Name: 3D Tüm kalp Miyokard Doku Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 53 s
Description: Keşfedin, domuz miyokard infarktüsü modelinde 3D bütün kalp doku işleme protokolü ile intramyokardiyal enjeksiyonların hedefleme doğruluğunu değerlendirme yöntemini. Bu standartlaştırılmış yaklaşım, kardiyovasküler rejeneratif tıpta güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar hayvan deneylerinde ile yardım için Marlijn Jansen Joyce Visser ve Martijn van Nieuwburg teşekkür etmek istiyorum. Biz büyük ölçüde MR görüntüleme ile yardım için Martijn Froeling ve Anke Wassink edersiniz.

In vivo deney Laboratuar Hayvan Araştırmaları Enstitüsü tarafından hazırlanan Laboratuvar Hayvanları Bakım Kılavuzu esaslarına göre ve Kullanımında yürütülmüştür. Deney yerel Hayvan Deneyleri Komitesi tarafından onaylandı. Enjekte ve Gömme Çözüm hazırlanması 1. <ol><li> Enjekte edilebilir jel hazırlayın. <ol><li> 13, daha önce tarif edilen protokollere 12 uygun olarak üreido-pirimidinon (UPy) jel, 1 mL hazırlayın. </li><li> çözeltisine ilave süperparamanyetik demir oksit parçacıkları (SPIOs), 15 ug / mL'lik bir konsantrasyon elde ve homojen dağılımı için, 5 dakika için karıştırın için. </li><li> 10.000 boncuk / mL'lik bir konsantrasyon elde etmek için çözeltiye floresan mikroboncuklar ekleyin ve homojen dağılımı için, 5 dakika için karıştırın. </li><li> karanlık ortamda, oda sıcaklığında elde edilen karışım saklayın. Sıcak ve girdap veya karıştırma tkısa bir süre enjeksiyon prosedürü önce o çözüm. </li></ol></li><li> gömme çözeltisi hazırlayın. <ol><li> Oda sıcaklığında musluk suyu ile başlayın ve (ağar) ağırlıkça% 4 arasında bir konsantrasyona agaroz ekleyin. </li><li> Yavaş yavaş bir mikrodalga fırın kullanılarak kaynama noktasına çözeltinin ısıtılması ve ısıtma sırasında sık sık karıştırılır. kaynama noktası, depolama ulaşan ve 2 saat boyunca 70 ° C'nin üzerinde, agar çözeltisi tutmak üzerine sıkışmış hava yüzey sağlamak için. </li><li> ağar gömme zamanına kadar 50 ila 60 ° C arasındaki bir sıcaklıkta, oda sıcaklığında soğumasına izin verin. </li></ol></li></ol> 2. Enjeksiyon Yöntemi <ol><li> Daha önce 14 tarif edildiği gibi, önceden ilaç (anti-aritmik maddeler, anti-platelet terapi ve ağrı kesiciler), anestezi, toplardamar erişim ve entübasyon gerçekleştirin. </li><li> Bir intramiyokardiyal enjeksiyon kateter (Malzemelerin Tablo) kullanılarak enjeksiyon gerçekleştirin. Her enjeksiyon için, 0 için.Karışımın 2 ml bir enjeksiyon cihazı kullanılarak yaklaşık olarak 0.3 mL / dakikalık bir sabit oranda bir bolus olarak enjekte edilir. IBZ 12 boyunca farklı pozisyonlarda enjeksiyon yerleştirin. </li><li> önce hayvan ötenazi bir gadolinyum bazlı kontrast madde, 15 dakika, 0.2 ml / kg (1.0 mmol / ml) uygulayınız. </li><li> intravenöz hayvan euthanize% 7.5 potasyum klorür 20 mL yönetmek. </li><li> Koudstaal ve arkadaşları tarafından tarif edildiği gibi, 8.3 - protokol takip güvenli mediastinal erişim 8.2 adımları tekrarlayın. 14. Sağ atrium dan aşağı vena kava 5 cm kesin ve bir emme cihazı ile kan akan çıkarın. kalp şekilde kesilmesi ve oda sıcaklığında,% 0.9 tuzlu su ile yıkayın. </li></ol> 3. Gömme Prosedürü <ol><li> kalbi hazırlayın. <ol><li> bozulmamış Atriumlarm ve ventriküllere tutarken kalpten perikard çıkarın. ± 1 cm Klinkenberg kullanılarak aort kapağının çıkan aort teşrihmakas. atriyum aşağı vena kava ± 1 cm kesin ve pulmoner venlerin için aynı işlemi. </li><li> Plastik bir gömme kap (17 x 15 x 15 cm, G x D x H) gömme sırasında kalbin yüzmesini önlemek için 2-0 sütür ile (Şekil 1A) tabanına kalbin apeksi dikin. </li><li> Kalp ortalanmış emin ve kabın (Şekil 1B) duvarlarını temas etmeyen, 2-0 kullanılarak kabın jantlara aort kalan kısmını