Name: Tek Molekül Kuvvetleri Spektroskopisi kullanarak İnorganik Malzemelerle Amino Asitler ve Peptitler Etkileşimi içine Trendleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Öğrenin, tek molekül kuvvet spektroskopisi ile amino asit ve peptitlerin inorganik yüzeylerle yapışma kuvvetlerini ve etkileşim doğasını nasıl belirleyeceğinizi. Bu yöntem, yüzey kimyası ve yeni malzeme geliştirme alanlarında araştırmacılara değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Marie Curie Uluslararası Yeniden Entegrasyon Hibesi (EP7) tarafından desteklenmiştir. P. D., İsrail Yüksek Öğrenim Konseyi'nin desteğini kabul eder.

1. İpucu Modifikasyon <ol><li> Satınalma silisyum nitrür (Si 3 N 4) silikon uçları ile AFM dirsekleri (~ 2 nm nominal konsol yarıçapı). </li><li> 20 dakika boyunca, susuz etanol içinde daldırma her AFM konsol temizleyin. Oda sıcaklığında kurutun. Daha sonra 5 dakika boyunca O 2 plazmaya maruz bırakılmasıyla konsol davranın. </li><li> 15 oranında (3 cm) ihtiva eden bir çözelti metiltrietoksilan ve 3- (aminopropil) trietoksisilan, yukarıda Temiz ipuçlarını askıya alınması: 1 (hacim / hacim) bir atıl atmosfer (azot ya da argon ya da) altında bir desikatör içinde ve desikatörde bağlamak bir vakum pompası. 2 saat için vakum karışık silan bileşimleri, bu iki tür bir tek tabaka oluşturulur. </li><li> sıcak bir plaka üzerinde ipuçları yerleştirmek için (bu işlem için üretilmiş) metalik bir ucu tutucu kullanın. Daha sonra atmosfer şartları altında 70 ° C&#39;de 10 dakika süre ile ipuçları kurutun. Kullanmadan önce, etanol kullanılarak sıcak plaka, metal tutucu ve cımbız temizleyin. </li><li> oda t ipuçlarını soğutmakemperature, ve daha sonra 1 saat boyunca% 0.5 (h / h) trietilamin ihtiva eden kloroform içinde 5 mM konsantrasyonda Floroenilmetiloksikarbonil-PEG-N-hidroksi-çözeltisi (Fmoc-PEG-NHS, MW 5,000 Da) de içine ipuçları batırmak oda sıcaklığı. </li><li> 5 dakika boyunca kloroform içinde ipuçlarını daldırma ve daha sonra ilave 5 dakika boyunca dimetilformamit (DMF) içinde daldırma. PEG molekülüne Fmoc grubunun korumasının kaldırılması için, 30 dakika süre ile, DMF içinde% 20 piperidin (h / h) ipuçlarını daldırma. 4 dakika için ve daha sonra, ilave 4 dakika süreyle N-metil-2-pirolidon (NMP) içinde DMF içinde ipuçlarını batırın. üç kez daldırma sıralı tekrarlayın. </li><li> Amino asitlerin bağlanması için, N-ucu korumalı amino asit (AA) / diizopropiletilamin (DIPEA) / 2- (1 H-benzotriazol-1-il) -1,1,3,3-tetrametilüronyum hexafluophosphate ihtiva eden bir çözelti içine sokmak ipuçları 1.5 saat boyunca 5 ml NMP içinde 30 mM bir toplam konsantrasyonda 1: 1: 1 arasında bir molar oranda (HBTU). </li><li> Peptit bağlama, bir 5 ml çözelti cont içine ipuçları daldırmakorunan peptidin 40 mg Tahliye (N terminal ve yan zincir, örneğin Fmoc-Gln (Trt) -Pro-Ala-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Arg için (PBF) -Tyr (tBu) -COOH). , 15 mg 2- (1H-benzotriazol-1-il) -1,1,3,3-tetrametilüronyum heksaflorofosfat (HBTU), ve 2 saat boyunca NMP içinde DIPEA 5 ml. </li><li> 4 dakika boyunca NMP içinde ipuçlarını batırın. Daha sonra, asetil grubu ile oyma serbest / tepkimemiş NH2 koruma molar oranı 4 asetik anhidrit / DIPEA karışımı 30 dakika boyunca ipuçları daldırma: 1 ile NMP içinde 0.65 M bir toplam konsantrasyonu. </li><li> Peptid bağlantı için, iki ek adımları uygulayın. <ol><li> Peptit yan zincirleri korumasının kaldırılması, 1 saat boyunca% 95 TFA,% 2.5 triizopropilsilan ve% 2.5 su ihtiva eden bir çözelti içine ipuçları sokmak ve sonra kloroform ve DMF yıkama için. </li><li> 30 dakika süre ile, DMF içinde% 20 piperidin (h / h) içine ipuçları, peptidin Fmoc