3D Tüm kalp Miyokard Doku Analizi

Ekran okuyucusu}Bu protokolün genel amacı, enfarktüs sınır bölgesine intramiyokardiyal enjeksiyonların hedefleme doğruluğunu değerlendirmek için kullanılabilecek 3D tüm kalp dokusu işleme için yapılandırılmış ve tekrarlanabilir bir yöntemi kolaylaştırmaktır. Bu yöntem, enjeksiyon tekniklerinin uygulama geliştirme ve optimizasyonu gibi kardiyorejeneratif tıp alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, 3D tüm kalp dokusu işleme için standartlaştırılmış ve tekrarlanabilir bir yöntem sunmasıdır.

Bu tekniğin etkileri, kardiyak rejeneratif tedavilerin geliştirilmesine ve normal uygulama tekniklerinin enjeksiyon doğruluğunun doğrulanmasına kadar uzanır. Bu kardiyak kök hücre tedavisinin amacı, lokal vaskülogenezin uyarılması ve kardiyomiyositlerin korunması için hücrelerin enfarktüs sınır bölgesine enjekte edilmesidir. Diyastolik son aşamada kalbi yakalamak pratik ve sabır gerektirir.

Bu adımların görsel bir gösterimi çok önemlidir. Perikardını mikroboncuk enjekte edilen kalpten ayırarak başlayın, kulakçıkları ve ventrikülleri sağlam tutun. Dokunun tamamı çıkarıldığında, çıkan aortu aort kapağının yaklaşık bir santimetre yukarısından incelemek için Klinkenberg makasını kullanın ve alt kaval ve pulmoner damarları atriyumdan yaklaşık bir santimetre uzakta kesin.

Yüzdürmeyi önlemek için kalbin tepesini plastik gömme kabının dibine sabitledikten sonra, aortun kalan kısmından kabın kenarlarına 2-0 dikiş yerleştirin ve kalbi sabitleyin. Kalbin ortalanmış olmasına ve kabın duvarlarına değmemesine dikkat edin. Organ, diyastolik benzeri bir geometri ile sabitlendiğinde, inferior kaval veni kavramak için sivrisinek kıskaçları kullanın ve 50 mililitrelik bir şırınga kullanarak taze hazırlanmış 50 ila 60 santigrat derece agarı, hem sağ atriyum hem de ventrikül tamamen dolana kadar superior kaval veni yoluyla sağ atriyuma yavaşça enjekte edin.

Diyastol ucu geometriye mümkün olduğunca benzeyen gömülü bir kalp elde etmek için, sol ventrikül tepesini kabın dibine sabitleyin ve pulmoner venler klemplenirken sağ ventrikülü agar ile doldurun. Daha sonra, pulmoner damarlara bir sivrisinek kelepçesi yerleştirin ve aort kapakçıklarından retrograd yönde 50 mililitrelik yeni bir agar dolu şırıngayı yavaşça geçirin. Ventrikül ve sol atriyum tamamen dolana kadar solüsyonu sol ventriküle yavaşça enjekte edin ve sol ventrikül dolduktan sonra aortu sıkıştırın.

Şimdi, kalan agarı kalp tamamen kaplanana kadar kabın içine dökün ve görüntü kaydı sırasında referans yapıları olarak hizmet etmesi için gömme kabının içine iki sert plastik tüp yerleştirin. Ardından, agarı katılaştırmak için kalbi en az dört saat boyunca iki ila yedi santigrat dereceye yerleştirin. Manyetik rezonans görüntülemeden sonra, kabı ters çevirin ve katı agar solüsyonunu ve kalbi kaptan çıkarmak için agar ile kabın kenarları arasında hava bırakın.

Plastik çubukları çıkarın. Daha sonra, agar bloğunu ve kalbi, tepeden kalbin tabanına kadar beş milimetrelik dilimler halinde bölümlere ayırmak için bir et dilimleyici kullanın, dilimlerin açılandırılmasını elde edilen manyetik rezonans görüntülerindeki gibi tutmak için agar bloğunun tabanına paralel olarak kesin. Tüm dilimler elde edildiğinde, doku örneklerini TTC'de boyayın.

15 dakika sonra, her iki taraftaki dilimleri dik bir açıyla fotoğraflayın, ardından bölümleri %0,9 tuzlu su ile dikkatlice durulayın. Numuneleri floresan mikroskobu ile görüntülemek için, değişken modlu tarayıcıda floresan modu görüntülemeyi seçin ve piksel boyutunu 100 x 100 mikron olarak ayarlayın. İlk filtre bloğu için, birinci kanaldaki boncuk floresansının emisyon dalga boyu ile çakışan bir bant geçiren filtre seçin, ardından ikinci kanaldaki emisyon dalga boyunun dışındaki ikinci filtre bloğu için bant geçiren filtreye geçin.

Ardından, uygun filtre bloğunu seçin, fotoçoğaltıcı tüpü uygun voltaja ve uyarma lazerini enjekte edilen mikro boncuklarınkine en yakın uyarma dalga boyuna ayarlayın. Tüm görüntüler elde edildikten sonra, uygun son işlem yazılımında, manyetik rezonans görüntülerinde miyokard ve endo ve epikardiyal sol ventrikül sınırlarını segmentlere ayırın ve ardından floresan görüntülerde miyokard ve enjeksiyon bölgelerinin benzer bir segmentasyonu izleyin. Ardından, orijinal numune kalınlığını yeniden oluşturmak ve verilerin bir 3B modelini oluşturmak için dilimlerin her iki tarafından görüntü kayıtlı segmentleri doğrusal olarak enterpolasyon yapın.

Kalp, az önce gösterildiği gibi diyastolik benzeri bir geometride sabitlendiğinde, bu temsili deneyde, agar kalp dokusuna başarılı bir şekilde yapıştı ve dokunun eşit dilim kalınlıklarında istenen açıda dilimlenmesini sağladı. Hem 2D floresan hem de manyetik rezonans görüntülerinde, yara izi ve enjeksiyon bölgeleri açıkça belirgindir. TTC boyalı doku ve geç gadolinyum ile güçlendirilmiş manyetik rezonans görüntüleri, floresan görüntülemede skar değerlendirmesi için bir kontrol sağlar.

İşlem sonrası görüntüleme, segmentasyonlara ve floresan görüntülere dayalı olarak ex vivo kalbin 3D geometrisinin yeniden yapılandırılmasını sağlayarak 3D enjeksiyon doğruluğunun değerlendirilmesine olanak tanır. Bu çalışmada, enjeksiyon birikimleri ve enfarktüs sınır bölgesi endokardiyal duvar üzerine korundu ve endokardiyal yüzeydeki projeksiyonlar arasındaki mesafeler ölçüldü. Bu prosedürü takiben, cerrahi değerlendirme, enfarktüs boyutu ölçümü veya diğer üç boyutlu görüntüleme modalitelerinin doğrulanması gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir.

Bu tekniği, enfarktüs sınır bölgesine enjeksiyonun doğruluğunu değerlendirmek için kullandık. Bu araştırma, kalp yetmezliği için kardiyorejeneratif tedaviyi geliştirmek amacıyla yapılmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, kalbin nasıl hazırlanacağını, kalp dokusunun nasıl yerleştirileceğini ve işleneceğini ve kalp dokusu örneklerinin floresan görüntülemesinin nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.