Name: aşılanması Anofel gambiae ile Sivrisinekler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: Öğrenin, Anopheles gambiae sivrisineklerinde melanizasyon yanıtını uyarmak için boncuk aşılama tekniğini. Bu yöntem, ekolojik immünolojide bağışıklık tepkilerini nicel olarak ölçmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Neuchâtel Üniversitesi'nden sağlanan fonla mümkün oldu. Bu tekniğin geliştirilmesine yardımcı olan tüm öğrencilere, yani meslektaşımız Kevin Thievent'e teşekkür ederiz. Thomas Lab üyelerine de laboratuvarlarını kullanıma sundukları için teşekkür ederiz. Sivrisinek yetiştiriciliği konusundaki yardımları için Janet Teeple'a teşekkür ederiz. Mikro kılcal cam tüplerin hazırlanmasındaki yardımları için Pr. Tom Baker'ın laboratuvarındaki Loyal Hall'a da teşekkür ederiz.

Enjeksiyon ve Diseksiyon 1. Tuzlu Çözüm <ol><li> PH = 6.8 de 1.3 mM NaCI, 0.5 mM KCI, 0.2 mM CaCl2 elde etmek üzere distile su NaCl, KCl, ve CaCl2 eklenerek tuz çözeltisi hazırlayın. </li><li> Şeffaf boncuk renk tuz çözeltisi için 99 mililitre% 0.1 metil yeşil çözelti 1 ml. Bu% 0.001 metil yeşil &quot;enjeksiyon çözüm&quot; dir. </li><li> Daha sonra, tuzlu su çözeltisi, 45 ml% 0.1 metil yeşil çözelti 5 ml. Bu% 0.01 metil yeşil &quot;diseksiyon çözüm&quot; Diseksiyon sırasında boncuk renklerini ve gözlem kolaylaştırmak için 10 kat daha fazla konsantre metil yeşil olduğunu. NOT: Gerekirse Filtre tampon sterilize edin. </li></ol> 2. Kılcal Hazırlık <ol><li> Isı çekme microcapillary cam tüpler küçük boncuklar (φ = 40 um) 42 biraz daha büyük bir çok ince bir ipucu elde etmek için. </li><li> Açık veCımbız ile ucu kırarak ya da ucu kapalı testere ile her kılcal djust. </li></ol> 3. Sivrisinek Yetiştirme <ol><li> 26 ± 1 ° C&#39;de arka A. gambiae, 70 ±% 5 bağıl nem ve 12:12 saat ışık: karanlık döngüsü. yetişkin kadın tutmak ve onlara% 10 şeker çözeltisi erişim sağlar. </li></ol> Kapiller 4. Boncuk Seçimleri <ol><li> 5 santimetrelik bir petri tabağına negatif yüklü boncuklar (çapı 40-120 um) ve 0.009 g dökün ve önceden enjeksiyon çözeltisi, 30 dakika içinde 5 mL. NOT: amaç boya kolay enjeksiyon için boncuk seçim yapmak için boncuk renk izin vermektir. onlar steril kavanoz gelmediği takdirde boncuk otoklavlayın. </li><li> Bir kılcal pipet ampul monte edilmiş bir kılcal kullanarak, görsel bir binoküler mikroskop altında tuzlu su çözeltisi 0.1 ul küçük boncuk seçin. NOT: Aynı anda birden fazla boncuk aşılamak zaman 0.1 ul toplam hacmi üç boncuk seçin.</li></ol> 5. Sivrisinek Taşıma ve Aşılama <ol><li> Bir böcek aspiratör kullanılarak, 50 ml bir tüp içinde, her sivrisinek yerleştirin. </li><li> ezilmiş buz (2-5 dk) tüp koyarak kısaca her sivrisinek Chill. </li><li> binoküler mikroskop altında sağ tarafta bir sivrisinek yerleştirin. </li><li> Bir stereomikroskop altında, sıkıca göğüs boşluğu manikür sol tarafında delip ardından sıvı ve boncuk enjekte ederek kılcal sivrisinek aşılamak. NOT: mümkün olduğunca sivrisinek olarak dik kılcal tutarak uçuş kaslarının zarar vermemeye özen gösterin. </li><li> kılcal çıkarın. </li><li> tüy entomoloji forseps kullanarak, ayrı ayrı sivrisinek örgü ile kaplı bir 180 ml&#39;lik plastik bir kap içinde her kadın yerleştirin; Onlara% 10 şeker çözeltisi erişim sağlar. NOT: sivrisinek şeker çözeltisi damla takılıyorum olabilir Dikkat, şeker çözeltisi ile gereklidir. </li></ol> 6. SivrisinekDiseksiyon ve Boncuk Fotoğrafçılık <ol><li> Sivrisinekler 24 saat aşılamadan sonra hayatta olup olmadığını kontrol edin. Eğer öyleyse, onların durumunu kontrol ve uçabiliyor sadece sivrisinek tutmak. </li><li> -20 ° C&#39;de bu sivrisinek dondurun. NOT: Gerekirse Onlar diseksiyon aylar önce birkaç gün muhafaza edilebilir. </li><li> 32X büyütmede bir binoküler mikroskop altında cımbız kullanarak sivrisineklerin kanatları kaldırın. saydam bant ile cam slaytlar üzerine kanatlarını sabitleyin. her sivrisinek için kullanılan kodunu yazın. </li><li> Bir tarayıcı cam slaytlar koyun ve 1.200 dpi onları tarayın. Not: kod her sivrisinek için okunabilir olup olmadığını kontrol edin. </li><li> cam bir mikroskop lamı üzerine ve diseksiyon çözeltisi içinde, baş ve karın toraks ayırmak için forseps kullanabilir. </li><li> boncuk almak için forseps ile toraks açın. NOT: Boncuk karın hareket etmiyor, birbirleri ile temas halinde değildir ve çoğu t serbestçe yüzenO Hemolimf. olmayan bir melanized boncuk bulmak zor olabileceğinden, forseps ile boncuk kırmak için değil dikkatli olun. Boncuklar rengi elde etmek için 1 ilâ 5 dakika bekleyin. </li><li> resmi çekmeden önce, bir cam mikroskop lamı üzerine diseksiyon çözümün bir damlacık boncuk aktarın. NOT: boncuk yıkamak gerek yok. </li><li> Bir kamera ile donatılmış bir mikroskop kullanarak, standart bir aydınlatma ayarı ve 400X büyütmede her boncuk bir dijital görüntü almak. NOT: kendi karşılaştırma yapabilmek için farklı resim arasındaki aydınlatma değiştirmeyin. </li></ol> 7. Resim Analizi: Boncuk melanization <ol><li> Görüntü analiz yazılımı açın. &quot;Dosyasında&quot; üzerine tıklayın ve ardından &quot;açık&quot; bir boncuk görüntüyü bulmak için. </li><li> Tıklayın &quot;analiz edin.