Name: Kalp Fonksiyon Çalışmaları Diseksiyon ve Bal Arısı Dorsal Vessel Gözlem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 52 s
Description: Öğrenin, bal arısı dorsal damarına kardiyomodülatör ajanlar uygulayarak kalp hızı değişikliklerini nasıl gözlemleyeceğinizi. Bu basit yöntem, böcek fizyolojisi ve polinatör sağlığı araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, teknik yorumları ve önerileri için Dr. Jeffrey Bloomquist ve Daniel Swale'e teşekkür eder. Bu proje kısmen Entomoloji Bölümü ve Virginia Tech Tarım ve Yaşam Bilimleri Koleji tarafından finanse edildi.

1. Toplama ve Test Konularının hazırlanması <ol><li> koloni arı uygun sayıda toplayın. NOT: Gerekli sayı boyutu ve deney kapsamında, aynı zamanda araştırmacının beceri sadece bağlıdır. 2 tedavi grubu, grup başına 10 arı istenen örneklem büyüklüğü ile varsa Örneğin, bir makul yetenekli araştırmacı başarısız diseksiyonlardan hesap ve skoru 20 Yararlı videolar ile sonuna kadar en az 30 arı toplamak olabilir. </li><li> toplanması ve diseksiyon arasında geçen süreyi en aza indirin. NOT: Arılar gün önce diseksiyon için laboratuvarda muhafaza edilebilmesine rağmen, diseksiyonları başarı oranı (bir disseke dorsal geminin istikrarlı bir kalp hızını sürdürmek olasılığı yani) zaman miktarına göre azaldığı gözlenmiştir edildiğini arılar uzakta koloniden yerleştirilmiştir. <ol><li> Laboratuvarda muhafaza ederken su ve yiyecek kaynağı ile arıları sağlamak. EXA içinmple, en azından (bu en az 6 saat süreleri için yeterli olan) su içinde sükroz çözeltisi (ağ / hac)% 50 erişimi sağlar. uzun süreler için, arılar bal erişim sağlar. </li><li> Yaklaşık 32 ° C ve% 60-80 bağıl nem sıcaklıkta laboratuar gecede Ev arılar stresi azaltmak ve dehidratasyonu önlemek için. </li></ol></li><li> Diseksiyon önce, taşıma yardımcı olmak için kısaca arıları uyutmak. NOT: Bu diseksiyonları başarı oranını azaltmak ve verimi azaltabilir. <ol><li> buz üzerinde yerleştirerek ya da sadece yeterince uzun işlemede yardımcı olmak amacıyla hareketi azaltmak için bir buzdolabına ya arıları Chill. </li><li> Alternatif olarak, kısaca ele alınmasında yardımcı olmak amacıyla CO 2 arılar maruz bırakmaktadır. NOT: soğuğa maruz kalma Genişletilmiş diseksiyonları başarı oranını azaltabilir. Genişletilmiş veya ayrıca diseksiyonları başarı oranını azaltabilir CO 2 maruz kalma tekrarladı. </li></ol></li></ol> 2. DiseksiyonDorsal Karın Duvarı NOT: Arılar diseksiyon anda hayatta olması gerekir. <ol><li> forseps ve / veya mikrodiseksiyon makas, kaldırmak bacaklarını ve kanatlarını kullanarak karın diseksiyonu kolaylaştırmak için. Küçük bir beher veya disseksiyonlar arasındaki aletleri durulama amacıyla yakın damıtılmış su ile dolu benzer tutunuz. </li><li> Forseps ile arı frenleyici olsa da, birinci ve ikinci tergites arasındaki dorsal karın duvarı boyunca yanal kesmek için mikrodiseksiyon makas kullanmak (Şekil 1). </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55029/55029fig1.jpg" /> Şekil 1: Arı karın Dorsal görünümü. kırmızı çizgi ile gösterildiği gibi sadece ilk kesi, birinci ve ikinci tergites arasında yapılmalıdır. Ölçek çubuğu = 1 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig1large.jpg" target="_blank">Onu tıklayınız</a>E bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için. <ol start="3"><li> Hafifçe forseps ile ikinci tergite posterior kenarını sıkarken, stinger başlangıç kesi arı her tarafı boyunca uzunlamasına kesilmiş (bakınız Şekil 2). gastrointestinal sistem delinmesiyle önlemek için kesim dikkatli olun. </li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/55029/55029fig2.jpg" /> Şekil 2: Arı karın Yanal görünümü. kırmızı çizgi ile gösterilen şekilde, ikinci ve üçüncü kesikler, karın her iki tarafı boyunca yapılmalıdır. Ölçek çubuğu = 