grubunun çıkarılması sokmak için. </li></ol></li><li> Sıralı peptit / aminoasit-işlevselleştirme daldırmaKloroform,% 50 etanol ve su (amino asit) (peptitler) DMF ya da NMP içinde dört dakika her biri d ipuçları. Nihayet havada ucu kurutun. </li></ol> 2. Yüzey Hazırlama <ol><li> mika hazırlayın. seloteyip kullanarak her kullanımdan önce yüzeyler (9.9 mm çap) bölmektedir. Ardından, üçlü damıtılmış su (TDW) ile yüzeyleri yıkayın. </li><li> TiO2 -kaplı silikon hazırlayın. <ol><li> Bir elmas kalem kullanarak 2 cm kareler halinde silikon gofret (100) kesin. </li><li> aseton ile doldurulmuş bir 15 ml test tüpü içinde yerleştirilmesidir ve bir ultrason banyosu içinde beş dakika için sonikasyon. Daha sonra, izopropanol ile doldurulmuş bir 15 ml test tüpü içinde, bu yüzey koyun ve 5 dakika için sonikasyon. azot kullanılarak substrat kurutun. </li><li> % 5 (ağırlık / hacım) bir solüsyonu hazırlamak için, etanol içinde yüzey aktif madde (örneğin, Byk-348) içinde çözülür. Daha sonra, 2 ml% 30 TiO2 dispersiyona sürfaktan çözeltisinin 0.02 ml. </li><li> Elde edilen çözelti itibaren, 0-cast damla.Temiz bir Si alt-tabaka 2 ml. </li><li> Havada 2 saat boyunca 250 ° C &#39;de, bu açılan döküm yüzeyleri yeniden birleşir. 41 </li></ol></li></ol> 3. Tek-molekül Kuvvet Spektroskopi Ölçümleri <ol><li> piyasada mevcut iki bileşenli yapıştırıcı ile AFM metalik sahibine istenen yüzey takın. küçük bir petri şeklindedir AFM, cam tutucu metalik tutucu yerleştirin. Tris tamponu (50 mM, pH = 7.4) ya da arzu edilen herhangi bir ortam ile bu tutucu doldurun. Sonra, ucu tutucu altında AFM sahnede tutucu yerleştirin. </li><li> % 10 kadar mutlak belirsizlikle (AFM yazılım dahil) ısı dalgalanma yöntemi 26 ile 10 ile 30 pN / nm arasında değişen yay sabitleri AFM konsol kalibre edin. </li><li> Bir sıkıştırma ile alt-tabaka ile temas edene kadar alt-tabaka, amino asit ya da peptid-işlevselleştirilmiş ucu yaklaşarak etkileşim kuvveti ölçmek~ 200 pN kuvvet ve hemen ardından ~ 200 nm bir mesafe için 0.1 ile 0.8 mm / s, çeşitli hızlarda ucu geri çekin. </li></ol> 4. Veri Analizi <ol><li> fotodiyot hassasiyeti (V / m) çarpılması ve deneysel olarak belirlenen yay sabiti kullanılarak (V) zorlamak için saptırma değerleri dönüştürmek. 42 Bu AFM yazılım tarafından otomatik olarak yapılır. <ol><li> Eğrilerin tek molekül olaylar, kayıt yüzlerce (800-1,500) ile FD eğrileri elde etmek. Bir tek-molekül eğrisinde iki tepe elde: İlk tepe ucu ve yüzey ve yüzey ile molekülün belirli bir etkileşim ikinci zirve tekabül arasındaki non-spesifik etkileşimler gösterir. FD eğrisi, bu iki tepe daha ihtiva ettiğinde, en olası güç hesaplamasına atın. NOT: Sadece tek yapışma olaylar (10 eğrilerin% 30) bir hesaba alınır. 43 </li></ol></li><li&gt; sonra histogramları hazırlamak için kullanılan yükleme oranları, bir dizi elde etmek için hemen önce rüptür için açık yükleme hızı, solucan benzeri zinciri (WLC) modeli 44 ile mesafe eğrileri vs uygun en az 50 kuvveti hesaplamak için belirgin yükleme oranları. alt tabakadan konsol ayırdıktan sonra yürürlüğe atlama gelen peptitler / amino asitler ve yüzey arasındaki unbinding kuvvetleri türevi. </li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Protokolde 1.3, 1.4 ve 1.7 detaylı özenle ve çok hassas bir şekilde yapılmalıdır Adım. adım 1.3, uç silan karışımı ile silanizasyon işlemi bir inert atmosfer (nemsiz) içinde yapılmalıdır temas etmemelidir. 45 Bu çok tabakalı oluşmasını önlemek için ve silan moleküller nemi kolayca mevcudiyetinde hidrolize için yapılır. 45 Aşama 1.4, sıcaklık ve zaman düzgün bir şekilde muhafaza edilmelidir. adım 1.5 başlamadan önce, uç oda sıcaklığına kadar soğ...