&quot; Tıklayın &quot;set ölçümlerin.&quot; &quot;Set ölçümler&quot; penceresinde &quot;gri ortalama değer&quot; kutusunu işaretleyin. </li><li> daire seçim aracı simgesini tıklayın. boncuk çevresini seçin; kalırboncuk yan ve çevresinde aydınlık halo kaçının. </li><li> &quot;Analiz&quot; menüsünü tıklayın. Tıklayın &quot;tedbir.&quot; boncuk enine kesit alanının ortalama gri değer ve boyutunu elde edilir. <ol><li> &quot;- Gri değerini ortalama 256.&quot;: Her boncuk melanizm değerini elde etmek için, bir hesap makinesi veya hesap yazılımını kullanarak aşağıdaki işlemi gerçekleştirmek melanizm tedbir 0 tamamen beyaz bir görüntü temsil eden, 0 ile 256 arasında bir değerdir. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Dong, Y., Aguilar, R., Xi, Z., Warr, E., Mongin, E., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anopheles+gambiae+immune+responses+to+human+and+rodent+Plasmodium+parasite+species%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathog%22%5BJournal%5D)">Anopheles gambiae immune responses to human and rodent Plasmodium parasite species.</a> PLoS pathog. 2 (6), e52(2006).</li>
<li>Sadd, B. M., Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PERSPECTIVE%3A+Principles+of+ecological+immunology%5BTitle%5D)+AND+%22Evolutionary+Appl%22%5BJournal%5D)">PERSPECTIVE: Principles of ecological immunology.</a> Evolutionary Appl. 2 (1), 113-121 (2008).</li>
<li>Crompton, P. D., Moebius, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malaria+Immunity+in+Man+and+Mosquito%3A+Insights+into+Unsolved+Mysteries+of+a+Deadly+Infectious+Disease%2A%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immuno%22%5BJournal%5D)">Malaria Immunity in Man and Mosquito: Insights into Unsolved Mysteries of a Deadly Infectious Disease*.</a> Annu Rev Immuno. 32 (1), 157-187 (2014).</li>
<li>Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EVOLUTIONARY+ECOLOGY+OF+INSECT+IMMUNE+DEFENSES%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Entomol%22%5BJournal%5D)">EVOLUTIONARY ECOLOGY OF INSECT IMMUNE DEFENSES.</a> Annu Rev Entomol. 50 (1), 529-551 (2005).</li>
<li>Hillyer, J. F., Schmidt, S. L., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+phagocytosis+and+melanization+of+bacteria+and+Plasmodium+sporozoites+by+hemocytes+of+the+mosquito+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22J+parasito%22%5BJournal%5D)">Rapid phagocytosis and melanization of bacteria and Plasmodium sporozoites by hemocytes of the mosquito Aedes aegypti.</a> J parasito. 89 (1), 62-69 (2003).</li>
<li>Carissimo, G., Pondeville, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiviral+immunity+of+Anopheles+gambiae+is+highly+compartmentalized%2C+with+distinct+roles+for+RNA+interference+and+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Antiviral immunity of Anopheles gambiae is highly compartmentalized, with distinct roles for RNA interference and gut microbiota.</a> PNAS. 112 (2), E176-E185 (2015).</li>
<li>Christensen, B. M., Li, J., Chen, C. -C., Nappi, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanization+immune+responses+in+mosquito+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+parasito%22%5BJournal%5D)">Melanization immune responses in mosquito vectors.</a> Trends parasito. 21 (4), 192-199 (2005).</li>
<li>Collins, F., Sakai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+selection+of+a+Plasmodium-refractory+strain+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genetic selection of a Plasmodium-refractory strain of the malaria vector Anopheles gambiae.</a> Science. 234 (4776), 607-610 (1986).</li>