1 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="4"><li> ince forseps ikinci bir set için makas değişimi ve dikkatle geri kalanı o gelen dorsal karın duvarı ayırmak için onları kullanmakKarın f. Yavaşça stinger ve dorsal karın duvarında asılı kalır gastrointestinal sistemin herhangi bir kısmını çıkarmak. içindekiler dorsal geminin görselleştirme engel kat karın duvarı ve olduğu gibi, gut kırılması kaçının. </li></ol><img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/55029/55029fig3.jpg" /> Şekil 3: dorsal geminin görünümü. Bağırsak ve ısırgan otu çıkarıldıktan sonra, dorsal damar disseke dorsal karın duvarı orta hat boyunca görülebilir. Ölçek çubuğu = 1 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="5"><li> Dorsal damar görülebilecek şekilde kamera altında istenen yönde dorsal karın duvarı düzenleyin (bakınız Şekil 3). herhangi bir aşırı ab uzak trim için mikrodiseksiyon makas yararlanındorsal geminin görselleştirme engellemektedir dominal duvar. Düzgün yer alan zaman dorsal karın duvarının şekli sığ fincan veya kase benzer olmalıdır. <ol><li> dorsal damar arının sondaki karın segment içine uzatmak olmadığından, sırt geminin görselleştirme geliştirmek amacıyla son tergite kaldırın. </li></ol></li><li> ayarlanabilir bir birim mikropipet kullanarak, fizyolojik koşulları sürdürmek ve sürekli bir yayın sinyali sağlamak için bir izotonik çözelti 10 ul ile sırt damarı kapsamaktadır. Not: önerilen çözüm çeyrek gücü Ringer çözeltisi (0.120 g / l kalsiyum klorür, 0.105 g / L potasyum klorür, 0.050 g / L sodyum bikarbonat ve 2.250 g / L sodyum klorid) sabit bir şekilde kolaylaştırılması için bulunmuştur edilmiştir, sürekli kalp atışı. </li></ol> 3. Gözlem ve Kalp Hızı modülasyonu <ol><li> istikrarlı, sürekli kalp atışı elde edilene kadar dorsal damar rahatsız oturmak için izin(Genellikle 300 saniye içinde). NOT: Kalp atışı dorsal geminin ritmik kasılmalar olarak görüntülenmiştir. Başlangıçta, arı anestezi edildi, özellikle hiçbir kalp atışı orada görünebilir, ancak kalp genellikle birkaç dakika için izotonik çözelti içinde dinlendikten sonra dayak devam edecektir ve saatlerce dayak devam edebilir, bu çözelti içinde kalmış kalır sağladı. </li><li> dakika (BPM) başına atım sayısı bakımından kalp hızını ölçün. <ol><li> 60 saniye süresince gözlenen kasılma numarasını kaydedin. Bu süreci kolaylaştırmak için bir el taksitli sayacı ve bir zamanlayıcı kullanın. </li></ol></li><li> önce ve cardiomodulatory bileşik ile tedavi sonrasında gözlenen BPM&#39;i kaydederek kalp hızındaki değişimi ölçer. Not: zaman test edilen bileşiğe bağlı olarak değişebilir, kalp hızı üzerinde bir etkiye gözlemek için gerekli olsa da, kalp hızı değişiklikleri genellikle birkaç dakika içinde görülür. <ol><li> hemen önce bazal kalp hızını belirleyinHerhangi bir test bileşiğinin eklenmesi. NOT: Tedavi sonrası kalp hızı genellikle 90 ila 120 saniye sonra tespit edilebilir. </li><li> Dorsal damar yıkanmak için kullanılan aynı izotonik çözelti içinde eritilmesi suretiyle potansiyel cardiomodulators (ör octopamine) hazırlayın. </li><li> Bir Mikropipet kullanarak dorsal kabı çevreleyen çözüm test bileşiklerinin ekleyin. </li></ol></li><li> daha doğru ve daha yüksek verim için, her bir test konusunun bir video kaydı yapmak ve daha sonra daha sonra kalp atış hızını puan videoları kullanın. NOT: Bu videoların neredeyse sürekli üretimi kolaylaştırmak amacıyla diseksiyonu sendeleyip tek araştırmacı sağlar. Video kaydederken, önerilen minimum uzunluk herhangi bir test bileşiği ile yaklaşık 240 saniye 60 saniye işareti eklenir ediliyor. Bu araştırmacı bazal kalp hızı ve daha sonra tedavi sonrası kalp hızı 120 saniye puanlama için başka 60 sn penceresi puanlama için 60 sn penceresi sahip olmasını sağlartedavi sonrası. </li></ol>