dikin. </li></ol></li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54974/54974fig1.jpg"> Şekil 1: Şematik genel ve katıştırma Konteyner fotoğrafı. (A), gömme işleminin şematik gösterimi. Kalp (kırmızı) sütür kullanılarak konteyner (mavi) içinde sabitlenir. Agar çözeltisi ile kalbi doldurduktan sonra kalbin çevresinde boşluk doldurulur. En sonunda,iki sert plastik tüpler (sarı) görüntü kaydı sırasında bir referans olarak hizmet etmek üzere, kalp dokunmadan değil, yan yana, bir kap içinde konumlandırılır. Gömme kap içinde sabitlenmiş bir kalbin (B) fotoğrafı. Dikişler sivrisinek kelepçeler kullanılarak kap kenarına sabitlenir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54974/54974fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.</a> <ol start="2"><li> bir uç-diastolik geometriye kalbin yerleştirin. NOT: hava kabarcığı yaratılış önlenmesi gereklidir. Büyük hava agar çözeltisi içinde mevcut kabarcıklar halinde hava kabarcıkları yüzey sağlayan, 40 ° C 'de agar tutun. <ol><li> sivrisinek kelepçeler kullanılarak ven inferior vena Kelepçe. Yavaş yavaş sağ atriyum ve ventrikül de tamamen dolana kadar üstün kaval damar yoluyla sağ atriyum içinde 50 mL'lik bir şırınga kullanılarak sıvı agar enjekte edilir. </li><li> Mosquit kullanılarak pulmoner venlerin KelepçeO kelepçeler. Yavaşça aort valfler üzerinden retrograd bir agar doldurulmuş 50 ml hava geçmektedir. Yavaş yavaş LV ve sol atriyum tamamen dolana kadar sol ventrikül (LV) solüsyonu enjekte edilir. LV doldurduktan sonra LV içinde agar tutmak için aort kelepçe. </li><li> Kalp tamamen kaplıdır kadar kaba kalan agar dökün. Daha sonra görüntü kaydı (Şekil 1A) referans yapılar olarak hizmet etmek için gömme kap içinde iki katı plastik tüpler yerleştirin. Tüpler konteyner veya kalbin duvarlara dokunmayın emin olun. </li><li> 7 ° C - agar 2 katılaşmaya olsun. </li></ol></li></ol> 4. Görüntü Alma <ol><li> Kap içinde gömülü olduğu kalbin enine ex vivo MR taramaları gerçekleştirin. <ol><li> Bir kafa bobin içinde gömülü kalp (Malzemelerin Tablo) kap yerleştirin. </li><li> Dilimler, kabın tabanına paralel Angulate. kullanımHer bir ex vivo MR dizisinde aynı yönlendirme ve bir açı vardır. </li><li> miyokardı görselleştirmek için, bir sıvı-zayıflatılmış ters kurtarma aşağıdaki parametrelerle (FLAİR) sekansı gerçekleştirmek: tekrar zamanı [TR] / eko zamanı [TE] = 10 s / 140 ms, dönüş açısı = 90 °, piksel boyutu = 0.5 x 0.5 mm, [FOV] = 169 x 169 mm alanı, 320 x 320 matris ve 3 mm kesit kalınlığı. </li><li> [TR] / [TE] = 5.53 ms / 1.69 ms, dönüş açısı = 25 °, piksel boyutu = 1.0 x 1.0 mm, [miyokard enfarktüsü görselleştirmek için aşağıdaki parametrelerle (LGE) sekansı geliştirilmiş bir geç-gadolinyum gerçekleştirmek FOV] = 169 x 169 mm, 176 x 176 matris ve 3 mm kesit kalınlığı. </li><li> - 24.6 ms, dönüş açısı = 15 °, piksel [TR] / [TE] = 88.7 ms / 1.9 bir dizi ile 15 eş dağılmış TEler: bir T2, aşağıdaki parametreler ile * -ağırlıklı gradyan eko dizisi yerine, SPIOs görselleştirmek için boyutu = 0.5 x 0.5 mm, [FOV] = 169 x 169 mm, 320 x 320 matris ve 3 mm kesit kalınlığı. </li></ol></li><li> Doku süreçşarkı söyle <ol><li> baş aşağı kabı çevirin ve kaptan, kalp de dahil olmak üzere, katı agar çözüm kaldırmak için agar ve kabın kenarları arasındaki havayı bekleyin. katı agar plastik çubuklar çıkarın. </li><li> Bölüm et dilicisi kullanılarak kalbin tabanına apeksten 5 mm dilimleri kalp içeren agar bloğu. Agar bloğun altına paralel keserek kesik dilimler edinilen MR görüntülerinde aynı açısal şeklinin tutun. </li><li> 37 ° C'de% 0.9 salin içinde çözülmüş 2,3,5-trifenil-(TTC) ile 1 ağırlık% 'si, 15 dakika boyunca (kalp de dahil), agar dilimleri Leke ve dik bir görünüm, her iki tarafta da dilim fotoğraf (Şekil 2A). Daha sonra, dikkatli bir şekilde% 0.9 salin içinde dilimleri