Name: Doğum sonrası Farelerde İşitsel Bulla diseksiyonu: Orta Kulak Kemikler ve histolojik analiz izolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Öğrenin, doğum sonrası farelerde işitsel bulla ve kemikçiklerin diseksiyon yöntemini. Bu teknik, histolojik analiz ve morfojenez araştırmaları için anatomik yapıları izole etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, el yazmasının eleştirel okuması için Masaki Yoda ve Elise Lamar'a, histoloji konusunda yardım için Kazumasa Takenouchi'ye, mikroskopi konusunda yardım için Mari Fujiwara'ya ve insan ve fare işitme kemikçiklerinin fotoğraflanmasında yardım için Makoto Morikawa'ya teşekkür eder.

Bu çalışmada yapılan tüm hayvan prosedürleri Keio Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanan (IACUC - onay numarası: 09221) ve araştırma hayvanların kullanımı için Keio Üniversitesi&#39;nde Hayvan Deneyleri üzerinde Kurumsal Yönergeleri izleyin. İnsan örnekler Anatomi, Keio Üniversitesi Tıp Fakültesi Anabilim bağışlanan bir kadavradan izole edilmiştir ve kurumsal düzenlemelere uygun olarak kullanılmıştır. İşitsel Bulla ve Kapsül 1. İzolasyonu <ol><li> Solunum havalandırma min fazla bitene kadar izofluran veya sevofluran batırılmış kağıt havlu üzerinde bir platform içeren bir kavanoza fareler Euthanize ve sonra servikal dislokasyon gerçekleştirin. batırılmış kağıt havlu ile farelerin doğrudan temas önlemek için dikkatli olun. </li><li> boyun sırt tarafında küçük bir enine bir kesi yapmak ve kafasına doğru ayrı cilt çekin ve iki elinizi kullanarak kuyruk altında yatan boyun mu maruzSistemik lupus dokusu. </li><li> 14 cm keskin cerrahi makas kullanarak Servikal bölgede fareler başını kesmek. </li><li> tamamen burnuna doğru soyma cilt. burnu ve kesici diş ile birlikte tüm cilt kesti. </li><li> ağzına makas yerleştirin ve her iki tarafta masseter kasları kesti. </li><li> dikkatle çene açın ve birlikte dil ve alt çene çıkarın. </li><li> Midsagital düzlemde (Şekil 1A, B) boyunca ikiye keskin bir makas, split kafatası ve kafa tabanı kullanma. </li><li> forseps kullanarak, serebral ve serebellar hemisferlerin ve beyin sapı çıkarın. işitsel bül ve kapsül beyincik ve beyin sapı lateral yer almaktadır. İşitsel bül işitsel kapsül (Şekil 1C, D) daha fazla yanal olarak olduğuna dikkat edin. </li><li> Çevreleyen kafatası kemiği (Şekil 1E) ile bül ve kapsül parçalara ayır. </li><li> Oda sıcaklığında fosfat tamponlu tuz (PBS), pH 7.4 ihtiva eden bir çanak için numune aktarın. </li><li> Ubinoküler diseksiyon mikroskobu nder, bül ve kapsül (Şekil 1F) etrafında gevşetilmiş sınır kesmek için çevredeki kemikleri ve makas ayrı çekmek için forseps kullanabilir. kaldırıldı çevreleyen kemikler basioccipital (ventral sınır), exoccipital (ventro-posterior sınır), supraoccipital (arka kenar), interparietal, paryetal (dorsal sınır), skuamöz (dorso-anterior sınır), alisphenoid (anterior sınır) ve basisphenoid vardır (antero-ventral sınır) kemikleri. Östaki tüpünün 41 timpanik açılmasını destekler styliform süreci (Sp), temporal kemik stiloid farklı olduğunu unutmayın. </li></ol> Malleus, örs ve stapes: işitme kemiklerine 2. izolasyonu <ol><li> çekiç kemiği <ol><li> Kulak zarı görülebilecek şekilde küçük bir makas ve forseps hem kullanarak, (Şekil 2A, B sulkus tympanicus dış kulak yolu yanal parçası kaldırmak). </li><li> Ventral (noktalı) ve posterior (#) duvarları (Şekil 2C) malleal processus brevis (yuvarlak apofizlidir, Tartışma), hem de yakın kulak zarı ve kulak kemiğinin bir kısmını çıkarın. Malleus ve tensör timpani kas şimdi (Şekil 2B, E) açık olmalıdır. </li><li> Malleus ile stapes tabanı (Şekil 2F) kaldırın ve bir 27 G iğne (Şekil 2G) eğimli kenarı tensör timpani kas kesti. diğer memelilerde görüldüğü gibi malleal manubrium sıkıca timpanik membrana takılan unutmayın. </li><li> kırılgan manubrium, dikkatlice kulak zarına ayırın. Üç işitsel kemikçik ortaya çıkarmak için timpanik kemik çıkarın. </li><li> Kemikçik