<ol><li>Klowden, M. J. Circulatory Systems. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKlowden%2C+MJ+%22Physiological+Systems+in+Insects%2C+3rd+Edition%22">Physiological Systems in Insects, 3rd Edition</a>. , 3rd, 365-413 (2013).</li>
<li>League, G. P., Onuh, O. C., Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+structural+and+functional+analysis+of+the+larval+and+adult+dorsal+vessel+and+its+role+in+hemolymph+circulation+in+the+mosquito+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparative structural and functional analysis of the larval and adult dorsal vessel and its role in hemolymph circulation in the mosquito Anopheles gambiae.</a> J Exp Biol. 218 (Pt 3), 370-380 (2015).</li>
<li>Wasserthal, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+Hemolymph+Circulation+in+the+Butterfly+Papilio-Machaon+L+Revealed+by+Contact+Thermography+and+Photocell+Measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Oscillating Hemolymph Circulation in the Butterfly Papilio-Machaon L Revealed by Contact Thermography and Photocell Measurements.</a> J Comp Physiol. 139 (2), 145-163 (1980).</li>
<li>Wasserthal, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+circulation+and+tracheal+ventilation+in+holometabolous+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Interaction of circulation and tracheal ventilation in holometabolous insects.</a> Adv Insect Physiol. 26, 297-351 (1996).</li>
<li>Schwab, E. R., Chilson, R. A., Eddleman, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heartbeat+Rate+Modulation+Mediated+by+the+Ventral+Nerve+Cord+in+the+Honey-Bee%2C+Apis-Mellifera%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B-Biochem+Syst+Environ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heartbeat Rate Modulation Mediated by the Ventral Nerve Cord in the Honey-Bee, Apis-Mellifera.</a> J Comp Physiol B-Biochem Syst Environ Physiol. 161 (6), 602-610 (1991).</li>
<li>Kaiser, W., Weber, T., Otto, D., Miroschnikow, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+supply+of+the+heart+and+electrocardiogram+potentials+with+reversed+polarity+in+sleeping+and+resting+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Oxygen supply of the heart and electrocardiogram potentials with reversed polarity in sleeping and resting honey bees.</a> Apidologie. 45 (1), 73-87 (2014).</li>
<li>Papaefthimiou, C., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Octopamine--a+single+modulator+with+double+action+on+the+heart+of+two+insect+species+%28Apis+mellifera+macedonica+and+Bactrocera+oleae%29%3A+Acceleration+vs.+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Octopamine--a single modulator with double action on the heart of two insect species (Apis mellifera macedonica and Bactrocera oleae): Acceleration vs. inhibition.</a> J Insect Physiol. 57 (2), 316-325 (2011).</li>
<li>Castro, C. A., Hogan, J. B., Benson, K. A., Shehata, C. W., Landauer, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral-Effects+of+Vehicles+-+Dmso%2C+Ethanol%2C+Tween-20%2C+Tween-80%2C+and+Emulphor-620%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavioral-Effects of Vehicles - Dmso, Ethanol, Tween-20, Tween-80, and Emulphor-620.</a> Pharmacol Biochem Behav. 50 (4), 521-526 (1995).</li>
<li>Papaefthimiou, C., Papachristoforou, A., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biphasic+responses+of+the+honeybee+heart+to+nanomolar+concentrations+of+amitraz%5BTitle%5D)+AND+%22Pestic+Biochem+Phys%22%5BJournal%5D)">Biphasic responses of the honeybee heart to nanomolar concentrations of amitraz.</a> Pestic Biochem Phys. 107 (1), 132-137 (2013).</li>
<li>Roeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Octopamine+in+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Octopamine in invertebrates.</a> Prog Neurobiol. 59 (5), 533-561 (1999).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Drosophila+heartbeat+by+neurotransmitters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B%22%5BJournal%5D)">Modulation of Drosophila heartbeat by neurotransmitters.</a> J Comp Physiol B. 167 (2), 89-97 (1997).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Burada sunulan protokol, farmakolojik bileşiklerin bal arısı kalp atış hızı üzerindeki etkilerini test etmek için basit ve etkili bir yaklaşım sağlar. Canlı bir böceğin5 ventral sinir kordonunu kesen veya dorsal damarı7 açığa çıkarırken ventral sinir kordonunu kesen önceki deneylerde gözlemlendiği gibi, merkezi sinir sistemi regülasyonunun kaybı, stabil, düşük frekanslı bir kalp atışı ile sonuçlanır. Düşük atım frekansı, araştırmacının hassas veya pahalı enstrümantasyona güvenmek zorunda kalmadan ka...