yıkayın. NOT: Bu çalışmada, uygun bir lens / objektif, bir tripod ve tekdüze aydınlatma ile dSLR kurulum kullandı. Ancak, fotoğraflar, sadece yara bölgenin değerlendirilmesi için bir kontrol olarak görev yaptıbu yüzden farklı bir düzenleme kullanmış olabilir. </li></ol></li><li> floresan görüntüleme NOT: bu nedenle seçilen uyarım lazer floresan mikrotaneciklerin uyarma ve emisyon dalga boyları bağlı olarak (örneğin, burada kullanılan kırmızı microboncuklar sırasıyla 580 nm ve 605 nm uyarma ve emisyon dalga boylarına sahiptir uygun filtre bloğu ve uyarma lazerler seçmek ve bant geçiş filtreleri, 532 nm, 580/30 nm ve 610/30 nm, sırasıyla) ayarlanmıştır. <ol><li> Değişken modu tarayıcı üzerinde Seç floresan modu görüntüleme. 430 V veya eşdeğeri fotomultiplikatör tüpü ve 100 x 100 um piksel boyutunu ayarlayın. Floresan mikro boncuklar uyarılma dalga boyunda bir uyarım lazer (532 nm), en yakın seçin. </li><li> Birinci filtre blok için, enjekte edilen flüoresan boncuklar (kanal 1) emisyon dalga boyu ile örtüşen bir bant geçiş filtresi (580/30 nm) seçin. dışındaki bir ikinci filtre bloğu (610/30) için bir bant geçiren filtre seçinGörev dalga boyu (kanal 2). İkinci filtre bloğu bir negatif kontrol olarak hizmet eder ve bozulmamış enjeksiyon bölgeleri tutarken otomatik floresan kaldırmak için: NOT. </li><li> İki kanalları kullanarak değişken modlu lazer tarayıcının floresan modunda Agar dilim her iki tarafını tarayın. Her dilim tamamen referans delikleri dahil taranır emin olun. </li></ol></li></ol> 5. Post-işleme NOT: görüntü post-processing ilk adım endo- ve epikardiyal sınırları yanı sıra enjeksiyon yerlerini iz in-house geliştirilen komut dosyalarını kullanarak miyokard manuel segmentasyondur. Bu MR ve floresan taramaları ikisi için aynıdır. <ol><li> Segment MR taramalarında miyokard. <ol><li> Segment FLAIR MR dizisi görüntülerde endokardiyal ve epikardiyal LV borders. </li><li> LGE MR dizisine IgE MR veri kümesi ve segmente aşama 5.1.1 gelen yara AG bölümleme kopyalama. </li><li> AG miyokardiyumda * -ağırlıklı veri kümesi ve kademeli SPIO çökelmeler T2 aşama 5.1.1 den miyokardiyum bölümleme kopyalar. </li></ol></li><li> floresan görüntüleri işleyin ve segmentasyonları gerçekleştirin. <ol><li> Değişken modlu tarayıcı elde edilen dosyaları yükleyin ve her kesit kalp dilim ayrı bir görüntüsünü oluşturuyor. </li><li> yönünü apekse ve apeksinden tabanına dönük olan iki kanal için bir istif halinde flüoresan görüntülerini sıralamak için bir baz tarandı dilimleri çevirin. </li><li> floresan görüntülerde Segment endokardiyal ve epikardiyal LV borders. </li><li> Segment floresan görüntülerde el yara ve kullanımı LGE-MRI taraması ve fotoğraflar yara morfolojiyi onaylamak için. </li><li> otomatik floresan hariç tutmak için kanal 1 görüntü yığınından kanal 2 Görüntü yığını çıkarın. Elle segmenti floresan microbead ifadelerin veya onay için * görüntüleri T2 kullanın. </li></ol></li><li> YaratmakBir anatomik doğru 3 boyutlu geometri, referans yapılarının (sert tüpler tarafından oluşturulan delikler) göre görüntü yığını içinde dilimlerinin bir katı kaydını gerçekleştirilir. Hesaplayın ve her resmin tatbik çeviri ve döndürme saklayın. </li><li> görüntü yığınlarından ve segmentasyon için saklanan dönüşümleri uygulayın. Doğrusal Olarak orijinal kesit kalınlığı yeniden yapılandırmak ve verilerin bir 3D modeli oluşturmak için dilimlerin her iki tarafın segmentlerini sokmak. </li></ol> 6. analizi <ol><li> Enjeksiyon doğruluğunu değerlendirmek için enjeksiyon sitelerin merkezleri ve IBZ arasındaki mesafenin 2D ve / veya 3D ölçümlerini gerçekleştirin. LV Segmentasyonun endokardiyal sınırı boyunca mesafeyi ölçün. Şekil 2C ve 2F'de ise, 2 ve 3 boyutlu ölçümler örnek kırmızı çizgi ile gösterilir. </li></ol>