eklem (Şekil 2H) de inkus gelen malleus ile stapes tabanı yerinden. </li><li> goniale anterior süreci çatlatma ile malleus ile stapes tabanı izole edin. </li></ol></li><li> Incus ve Stapes <ol><li> t yalıtmakKısa crus (Şekil 3A) inkus posterior ligament keserek o incus. </li><li> 27 G iğne (Şekil 3B, C) kesik kenarı stapes yakın stapes arter keserek stapes izole edin. Gerekirse, iğne ile stapes kas sürecinde stapes kasının tendonu kesti. </li><li> stapesin obturator foramen içine dikiş iğnesine (veya işaretleme pimi) takın ve stapes yukarı kaldırın. Stapes uzaklaştırıldıktan sonra, oval pencere açıklığı açıkça görülebilir (Şekil 3D) olmalıdır. </li></ol></li></ol> İşitsel Bulla ve Kapsül 3. gömülmesi <ol><li> Parafine gömme için hazırlık <ol><li> Bölüm 1 &#39;de tarif edildiği gibi bül ve kapsül izole edin. </li><li> Makasla rahatsız bül (styliform işlemi) ön ucu kesilir, 4 ° C&#39;de PBS içinde% 4 paraformaldehid (PFA) bül ve kapsül batırmakC ve fiksatif bül içine girmesine izin verir. Hava bulla hapsolur ise, bir iğne ve şırınga ile çıkarın. Bir tüp rotator 4 ° CO / N de fiksatif bül ve kapsül bırakın. Dikkat: PFA toksik ve dikkatle ele alınmalıdır. </li><li> Bir kez PBS ile yıkayın. </li><li> % 10 etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu dihidrat 4 ° C&#39;de bir hafta kirecini bül ve kapsül (EDTA 2Na), 2 ml bir tüp içinde 100 mM Tris baz, pH 7.0. Her gün tampon değiştirin. </li><li> Bir kez PBS ile yıkayın. Numuneler 4 ° C&#39;de su içinde% 70 etanol içinde saklanır. İsteğe bağlı olarak, kademeli alkol serisi (% 30,% 50, su içinde% 70) ile,% 70 etanol aktarın. </li><li> Doku işlemcide (4x 40 ° C&#39;de her biri 1 saat), ksilen içinde açık bir etanol çözeltileri kademeli bir seri örnekleri (% 70, 2 x% 95, 3 x% 100 her biri 1 H), kurutma, ile numune sızmaya erimiş parafin mumu 42. İsteğe bağlı olarak, ticari doku clearin ile yerine ksileng çözelti (örneğin, Histo-Temizle). </li><li> işlemci örnekleri boşaltın ve onların kasetleri çıkarın. </li><li> Bir doku gömme konsol sisteminde, bir yerde erimiş parafin mumu ile dolu kalıplar içine numune. (Bölüm 4) gömme geçin. </li></ol></li><li> (Kawamoto film yöntemiyle) dondurulmuş blokların gömme için hazırlık 43 <ol><li> Bölüm 1 &#39;de tarif edildiği gibi bül ve kapsül izole edin. </li><li> makası ile bül (styliform işlemi) ön ucu kesilir, 4 ° C &#39;de (antijenikliği korumak için% 2 ya da% 1 PFA yerine PBS içinde% 4) sabitleştirici bül ve kapsül bırakın. Hava bulla kaldıysa, bir iğne ve şırınga kullanılarak çıkarın. Bir tüp rotator 4 ° CO / N de fiksatif bül ve kapsül bırakın. </li><li> PBS hızla bül ve kapsül yıkayın ve hemen 4 ° C&#39;de sıvı cryo-gömme bileşik batırın. </li><li> Önemli: hava kabarcıklarını çıkarın eğer ortada herhangi birve bir iğne ile, ve forseps ile gömme bileşiğin eklenmesi ile aspirasyon yoluyla dış kulak. (Bölüm 4) gömme geçin. </li></ol></li></ol> 4. Numune Oryantasyon ve katıştırma Not: Bütün bül ve kapsül arzu edilen bölümleri kesmek için gömme boyunca belirli bir yönde düzenlenmiş olması gerekir. aşağıda belirtilen prosedürler bölümüne, çeşitli yönlerde malleus ile stapes tabanı kullanılmaktadır. <ol><li> Malleusun Boyuna (Parasagital) kesit <ol><li> Sıcak parafin (veya cryo gömme bileşik) aşağı bül veya dış kulak yolu lateral tarafını koyun. Malleusun boyun ve enine lamina gömme çanak (- C Şekil 4A) yatay altına paralel olacak şekilde yönlendirmeyi ayarlayın. Timpanik membran fare kafasının (Şekil 4A&#39;da dikey yaklaşık 30 ° &#39;lik bir açı ile eğimli dikkat edin; Şekil 59 Kampen <sup&gt; 44). </li></ol></li><li> Malleusun Yatay kesit <ol><li> Sıcak parafin (veya cryo gömme bileşik) yatay dorsal tepe yerleştirin. Malleusun boyun ve enine lamina gömme kabı (- F Şekil 4D) tabanına dik olacak şekilde bül ve kapsülün yönünü ayarlar. </li></ol></li><li> Manubrium ve kulak zarı 5 frontal kesit (kesitler) <ol><li> Bu gömme tabağın tabanına dik olacak