Bu metodoloji genel amacı araştırmacı hızlı ve kolay gözlemlemek ve farmakolojik ajan bal arılarının kalp atım hızı üzerindeki etkisini ölçmek için izin vermektir. Arılar, diğer böcekler gibi, hemocoel olarak bilinen vücut boşluğuna boyunca, hemolimf, kan böcek eşdeğer yaymaktadır açık dolaşım sistemi var. Hemolimf dolaşımı besin bağışıklık faktör, atık ürünleri, hem de nörohormonlar ve diğer sinyal molekülleri 1 taşınması için gereklidir. Ödünç böcek dorsal orta hat, hem de bir aksesuar pulsatil organları boyunca uzanır dorsal kabında ile kolaylaştırılır. dorsal damar, iki fonksiyonel bölüme ayrılırdı karın kalp ve göğüs ve baş aorta belirlenir. Göğüs ve kafa doğru kalp pompası hemolimf yayılır kasılmalar, aksesuar pulsatil organları ekstremitelerde hemolimf akışını sağlamak ise. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; Böcek kardiyak fonksiyon böceğin boyutu, fizyoloji, ya da yaşam aşamasına bağlı olarak, çeşitli yöntemler kullanılarak görülebilir. Larva veya daha küçük böcekler kalp hızı gözlemlemek için ortak bir yaklaşım intravital görüntüleme 2 kullanımıdır. Bu açık bir şekilde karın duvarından sırt damarı görüntülemek için zor olabilir Bu yöntem, bununla birlikte, yetişkin arı daha az kullanışlıdır. Böcekler dahil olmak üzere, arıların çeşitli kalp hızını kaydetmek için bir yöntem haline, kardiyak darbelerini 3,4 algılamak için böceğin dış kısmına uygulanmıştır termistör kullanan iletişim termografi, kullanılmasıdır. Yetişkin arıların kalp hızı da bir elektrik empedans sinyali 4,5 ölçmek için bir elektrofizyolojik tekniği kullanılarak kaydedilmiştir. Bu teknik, kalp yanında hayvana elektrotların yerleştirilmesi ve kalp atışları 4 kaydetmek için bir empedans dönüştürücü kullanılmasını gerektirir. Benzer şekilde, elektrokardiyogram DETEC için kullanılmaktadırkalp tarafından üretilen ve kardiyak aktivitenin 6 değişiklikleri gözlemek için arının video kaydı ile birlikte elektrik sinyallerini t. Bu yaklaşımların belirgin bir avantajı kalp hızı oldukça konuda fizyolojik yanıtlar dizi kullanılabilirliğini sağlamak için yardımcı olan bir disseke numune, daha, dokunulmamış, canlı bir arı değerlendirilir olmasıdır. Bu yaklaşımların zorlukları konu, kalp hızını değiştirmek, hem de farmakolojik ajanların test ederken uygun bir dağıtım yöntemi belirleme olabilir dış değişkenler ve uyaranlara sınırlamak için ihtiyaç immobilizasyon veya anesthetization için muhasebe sayılabilir. Arı kardiyak aktivite eğitimi için kullanılan bir başka yaklaşım kısmen bir kuvvet yer değiştirme dönüştürücü 7&#39;yi kullanarak dorsal damar kasılmaları daha sonra, kalp maruz ölçmek için böcek incelemek etmektir. Bu protokol, kalp sürekli çalışan serum fizyolojik ve test işbirliği ile yıkanıyormpounds konu 7 uygulaması için bu çözelti içinde çözündürülebilir. Bu yöntem ve bu, daha önce tarif edildiği arasındaki önemli bir fark, ventral sinir kablosu, merkezi sinir sistemi, kalp hızı 5 modüle oynadığı gösterilmiştir ki rol ortadan kaldırılmış olmasıdır. Sonuç, genellikle oldukça düzensiz bazal kalp atışı, çok daha düşük frekansta stabilize ve genlik daha tipik bir canlı böcek 5,7 gözlenen olmasıdır. Ne bu yöntemlerin hepsi ortak noktası ise yapılacak üzere, uzmanlık belirli bir seviyeye ek olarak, son derece özel ve genellikle pahalı ekipman gerektirir olmasıdır. Belki de en büyük dezavantajı, bu yaklaşımların hiçbiri, özellikle bu potansiyel cardiomodulatory bileşiklerin bir kütüphanenin taranması gibi konularda çok sayıda test ihtiva eden deneyler için uygun olmasıdır. Burada anlatılan yaklaşımın en büyük gücüsadeliği. protokol ayarı az yer kaplar, usta nispeten kolaydır, ve sadece minimal mali giriş gereklidir. yöntem bazı arılar, birkaç cerrahi aletler, izotonik solüsyon biraz daha gerektirir ve bir dijital mikroskop veya dijital kamera ile geleneksel mikroskop ya. Arılar dorsal gemi görselleştirmek için disseke ve dijital video öncesi ve farmakolojik ajanlar ile tedavi sonrası kalp hızını kaydetmek için kullanılır. Video kayıt kalp hızı değişiklikleri gözlemlemek için aslında gerekli değildir, ancak, büyük ölçüde verim artar (yani, belirli bir zaman miktarı işlenebilir konuların sayısı). Araştırmacı seferde videoların çok sayıda kayıt ve daha sonra bir daha uygun bir zamanda bu videoları puanlama verimliliği en üst düzeye çıkarabilirsiniz. Bu yaklaşımın bir diğer avantajı videoları araştırmacı puanlama süreci kesintiye gerektiğini, baştan başlamak ve v için daha kolay hale getirmek için izin olduğunuiewer önyargı azaltmak için tedaviye kör edilmesi.

