Doğum sonrası Farelerde İşitsel Bulla diseksiyonu: Orta Kulak Kemikler ve histolojik analiz izolasyonu

Diseksiyon prosedürünün genel amacı, işitsel büla ve kapsülü izole etmek, ardından çeşitli tam montajlı ve histolojik analizler için doğum sonrası farelerden bireysel işitsel kemikçikleri izole etmektir. Bu yöntem, zayıf morfogenez mekanizmaları, endokondral ossifikasyon veya zayıf mineral metabolizması gibi yara biyolojisi alanındaki temel soruları ele almak için kullanılabilir. Bu yöntem, anatomik detayların derinlemesine bilgisine dayanmaktadır.

Genel olarak, biyolojik bir sistem olarak fareye yeni olan bireyler mücadele edebilir, çünkü insan orta kulağı hakkındaki bilgileri fare muadili için geçerli olmayabilir. Prosedürü göstermek, laboratuvarımda bir teknisyen olan Ayako Sakamoto olacak. İşitsel bülleri ve çevreleyen kafatası kemiği ile kapsülü, oda sıcaklığında fosfat tamponlu salin pH 7.4 içeren bir numune kabına yerleştirerek başlayın.

Binoküler diseksiyon mikroskobu altında, burada gösterildiği gibi işitsel kapsülü çevreleyen kafatası kemiklerini tanımlayın. Çevreleyen kafatasını kavramak için bir set forseps ve bazfenoid ve oksipital kemiği çıkarmak için ikinci bir set kullanın. Ardından, interparietal ve parietal kemikleri kapsülden nazikçe çekmek için forsepsleri kullanın ve tamamen gevşetildiğinde çıkarın.

Daha sonra, skuamozali bulla ve kapsülden uzaklaştırın ve kemiği ve yumuşak dokuları nazikçe uzaklaştırın. Ardından, dış kulağı kavrayın ve medial tarafı ortaya çıkarmak için numuneyi çevirin. Daha sonra, numuneyi 180 derece çevirin, kapsülü kavrayın ve kalan yumuşak dokuları çekin.

Sırt tepesi artık görülebilir. Bu açıda, iç kulak yolundaki fasiyal ve vestibülo-koklear sinirler, subarcuat fossa ve anterior semisirküler kanal açıkça görülebilir. Sırt tepesi diseksiyon çanağının dibine doğru açılı olduğunda, işitsel bulla açıkça görülür.

Preparat hafifçe açılı ise, malleus bulla içinde görülebilir. Malleusun üzerindeki dış kulak kanalını ve sulkus timpanicusunun lateralini kırmak için forseps kullanarak başlayın. Birincinin önünde ikinci bir olgu oluşturun.

Ardından, kulak zarı görünecek şekilde dış kulak yolu parçasını çıkarın. Daha sonra, hem ventral hem de arka duvarlarda timpanik membranın bir kısmını ve malleal processus brevis'in yakınındaki timpanik kemiği çıkarın. Malleus, incus, stapes ve tensör timpani kası artık açığa çıkarılmalıdır.

Malleus'u kaldırın ve 27 gauge iğnenin eğimli kenarı ile tensör timpani kasını kesin. Malleal manubrium'un diğer memelilerde görüldüğü gibi timpanik zara sıkıca yapıştığını unutmayın. Goniale'deki malleusun anterior sürecini kırarak malleus'u kemikçik eklemindeki inkustan çıkarın.

Forseps kullanarak malleus'u işitsel bulladan izole edin. İnkus ve stapesleri ortaya çıkarmak için işitsel bulla'nın büyük bir kısmını çıkarın. Ardından, kısa tepede inkus'un arka bağını kesmek için 27 gauge iğnenin eğimli kenarını kullanın.

Forseps kullanarak inkus'u izole edin. 27 gauge iğnenin eğimli kenarı ile stapesin yakınındaki stapedial arteri kesin. Numuneyi, yuvarlak pencere altta olacak şekilde döndürün.

Daha sonra stapesin obturator foramenine bir dikiş iğnesi sokun ve stapesleri yukarı kaldırın. Stapesleri çıkardıktan sonra, oval pencere açıklığı açıkça görülebilmelidir. Dikiş iğnesinin stapeslerini itmek için 27 gauge iğneyi kullanın.

Doku gömmeye başlamak için, önce bullanın ön ucundaki stiliform işlemi kesmek için makas kullanın. Malleus ve sırt tepesi, kesilen kısımdan görülebilir. Bulla ve kapsülü PBS'de% 1-2 paraformaldehite daldırın.

Bullada hava sıkışmışsa, bir iğne ve şırınga kullanarak çıkarın. Bulla ve kapsülü bir tüp döndürücü üzerinde gece boyunca dört santigrat derecede fiksatif içinde bırakın. Ertesi gün, bülbül ve kapsülü PBS'de hızlı bir şekilde yıkayın.

Ardından hemen dört santigrat derecede sıvı kriyo gömme bileşiğine daldırın. Orta ve dış kulak seviyesinde kriyo gömme bileşikte hava kabarcıklarının oluşması yaygındır. Bir iğne ile aspirasyon yoluyla orta kulaktan hava kabarcığını çıkarın.

Dış kulaktaki hava kabarcığı için de aynı tekniği kullanın. Tüm hava kabarcıkları çıkarıldıktan sonra, dokuyu elde edilecek kesit tipine göre yönlendirin. Doku daha sonra kesitlere ayrılmadan önce donmuş bloklara gömülebilir.

Bu görüntü, M harfi ile gösterilen kalsifiye malleusun uzunlamasına bir parafin bölümünün H ve E boyamasını ve bir P14 faresinden alınan işitsel bulla ve kapsülü göstermektedir. Kulak zarı TM harfi ile gösterilir. Bu görüntü, M harfi ile gösterilen donmuş kireçlenmemiş malleusun uzunlamasına bir bölümünün kalsiyum kemik etiketlemesini ve bir P21 faresinin işitsel bullasını göstermektedir. Kalsiyum yeşili sinyaller malleus, bulla ve kapsülde yeni kemik oluşumunu ortaya çıkarır.

Tekniğe hakim olduktan sonra, prosedür uygun şekilde gerçekleştirilirse işitsel bulla ve kapsül on dakika içinde izole edilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, ana metinde anlatılan faredeki işitsel kemikçiklerin ve büllerin anatomik yönelimlerini iyi anlamalısınız.