<ol><li>Nowbar, A. N., Howard, J. P., Ja Finegold,, Asaria, P., Francis, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2014+global+geographic+analysis+of+mortality+from+ischaemic+heart+disease+by+country%2C+age+and+income%3A+statistics+from+World+Health+Organisation+and+United+Nations%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">2014 global geographic analysis of mortality from ischaemic heart disease by country, age and income: statistics from World Health Organisation and United Nations.</a> Int J Cardiol. 174 (2), 293-298 (2014).</li>
<li>Kannel, W. B., Belanger, A. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2000773">Epidemiology of heart failure.</a> Am Heart J. 121 (3), 951-957 (1991).</li>
<li>Ibáñez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van De Werf, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+therapies+for+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury.</a> J Am Coll Cardiol. 65 (14), 1454-1471 (2015).</li>
<li>Bartunek, J., Vanderheyden, M., Hill, J., Terzic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+as+biologics+for+cardiac+repair+in+ischaemic+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">Cells as biologics for cardiac repair in ischaemic heart failure.</a> Heart. 96 (10), 792-800 (2010).</li>
<li>Orlic, D., Kajstura, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+cells+regenerate+infarcted+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Bone marrow cells regenerate infarcted myocardium.</a> Nature. 410 (6829), 701-705 (2001).</li>
<li>Nguyen, P. K., Lan, F., Wang, Y., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging%3A+Guiding+the+Clinical+Translation+of+Cardiac+Stem+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging: Guiding the Clinical Translation of Cardiac Stem Cell Therapy.</a> Circ Res. 109 (8), 962-979 (2011).</li>
<li>Psaltis, P. J., Worthley, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoventricular+electromechanical+mapping-the+diagnostic+and+therapeutic+utility+of+the+NOGA+XP+Cardiac+Navigation+System%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Endoventricular electromechanical mapping-the diagnostic and therapeutic utility of the NOGA XP Cardiac Navigation System.</a> J Cardiovasc Transl Res. 2 (1), 48-62 (2009).</li>
<li>Tomkowiak, M. T., Klein, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+transendocardial+therapeutic+delivery+guided+by+MRI-x-ray+image+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Catheter+Cardiovasc+Interv%22%5BJournal%5D)">Targeted transendocardial therapeutic delivery guided by MRI-x-ray image fusion.</a> Catheter Cardiovasc Interv. 78 (3), 468-478 (2011).</li>
<li>Dauwe, D. F., Nuyens, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+rotational+angiography+fused+with+multimodal+imaging+modalities+for+targeted+endomyocardial+injections+in+the+ischaemic+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J+Cardiovasc+Imaging%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional rotational angiography fused with multimodal imaging modalities for targeted endomyocardial injections in the ischaemic heart.</a> Eur Heart J Cardiovasc Imaging. 15 (8), 900-907 (2014).</li>
<li>van Slochteren, F. J., van Es, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodality+infarct+identification+for+optimal+image-guided+intramyocardial+cell+injections%5BTitle%5D)+AND+%22Neth+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Multimodality infarct identification for optimal image-guided intramyocardial cell injections.</a> Neth Heart J. 22 (11), 493-500 (2014).</li>
<li>van Slochteren, F. J., van Es, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dimensional+fusion+of+electromechanical+mapping+and+magnetic+resonance+imaging+for+real-time+navigation+of+intramyocardial+cell+injections+in+a+porcine+model+of+chronic+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cardiovasc+Imaging%22%5BJournal%5D)">Three dimensional fusion of electromechanical mapping and magnetic resonance imaging for real-time navigation of intramyocardial cell injections in a porcine model of chronic myocardial infarction.</a> Int J Cardiovasc Imaging. 32 (5), 833-843 (2016).</li>
<li>Pape, aC. H., Bakker, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Injectable+and+Drug-loaded+Supramolecular+Hydrogel+for+Local+Catheter+Injection+into+the+Pig+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An Injectable and Drug-loaded Supramolecular Hydrogel for Local Catheter Injection into the Pig Heart.</a> J Vis Exp. (100), (2015).</li>
<li>Bastings, M. M. C., Koudstaal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fast+pH-switchable+and+self-healing+supramolecular+hydrogel+carrier+for+guided%2C+local+catheter+injection+in+the+infarcted+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">A fast pH-switchable and self-healing supramolecular hydrogel carrier for guided, local catheter injection in the infarcted myocardium.</a> Adv Healthc Mater. 3 (1), 70-78 (2014).</li>
<li>Koudstaal, S., Jansen of Lorkeers, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+infarction+and+functional+outcome+assessment+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Myocardial infarction and functional outcome assessment in pigs.</a> J. Vis. Exp. (86), (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu protokole göre bütün kalp 3D miyokardiyal doku işleme enfarktüs, IBZ ve kardiyak anatomiye göre yapılan enjeksiyon 3D analiz sağlar yapısal bir yöntem sağlar. Kalbin dolum hacmi istenen analizine bağlıdır. Bu çalışmada, enjeksiyon doğruluğunu değerlendirmek için, biz mümkün olduğunca yakından diyastol sonu geometriyi benzemeye kalp doldurmak amaçladık. Bu zorlamak için, LV apeks kabın tabanına sabitlenir ve pulmoner venler sıkıştırılmış iken AG agar ile doldurulur. LV doldurulduğunda, aort LV dışarı akan ve mümkün ol...