proteinler ve inorganik mineraller arasındaki etkileşim ayırt edici özelliklere sahip kompozit malzeme yapısına yol açar. Bu yüksek mekanik mukavemet ve eşsiz optik özellikleri olan malzemeler içerir. Örneğin, 1, 2, maden hidroksiapatit protein kollajen kombinasyonu, farklı işlevler için yumuşak ya da sert kemik ya oluşturur. 3 Kısa peptitler de yüksek özgüllük ile inorganik maddeler bağlayabilirsiniz. 4, bu peptidlerin 5, 6 özgüllük, kristaller, 9 nano yapılı malzemeler imal, 8, 7, yeni manyetik ve elektronik malzeme tasarımında büyütmek için kullanılmaktadır 10 ve sentezleme nanopartiküller. 11 Bu nedenle bize geliştirilmiş adsorptif özellikleri olan yeni kompozit malzemeler tasarlamak sağlayacak peptidler veya proteinler ve inorganik maddeler arasındaki etkileşimleri altında yatan mekanizma anlamak. bir bağışıklık tepkisi ile implant interfaz proteinleri aracılık beri ek olarak, daha iyi inorganik maddelerle proteinlerin etkileşimlerini anlamak implantları tasarım yeteneğimizi artıracak. İnorganik yüzeyler ile etkileşim proteinleri içeren diğer önemli alan zehirli maddelerin imalatı olduğunu. 12, 13, 14, 15 Biyolojik kirlilik organizmalar, bir yüzeye eklemek hangi istenmeyen bir işlemdir. Bu bizim hayatımızın birçok zararlı etkileri vardır. Örneğin, tıbbi cihazlarda bakteri biyolojik kirlenme hastane kaynaklı enfeksiyonların yol açar. teknelerle büyük gemilerde deniz organizmalarının biyolojik kirlenme artar<html> yakıt tüketimi. 12, 16, 17, 18 Tek moleküllü kuvveti Spektroskopisi (SMFs), bir AFM yoluyla doğrudan bir amino asit ya da bir alt-tabaka ile bir peptid arasındaki etkileşimi ölçebilir. Bu faj gösterimi, 27, 28 olarak 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 başka yöntemler kuartz kristali mikro-(QCM) 29 veya yüzey plazmon rezonans (SPR) 29, 30, 31, 32,ref &quot;&gt; 33 ölçü toplu olarak, inorganik yüzeylere peptidlerin ve proteinlerin etkileşimleri. 34, 35, 36 Bu durum, bu yöntem ile elde edilen sonuçlar molekül veya agrega toplulukları ilgili olduğu anlamına gelir. SMFs olarak, bir ya da çok az moleküller AFM ucuna sabitlenir ve istenen alt-tabaka ile etkileşimleri ölçülür. Bu yaklaşım yüzeyinden proteini çekerek protein katlanmasını incelemek için genişletilebilir. Buna ek olarak, hücreler ve proteinler ve bunların ligandlarına antikorların bağlanma arasındaki etkileşimi ölçmek için kullanılabilir. 37, 38, 39, 40 Bu kağıt silanol kimyası kullanılarak AFM ucu peptid veya amino asit ya takmak için nasıl ayrıntılı olarak anlatılmaktadır. Buna ek olarak, kağıt kuvvet ölçümleri gerçekleştirmek için nasıl ve analiz açıklarSonuçlar.