<li>Warr, E., Lambrechts, L., Koella, J. C., Bourgouin, C., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anopheles+gambiae+immune+responses+to+Sephadex+beads%3A+Involvement+of+anti-Plasmodium+factors+in+regulating+melanization%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Molec%22%5BJournal%5D)">Anopheles gambiae immune responses to Sephadex beads: Involvement of anti-Plasmodium factors in regulating melanization.</a> Insect Biochem Molec. 36 (10), 769-778 (2006).</li>
<li>Fuchs, S., Behrends, V., Bundy, J. G., Crisanti, A., Nolan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenylalanine+metabolism+regulates+reproduction+and+parasite+melanization+in+the+malaria+mosquito%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Phenylalanine metabolism regulates reproduction and parasite melanization in the malaria mosquito.</a> PloS one. 9 (1), e84865(2014).</li>
<li>Cerenius, L., Söderhäll, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prophenoloxidase-activating+system+in+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Immuno+Rev%22%5BJournal%5D)">The prophenoloxidase-activating system in invertebrates.</a> Immuno Rev. 198, 116-126 (2004).</li>
<li>Cerenius, L., Lee, B. L., Söderhäll, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+proPO-system%3A+pros+and+cons+for+its+role+in+invertebrate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Immuno%22%5BJournal%5D)">The proPO-system: pros and cons for its role in invertebrate immunity.</a> Trend Immuno. 29 (6), 263-271 (2008).</li>
<li>Moret, Y., Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMoret%2C+Y+%22Survival+for+immunity%3A+the+price+of+immune+system+activation+for+bumblebee+workers%22">Survival for immunity: the price of immune system activation for bumblebee workers</a>. , Science. New York, N.Y. 1166-1168 (2000).</li>
<li>Suwanchaichinda, C., Paskewitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Larval+Nutrition%2C+Adult+Body+Size%2C+and+Adult+Temperature+on+the+Ability+of+Anopheles+gambiae%28Diptera%3A+Culicidae%29+to+Melanize+Sephadex+Beads%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Effects of Larval Nutrition, Adult Body Size, and Adult Temperature on the Ability of Anopheles gambiae(Diptera: Culicidae) to Melanize Sephadex Beads.</a> J Med Entomol. 35 (2), 157-161 (1998).</li>
<li>Chun, J., Riehle, M., Paskewitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Mosquito+Age+and+Reproductive+Status+on+Melanization+of+Sephadex+Beads+in+Plasmodium-Refractory+and+-Susceptible+Strains+of+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invertebr+Pathol%22%5BJournal%5D)">Effect of Mosquito Age and Reproductive Status on Melanization of Sephadex Beads in Plasmodium-Refractory and -Susceptible Strains of Anopheles gambiae.</a> J Invertebr Pathol. 66 (1), 11-17 (1995).</li>
<li>Schwartz, A., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanization+of+Plasmodium+falciparum+and+C-25+Sephadex+Beads+by+Field-Caught+Anopheles+gambiae+%28Diptera%3A+Culicidae%29+from+Southern+Tanzania%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Melanization of Plasmodium falciparum and C-25 Sephadex Beads by Field-Caught Anopheles gambiae (Diptera: Culicidae) from Southern Tanzania.</a> J Med Entomol. 39 (1), 84-88 (2002).</li>
<li>Zahedi, M., Denham, D. A., Ham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation+and+melanization+responses+of+Armigeres+subalbatus+against+inoculated+Sephadex+beads%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invertebr+Pathol%22%5BJournal%5D)">Encapsulation and melanization responses of Armigeres subalbatus against inoculated Sephadex beads.</a> J Invertebr Pathol. 59 (3), 258-263 (1992).</li>
<li>Laughton, A. M., Garcia, J. R., Altincicek, B., Strand, M. R., Gerardo, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+immune+responses+in+the+pea+aphid%2C+Acyrthosiphon+pisum%5BTitle%5D)+AND+%22J+insect+physiol%22%5BJournal%5D)">Characterisation of immune responses in the pea aphid, Acyrthosiphon pisum.</a> J insect physiol. 57 (6), 830-839 (2011).</li>
<li>Barreaux, A. M. G., Barreaux, P., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overloading+the+immunity+of+the+mosquito+Anopheles+gambiae+with+multiple+immune+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite+Vector%22%5BJournal%5D)">Overloading the immunity of the mosquito Anopheles gambiae with multiple immune challenges.</a> Parasite Vector. 9 (1), 210(2016).</li>
<li>Lazzaro, B. P., Rolff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Danger%2C+Microbes%2C+and+Homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Danger, Microbes, and Homeostasis.</a> Science. 332 (6025), 43-44 (2011).</li>