<table><tbody><tr><td>Dino-Lite Edge dijital USB mikroskop</td><td>Dino-Lite</td><td>AM4815ZT</td><td>Herhangi bir dijital mikroskop veya benzeri bir kurulum yeterli olacaktır</td></tr><tr><td>Mikroskop standı</td><td>Dino-Lite</td><td>RK-10</td><td>Dijital mikroskop için uygun herhangi bir stand</td></tr><tr>Dijital <td>mikroskop için gerekli</td><td>dizüstü bilgisayar veya PC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiseksiyon makası (Vannas, 8 cm, Düz, 5 mm Bıçaklar)</td><td>World Precision Instruments</td><td>14003</td><td>Mikrodiseksiyon için uygun herhangi bir benzer makas yeterli olacaktır</td></tr><tr><td>Mikrodiseksiyon Forseps, 10.2 cm, Açılı (2 çift)</td><td>World Precision Instruments</td><td>504482</td><td>Mikrodiseksiyon için uygun herhangi bir benzer forseps yeterli olacaktır</td></tr><tr><td>Ringers solüsyonu 1/4 mukavemet tabletleri&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>96724-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon tepsisi</td><td></td><td></td><td>Mikrodiseksiyon için uygun herhangi bir yüzey</td></tr><tr><td>Tek kanal 10 ve mikro; l pipet</td><td></td><td></td><td>10 & mikro'yu doğru bir şekilde iletebilen herhangi bir cihaz; l hacim</td></tr><tr><td>Pipet uçları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Küçük beher veya su</td><td></td><td></td> kabı <td>Konular arasında aletleri durulamak için kullanılır</td></tr><tr><td>El çetele sayacı</td><td>Ofis Deposu</td><td>295033</td><td>Benzer herhangi bir ürün yeterli olacaktır</td></tr><tr><td>Zamanlayıcı</td><td>Ofis Deposu</td><td>644219</td><td>Benzer herhangi bir ürün yeterli olacaktır</td></tr><tr><td>Deiyonize su</td><td></td><td></td><td>Ringers çözeltisinin ve durulama aletlerinin hazırlanması</td></tr></tbody></table>

kalp fonksiyon Çalışmaları diseksiyon ve bal arısı dorsal vessel gözlem

Dissection and Observation of Honey Bee Dorsal Vessel for Studies of Cardiac Function