<table><tbody><tr><td>Silisyum nitrür (Si3N4) Silikon uçlu AFM konsolları</td><td>Bruker (Camarilo, CA, ABD)</td><td></td><td>MSNL10, nominal konsol yarıçapı ~2 nm&nbsp;</td></tr><tr><td>Metiltrietoksisilan&nbsp;</td><td>Acros Organics (New Jersey, ABD)</td><td></td><td>AFM ucunun silaylasyonu için&nbsp;</td></tr><tr><td>3- (Aminopropil) trietoksisilan</td><td>Sigma-Aldrich (Kudüs, İsrail)</td><td></td> <td>AFM ucunun Silaylasyonu için</td></tr><tr><td>Triizopropilsilan</td><td>Sigma-Aldrich (Kudüs, İsrail)</td><td></td> <td>Peptit korumasının giderilmesi için kullanılır</td></tr><tr><td>N-Etildiizopropilamin</td><td>Alfa-Aesar (Lancashire, İngiltere)</td><td></td> <td>Uç modifikasyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Trietilamin</td><td>Alfa-Aesar (Lancashire, İngiltere)</td><td></td> <td>Uç için kullanılır modifikasyon</td></tr><tr><td>Piperidin</td><td>Alfa-Aesar (Lancashire, İngiltere)</td><td></td> <td>Fmoc ucu koruması için kullanılır</td></tr><tr><td>Florenilmetiloksikarbonil-PEG-N-hidroksisüksinimid&nbsp; (Fmoc-PEG-NHS)</td><td>Iris Biotech GmbH (Deutschland, Almanya)</td><td></td><td>Kovalent esnek bağlayıcı olarak kullanılır&nbsp; (MW = 5.000 da)</td></tr><tr><td>2- (1H-benzotriazol-1-il) -1,1,3,3, -tetrametiluronyum hekzaflorofosfat (HBTU)</td> <td>Alfa Aser (Heysham, İngiltere)</td><td></td> <td>Birleştirme reaktifi olarak kullanılır.</td></tr><tr><td>N-metil-2-pirolidon (NMP)</td><td>Acros Organics (New Jersey, ABD)</td><td></td><td>Uç modifikasyon prosedüründe Çözücü olarak kullanılır</td></tr><tr><td>DMF (dimetilformamid)</td><td>Merck (Darmstadt, Almanya)</td><td></td><td>Uç modifikasyon prosedüründe Çözücü olarak kullanılır</td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Bio-Lab (Kudüs, İsrail)</td><td></td><td>Uç modifikasyon prosedüründe Çözücü olarak kullanılır</td></tr><tr><td>Etanol (Susuz)</td><td>Gadot (Netanya, İsrail)</td><td></td><td>Uç modifikasyon prosedüründe Çözücü olarak kullanılır</td></tr><tr><td>Trifloro asetik asit (TFA)</td> <td>Merck (Darmstadt, Almanya)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Asetik anhidrit</td><td>Merck (Darmstadt, Almanya)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Peptitler</td><td>GL Biochem (Şangay, Çin).</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fenilalanin ve Tirozin&nbsp;</td><td>Biochem (Darmstadt, Almanya)&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Çözücü 2- (2-Metoksietoksi) etanol (DEGME) ve Etil 3>< Etoksipropiyonat (EEP) Uygulamalı</td> <td>Görme Laboratuvarları (Kudüs, İsrail)</td><td></td> karışımında %30 TiOalt< /alt> dispersiyon <td>Solvent 2- (2 Metoksietoksi) etanol (DEGME) ve Etil 3-Etoksipropiyonat (EEP). TiO2 substrat hazırlığı için kullanılır</td></tr><tr><td>Mika yüzeyler</td><td>TED PELLA, INC. (Redding, California, ABD)</td><td></td><td>9,9 mm çap</td></tr></tbody></table>

tek molekül kuvvetleri spektroskopisi kullanarak İnorganik malzemelerle amino asitler ve peptitler etkileşimi içine trendleri