<li>Arrighi, R. B. G., Faye, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+GPI+toxin%3A+a+common+foe+for+man+and+mosquito%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+trop%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum GPI toxin: a common foe for man and mosquito.</a> Acta trop. 114 (3), 162-165 (2010).</li>
<li>Michel, K., Kafatos, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+immunity+against+Plasmodium%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Molec%22%5BJournal%5D)">Mosquito immunity against Plasmodium.</a> Insect Biochem Molec. 35 (7), 677-689 (2005).</li>
<li>Osta, M. A., Christophides, G. K., Vlachou, D., Kafatos, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+in+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae%3A+comparative+and+functional+genomics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Innate immunity in the malaria vector Anopheles gambiae: comparative and functional genomics.</a> J Exp Biol. 207 (15), 2551-2563 (2004).</li>
<li>Christophides, G. K., Vlachou, D., Kafatos, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+and+functional+genomics+of+the+innate+immune+system+in+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Comparative and functional genomics of the innate immune system in the malaria vector Anopheles gambiae.</a> Immunol Rev. 198 (1), 127-148 (2004).</li>
<li>Blair, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+RNAi+is+the+major+innate+immune+pathway+controlling+arbovirus+infection+and+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Future+microbiol%22%5BJournal%5D)">Mosquito RNAi is the major innate immune pathway controlling arbovirus infection and transmission.</a> Future microbiol. 6 (3), 265-277 (2011).</li>
<li>Fragkoudis, R., Attarzadeh-Yazdi, G., Nash, A. A., Fazakerley, J. K., Kohl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+dissecting+mosquito+innate+immune+responses+to+arbovirus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Advances in dissecting mosquito innate immune responses to arbovirus infection.</a> J Gen Virol. , (2009).</li>
<li>Schwartz, A., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cost+of+immunity+in+the+yellow+fever+mosquito%2C+Aedes+aegypti+depends+on+immune+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+evol+biol%22%5BJournal%5D)">The cost of immunity in the yellow fever mosquito, Aedes aegypti depends on immune activation.</a> J evol biol. 17 (4), 834-840 (2004).</li>
<li>Lambrechts, L., Vulule, J. M., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+correlation+between+melanization+and+antibaterial+immune+responses+in+a+natural+population+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Genetic correlation between melanization and antibaterial immune responses in a natural population of the malaria vector Anopheles gambiae.</a> Evolution. 58 (10), 2377(2004).</li>
<li>Boete, C., Paul, R. E. L., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+immunosuppression+by+a+malaria+parasite+in+its+mosquito+vector%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect immunosuppression by a malaria parasite in its mosquito vector.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 271 (1548), 1611-1615 (2004).</li>
<li>Sacks, D., Sher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evasion+of+innate+immunity+by+parasitic+protozoa%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+immunol%22%5BJournal%5D)">Evasion of innate immunity by parasitic protozoa.</a> Nat immunol. 3 (11), 1041-1047 (2002).</li>
<li>Zambrano-Villa, S., Rosales-Borjas, D., Carrero, J. C., Ortiz-Ortiz, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+protozoan+parasites+evade+the+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Parasito%22%5BJournal%5D)">How protozoan parasites evade the immune response.</a> Trend Parasito. 18 (6), 272-278 (2002).</li>
<li>Damian, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parasite+immune+evasion+and+exploitation%3A+reflections+and+projections%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitology%22%5BJournal%5D)">Parasite immune evasion and exploitation: reflections and projections.</a> Parasitology. 115, S169-S175 (1997).</li>
<li>Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parasite+immune+evasion%3A+a+momentous+molecular+war%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+ecol+evol%22%5BJournal%5D)">Parasite immune evasion: a momentous molecular war.</a> Trend ecol evol. 23 (6), 318-326 (2008).</li>