Avrupa bal arısı, Apis mellifera L., bal üretimi ve mahsul tozlaşma hizmetleri sağlamasıyla tanınan değerli bir tarımsal ve ticari kaynak olmasının yanı sıra, hafıza ve öğrenme, yaşlanma ve daha fazlasını incelemek için kullanılan önemli bir model sosyal böcektir. Burada, böcekte kalbin rolüne hizmet eden sırt damarını görselleştirmek için bir arının dorsal karın duvarının diseksiyonu için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz. Başarılı bir diseksiyon, uygun koşullar altında uzun süre sabit bir kalp atışını sürdürebilen işlevsel bir kalbi ortaya çıkaracaktır. Bu, araştırmacının kardiyomodülatör bileşiklerin dorsal damara uygulanması yoluyla kalp atış hızını manipüle etmesine izin verir. Araştırmacı, dijital bir mikroskop veya dijital kamera ile donatılmış bir mikroskop kullanarak, test bileşikleri ile tedaviden önce ve sonra dorsal damarın video kayıtlarını yapabilir. Videolar daha sonra, tedaviyi takiben kalp atış hızındaki değişikliklerin yanı sıra kalp atışı modelindeki değişiklikleri belirlemek için kullanıcı için uygun bir zamanda puanlanabilir. Bu protokolün avantajları, kurulumunun nispeten ucuz olması, öğrenilmesinin kolay olması, az alan veya ekipman gerektirmesi ve yürütülmesinin çok az zaman almasıdır.

Bu protokol kullanılarak test edilebilir, farmakolojik olarak aktif bileşiklerin bir çoğu, suda çözünür olmadığı için, test bileşikleri dorsal damar yıkanmak için kullanılan izotonik çözeltisi ile iletilecektir sağlayacak güvenilir bir çözücü olması gerekmektedir. Dimetil sülfoksit (DMSO), yaygın olarak hayvan 8 deneysel ilaçları ve diğer bileşiklerin sağlanması için bir araç olarak kullanılan bir çözücü olduğunu ve bal arısı kalp aktivitesi 9 pestisit etkisini ince...

Bal arısı ve diğer böceklerin abdominal sırt damarı, memeli kalbinin işlevsel eşdeğeri olarak hizmet eder ve besin taşınması, atıkların uzaklaştırılması, bağışıklık fonksiyonu ve daha fazlasında önemli bir rol oynar. Burada arı kalp atış hızının görselleştirilmesi ve farmakolojik manipülasyonu için bir protokol açıklıyoruz.

Kalp Fonksiyon Çalışmaları Diseksiyon ve Bal Arısı Dorsal Vessel Gözlem

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination ...

