bir protokol sunulmaktadır. Sistem sinir yaralanması sonrasında laringeal kasların reinnervasyon araştırılması için uygulanır.

Vivo Elektromiyografide Kronik İçin İmplante Edilebilir Bir Sistem

Küçük kemirgenlerde kullanılmak üzere kronik implante edilebilir periferik sinir manşet elektrotları oluşturmak için mevcut yaklaşımlar genellikle özel ekipman ve / veya yüksek eğitimli personel gerektirir. Bu protokolde kronik olarak implante edilebilen manşet elektrotlar imal etmek için basit, düşük maliyetli bir yaklaşım göstermekte ve sıçanlarda vagus sinir stimülasyonu (VNS) için etkinliğini gösteriyoruz.

Sıçanlarda Kronik İmplantasyon için Periferik Sinir Stimülasyon Elektrotlarının Hazırlanması

Modifiye cerrahi, hem ortak peroneal hem de sural sinirleri yaralamak için sadece bir ligasyon ve bir kesi gerektiren fare veya sıçan korunmuş sinir yaralanması modeli için basitleştirilmiş bir yöntemdir.

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Mevcut protokol, sıçanlarda abdominal vagus sinirine bir elektrot dizisi implante etmek için cerrahi tekniği ve implante edilen cihazı kullanarak kronik elektrofizyoloji testi ve stimülasyon yöntemlerini açıklamaktadır.

Uyanık Sıçanlarda Abdominal Vagus Sinir Stimülasyonu ve Kayıt Çalışmaları için İmplantasyon Cerrahisi

Bu çalışmada, invaziv olmayan endotrakeal instillasyon tekniğinin, akciğerlere hassas LPS iletimi sağlamak için temel bir laringoskop kullanılarak sıçanlarda ALI geliştirdiği gösterilmiştir. LPS, laringoskop kullanılarak endotrakeal tüp aracılığıyla yerleştirilir. Akciğer yaralanmasının büyüklüğü birden fazla zaman noktasında değerlendirilir.

Kemirgenlerde akut akciğer hasarını indüklemek için lipopolisakkaridin invaziv olmayan endotrakeal uygulaması

Kemik iliği nakli Kemik iliği kaynaklı hücrelerin genotipi değiştirmek için bir yol sağlar. Ilgilenilen genin kemik iliğinden elde edilen hücreler ve olmayan kemik iliğinden elde edilen hücreler, hem de ifade etmek gerekirse, kemik iliği transplantasyonu olmayan kemik iliği kaynaklı hücre genotip değiştirmeden, farklı bir genotip için kemik iliği kaynaklı hücre değiştirebilir.

Kemik İliği Transplantasyonu tarafından Fare Kolit immün ve non-immün Hücreler Gen Ekspresyonu İşlevsel Rolleri Farklılaşan

Keşfedin vagus sinir stimülasyonunun enflamatuar yanıtlar üzerindeki etkilerini ve kolinergik anti-enflamatuar yolaktaki mekanizmaları fare modelinde. Bu cerrahi teknik nöroimmünoloji araştırmaları için uygulanabilir bir yöntem sunar.

Kurtarma Zamanı Artan ve Sınırlı Enflamatuar Yanıtları içinde Vagus sinir stimülasyonu Mekanizmaları Eğitim için LPS İdaresi Azalmış (Video) | JoVE Journal

Kurtarma Zamanı Artan ve Sınırlı Enflamatuar Yanıtları içinde Vagus sinir stimülasyonu Mekanizmaları Eğitim için LPS İdaresi Azalmış

Daha fazla video keşfet