<li>Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+defence%2C+parasite+evasion+strategies+and+their+relevance+for+%26%2334%3Bmacroscopic+phenomena%26%2334%3B+such+as+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Immune defence, parasite evasion strategies and their relevance for &#34;macroscopic phenomena&#34; such as virulence.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 364 (1513), 85-98 (2009).</li>
<li>Stearns, S. C., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+phenotypic+plasticity+in+life+history+traits-+predictions+of+reaction+norms+for+age+and+size+at+maturity%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">The evolution of phenotypic plasticity in life history traits- predictions of reaction norms for age and size at maturity.</a> Evolution. 40 (5), 893-913 (1986).</li>
<li>Stearns, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life-history+tactics%3A+a+review+of+the+ideas%5BTitle%5D)+AND+%22Q+rev+biol%22%5BJournal%5D)">Life-history tactics: a review of the ideas.</a> Q rev biol. 51 (1), 3-47 (1976).</li>
<li>Valtonen, T. M., Kleino, A., Ramet, M., Rantala, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Starvation+Reveals+Maintenance+Cost+of+Humoral+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Evol+Biol%22%5BJournal%5D)">Starvation Reveals Maintenance Cost of Humoral Immunity.</a> Evol Biol. 37 (1), 49-57 (2010).</li>
<li>Sheldon, B. C., Verhulst, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecological+immunology%3A+costly+parasite+defences+and+trade-offs+in+evolutionary+ecology%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Ecol+Evo%22%5BJournal%5D)">Ecological immunology: costly parasite defences and trade-offs in evolutionary ecology.</a> Trend Ecol Evo. 11 (8), 317-321 (1996).</li>
<li>Graham, A. L., Allen, J. E., Read, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+causes+and+consequences+of+immunopathology%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Ecol+Evol+S%22%5BJournal%5D)">Evolutionary causes and consequences of immunopathology.</a> Annu Rev Ecol Evol S. 36, 373-397 (2005).</li>
<li>Best, A., Long, G., White, A., Boots, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+implications+of+immunopathology+for+parasite+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">The implications of immunopathology for parasite evolution.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 279 (1741), 3234-3240 (2012).</li>
<li>Cator, L. J., George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((34%3BManipulation%26%2334%3B+without+the+parasite%3A+altered+feeding+behaviour+of+mosquitoes+is+not+dependent+on+infection+with+malaria+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">34;Manipulation&#34; without the parasite: altered feeding behaviour of mosquitoes is not dependent on infection with malaria parasites.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 280 (1763), 20130711(2013).</li>
<li>Voordouw, M. J., Lambrechts, L., Koella, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((No+maternal+effects+after+stimulation+of+the+melanization+response+in+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Oikos%22%5BJournal%5D)">No maternal effects after stimulation of the melanization response in the yellow fever mosquito Aedes aegypti.</a> Oikos. 117 (8), 1269-1279 (2008).</li>
<li>Paskewitz, S., Riehle, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+Plasmodium+refractory+and+susceptible+strains+of+Anopheles+gambiae+to+inoculated+Sephadex+beads%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+comp+immunol%22%5BJournal%5D)">Response of Plasmodium refractory and susceptible strains of Anopheles gambiae to inoculated Sephadex beads.</a> Dev comp immunol. 18 (5), 369-375 (1994).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Bu enjeksiyon tekniği teşvik ve sivrisinek melanizm tepkisini incelemek için yararlıdır. Örneğin, burada bağışıklık uyaranlar yükün etkisi incelenmiştir. Bu prosedürde kritik adım düzgün sivrisinek aşılamak etmektir. Uçuş kaslara veya sivrisinek kendisine herhangi bir aşırı hasar besleme gelen sivrisinek önleyebilir veya diseksiyonu önce öldürebilir. İkinci önemli bir adım onları öldürmeden onları dışarı vurmak için yeterince uzun buz üzerinde sivrisinek tutmaktır. Küçük bir kap kolaylaştırm...