şekilde sıcak bir parafin (veya kriyo-gömme bileşim) &#39;de malleal manubrium yerleştirin. </li></ol></li><li> Bir doku gömme konsol sistemi üzerinde parafin sertleşmesine uygun sıcaklıklara blok soğumasını (alternatif, kuru buz / hekzan banyosunda cryo gömme bileşik kullanın). </li><li> Süreç doku blok ve rutin prosedürler kullanılarak kesilmiş bölümleri. hematoksilen ve eozin (H &amp; # ile örneğin, leke parafin kesitleri38 E), safranin O (kıkırdak için) veya osteoklastlar için tartarata dirençli asit fosfataz (TRAP) aktivitesi () 3 veya imünohistokimya ile. Undekalsifiye cryosections kemik fluorochromes 14 kullanılarak etiketleme, kalsiyum alizarin kırmızısı boyama ve immünofloresans 42 için uygundur. </li></ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Burada, doğum sonrası farelerde işitsel bül ve kapsül izole etmek için kullanışlı bir yöntem mevcut. P12 önce, dokular kırılgan ve izolasyonu sırasında zarar görebilir. P12 sonra, işitsel bül ve kapsül kolay çevre dokulardan izole edilebilir. kesit önce kafa bül Kesme pek çok avantajı vardır. İlk olarak, doğum sonrası kavitasyon ve işitsel bül büyüme en aktif itibaren P6 meydana gelir ve P14 50 tarafından tamamlandı. kulak zarı ve koklear duvar arasındaki mezenkimal doku kavitasyon sürecinde hava ile değiştirilir. orta kulak boşluğunda bileşke hava fiksasyon, yumuşatma ve gömme sırasında doku ve sıvılar arasındaki teması engelleyebilir. Ön uç (styliform sürecini) keserek yerine unisolated bül bunu yapmak çalışarak izole işitsel bül havayı çıkarmak için daha kolaydır. İkinci olarak, malleus (ve kulak zarı) yönünü dikey değilKafada. Bu, belirli bir yönde izole işitsel bül ve kapsül gömerek istenilen düzlemde malleus ile stapes tabanı bölümünde bu nedenle kolaydır. izole sonra, işitsel bül ve kapsüller çeşitli analizler için de yararlıdır. Örneğin, yüksek çözünürlüklü X-ışını mikro-BT gibi malleus 14 osteojenik kılcal damarlar gibi kemik mikro morfoloji ortaya çıkarabilir. Stereofluorescence diseksiyon mikroskobu, orta veya iç kulak 33 floresan proteinleri ifade muhabiri fareler değerlendirmede yapıları görselleştirmek için güçlü bir araçtır. Buna ek olarak, in vivo veya ex vivo olarak floresans etiketleme yöntemleri ve bütün montaj immünofloresan algılama çeşitli üstlenilebilir. Işık levha floresan mikroskobu da üç boyutlu analiz 51 için yararlıdır. Burada açıklanmamış olmasına rağmen, çeşitli anatomik yapıları, periferal sinirler, kan damarları gibi işitsel bül ve kapsül ile bağlantılı veOrta kulaktaki kulak zarı da bu protokolü kullanarak değerlendirilebilir. O parafin kesit mineralizasyon analizini izin vermez, bu nedenle gömmeden önce kemik dokularının dekalsifikasyon gerektirir ve unutmayın. Buna karşılık, dondurulmuş kesitler hazırlamak için kullanılan Kawamoto filmi yöntemi 43 yumuşatma gerçekleştirilir, örneğin Alizarin boyama gibi in vivo kemik etiketleme teknikleri ya da özel boyama kullanılarak mineralizasyon çalışmalar için uygun olan edilebilir. Kriyo-ayırma koşulları, fare yaşına göre göre optimize edilmelidir. Örneğin, kriyostat odası içinde bir daha soğuk ısı bölümlerine hasarı en aza indirmek için daha büyük bir fare numuneler için tavsiye edilir. Fare, malleusun önde gelen yarı küresel çıkıntı için doğru terim &quot;orbicular apophysis&quot; dir. Bununla birlikte, &quot;prosesus brevis&quot; çok fazla th yuvarlak apofize belirtmek için kullanılmaktadırÖzellikle fare gelişimsel biyologlar 16,20,22-25 arasında bir iki yıl. &quot;Prosessus brevis&quot; aslen orbicular apofizlidir farklı yanal süreç (processus lateralis), atıfta bulundu. İnsanlarda, hafif konik bir çıkıntı benzeyen bir yanal işlemi (şekil 6B, dış görünüşü görülmektedir) manubrium uzanan kulak zarı bağlanma genel hat oluşturur. Farelerde, yan işlemi, umbo 48 karşı ucunda manubrium bir tahmindir. Kulak zarının pars flaccida malleusun yanal süreç üzerindedir. Yuvarlak apofizi insan malleusun belirgin değildir.