Insights into the Interactions of Amino Acids and Peptides with Inorganic Materials Using Single-Molecule Force Spectroscopy

proteinler veya peptidler ve inorganik maddeler arasındaki etkileşimler çok ilginç işlemlere yol açar. Örneğin, mineral proteinleri birleştiren benzersiz özellikleri ile kompozit malzeme oluşumuna yol açar. Buna ek olarak, biyolojik kirlenmeye istenmeyen proses yüzeylerinde biyomoleküllerin ağırlıklı proteinlerin adsorpsiyonu ile başlatılır. Bu organik tabaka, bakteriler için bir yapışma tabakası ve onları yüzeyle etkileşim sağlar. Organik-inorganik arayüzünde etkileşimleri yöneten temel güçleri anlama araştırma birçok alanda bu nedenle önemlidir ve optik, mekanik ve biyomedikal uygulamalar için yeni malzemelerin tasarımına yol açabilir. Bu çalışma, peptitler veya amino asitler ve iyi tanımlanmış inorganik yüzeyler ya arasındaki yapışma kuvvetini ölçmek için bir AFM kullanan tek molekül kuvvet spektroskopisi teknik gösterilmiştir. Bu teknik AFM için biyomolekülü takmak için bir protokol içeriratomik kuvvet mikroskobu ile kovalent esnek bağlayıcı ve tek-molekül kuvvet spektroskopisi ölçümleri yoluyla ipucu. Buna ek olarak, bu ölçümlerin analiz dahildir.

Şekil 1 ucu modifikasyonu prosedürü sergiler. İlk aşamada, bir plazma işleme silisyum nitrür uç yüzeyini değiştirir. ucu OH gruplarını sunar. Bu gruplar daha sonra silan ile reaksiyona girer. Bu aşamanın sonunda, uç yüzey serbest -NH2 grupları ile karşılanacaktır. Bu, serbest aminler daha sonra Fmoc -PEG-NHS, kovalent bir bağlayıcı ile reaksiyona girer. PEG bağlayıcının Fmoc grubu pipyridine, koruma bozucu bir reaktif ile çıkarılır. Son olarak, incelenen amino...

Burada bir atomik kuvvet mikroskopu (AFM) ile tek bir molekül kuvveti spektroskopi ölçümleri ile iyi tanımlanmış bir inorganik yüzey ve ya peptitler veya amino asitler arasındaki etkileşimlerin kuvvetini ölçmek için bir protokol mevcut. ölçümü ile elde edilen bilgiler, daha peptid inorganik madde interfazda anlamak önemlidir.

Tek Molekül Kuvvetleri Spektroskopisi kullanarak İnorganik Malzemelerle Amino Asitler ve Peptitler Etkileşimi içine Trendleri

The interactions between proteins or peptides and inorganic materials lead to several interesting processes. For example, combining proteins with minerals ...