İskemik kalp hastalığı geçmiş yıllarda 1 ölüm dünyanın önde gelen nedenidir olmuştur. Miyokardiyal enfarktüs sonrası akut tedavi perkütan koroner müdahale ya da koroner arter bypass aşılama yoluyla miyokard kan akışının sağlanması amaçlanmaktadır. Şiddetli enfarktüsü olarak, geniş bir miyokard alanı izlerini taşıyor ve bu vakalar genellikle iskemik kalp yetersizliği (KY) 2 sonuçlanabilir. HF önlenmesi odaklanmak ve HF hastalar için kalp fonksiyonunun korunması için mevcut tedavi seçenekleri değil yenilenmesine. Son on yıl içinde, kardiyak rejeneratif tedaviler HF 3 için tedavi seçeneği olarak incelenmiştir. Bu terapi revaskülarizasyon, kardiyomiyosit koruması, farklılaşmayı etkileyen doğrudan yaralı miyokardiyuma, örneğin kök hücre ya da büyüme faktörleri gibi olarak biyolojik, sağlamayı amaçlar ve büyüme 4.. optimum içinTerapötik etki, biyolojik olarak biyolojik hayatta kalma ve hedef bölge 5, 6 için en uygun etki için iyi bir doku perfüzyonunun kolaylaştırmak için enfarktüs sınır bölgesi (IBZ) enjekte edilmelidir varsayılmaktadır. Çoklu teknikler intramiyokardiyal enjeksiyonları 7, 8, 9, 10, 11 rehberlik etmek IBZ belirlenmesini ve görselleştirme gerçekleştirmek için geliştirilmiştir. IBZ tanımlanması ve görselleştirme yanı sıra, teslimat da kullanılabilir biyomalzeme ve enjeksiyon kateter dayanır. uygulama teknikleri püskürtme doğruluğunu doğrulamak için, doğru ve tekrarlanabilir bir nicelendirme yöntemi gerekmektedir. Biz bütün kalp miyokard dokusu iki boyutlu (2D) sunmaktadır işleme ve üç dimensio için bir protokol geliştirdilernitel ve nicel çalışma için kullanılabilecek nal (3D) görüntüleme, hedeflemektedir. protokol gömme işlemini ve dijital görüntü analizi kapsar. Bu çalışmada, kronik miyokart enfarktüsü, büyük domuz modelinde IBZ içinde intramiyokardiyal enjeksiyonları hedefleme doğruluk değerlendirme için bir protokol göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>% 0.9 Saline</td><td>Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Roche Teşhis</td><td></td><td>Bilimsel sınıf çok amaçlı agar Biyomoleküler</td></tr><tr><td>floresan tarayıcı Typhoon 9410 &nbsp;</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gömme kabı</td><td></td><td></td><td>Plastik, boyutlar 17 x 14,5 x 14 cm</td></tr><tr><td>FluoSpheres Polistiren Mikroküreler</td><td>Invitrogen</td><td>F8834</td><td>kırmızı, 10 ve mikro; m</td></tr><tr><td>Gadolinium</td><td>Gadovist</td><td></td><td>1.0 mmol/mL</td></tr><tr><td>dS 32 kanallı kafa bobini</td><td>Philips</td><td></td><td>Veya benzeri</td></tr><tr><td>Matlab</td><td>Mathworks</td><td></td><td>Uyumluluğu sağlamak için 2015a veya daha yenisi</td></tr><tr><td>Et dilimleyici</td><td>Berkel</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Myostar enjeksiyon kateteri</td><td>Biosense Webster</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Süper paramanyetik demir oksit parçacıkları</td><td>Sinerem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trifenil-tetrazolyum klorür</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>UPy-PEG10k</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 2-0</td><td>Ethicon</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