Orta kulak üç işitsel kemikçikleri, yani malleus, incus ve stapes, kulak iç kulak zarının ya da koklea 1,2 ses iletir bir memeli özgü işitsel zinciri oluştururlar. İşitme fonksiyonu İşitsel Beyin Sapı Yanıtı (ABR) 3-6 ve Laser Doppler Vibrometry (LDV) 7 kullanılarak izlenebilir kulak zarı arkasında malleusun titreşim eşikleri ölçerek farelerde değerlendirilebilir. ABR, LDV ve otoakustik emisyon (DPOAE) ölçümleri birleştirerek, iletim tipi işitme kaybı sensorinöral bozukluğu 8 ayırt edilebilir. Kulak koşulları hayvan modelleri her yaştan hastaların refahı için işitme ve kulak sağlığı önemi göz önüne alındığında, ihtiyaç vardır. Örneğin, orta kulak iltihabı, insan bebekler ve çocuklarda ve şiddetli, akut otitis media görülen son derece yaygın bir kulak enfeksiyonu ve komplikasyonları Condi oluşabiliryon uygun antimikrobik 9 ile tedavi edilmez. Otitis media Fare modelleri patogenezini anlamak ve tedaviler 10,11 geliştirilmesinde faydalı olabilir. (Malleusun goniale kısmı hariç) endokondral kemikleşme 12,13 oluşturduğu Murin kemikçikleri, kemik metabolizması ve morfolojilerinden çalışmaya son derece alakalı. Birincisi, kendi küçük boyutlu X-ray veya floresan mikroskobu 14 kullanılarak sağlam bir periost ile kemiklerin yüksek çözünürlüklü analiz sağlar. İkincisi, bu tür kemik hücreleri 15 arasında aşırı veya yetersiz kemik erimesinin, veya bozulmuş etkileşimleri gibi anormal kemik metabolizması, kayıp 3,4,7 işitme potansiyel katılımcı olarak analiz edilebilir. Üçüncü olarak, anormal kemik parçası morfogenez gibi Hoxa2 16-19 Msx1 20-22 Prrx1 23 Goosecoid yoksun hayvanlarda gibi çeşitli gen eksikliği olan farelerde, bildirilir(GSC) 24,25, Bapx1 13 Tshz1 26 dusp6 (Mkp3) 27, Noggin (Nog), 28, FGFR1 29 farelerde tiroid hormon reseptörleri (thrA, Thrb) 5 Bcl2 30 ve diğerleri 1,31 ya da aşırı eksprese Hoxa2 32. Son olarak, kendi küçük boyutuna rağmen, yapıları kaslar 33 ve eklem 34,35 olarak Kemikcikler ile ilişkili erişilebilir. Fare kemikçikleri insan kemiklerinin daha küçük, ama fare orta kulak insan muadili bir minyatür sürümü değil dikkat çekicidir. İnsanlarda, oluşum safhasındaki stapedial arter gebelik sırasında kaybolur, oysa Örneğin farelerde, üzengi halkası geçer stapedial arter, yaşam 36 boyunca devam eder. Buna ek olarak, fare malleusun morfolojisi th farklıdıre insan kemik (Şekil 6). İnsanlarda, temporal kemik trabeküler kemiğin oluşan mastoid hava hücreleri bül 37 yerine kemikçik evler ise farelerde, işitsel (timpanik) bül, hava dolu orta kulak boşluğu kapatmaktadır. Her iki türde de işitsel kapsül (otik kapsül, kemik labirent) koklea ve iç kulak yarı dairesel kanallar kapsar. Orta kulak Karşılaştırmalı ve evrimsel biyoloji yoğun 38-40 gözden geçirilmiştir. İlk Aşağıda verilen protokol sırasıyla, öncelikle orta kulak ve iç kulak oluşan işitme bül ve kapsül, teşrih açıklamaktadır. Bu protokol aynı zamanda işitsel bül gelen malleus, incus ve stapes izole etmek için nasıl gösterir. Son olarak, işitsel kemiklerin doku kesit için hazırlık gömmek için işitsel bül ve kapsül yönlendirmek için nasıl gösterir.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Araçlar / Ekipmanlar < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Kağıt havlu</td><td>Daio Paper Corporation</td><td>703347</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr><td>Cam Kavanoz</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr><td>14 cm cerrahi makas</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST)</td><td>91400-14</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr><td>Ekstra ince makas-düz</td><td>İnce Bilim Araçları (FST)</td><td>14084-08</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr><td>İnce Forseps Açılı 45&deg; </td><td>Güzel Bilim Araçları (F.S.T.)</td><td>11063-07</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Nikon</td><td>rutin</td><td>diseksiyon için</td>SMZ800N</tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Nikon</td><td>SMZ18</td><td>filmler için&nbsp;</td></tr><tr><td>Enjeksiyon iğnesi 27 G</td><td>TERUMO</td><td>NN-2719S</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga (1 mL)</td><td>TERUMO</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>İşaretleme Pimi</td><td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tüp döndürücü RT-50</td><td>TAITEC</td><td>0000165-000</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM3050S</td><td>http://www.leicabiosystems.com/histology-equipment/cryostats/details/product/leica-cm3050-s/</td></tr> <tr><td>TC-65 Tungsten bıçak</td><td>Leica</td><td>14021626379</td><td>Kawamoto'nun firma yöntemi için</td></tr><tr><td>Paslanmaz kaplar</td><td>Kawamoto'nun firma yöntemi için</td><td>Leica</td><td></td></tr><tr><td>Kriyofilm tip IIC</td><td>Kawamoto'nun firma yöntemi için</td><td>Leica</td><td></td></tr><tr><td>Silan kaplı slayt (Yeni Silan II)</td><td>Muto Saf Kimyasallar</td><td>511617</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr><td>Kapak camı</td><td>Matsunami</td><td></td><td>diğer satıcılardan satın</td></tr> alınabilir <tr><td>Doku işlemcisi</td><td>Sakura Finetek</td><td>VIP-5</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr><td>Doku Gömme Konsol Sistemi</td><td>Sakura Finetek</td><td>Tissue-Tek TEC 5&nbsp;</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr>Parafin <td>Yamato Kohki Industrial</td><td>REM-710</td> için <td>kayar mikrotom</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir</td></tr><tr><td>Sert doku için Path Blade+pro</td><td>Parafin bölümü için</td><td>Matsunami</td><td>PB3503C</td></tr><tr><td>Micro-CT</td><td>RIGAKU</td><td>R_mCT2</td><td>http://www.rigaku.com/en</td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td></td></tr><tr><td>Name </td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Maruishi pharmaceutical Co., Ltd</td><td></td><td></td>,</tr><tr><td>NaCl</td>, <td>wako</td><td>191-01665</td>, <td>PBS</td></tr><tr><td>için</td> <td>KCl</td><td>wako</td><td>285-14</td></tr><tr><td>PBS için Na2HPO<>sub4 PBS için 12H2O</td><td>wako</td><td>196-02835</td><td></td></tr><tr><td>KH2<>4</td><td>wako</td><td>287-21</td><td></td></tr><tr>PBS<td>Paraformaldehit (PFA, EM Sınıfı)</td> <td>için TAAB</td><td>P001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA-2Na</td><td>wako</td><td>15111-45</td><td></td></tr><tr><td>Trizma tabanı</td><td>Sigma</td><td>T1503-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Kawamoto'nun firma yöntemi için</td><td>Süper Kriyo Gömme Orta</td><td>Leica</td><td></td></tr><tr><td>Kuru Buz</td><td>Kawamoto'nun firma yöntemi için</td><td>çeşitli</td><td></td> Kawamoto'nun firma yöntemi</tr><tr>için<td>Hexane</td><td>wako</td><td>080-03423</td><td>Kawamoto'nun firma yöntemi için</td></tr><tr><td>Süper Kriyo Önleme Orta tipi R2</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafin</td><td>Sakura Finetek</td><td>781001A0107</td><td></td></tr><tr><td>Histo-Clear</td><td>NDS</td><td>HS-200</td><td></td></tr><tr><td>Calcein</td><td>DOJINDO</td><td>340-00433</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen ve nbsp;</td><td>wako</td><td>131-09665</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>wako</td><td>051-06515</td><td></td></tr></tbody></table>