Tek moleküllü kuvvet spektroskopisi tekniğinin genel amacı, farklı yüzeylere sahip amino asitler veya peptitler arasındaki etkileşimlerin yapışma kuvvetini ve doğasını belirlemektir. Bu konu, yüzey kimyası alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir ve yeni kompozitlerin ve kordalıların geliştirilmesi için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, tek molekül seviyesinde istenen molekül ve yüzeyler arasındaki etkileşim hakkında bilgi sağlamasıdır.Başlamak için, nominal konsol yarıçapı iki nanometre olan silikon uçlarla donatılmış silikon nitrür AFM konsolları satın alın. Ucu tutucuya monte edin. AFM konsollarının her birini 20 dakika etanole batırarak temizleyin ve ardından oda sıcaklığında kurutun.Daha sonra, uçları bir plazma odasına yerleştirin ve konsolları beş dakika boyunca oksijen plazmasına maruz bırakarak tedavi edin. 15 kısım metiltrietoksisilan ve bir kısım üç amino propiltrietoksisilan içeren bir çözelti hazırlayın ve inert bir atmosfer altındayken kanitlevleri çözeltinin üç santimetre üzerinde askıya alın. Uçların ve tutucunun silan karışımına temas etmemesi önemlidir.Ek olarak, silan neme oldukça duyarlıdır ve bu nedenle bu uçların inert bir atmosferde gerçekleştirilmesi gerekir. Kapatıldıktan sonra, desikatörü bir vakum pompasına bağlayın ve konsolların yüzeyinde iki tip karışık silan bileşiğinin tek bir tabakasını oluşturmak için iki saat boyunca bir vakum uygulayın. Uçları dikkatlice çıkarın ve önceden 70 dereceye ısıtılmış sıcak bir plakaya yerleştirin.Uçları 10 dakika kurumaya bırakın. Uçları oda sıcaklığında bir saat boyunca bir Fmoc-PEG-NHS çözeltisine batırmadan önce oda sıcaklığında soğutun. Ardından, uçları beş dakika kloroforma ve ardından beş dakika daha DMF'ye batırın.DMF'de inkübasyondan sonra, uçları 30 dakika boyunca DMF'de% 20 piperidin çözeltisine daldırarak bağlı PEG moleküllerinin Fmoc gruplarını koruyun. Yine, uçları dört dakika DMF'ye ve ardından dört dakika daha N-Metil-2-pirolidon'a batırın. Amino asitleri uçlara bağlamak için, bir buçuk saat boyunca toplam konsantrasyonu 30 milimolar ve beş mililitre N-Metil-2-pirolidon olan bir amino asit birleştirme çözeltisine daldırın.Kalan serbest veya reaktant olmayan PEG kalıntılarını asetil grubu tarafından korumak için, uçları dört kısım asetik anhidrit ve bir kısım diizopropiletilamin ve N-Metil-2-pirolidondan oluşan 0.65 molar bir karışıma 30 dakika daldırın. Daha sonra, peptit amino asit işlevselleştirilmiş uçları sırayla NMP, kloroform,% 50 etanol ve suya batırın ve son olarak ucu havada kurutun. İstenen test yüzeyini, piyasada bulunan epoksi ile AFM'nin metalik bir tutucusuna takın.Ardından, metal tutucuyu AFM'nin küçük bir petri kabı şeklindeki cam tutucusuna yerleştirin. Cam tutucuyu TRIS tamponu ile doldurun. Ardından metal tutucuyu, uç tutucunun altındaki AFM aşamasına yerleştirin.Ardından, AFM ucunu AFM'nin optik camına monte edin. Optik cam bloğu AFM kafasına yerleştirin. Ve AFM kafasını sahneye koyun.Ardından, AFM konsollarını nanometre başına 10 ila 30 pikonewton arasında değişen yay sabitleriyle kalibre edin. Tipik bir kuvvet ölçümü, burada gösterilenlere benzer bir kuvvet mesafesi eğrisi ile sonuçlanır. İlk bakış, uç ve yüzey arasındaki spesifik olmayan etkileşimleri gösterir ve ikinci bakış, spesifik yapışma olayını ifade eder.Birkaç yüz kuvvet mesafesi eğrisinden, kuvvete karşı yapışma olaylarının sayısını çizerek bir histogram oluşturmak mümkündür. Bu histogramlara bir Gauss uyumu uygulamak, en olası kuvveti belirleyecektir. Bu videoyu izledikten sonra, AFM uçlarını amino asitler veya peptitlerle kimyasal olarak nasıl değiştireceğinizi ve AFM kullanarak tek moleküllü kuvvet spektroskopisini nasıl gerçekleştireceğinizi iyi anlamış olmalısınız.

insights-into-interactions-amino-acids-peptides-with-inorganic

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Bu yazıda son derece parallelizable şekilde tek bir molekül düzeyinde enzimatik proteolizin yürürlüğe etkisini incelemek için manyetik cımbız kullanımı açıklanır.

Manyetik cımbız kullanarak Multiplexed Tek molekül Kuvvetleri Proteoliz Ölçümleri

Selülozomlar, selülozu sindirmek için tasarlanmış multienzim kompleksleridir. AFM tabanlı SMFS, selülozomla ilişkili protein düzeneklerinin mekanik özelliklerini ve katlanma konfigürasyonunu incelemek için kullanıldı. Selülozom montajında yer alan bireysel reseptör-ligand komplekslerinin etkileşimlerini incelemek için protein immobilizasyonu, veri toplama ve veri analizi için eksiksiz bir iş akışı sunuyoruz.

AFM-tabanlı Tek-molekül Kuvvetleri Spektroskopisi ile cellulosome Reseptör-ligand Sistemleri Araştırılması

Çok çeşitli tek molekülleri kovalent olarak bir AFM ucuna bağlamak için bir protokol sunulmuştur. Bu moleküllerin katı mesnetler ve biyo-arayüzler üzerindeki yapışma kuvvetini ve serbest enerjisini belirlemek için prosedürler ve örnekler verilmiştir.