3d tüm kalp miyokard doku analizi

3D Whole-heart Myocardial Tissue Analysis

Kardiyak rejeneratif tedaviler korumak ve iskemik kalp hastalığı olan hastalarda yaralanan kalbi onarmak amaçlıyoruz. kök hücreler veya enfarktüs sınır bölge (IBZ) içine anjio veya vaskülojenezi artırmak için diğer biyo enjekte ederek, doku perfüzyonu geliştirilir ve miyokardın daha fazla zarar korunabilir. Maksimum terapötik etkisi için yenileyici madde iyi IBZ teslim edilir varsayılmaktadır. Bu doğru iğnesi yapılması gerekir ve yeni enjeksiyon tekniklerinin geliştirilmesine yol açmıştır. Bu yeni teknikler geçerli kılmak için, miyokardiyal doku analizine dayalı bir doğrulama protokolü tasarladık. Bu protokol ayrıntılı iki boyutlu (2D) ve kardiyak anatomi ve intramiyokardiyal enjeksiyonların üç boyutlu (3D) analizine olanak tanır bütün kalp miyokard doku işleme içerir. bir domuz olarak, miyokardiyal enfarktüs, koroner arter, sol ön inen bir 90-dakikalık bir oklüzyonundan ve oluşturuldu. Dört hafta sonra, bir mikstsüperparamanyetik demir oksit parçacıkları (SPIOs) ve flüoresan boncuklar ile bir hidrojel ure minimal invaziv endokardiyal yaklaşım kullanılarak IBZ enjekte edilmiştir. 1 saat enjeksiyon işleminden hemen sonra, domuz ötenazi edildi ve Kalp kesilip çıkartılmış ve agaroz gömülü (ağar). agar sertleşmesinden sonra, manyetik rezonans görüntüleme (MRI), kalbin dilimleme ve fluoresans görüntü gerçekleştirilmiştir. görüntü post-processing sonra 3D analiz IBZ hedefleyen doğruluğu değerlendirmek amacıyla yapıldı. Bu protokol, IBZ içine intramiyokardiyal enjeksiyonları hedefleme doğruluk değerlendirme için yapılandırılmış ve yeniden üretilebilir bir usul sağlamaktadır. yara dokusu ve / veya bütün kalp enjeksiyon doğruluk doğrulama işleme istendiği zaman protokolü kolay kullanılabilir.