doğum sonrası farelerde İşitsel bulla diseksiyonu: orta kulak kemikler ve histolojik analiz izolasyonu

Dissection of the Auditory Bulla in Postnatal Mice: Isolation of the Middle Ear Bones and Histological Analysis

En Memelilerde, malleus, inkus ve stapes olmak üzere orta kulakta işitme kemikçikleri, en küçük kemiklerdir. Farelerde, bir kemik yapısı işitsel kapsül iç kulağı, yani koklea ve semisirküler kanallar kapsayan oysa işitsel bül, kemikçik evler çağırdı. Murin kemikçikler otolaringoloji alanındaki araştırmacılar büyük ilgi dolayısıyla işitme ve için gerekli olan, ancak onların metabolizma, gelişim ve evrim diğer alanlarda son derece alakalı. Değişmiş kemik metabolizması erişkin farelerde işitme fonksiyonu etkileyebilir ve çeşitli gen yoksun fareler in utero işitme kemiklerine morfogenezindeki değişiklikleri göstermek. fare işitsel kemikçikler küçük olmasına rağmen bir anatomik oryantasyon ve 3D yapısını anlar ise, kendi manipülasyon mümkündür. Burada, işitsel bül ve doğum sonrası farelerin kapsülü incelemek ve sonra bül kısmını kaldırarak bireysel kemikçik izole açıklanmıştır. Biz de tartışmak nasıl em içinfarklı yönlerde yatak bül ve kapsül malleusun, uzunlamasına yatay, ya da frontal kesitlerin hazırlanması için parafin veya dondurulmuş kesitler uygun üretmek için. Son olarak, biz fare ve insan işitme kemiklerine arasındaki anatomik farklılıklar numaralandırmak. Bu yöntemler işitsel kemiklerin, patolojik gelişim ve evrimsel açıdan ve farelerde orta kulağa analiz yararlı olacaktır.