Atomik Kuvvet Spektroskopi Tek Molekül Yapışma incelenmesi

Biz ayrıntılı yordamlar ve mekanik özellikleri ve mekanik unfolding yollar tek protein moleküllerinin bir Atomik kuvvet mikroskobu kullanarak ölçmek için stratejileri açıklar. Ayrıca seçim ve bloklama iyi tek protein molekülü kayıtları için bir başvuru olarak temsilcisi sonuçları göster.

Kuvvet spektroskopisi bir Atomik kuvvet mikroskobu kullanılarak tek Protein moleküllerinin

Bu iletişim kuralı ile örneklenir bir heterobifunctional silane Bağlantı Aracısı atomik kuvvet mikroskobu dayalı tek molekül kuvvet spektroskopisi için tasarlanmış silikon-oksit yüzeyler için proteinlerin immobilizasyon kovalent açıklar RrgA etkileşim (pilus-1 İpucu adhesin, S. pneumoniae) fibronektin ile.

Proteinler kovalent immobilizasyon için tek molekül kuvvet spektroskopisi

Biz kızılötesi nanospectroskopi ve yüksek çözünürlüklü atomik kuvvet mikroskobu oligomerik agregalar ve amiloid fibrils içine protein kendini montaj sürecini görselleştirmek için uygulama açıklar, yakından başlangıç ve geliştirme ile ilişkilidir insan nörodejeneratif bozuklukların geniş bir yelpazede.

Bireysel Protein Agregalarının Kızılötesi Nanospektroskopi ve Atomik Kuvvet Mikroskobu ile Karakterizeleştirilmesi

Burada, protein monomerini kontrollü bir dizi ile protein polimeri oluşturan enzimler tarafından biraraya getirmek ve tek moleküllü kuvvet spektroskopisi çalışmaları için yüzeyde hareketsiz hale getirmek için bir protokol sokuyoruz.

OaAEP1-Tek Moleküllü Kuvvet Spektroskopisi İçin Polimerize Proteinin Aracılı Enzimatik Sentezi ve Immobilizasyonu

Prob moleküllerinin atomik kuvvet mikroskobuna kovalent bağlanması (AFM) kantilever uçları fiziksel özelliklerinin araştırılması için gerekli bir tekniktir. Bu bize yüksek tekrarlanabilirlik ile AFM tabanlı tek molekül kuvvet spektroskopisi ile polimerlerin germe kuvveti, desorpsiyon kuvveti ve uzunluğu belirlemenize olanak sağlar.

AFM tabanlı Kuvvet Spektroskopisi için Tek Moleküllerin Kovalent Eki

Topluluk kuvvet spektroskopisi (EFS), biyofiziksel ve biyosensing alanlarında bir grup biyomoleküler yapının mekanik olarak açılması ve gerçek zamanlı olarak algılanması için sağlam bir tekniktir.

Kesme Kuvvetleri ile Topluluk Kuvveti Spektroskopisi

Plazmonik nano cımbızlayıcılar, proteinler de dahil olmak üzere tek nanoparçacıkları nanometre ölçekli bir optik alan içinde yakalamak için altın nanoyapılarda lokalize yüzey plazmon rezonansı kullanır. Saçılan sinyaldeki değişiklikler, protein varlığını ve konformasyonel dinamikleri ortaya çıkararak, florofor modifikasyonları veya yüzey bağlantısı olmadan izlemeyi mümkün kılar.

Plazmonik Nanotcımbız Kullanarak Tek Değiştirilmemiş Proteinlerin Konformasyonel Dinamiğinin İzlenmesi

Öğrenin, tek molekül kuvvet spektroskopisi ile amino asit ve peptitlerin inorganik yüzeylerle yapışma kuvvetlerini ve etkileşim doğasını nasıl belirleyeceğinizi. Bu yöntem, yüzey kimyası ve yeni malzeme geliştirme alanlarında araştırmacılara değerli bilgiler sunar.

Tek Molekül Kuvvetleri Spektroskopisi kullanarak İnorganik Malzemelerle Amino Asitler ve Peptitler Etkileşimi içine Trendleri

Daha fazla video keşfet