Doku Gömme gömme işlemi sayesinde, bir uç-diastolik benzeri geometri kurulmuştur. Başarılı bir şekilde doku sağlayarak, kalp dokusuna yapışık agar eşit kesit kalınlıkları (Şekil 2A ve 2C) ile istenilen açı ile dilimlenmiş. Scar- ve Enjeksiyon yerinde Değerlendirmesi Her görüntü...

Bu protokol, MRI ile bütün kalp miyokard dokusu 3D karşılaştırmak için yeni bir yöntem tarif eder. Bu miyokard enfarktüsü, kronik domuz modelinde enfarktüs sınır bölgesinde intramiyokardiyal enjeksiyonları tam olarak değerlendirilmesi için tasarlanmıştır.

3D Tüm kalp Miyokard Doku Analizi

Cardiac regenerative therapies aim to protect and repair the injured heart in patients with ischemic heart disease. By injecting stem cells or other ...

Ekran okuyucusu}Bu protokolün genel amacı, enfarktüs sınır bölgesine intramiyokardiyal enjeksiyonların hedefleme doğruluğunu değerlendirmek için kullanılabilecek 3D tüm kalp dokusu işleme için yapılandırılmış ve tekrarlanabilir bir yöntemi kolaylaştırmaktır. Bu yöntem, enjeksiyon tekniklerinin uygulama geliştirme ve optimizasyonu gibi kardiyorejeneratif tıp alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, 3D tüm kalp dokusu işleme için standartlaştırılmış ve tekrarlanabilir bir yöntem sunmasıdır.Bu tekniğin etkileri, kardiyak rejeneratif tedavilerin geliştirilmesine ve normal uygulama tekniklerinin enjeksiyon doğruluğunun doğrulanmasına kadar uzanır. Bu kardiyak kök hücre tedavisinin amacı, lokal vaskülogenezin uyarılması ve kardiyomiyositlerin korunması için hücrelerin enfarktüs sınır bölgesine enjekte edilmesidir. Diyastolik son aşamada kalbi yakalamak pratik ve sabır gerektirir.Bu adımların görsel bir gösterimi çok önemlidir. Perikardını mikroboncuk enjekte edilen kalpten ayırarak başlayın, kulakçıkları ve ventrikülleri sağlam tutun. Dokunun tamamı çıkarıldığında, çıkan aortu aort kapağının yaklaşık bir santimetre yukarısından incelemek için Klinkenberg makasını kullanın ve alt kaval ve pulmoner damarları atriyumdan yaklaşık bir santimetre uzakta kesin.Yüzdürmeyi önlemek için kalbin tepesini plastik gömme kabının dibine sabitledikten sonra, aortun kalan kısmından kabın kenarlarına 2-0 dikiş yerleştirin ve kalbi sabitleyin. Kalbin ortalanmış olmasına ve kabın duvarlarına değmemesine dikkat edin. Organ, diyastolik benzeri bir geometri ile sabitlendiğinde, inferior kaval veni kavramak için sivrisinek kıskaçları kullanın ve 50 mililitrelik bir şırınga kullanarak taze hazırlanmış 50 ila 60 santigrat derece agarı, hem sağ atriyum hem de ventrikül tamamen dolana kadar superior kaval veni yoluyla sağ atriyuma yavaşça enjekte edin.Diyastol ucu geometriye mümkün olduğunca benzeyen gömülü bir kalp elde etmek için, sol ventrikül tepesini kabın dibine sabitleyin ve pulmoner venler klemplenirken sağ ventrikülü agar ile doldurun. Daha sonra, pulmoner damarlara bir sivrisinek kelepçesi yerleştirin ve aort kapakçıklarından retrograd yönde 50 mililitrelik yeni bir agar dolu şırıngayı yavaşça geçirin. Ventrikül ve sol atriyum tamamen dolana kadar solüsyonu sol ventriküle yavaşça enjekte edin ve sol ventrikül dolduktan sonra aortu sıkıştırın.Şimdi, kalan agarı kalp tamamen kaplanana kadar kabın içine dökün ve görüntü kaydı sırasında referans yapıları olarak hizmet etmesi için gömme kabının içine iki sert plastik tüp yerleştirin. Ardından, agarı katılaştırmak için kalbi en az dört saat boyunca iki ila yedi santigrat dereceye yerleştirin. Manyetik rezonans görüntülemeden sonra, kabı ters çevirin ve katı agar solüsyonunu ve kalbi kaptan çıkarmak için agar ile kabın kenarları arasında hava bırakın.Plastik çubukları çıkarın. Daha sonra, agar bloğunu ve kalbi, tepeden kalbin tabanına kadar beş milimetrelik dilimler halinde bölümlere ayırmak için bir et dilimleyici kullanın, dilimlerin açılandırılmasını elde edilen manyetik rezonans görüntülerindeki gibi tutmak için agar bloğunun tabanına paralel olarak kesin. Tüm dilimler elde edildiğinde, doku örneklerini TTC'de boyayın.15 dakika sonra, her iki taraftaki dilimleri dik bir açıyla fotoğraflayın, ardından bölümleri %0,9 tuzlu su ile dikkatlice durulayın. Numuneleri floresan mikroskobu ile görüntülemek için, değişken modlu tarayıcıda floresan modu görüntülemeyi seçin ve piksel boyutunu 100 x 100 mikron olarak ayarlayın. İlk filtre bloğu için, birinci kanaldaki boncuk floresansının emisyon dalga boyu ile çakışan bir bant geçiren filtre seçin, ardından ikinci kanaldaki emisyon dalga boyunun dışındaki ikinci filtre bloğu için bant geçiren filtreye geçin.Ardından, uygun filtre bloğunu seçin, fotoçoğaltıcı tüpü uygun voltaja ve uyarma lazerini enjekte edilen mikro boncuklarınkine en yakın uyarma dalga boyuna ayarlayın. Tüm görüntüler elde edildikten sonra, uygun son işlem yazılımında, manyetik rezonans görüntülerinde miyokard ve endo ve epikardiyal sol ventrikül sınırlarını segmentlere ayırın ve ardından floresan görüntülerde miyokard ve enjeksiyon bölgelerinin benzer bir segmentasyonu izleyin. Ardından, orijinal numune kalınlığını yeniden oluşturmak ve verilerin bir 3B modelini oluşturmak için dilimlerin her iki tarafından görüntü kayıtlı segmentleri doğrusal olarak enterpolasyon yapın.Kalp, az önce gösterildiği gibi diyastolik benzeri bir geometride sabitlendiğinde, bu temsili deneyde, agar kalp dokusuna başarılı bir şekilde yapıştı ve dokunun eşit dilim kalınlıklarında istenen açıda dilimlenmesini sağladı. Hem 2D floresan hem de manyetik rezonans görüntülerinde, yara izi ve enjeksiyon bölgeleri açıkça belirgindir. TTC boyalı doku ve geç gadolinyum ile güçlendirilmiş manyetik rezonans görüntüleri, floresan görüntülemede skar değerlendirmesi için bir kontrol sağlar.İşlem sonrası görüntüleme, segmentasyonlara ve floresan görüntülere dayalı olarak ex vivo kalbin 3D geometrisinin yeniden yapılandırılmasını sağlayarak 3D enjeksiyon doğruluğunun değerlendirilmesine olanak tanır. Bu çalışmada, enjeksiyon birikimleri ve enfarktüs sınır bölgesi endokardiyal duvar üzerine korundu ve endokardiyal yüzeydeki projeksiyonlar arasındaki mesafeler ölçüldü. Bu prosedürü takiben, cerrahi değerlendirme, enfarktüs boyutu ölçümü veya diğer üç boyutlu görüntüleme modalitelerinin doğrulanması gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir.Bu tekniği, enfarktüs sınır bölgesine enjeksiyonun doğruluğunu değerlendirmek için kullandık. Bu araştırma, kalp yetmezliği için kardiyorejeneratif tedaviyi geliştirmek amacıyla yapılmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, kalbin nasıl hazırlanacağını, kalp dokusunun nasıl yerleştirileceğini ve işleneceğini ve kalp dokusu örneklerinin floresan görüntülemesinin nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.

3d-whole-heart-myocardial-tissue-analysis

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Ekokardiyografi genellikle kardiyak yapı ve fonksiyondaki değişiklikleri noninvaziv olarak karakterize etmek ve ölçmek için kullanılır. Miyokard mikro yapısının gelişmiş bir vekil ölçüsünü sunan ve açık erişimli görüntü analiz yazılımı kullanılarak gerçekleştirilebilen ultrason tabanlı bir görüntüleme algoritmasını açıklıyoruz.

Miyokard Mikroyapısının Ultrasonik Değerlendirmesi

Bu yöntem, deneysel olarak indüklenen miyokard iskemisi olan farelerde kardiyak morfolojiyi, fonksiyonu, perfüzyonu, metabolizmayı ve iyotlu kontrast madde ile canlılığı değerlendirmek için Kuantum Mikro Bilgisayarlı Tomografi (MikroBT) kullanımını ana hatlarıyla belirtir. Teknik, insan kalbi hastalığının çeşitli hayvan modellerinin tahribatsız, yüksek verimli uzunlamasına in vivo görüntülenmesi için uygulanabilir.