Bu protokol, fare işitsel bül gelen kemikçik izole etmek için bir yöntem sunar. İlk olarak, bül ve kapsül kafatası (Şekil 1) tek bir parça olarak kesilir. Parçalara bül sonra malleus ile stapes tabanı (Şekil 2) ve örs ve üzengi (Şekil 3) hazırlamak için kullanılır. Işitsel bül ve kapsülün Merkezi bül, dorsal sorguç, ön semisirküler kanal ve subarcuate fossa (Şekil 1F) ön ucunda styliform süreçtir. Microcomputed tomografi (BT) görüntüleme işitsel bül kemikçiklerdeki yanı sıra bu kemiklerin uzunlamasına ve yatay bir kesit (Şekil 4) için en uygun oryantasyon ortaya koymaktadır. malleusun uzunlamasına parafın kesit için, bül ve kapsül pa gömülü bir hafta boyunca 4 ° C&#39;de EDTA içinde dekalsifiye edildiŞekil 4 A&#39;da gösterilen yönde de raffin blok - C, 4 um kesitler ve daha sonra H &amp; E ile boyandı. Işitsel bül de kulak zarı bağlı malleus P14 (Şekil 5A) devam eden endokondral ossifikasyon saptandı. yeni kemik oluşumunu görselleştirmek için, kalsein (30 mg / g vücut ağırlığı), periton bir P20 fareye enjekte edildi ve bül ve kapsül P21, 24 saat sonra izole edilmiştir. Yumuşatma olmaksızın örnek dondurulup yerleştirilebilir ve Kawamoto 43 yöntemine göre bir yapışkan film kullanılarak 6 uM&#39;de cryosectioned edildi. DAPI ile nükleer boyama (4 &#39;, 6-diamidino-2-fenilindol) sonra bu bölüm flöresanlı bir mikroskop altında gözlemlendi. Kalsein sinyalleri (yeşil) Malleus (m) &#39;de, yeni kemik oluşumunu, bül ve kapsül (Şekil 5B) gösterdi. malleusun yatay kesit için, 5 haftalık bir fare izole işitsel bül için (yumuşatma olmadan donmuş gömülüoryantasyon Şekil 4D bkz - Kawamoto yöntemi kullanılarak 6 mikron olarak cryosectioned F) ve H &amp; E ile boyandı. Malleal Processus brevis (MPB) yatay kesit, aynı zamanda koklea (Şekil 5C) göstermektedir. Bir P31 fare izole sağ işitme kemiklerine bir medial görünüm fare malleusun tipik özelliklerini gösterir, yani &quot;kayma-martı kanat benzeri&quot; (ya da Farsça kılıç gibi 45) manubrium, önemli bir processus brevis (yuvarlak apofiz ,) (Şekil 6) Tartışma görebilir ve enine lamina. Ön işlem (prosesus anterior) goniale yaklaşık diseksiyon işlemi kırıldığı ve (ectotympanic) timpanik halkasından ayrılabilir dikkat etmek gerekir. incudostapedial eklem yerinden oysa bu temsili numune, malleus ve inkus arasında sağlam bir incudomalleolar eklemi sergiler. malleal içine tendon girmeler vestapedial kas işlemler tespit (Şekil 6A, yıldızlar) vardır. Şekil 6B, aynı büyütmede, fare ve insan işitme kemiklerine karşılaştırır. boyut dışındaki türlerden farklılıklar, aşağıdakileri içerir. malleal manubrium kanat benzeri farelerde ancak insanlarda kulüp gibi. anatomik ekseni (ya da dönme ekseni, malleusun inkus ve kısa bir süreç ön işleminde çizgi) ve manubrium arasındaki açı farelerde çok küçük ve hemen hemen dik olan karşıt iki hemen hemen paralel olan insanlarda 6,46-48 yılında. İnsan Kemikcikler olarak, vibrometric çalışmalar incudo-malleoler ortak işlevsel 49 sabit ziyade hareketli olduğunu ortaya koymaktadır. Fare Malleus insanlarda 47 belirgin olmayan bir geniş, ince ve düz enine lamina sergiler. Farelerde, prosesus ön zar kemik, yani goniale ve tympani üzere kaynaşırC halkasının, insanlarda prosesus ön kemik 41 küçük bir spicule düşürülür ise. Fare ve insan üzengi da farklıdır: farelerde, ön crus kavislidir ve arka crus daha düz ise, insanlarda olduğu, ön crus düz arka crus daha fazladır. Bu vücut büyüklüğüne malleus baş göreli kitlesel &quot;küçük&quot; kemiklerin 48 allometrik ilişkilerinde önemli değişkenlik gösteren, örneğin altın köstebek gibi türler büyütülür dikkati çekiyor. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig1.jpg" /> Şekil İşitsel Bulla ve Kapsül 1. Diseksiyon. Bir P31 fare kafatası (A) sağ ve sol yarısı ayrılmıştır. A, ön; P, arka; L, sol; R, doğru. (B) ikiye, derili başının sağ yarısında medial yüzeyi. Cx, serebral korteks; Cb, beyincik; İşletmeleri, brainstem. D, dorsal; V, ventral. Forseps ile beyin (C) Sökme. (D) sağ kafatasında işitsel kapsül medial görünümü. dorsal tepe (ok başları), orta kranial fossa (MCF) ve posterior fossa (pcf) arasında uzanan ve dorso-anterior ve işitsel kapsülün ventro-arka yüzeyleri ayırır. Ölçek çubuğu, 2 mm. (E), işitsel bül ve kapsül (medial görünüm) Yüksek büyütme. Co, koklea; VII, yüz siniri; VIII, sinir vestibülokohlear; AC, anterior (üstün) semisirküler kanal; serebellar paraflokkulusun evler sf, subarcuate fossa. Ölçek çubuğu, 1 mm. İzole işitsel bül ve kapsül (medial görünüm) (F) Mikrografik. Sp, styliform süreci. Ölçek çubuğu, 1 mm. (A - E), P31 fare. (F), P33 fare. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig2.jpg" /> Malleusun 2. Diseksiyon Şekil. (A) sağ işitsel bül ve kapsülün ventrolateral görünümü. sulkus tympanicus (ST, kesik ok) kulak zarı eki sitesidir. ST kemik yanal dış kulak parçası ve ST kemik medial orta kulak boşluğunun tabanını oluşturur. A, ön; P, arka; D, dorsal; V, ventral. Dış kulak yolu çıkarıldıktan sonra (B) Görünüm pars flaccida (Pf) ve tensa pars (Pt) dahil timpanik membran (TM) ortaya çıkarmak için. Timpanik kemik malleal prosesus brevis (MPB) yakınındaki (noktalı çizgiler ve #) parçaları (C) çıkarılması. m, malleus; mM malleal manubrium. kulak zarından görülen orta kulak boşluğunda, hava kabarcığı ok. (D) Exposed malleus. Malleus kafa gösterilir. Noktalıhat inkus eklem yüzeyini gösterir. Tensör timpani kasının (E) tendon (TT) malleusun bağlı. Malleus kaldırıldığında (F) tensör tympani çekilir. * Kas süreç. (G) tensör timpaninin iğne kullanılarak kesilir. Üç işitsel kemikçikler kulak zarı çıkarıldıktan sonra (H). incudo-malleoler eklem yerinden edilir. m, malleus; i incus; s, stapes; , Goniale (çekiç kemiği ve timpanik halka, TR kaynaştırılmış) gidin. Tüm ölçek barlar, 0.5 mm. (A, lH), P33 fare. (B - G), P31 fare. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/55054/55054fig3.jpg" /> Şekil inkus ve stapes 3. Diseksiyon. (A) incus vemalleusun çıkarılmasından sonra üzengi. stapedial arterin (SA) üzengi (ler) geçer. Noktalı çizgi inkus eklem yüzeyini gösterir. kısa bacak inkus (i) (ICB, crus breve) posterior ligaman sabit unutmayın (gösterilmemiştir). Asterisk, stapes kas süreci. (B) inkus çıkarılmasından sonra Stapes. İğne ucu stapedial arter (SA) kesmek için kullanılır. Kan akış yönünü ok. Noktalı çizgi stapesin eklem yüzeyini gösterir. (C) stapedial arter üzengi kaldırılır. X stapes arter (SA) kesik ucunu gösterir. (D) oval pencere (Ah, fenestra ovalis veya fenestra Vestibül) stapes çıkarılmasından sonra görülebilir. Rw, yuvarlak pencere (fenestra rotunda veya fenestra cochleae). Ölçek çubukları, 0.5 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig3large.jpg" target="_blank">Bu daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız</a>rakam. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/55054/55054fig4.jpg" /> (- C parasagital, A) ve Yatay (D - E) malleusun Kesit Boyuna için gömülmesi sırasında İşitsel bül ve Kapsül yönlendirme Şekil 4.. (A - C) malleusun boyun ve enine lamina çanak gömme tabanına paralel yerleştirilir. (A) Yandan görünüm: Mikro BT görüntüsünde (mavi yalancı) bül sağ malleusun katıştırma göstermek için. Malleus ve inkus yeşil yalancı edilir. Kesikli çizgi, istenilen kesme düzlemi. Düz çizgi, çanak gömme alt. m, malleus; ok uçları, sırt sorguç. M, medial; L, yan; D, dorsal; V, ventral. (B) Üstten görünüm: Mikro-BT görüntüsü. bül (styliform işlemi) ön ucu uzaklaştırılmıştır unutmayın. i incus. (C) Üstten görünüm: a çekilmiş mikroskobu (renk filtresi). AC, anterior (üstün) semisirküler kanal; Sf, subarcuate fossa; Sp, styliform süreci. A, ön; P, arka; D, dorsal; V, ventral. (D - F) malleusun processus brevis çanak gömme dibine dik yerleştirilir. (D) Yandan görünüm: Mikro-BT görüntüsünde sağ malleusun katıştırma göstermek için. Kesikli çizgi, istenilen kesme düzlemi. Düz çizgi, çanak gömme alt. (E) Üstten görünüm: Mikro-BT görüntüsü. mM malleal manubrium. (F) Üstten görünüm: (a renk filtresiyle çekilmiş) mikrografı. Ölçek çubukları, 1mM. Daha önce 7 açıklandığı gibi Mikro-BT görüntüleri, 5 um bir voksel çözünürlükte elde edildi. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/55054/55054fig5.jpg" /> FŞEKIL 5. Histoloji. (A) H &amp; E boyama. P14 işitsel bül (noktalı çizgi), parafine gömülü sağ malleus (m) Boyuna (Parasagital) bölümü. TM, kulak zarı. (B) Calcein kemik etiketleme. P21 işitsel bül dondurulmuş, undekalsifiye sol malleus (m) Boyuna kesit. Counterstain, DAPI. (C) &#39;H &amp; E boyama. İşitsel bül ve kapsülün (5 haftalık fare) dondurulmuş, kalan undekalsifiye malleal Processus brevis (MPB) yatay kesit. Co, koklea. Ölçek çubukları, 1mM. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/55054/55054fig6.jpg" /> Şekil 6. işitme kemiklerine medial görünümü. (A), P sağ işitme kemiklerine31 fare. A, ön; P, arka; D, dorsal; V, ventral. Ölçek çubuğu, 1 mm. Malleus kafası (Caput mallei, capitulum mallei); Boyun (Collum mallei); lamina (enine lamina); mM (Ağız sapı mallei); siyah yıldız (malleusun kas süreci); MPA (prosessus anterior, prosessus gracilis); MPB (processus brevis); örs gövdesi (Corpus incudis); ICB (Crus breve, kısa crus, kısa bir süreç); ICL (Crus longum, uzun crus, uzun bir süreç); IPL (prosessus lenticularis, lentiküler işlem olup, Silviyan apofizi); stapes başı (Caput stapedis); beyaz yıldız (stapes kas süreci); ScA (Crus anterius, ön bacak); SCP (Crus posterius, arka bacak); Baz (Baz stapedis, kürek); Sof (obturator foramen, intercrural foramen). (B) 76 yaşındaki insan kadın sağ işitsel kemikçikler (Anatomi Anabilim Tıp, Keio Üniversitesi izniyle). insan Kemikcikler için kullanıldığı gibi P31 fare kemikçikleri (sağ alt) aynı büyütmede görüntülenmiş. CurvEd oklar anatomik ekseni ile manubrium (noktalı çizgiler) arasındaki açı gösterir. Ölçek çubuğu, 2 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Tüm mount ve histolojik analiz için postnatal farelerden işitsel bül, kapsül ve kemikçikleri izole etmek için bir protokol sunuyoruz.