Bu protokolün genel amacı, kardiyomodülatör ajanların dorsal damara doğrudan uygulanmasından kaynaklanan arı kalp atış hızındaki değişiklikleri gözlemlemektir. Bu yöntem, böcek fizyolojisi ile ilgili, özellikle tozlayıcı sağlığı ile ilgili olanlar hakkında önemli soruları cevaplayabilir. Bu tekniğin ana avantajı, basitliğidir, bu da onu uygun maliyetli ve gerçekleştirmesi kolay hale getirir.Koloniden uygun sayıda arı toplayın. İhtiyatlı bir önlem, yetenekli araştırmacıların bile planlaması gereken başarısız diseksiyonları hesaba katmak için yüzde 50'lik bir fazlalık eklemek olacaktır. Laboratuvarda barındırılırken arılara bir su ve yiyecek kaynağı sağlayın.Altı saatten az olan barınma süreleri için en az yüzde 50 sükroz çözeltisine erişim sağlayın. Daha uzun süreler boyunca, bala da erişim sağlar. Arıları gece boyunca yaklaşık 32 santigrat derecede ve yüzde 60 ila 80 bağıl nemde barındırın.Taze toplanan arıların diseksiyonu daha kolaydır, bu nedenle mümkün olan en kısa sürede diseksiyona devam edin. Diseksiyonlardan önce, arıları kısa bir süre karbondioksite maruz bırakarak hareketlerini azaltacak kadar uyuşturun. Anestezinin derinliği diseksiyonu daha zor hale getirebilir, bu nedenle mümkün olduğunca az gaz kullanın.Arılar diseksiyon sırasında canlı olmalıdır. Başlamak için, bacakları ve kanatları çıkarmak için forseps veya mikro diseksiyon makası kullanın. Her manipülasyondan sonra, aletleri damıtılmış suda durulayın.Daha sonra, arıyı forseps ile kısıtlayın ve makası kullanarak birinci ve ikinci tergitler arasında dorsal karın duvarı boyunca yanal olarak kesin. Ardından, ikinci tergitin arka kenarını forseps ile hafifçe kavrayın ve ilk kesiden iğneye kadar arının her iki tarafı boyunca uzunlamasına dikkatlice kesin. Sindirim sistemini delmeyin.Daha sonra, dorsal karın duvarını karnın geri kalanından dikkatlice ayırmak için ince forseps kullanın. Ardından, iğneyi nazikçe çıkarın ve sindirim sisteminin dorsal karın duvarına bağlı kalan herhangi bir bölümünü dikkatlice çıkarın. Sırt damarının görselleştirilmesini engelleyebileceğinden, bağırsak içeriğini serbest bırakmayın.Şimdi sırt damarının görselleştirilmesini iyileştirmek için son turgiti çıkarın. Bir sonraki adım, dorsal damarı görmek için sahneyi ayarlamak ve görüşünü engelleyen fazla karın duvarını kesmektir. Sırt karın duvarının şekli, uygun şekilde yerleştirildiğinde sığ bir fincan veya kaseye benzemelidir.Fiziksel koşullarını korumak için sırt damarını 10 mikrolitre önerilen izotonik solüsyonla örtün ve sırt damarının görüntülenmesini engelleyen kalan zarı çıkarın. İzotonik çözeltinin eklenmesi, gevşek zarın yüzmesine ve sırt damarının görünümünü gizlemesine neden olabilir. Bu zar parçaları ince forsepslerle çıkarılabilir, ancak sırt damarına zarar vermemek için dikkatli olun.Başlangıçta, kalp atışı yok gibi görünebilir, ancak izotonik çözeltide birkaç dakika içinde kalp genellikle atmaya devam eder. Solüsyonda yıkanmaya devam edilirse, kalp saatlerce atmaya devam edebilir. Stabil, sürekli bir kalp atışı elde edilene kadar sırt damarının rahatsız edilmeden oturmasına izin verin.Bu genellikle beş dakika içinde gerçekleşir. Bir el uyarı sinyali sayacı kullanarak temel kalp atış hızını ölçün veya daha fazla doğruluk için deneyin video kaydını yapın ve ölçümleri daha sonra yapın. İlk tedaviden önce en az bir dakikalık stabil kalp atışları kaydedin.Şimdi, banyo ile aynı izotonik çözelti içinde ideal olarak çözülen potansiyel kardiyomodülatörleri uygulamaya hazırlanın. Bu nedenle, önerilen çözelti, çoğu bileşiğin çözünmesine izin veren bir miktar DMSO içerir. Bir test bileşiği ekledikten sonra, kalp atış hızındaki değişikliği ölçmeden önce en az bir dakika bekleyin.Kalp atış hızının doğru bir ölçümünü elde etmek için en az bir dakikalık veri gerekir ve genellikle birkaç dakikalık veri gerekir. Bir dizi DMSO konsantrasyonu içeren çeşitli izotonik çözeltiler, kalp atış hızı üzerindeki herhangi bir etki için test edildi. Yüzde beş ve yüzde 10 DMSO, kalp atış hızını önemli ölçüde azaltırken, yüzde bir DMSO izotonik çözeltisi yoktu.Bu yüzden deneyler için yüzde bir çözelti kullanıldı. Omurgasızlarda iyi karakterize edilmiş bir demodülatör olan ahtapotamin, araca karşı test edildi. Daha yüksek oktopamin konsantrasyonları kalp atış hızını önemli ölçüde artırdı ve böylece testin faydasını gösterdi.Bu videoyu izledikten sonra, sırt damarını görselleştirmek için bir diseksiyonun nasıl yapılacağı ve potansiyel kardiyomodülatörlerin arı kalp atış hızı üzerindeki etkilerinin nasıl test edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu tekniğe hakim olduktan sonra, uygun şekilde yapılırsa birkaç dakika içinde bir diseksiyon tamamlanabilir.

dissection-observation-honey-bee-dorsal-vessel-for-studies-cardiac

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Larva ve yetişkin kalpte görüntülenmesi için gerekli...

Dayak Kalp görselleştirme Drosophila</em

Larva kalp fonksiyonları izlemek için çeşitli yollar...

Larvaların olarak izlenmesi Kalp Fonksiyonu Drosophila melanogaster Fizyolojik Çalışmaları

Bu video, sineğin yetişkin kalbini veya başka bir şekilde Drosophila sırt damarı olarak adlandırılıyor. Özellikli protokol, canlı kalp hazırlıkları için bir diseksiyon prosedürünü göstermektedir.

Drosophila kalbinin hazırlanması: yetişkin sineklerde kalp fizyolojisini incelemek için bir teknik

Bu videoda, kardiyak gelişim, olgunlaşma ve yaşlanmayı incelemek için birden fazla gelişim aşamasında kalbi bir zebra balığından izole etme tekniği açıklanmaktadır.