Kendi manikür ya da orta bağırsak epiteli 4 kırmayı 3 - Böcekler parazit ve patojenler 1 karşı kendilerini korumak için bağışıklık yanıtları güveniyor. Sivrisinekler, bu tepkiler bakteriler 5, virüs 6, filarial nematod 7 ve sıtma parazitleri 1,8,9 karşı etkilidir. 12 - sivrisinekler, önemli bir immün yanıt melanin 10 yabancı parçacıkların kapsülleme olduğunu. 12 - Bu kapsülleme midgut veya sistem 10 dolaşan hemolimf meydana gelebilir. Bu melanizm yanıtı ön-fenoloksidaz sonucu 10 kaskad olduğu - 12 ve parazit ölümüne veya fagositoz yol açabilir. Hemocytes hücrelerin sayısı sınırlıdır yetişkin sivrisinek, olarak, melanizm Plasmodium parazitler veya filarial nematod 7 karşı gibi bir humoral tepki vardır.Diğer bazı böcekler, bu doğrudan 7 melanize için parazitin etrafında toplanıp hemocytes hücredir. Ayrıca melanin da yumurta üretimi ve manikür yaralar 7 şifa gibi birçok fizyolojik süreç için gereklidir. 18 - immün yanıtın uyarılması çeşitli tarım ve halk sağlığı modeli sistemlerinde 13 böcek bağışıklık incelemek için bir araç olarak kullanılır. 16,19 - konak-parazit etkileşimleri 14 çalışmak için Anopheles içinde gambiae sivrisinek, Afrika&#39;da sıtma büyük vektör kullanılır. Bu teknikler kendi örüntü tanıma reseptörleri (PRR) 2 ile parazit tespit böceklerin kapasitesine dayanmaktadır. Sivrisinekler ayrıca patojen ilişkili moleküler desenleri (PAMPS) olarak biyoloji ile müdahale diğer molekülleri tespit veya kolajen ve nükleik asitlerin serbest bırakılması nedeniyle kendi hasarlı hücreleri tespit edebilir. Sivrisinek bağışıklık hücresi23 - Bu hemocytes olarak s Tespit 20 kullanılmaktadır. Ana bağışıklık sinyal yolları vardır IMD, Toll, JAK / STAT 24 ve ribonükleik asit enterferans (RNAi) 25,26. Toll ve IMD yollar Hem melanizm yanıtını etkileyen ve pro-fenoloksidaz ile etkileşim 10 kaskad - 12. melanizm yanıtını uyarmak için kullanılan standart bir araç göğüs boşluğunun hemolimf içine küçük bir boncuk ile bir sivrisinek aşılama olduğunu. Melanin kapsülleme derecesi daha sonra sivrisinek diseksiyon ile boncuk aldıktan sonra 19 ölçülebilir. Birçok çalışmada, tek bir kordon sivrisinek 15,16,27 başına enjekte edilmiştir, ancak daha fazla boncuk enjekte melanizm yanıtı 19 sınırlarını incelemek için mümkündür. Bu boncuklar sivrisinek fizyolojisi rahatsızlık sınırlamak için bir enjeksiyon çözeltisi (serum fizyolojik) kullanılarak enjekte edilir vesivrisinek 15,16,27 kurutulması. Bir boya boncuk seçimi kolaylaştırmak için bu çözeltiye ilave edilir. Bu boncuk 15,16,27 almak için kullanılan disseksiyon çözeltisi için aynıdır. Patojenik olmayan uyaranlara böcekleri aşılamak avantajı immün yanıt üzerinde doğrudan etkisi odaklanmak yeteneğidir. 31 ya da bağışıklık kaçırma - 31 - 34 sebebiyle parazit patojenite 28 immünsupresyonun 29 hiçbir komplike etkileri vardır. Ayrıca, bu tür uzun ömürlü ya da doğurganlık gibi diğer yaşam öyküsü özellikleri üzerinde uyarıların sonuçları da ele alınabilir. Böylece, evrimsel ekoloji okuyan araştırmacılar bu tür araçları 2,35,36 gerektirebilir. Örneğin, bağışıklık meydan bombus arıları açlık altında kısaltılmış ömre sahiptir. Bağışıklık uyarılara ve dağıtımları Benzer olumsuz etkileri genellikle kısa sonuçlanan farklı omurgasız modellerin gözlenmiştirer ömrü ya da daha az üreme başarısı 13,27,37. Bu tür çalışmalar, değişen ortamlarda 2,4,38 gerçekleştirilebilir. Bağışıklık uyarıcı da İmmünopatolojiye 39,40 doğrudan odaklanan olanlara ilgi çekicidir. Bu protokol, melanizm yanıtı uyarmak ve doğrudan melanin miktarını ölçmek için sivrisinek ile boncukların aşılama dayanır. Bu, farklı deneysel ortamlarda melanizm yanıtı nicel ve nitel çalışma sağlar. Böyle bir araç, bu tür antibakteriyel yanıt olarak diğer bağışıklık tepkilerinin uyarılması için uzatılabilir bakteriler 41 ısı ile öldürdü. Aynı zamanda pek çok ekolojik ortamlarda yapılabilir.