Miyokard Yapı, Fonksiyon Vivo Kantitatif Değerlendirilmesi yılında Perfüzyon ve Canlılık Kardiyak Mikro-bilgisayarlı Tomografi ile

Bu iletişim kuralı tatmin edici yapısal bütünlüğü ve zaman uyumlu dayak davranışı ile üç boyutlu iskele ücretsiz kalp doku oluşturmak için net bir kalıp tabanlı yöntemini açıklar.

Net kalıp tabanlı yöntemi iskele ücretsiz üç boyutlu kalp doku oluşturma

Bu yazıda, sol ventrikülün 3D ekokardiyografi ile hacimsel değerlendirilmesi ve benek izleme analizi için, özellikle bu tekniğin fizibilitesini en üst düzeye çıkaran pratik yönlere odaklanan adım adım bir alım ve analiz protokolü sunuyoruz.

3D Ekokardiyografi Kullanılarak Sol Ventrikül Yapısı ve İşlevinin Değerlendirilmesi

Burada, önceden ayırt edilmiş insan kaynaklı pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositler, kardiyak fibroblastlar ve endotel hücrelerinden oluşan 3D kendi kendine monte edilmiş kardiyak mikrotissue dizileri oluşturmak için kullanımı kolay bir metodolojiyi açıklıyoruz. Kardiyak mikrotissues üretmek için teknik gerektiren bu kullanıcı dostu ve düşük hücre, hastalık modellemesi ve ilaç gelişiminin erken aşamaları için uygulanabilir.

İnsan iPSC Türevli Kardiyomiyositler, Kardiyak Fibroblastlar ve Endotel Hücreleri Kullanılarak 3D Kardiyak Mikrotissue Dizilerinin İmalatı

Bu protokolün amacı, kardiyak doku mühendisliği, ilaç taraması ve hastalık modelleme uygulamaları için biyomimetik, kollajen bazlı bir hidrojel içinde kardiyak fibroblastlar (KF' ler) ile birlikte kültürlenmiş kök hücre türevi kardiyomiyositlerden oluşan, yüksek hizalanmış insan kardiyak dokusunun üç boyutlu (3D) mikroakışkan modelinin gelişimini açıklamak ve göstermektir.

Mikroakışkan Bir Platformda 3D Organize İnsan Kardiyak Dokusu Geliştirme

Doku transformasyonu ve boyamadaki yeni gelişmeleri eksenel olarak taranmış bir ışık tabakası mikroskobunun geliştirilmesiyle birleştirerek tüm fare kalbinin mezoskopik rekonstrüksiyonu için bir yöntem sunuyoruz.

Tüm Fare Kalbinin Mezoskopik Optik Görüntülenmesi

Burada, kollajen seçici kontrast artırımı ile sağlıklı ve patolojik büyük memeli tüm kalplerinin yüksek çözünürlüklü mikro bilgisayarlı tomografi görüntülerini elde etmek için bir protokol sunuyoruz.

Kronik Hastalığı Olan Büyük Memeli Kardiyak Modellerinin Kontrastlı Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntülemesinde Doku Hazırlama Teknikleri

Bu protokol, mikroskobik ve makroskopik ölçekleri kapsayan insan kalplerinden elde edilen örnekleri analiz etmek için kapsamlı bir boru hattı sunar.

İnsan Kalbinin Çok Ölçekli Üç Boyutlu Anatomik Çalışması için Boru Hattı

Reperfüze akut miyokard enfarktüsünde (repAMI) kardiyak hasarın üç boyutlu (3D) rekonstrüksiyonu, ilişkili hastalığı etkileyen paternlerin aslına uygun olarak ölçülmesini ve birlikte lokalizasyonunu sağlar. Burada, kardiyak hasarın, risk altındaki alanın ve bağışıklık hücresi tepkisinin eşzamanlı ölçümü için otomatikleştirilebilir bir ışık tabakası kılavuzluğunda görüntüleme yaklaşımı sağlanmıştır.

Işık Tabakası Floresan Mikroskobu Kullanılarak Reperfüze Akut Miyokard Enfarktüsünde Kardiyak Hasar ve İmmün Yanıtın Eşzamanlı 3D Analizi

Mevcut 2,3,5-Trifeniltetrazolyum Klorür (TTC) testi, mikroskobik çözünürlükte miyokard hasarının analizini mümkün kılan ve hücresel düzeyde infarkt boyutu ile kardiyomiyositlerin canlı yapılabilirliğinin doğru ve güvenilir değerlendirilmesini sağlayan yüksek kaliteli görüntüler elde eden ince bir TTC boyama protokolü sunmaktadır.

Miyokard yaralanmasının doğru ve güvenilir analizi için mikroskobik 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür testi

Keşfedin, domuz miyokard infarktüsü modelinde 3D bütün kalp doku işleme protokolü ile intramyokardiyal enjeksiyonların hedefleme doğruluğunu değerlendirme yöntemini. Bu standartlaştırılmış yaklaşım, kardiyovasküler rejeneratif tıpta güvenilir sonuçlar sağlar.

3D Tüm kalp Miyokard Doku Analizi

Daha fazla video keşfet