Kalp Diseksiyonu: Zebra Balığı Kardiyak Gelişimini Gözlemlemek İçin Bir Yöntem

İzole çalışan kalp modelleri, yükleme koşullarının, kalp atış hızının ve ilaçların miyokard performansı ve oksijen tüketimi üzerindeki etkisini ölçmek için kullanılabilir. Çeşitli koşullar altında sistolik ve diyastolik performans ve oksijen tüketiminin incelenmesine izin veren bir kemirgen sol kalp çalışma modelinin hazırlanması için yöntemleri açıklıyoruz.

Miyokard Performans ve Oksijen Tüketimi İnceleme Kemirgen Çalışma Kalp Modeli

Biz optik açıklık ve konfokal mikroskobu ile takip standart immünolojik boyama yöntemleri kullanarak, E15.5 kadar bütün embriyonik fare kalplerinde koroner damarların analizi için bir protokol mevcut. Bu teknik, dizi bölgelerinin zaman alıcı analizi için gerek kalmadan tüm kalp boyunca kan damarlarının görselleştirme sağlar.

Temizlendi Embriyonik Kalpler Koroner Damarlar Analizi

Burada, Drosophila'yı farklı gelişim aşamalarında hazırlamak ve özel bir optik tutarlılık mikroskobu (OCM) sistemi kullanarak Drosophila kalp atışlarının uzunlamasına optik görüntülemesini gerçekleştirmek için deneysel protokoller açıklanmaktadır. Kardiyak morfolojik ve dinamik değişiklikler, OCM görüntülerinden kalbin yapısal ve fonksiyonel parametrelerinin analiz edilmesiyle kantitatif olarak karakterize edilebilir.

Drosophila Hazırlama ve Optik Koherens Mikroskobu Kullanımı In Vivo Kalp Fonksiyonu Boyuna Görüntüleme (OCM)

Ekokardiyografik inceleme farelerde sık sık kullanılır. Bu amaç için pahalı yüksek çözünürlüklü ultrason cihazları geliştirilmiştir. Bu iletişim kuralı histolojik xarakteristikaları analizler ile kardiyak Morfoloji belirlemek için birlikte uygun fiyatlı bir Ekokardiyografik yordamı açıklar.

Kardiyak Morfoloji Ekokardiyografik ve histolojik muayene fare

Burada, septal arter kanüle edildiği ve basınçlandırıldığı için kılcal yataklar ve perisitler de dahil olmak üzere damar ağacı bileşenlerinin yanı sıra basıncı koruyan arteriyel perfüzyon basıncının ve akışının eks vivo izlenmesi ile canlı murine kalp dokusundaki koroner mikrositülasyonu incelemek için bir protokol sunulmaktadır.

Fare Kalbinde Kılcal Damarlar, Arterioles ve Perisitlerin Dinamik Ölçümü ve Görüntülenmesi

Karmaşık anatomi nedeniyle, kardiyak örnekler için sürekli tekrarlanabilir bir diseksiyon ve hasat protokolünün uygulanması zor olabilir. Bu yazıda bazı standart kardiyak diseksiyon protokollerinin temel unsurları sunulmakta ve hem brüt inceleme yaklaşımları hem de histopatolojik inceleme için yaygın olarak kullanılan örnekleme alanları vurgulanmaktadır.

Diseksiyon Teknikleri ve Kardiyovasküler Hastalıklar için Büyük Hayvan Modellerinde Kalbin Histolojik Örneklemesi

Drosophila kalp kesiti ve floresan görüntüleme protokolü, kalp yapısını ve patolojilerini incelemeyi basitleştirir. Bu yaklaşım, geleneksel diseksiyon için gereken teknik uzmanlığı atlayarak basit kesit alma, boyama ve görüntülemeyi içerir. Erişilebilirliği artırarak Drosophila'yı daha geniş bilimsel topluluk içinde kardiyak ile ilgili araştırmalar için daha yaygın olarak kullanılabilir bir model haline getirir.

Kriyoseksiyon ile Drosophila Kalp Floresan Boyama için Yeni ve Etkili Yöntem

Öğrenin, bal arısı dorsal damarına kardiyomodülatör ajanlar uygulayarak kalp hızı değişikliklerini nasıl gözlemleyeceğinizi. Bu basit yöntem, böcek fizyolojisi ve polinatör sağlığı araştırmalarına katkı sağlar.

Kalp Fonksiyon Çalışmaları Diseksiyon ve Bal Arısı Dorsal Vessel Gözlem

Daha fazla video keşfet