<table><tbody><tr><td>Mikrokılcal cam tüpler GB120TF-10</td><td>science-products.com</td><td>GB120TF-10</td><td>http://www.science-products.com/Products/CatalogG/Glass/Glass.html</td></tr><tr><td>Microcaps Kılcal pipet ampulü</td><td>Drumond</td><td>1-000-9000</td><td></td></tr><tr><td>negatif şarjlı Sephadex CM C-25 boncuklar</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim, Almanya</td><td>C25120 SIGMA'nın</td><td>Metil yeşili başlatmak için çok azına ihtiyacı var</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>323829 ALDRICH,</td> Yazılımı başlatmak <td>için çok azına ihtiyaç duyar</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>açık kaynak</td><td></td><td>Sürüm 1.47f7 veya üstü</td></tr></tbody></table>

aşılanması<em&gt; anofel gambiae</emmelanization bağışıklık tepkisi tetikleyebilecek ve tedbir boncuk&gt; ile sivrisinekler

Inoculating Anopheles gambiae Mosquitoes with Beads to Induce and Measure the Melanization Immune Response

immün yanıtın uyarılması etkinliğini ve bağışıklık mekanizmaları incelemek için omurgasız çalışmalarda ortak bir araçtır. parçacıklar, bağışıklık sistemi tarafından algılanır ve immün efektör üretimini teşvik edecek şekilde Bu uyarım, böceklerin içine patojenik olmayan partiküllerin enjekte dayanır. Biz sivrisinek Anopheles gambiae içinde melanizm tepkisinin uyarılması burada odaklanır. Melanin koyu bir tabaka ile yabancı partiküllerin ve parazitlerin kapsül içinde melanizm yanıt sonuçları. Bu yanıtı uyarmak için, sivrisinek microcapillary cam tüpler kullanılarak göğüs boşluğunda boncuk ile aşılanır. Daha sonra, 24 saat sonra, sivrisinekler boncuk almak için kesilir. tanenin melanization derecesi görüntü analizi yazılımı kullanılarak ölçülür. Boncuk parazitlerin patojenik etkileri yoktur, ya da kapasite kaçınmak veya immün yanıtı bastırmak için. Bu enjeksiyonlar measu bir yoludurBağışıklık etkinlik ve doğurganlık veya uzun ömürlü gibi diğer yaşam öyküsü özellikleri, immün uyarıların etkisiyle yeniden. Tam doğrudan konak-parazit etkileşimleri inceleyerek aynı değildir, ama bağışıklık ve evrimsel ekoloji incelemek için ilginç bir araçtır.

<html> Bazı boncuk diğerlerinden daha az melanin (Şekil 1) ile kaplandı sivrisineklerin aynı şekilde boncuklar melanize tüm yoktu. Gerçekten de, bazı boncuklar (Şekil 1), diğerleri tamamen karanlık oysa, çünkü melanization eksikliği mavi kalmıştır. Melanizm değeri (mavi ve unmelanized boncuğa karşılık), 0 ile 100 (koyu ve ağır melanized boncuğa karşılık gelir) (Şekil 2a ve 2b) arasında bir değere doğrusal interpolasyon ta...

Boncuklarla aşılama yoluyla, tarif edilen teknik, hemolenf dolaşım sisteminde sivrisinek melanizasyon yanıtının uyarılmasını sağlar. Boncukları kaplayan melanin miktarı, immün yanıtın bir ölçüsü olarak diseksiyondan sonra ölçülebilir.

aşılanması<em&gt; Anofel gambiae</emMelanization Bağışıklık Tepkisi tetikleyebilecek ve Tedbir Boncuk&gt; ile Sivrisinekler

The stimulation of immune responses is a common tool in invertebrate studies to examine the efficacy and the mechanisms of immunity. This stimulation is ...

Bu aşılama tekniğinin genel amacı, sivrisinek bağışıklık tepkisini uyarmak ve melanizasyon reaksiyonunu ölçmektir. Bu yöntem, insan tepkisinin maliyetinin genetik temeli ve çevresel faktörlerin etkisi de dahil olmak üzere ekolojik immünoloji alanındaki soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu yöntem bağışıklama yanıtı hakkında bilgi sağlayabilse de, diğer omurgasız sistemlerdeki anti-viral veya anti-bakteriyel yanıt gibi diğer sistemlere de uygulanabilir.Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler, enjeksiyonun neden olabileceği böcek hasarı nedeniyle mücadele edeceklerdir. Şeffaf boncukları renklendirmek için 99 mililitre tuzlu su çözeltisine bir mililitre% 0.1 metil yeşil çözelti ekleyin. Bu% 0.001 metil yeşil enjeksiyon çözeltisidir.Daha sonra, 45 mililitre tuzlu su çözeltisine beş mililitre% 0.1 metil yeşil çözelti ekleyin. Bu %0.01'lik metil yeşili diseksiyon çözeltisi, boncukların renklenmesini ve diseksiyon sırasında gözlemlenmesini kolaylaştırmak için metil yeşili içinde 10 kat daha konsantredir. Çözeltileri 25 dakika boyunca 110 santigrat derecede otoklavlayın.Kılcal damarı hazırlamak için, en küçük boncuklardan biraz daha büyük, çok ince bir uç elde etmek için mikrok

inoculating-anopheles-gambiae-mosquitoes-with-beads-to-induce-measure

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Anofel stephensi sivrisinekler, sıtma yaşayan Hindistan ve Asya'da vektörleri. Bu video bu türün sivrisinek sıtma karşı direnç kazandırırlar transgenlerin microinjections gerçekleştirmek için teknik göstermektedir. Bu video gösterdi metodoloji diğer sivrisinek türlerinin mikroenjeksiyon teknikleri uygulanabilir.

Bir, Enjeksiyon. stephensi Embriyolar Sıtma dayanıklı Sivrisinekler oluşturun

Bu videoda, embriyo mikroenjeksiyon tekniği ile Anopheles gambiae sivrisineğinin embriyosuna gen sürücü yapısının verilmesini gösteriyoruz. Bu prosedür, homolog rekombinasyon yoluyla iletilen DNA yapısının, dönüştürülmüş sivrisinek popülasyonu oluşturmak için germ hattı hücrelerine entegrasyonuna izin verir.

Sivrisinek Embriyo Mikroenjeksiyonu: Germ Hattı Mutasyonları Oluşturmak için Anopheles Gambiae'nin Embriyo Sarısına Ekzojen DNA Verme Tekniği

Bu video, bir fare modelini canlı zayıflatılmış sporozoitlerle bağışıklamak için bir testi göstermektedir. Radyasyonla zayıflatılmış Plasmodium sporozoitler, farenin kulağının sırt tarafına enjekte edilir. Her iki kulakta birden fazla yere enjeksiyonlardan sonra, farenin iyileşmesine izin verilir.

Bir Fare Modelinde Canlı Zayıflatılmış Sporozoitlerle İntradermal Bağışıklama

İnsan ko-enfeksiyonunun in vitro olarak çoğaltılması zordur. Bununla birlikte, insan sıtma parazitleri, doğal olarak HIV ile enfekte olmuş taze izole edilmiş insan periferik kan mononükleer hücreleri gibi, in vitro olarak kolayca kültürlenebilir. Bu, HIV ko-enfeksiyonu bağlamında sıtma parazitlerine karşı erken bağışıklık tepkilerini incelemek için mükemmel bir model sağlar.

Bir<em&gt; İn Vitro</em&gt; HIV Co-enfeksiyon Bağlamında Sıtma için Bağışıklık Yanıtları Ölçüm Modeli

RNA girişimi (RNAi), gen fonksiyonunu ortaya çıkarmak için son derece değerli bir araçtır. Bununla birlikte, yetişkinlik öncesi aşamalarda RNAi kullanarak genleri hedefleme yeteneği, başlıca insan sıtma vektörü Anopheles gambiae'de sınırlıdır. Pupa gelişimi sırasında doğrudan enjeksiyon yoluyla gen fonksiyonunu azaltmak için bir RNAi protokolü tanımladık.

içine RNAi Tetik Teslimat<em&gt; Anofel gambiae</em&gt; Pupa

Burada, Plasmodium sporozoitlerinin intradermal enjeksiyonunu takiben fare derisinden miyeloid hücreleri izole etmek ve lenf düğümünü boşaltmak için bir protokol açıklıyoruz. Toplanan hücrelerin akış sitometrisi, cildi karakterize etmek ve parazite karşı drenaj lenf nodu inflamatuar yanıtını karakterize etmek için güvenilir bir test sağlar.

Canlı zayıflatılmış intradermal aşılama sonrasında Fare Deri ve akan lenf düğümü gelen Myeloid Hücre İzolasyonu<em&gt; Plasmodium</em&gt; Sporozoitler

Deneysel serebral sıtmanın bir fare modelini tarif ediyoruz ve manyetik rezonans görüntüleme kullanılarak inflamatuar ve mikrovasküler patolojinin in vivo olarak nasıl izlenebileceğini gösteriyoruz.

Manyetik Rezonans Görüntüleme Kullanarak Deneysel Serebral Sıtma Bir Modelinde Ödem Gelişimi ve Mikrovasküler Patolojinin İn Vivo Takibi

Protokol, φC31 sistemini kullanarak Anopheles sıtma sivrisineklerinin genomunda bölgeye yönelik değişikliklerin nasıl eldeılacağını açıklar. Açıklanan değişiklikler, attP taşıyan yerleştirme hatlarının genomunda transgenik kasetlerin hem entegrasyonunu hem de değişimini içerir.

Sıtma Anopheles Vektörlerinde SiteYe Yönelik φC31 Aracılı Entegrasyon ve Kaset Değişimi

Mikroenjeksiyon teknikleri, sivrisineklerin genomlarına eksojen genleri sokmak için gereklidir. Bu protokol, James laboratuvarı tarafından DNA yapılarını dönüştürülmüş sivrisinekler üretmek için Anopheles gambiae embriyolarına mikroenjeze etmek için kullanılan bir yöntemi açıklar.

Anopheles gambiae Embriyoları için Mikroenjeksiyon Yöntemi

Caenorhabditis elegans'ta rutin olarak kullanılan RNA girişimi (RNAi) için bir dağıtım yöntemi olan bakteriler tarafından üretilen dsRNA'nın oral yoldan uygulanması, burada yetişkin sivrisineklere başarıyla uygulanmıştır. Yöntemimiz, enjeksiyon kullanmadan sağlam ters genetik çalışmalarına ve iletimi engelleyen vektör çalışmalarına izin verir.

Yetişkin Anofeller gambiae Sivrisineklerine Etkili Oral RNA İnferferi (RNAi) Uygulaması

Standart membran besleme testi (SMFA), potansiyel sıtma önleyici bileşiklerin değerlendirilmesi ve tanımlanması için altın standart olarak kabul edilir. Bu yapay besleme sistemi, bu tür bileşiklerin Plasmodium falciparum parazitinin yoğunluğu ve prevalansı üzerindeki etkilerini daha fazla değerlendirmek için sivrisinekleri enfekte etmek için kullanılır.

Anofellerde Plasmodium falciparum Enfeksiyonunun Tespiti için Standart Membran Besleme Testi

Öğrenin, Anopheles gambiae sivrisineklerinde melanizasyon yanıtını uyarmak için boncuk aşılama tekniğini. Bu yöntem, ekolojik immünolojide bağışıklık tepkilerini nicel olarak ölçmeyi sağlar.

aşılanması

Daha fazla video keşfet