Doğum sonrası Farelerde İşitsel Bulla diseksiyonu: Orta Kulak Kemikler ve histolojik analiz izolasyonu

In most mammals, auditory ossicles in the middle ear, including the malleus, incus and stapes, are the smallest bones. In mice, a bony structure called ...

Diseksiyon prosedürünün genel amacı, işitsel büla ve kapsülü izole etmek, ardından çeşitli tam montajlı ve histolojik analizler için doğum sonrası farelerden bireysel işitsel kemikçikleri izole etmektir. Bu yöntem, zayıf morfogenez mekanizmaları, endokondral ossifikasyon veya zayıf mineral metabolizması gibi yara biyolojisi alanındaki temel soruları ele almak için kullanılabilir. Bu yöntem, anatomik detayların derinlemesine bilgisine dayanmaktadır.Genel olarak, biyolojik bir sistem olarak fareye yeni olan bireyler mücadele edebilir, çünkü insan orta kulağı hakkındaki bilgileri fare muadili için geçerli olmayabilir. Prosedürü göstermek, laboratuvarımda bir teknisyen olan Ayako Sakamoto olacak. İşitsel bülleri ve çevreleyen kafatası kemiği ile kapsülü, oda sıcaklığında fosfat tamponlu salin pH 7.4 içeren bir numune kabına yerleştirerek başlayın.Binoküler diseksiyon mikroskobu altında, burada gösterildiği gibi işitsel kapsülü çevreleyen kafatası kemiklerini tanımlayın. Çevreleyen kafatasını kavramak için bir set forseps ve bazfenoid ve oksipital kemiği çıkarmak için ikinci bir set kullanın. Ardından, interparietal ve parietal kemikleri kapsülden nazikçe çekmek için forsepsleri kullanın ve tamamen gevşetildiğinde çıkarın.Daha sonra, skuamozali bulla ve kapsülden uzaklaştırın ve kemiği ve yumuşak dokuları nazikçe uzaklaştırın. Ardından, dış kulağı kavrayın ve medial tarafı ortaya çıkarmak için numuneyi çevirin. Daha sonra, numuneyi 180 derece çevirin, kapsülü kavrayın ve kalan yumuşak dokuları çekin.Sırt tepesi artık görülebilir. Bu açıda, iç kulak yolundaki fasiyal ve vestibülo-koklear sinirler, subarcuat fossa ve anterior semisirküler kanal açıkça görülebilir. Sırt tepesi diseksiyon çanağının dibine doğru açılı olduğunda, işitsel bulla açıkça görülür.Preparat hafifçe açılı ise, malleus bulla içinde görülebilir. Malleusun üzerindeki dış kulak kanalını ve sulkus timpanicusunun lateralini kırmak için forseps kullanarak başlayın. Birincinin önünde ikinci bir olgu oluşturun.Ardından, kulak zarı görünecek şekilde dış kulak yolu parçasını çıkarın. Daha sonra, hem ventral hem de arka duvarlarda timpanik membranın bir kısmını ve malleal processus brevis'in yakınındaki timpanik kemiği çıkarın. Malleus, incus, stapes ve tensör timpani kası artık açığa çıkarılmalıdır.Malleus'u kaldırın ve 27 gauge iğnenin eğimli kenarı ile tensör timpani kasını kesin. Malleal manubrium'un diğer memelilerde görüldüğü gibi timpanik zara sıkıca yapıştığını unutmayın. Goniale'deki malleusun anterior sürecini kırarak malleus'u kemikçik eklemindeki inkustan çıkarın.Forseps kullanarak malleus'u işitsel bulladan izole edin. İnkus ve stapesleri ortaya çıkarmak için işitsel bulla'nın büyük bir kısmını çıkarın. Ardından, kısa tepede inkus'un arka bağını kesmek için 27 gauge iğnenin eğimli kenarını kullanın.Forseps kullanarak inkus'u izole edin. 27 gauge iğnenin eğimli kenarı ile stapesin yakınındaki stapedial arteri kesin. Numuneyi, yuvarlak pencere altta olacak şekilde döndürün.Daha sonra stapesin obturator foramenine bir dikiş iğnesi sokun ve stapesleri yukarı kaldırın. Stapesleri çıkardıktan sonra, oval pencere açıklığı açıkça görülebilmelidir. Dikiş iğnesinin stapeslerini itmek için 27 gauge iğneyi kullanın.Doku gömmeye başlamak için, önce bullanın ön ucundaki stiliform işlemi kesmek için makas kullanın. Malleus ve sırt tepesi, kesilen kısımdan görülebilir. Bulla ve kapsülü PBS'de% 1-2 paraformaldehite daldırın.Bullada hava sıkışmışsa, bir iğne ve şırınga kullanarak çıkarın. Bulla ve kapsülü bir tüp döndürücü üzerinde gece boyunca dört santigrat derecede fiksatif içinde bırakın. Ertesi gün, bülbül ve kapsülü PBS'de hızlı bir şekilde yıkayın.Ardından hemen dört santigrat derecede sıvı kriyo gömme bileşiğine daldırın. Orta ve dış kulak seviyesinde kriyo gömme bileşikte hava kabarcıklarının oluşması yaygındır. Bir iğne ile aspirasyon yoluyla orta kulaktan hava kabarcığını çıkarın.Dış kulaktaki hava kabarcığı için de aynı tekniği kullanın. Tüm hava kabarcıkları çıkarıldıktan sonra, dokuyu elde edilecek kesit tipine göre yönlendirin. Doku daha sonra kesitlere ayrılmadan önce donmuş bloklara gömülebilir.Bu görüntü, M harfi ile gösterilen kalsifiye malleusun uzunlamasına bir parafin bölümünün H ve E boyamasını ve bir P14 faresinden alınan işitsel bulla ve kapsülü göstermektedir. Kulak zarı TM harfi ile gösterilir. Bu görüntü, M harfi ile gösterilen donmuş kireçlenmemiş malleusun uzunlamasına bir bölümünün kalsiyum kemik etiketlemesini ve bir P21 faresinin işitsel bullasını göstermektedir. Kalsiyum yeşili sinyaller malleus, bulla ve kapsülde yeni kemik oluşumunu ortaya çıkarır.Tekniğe hakim olduktan sonra, prosedür uygun şekilde gerçekleştirilirse işitsel bulla ve kapsül on dakika içinde izole edilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, ana metinde anlatılan faredeki işitsel kemikçiklerin ve büllerin anatomik yönelimlerini iyi anlamalısınız.

dissection-auditory-bulla-postnatal-mice-isolation-middle-ear-bones

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Hayvan modellerinin koklealarına ototoksik ajanlar eklemek için çeşitli yöntemler mevcuttur. Sunulan, ototoksik ajanların yuvarlak pencere nişine verilmesi için cerrahi bir protokoldür. Prosedür güvenilirdir, hedefe yönelik intra-koklear lezyonlar oluşturur ve mikromimaride mekanik hasarı önler. Koklear kendi kendine onarım/rejenerasyon muayenesi mümkündür.

Koklear Hücre Dejenerasyonu Inducing için hızlı ve Güvenilir Teknik: Ototoksik Ajan Teslimat için Fare Yuvarlak pencere Yaklaşımı

Birincil kirpikler çeşitli sinyal yollarını etkiler. Memeli kokleası, düzlemsel hücre polaritesi (PCP) sinyalini incelemek için idealdir. Kirpikler disfonksiyonu koklear büyümeyi, hücresel paternlenmeyi ve saç hücresi oryantasyonunu, PCP okumalarını etkiler. Amacımız, fare kokleasında PCP sinyalizasyonunu fenotipik analiz, immünohistokimya ve taramalı elektron mikroskobu ile analiz etmektir.

Ciliopathy Fare Mutant Kohlea Planar-Hücre-Polarite fenotipleri Değerlendirilmesi

Biz üç bozulmamış koklear döner (apeks, orta ve üs) olarak Corti yetişkin organı izole etmek için bir yöntem mevcut. Biz de floresan levhası 'antikorlar ile immün için bir prosedür ortaya koymaktadır. Birlikte bu teknikler kokleadaki bulunan saç hücreleri, destek hücreler ve diğer hücre türleri çalışma sağlar.

Tüm Dağı Diseksiyon ve Yetişkin Fare Kohlea immünofloresan

İç kulağa lokal ilaç verilmesi için iki mikrocerrahi yaklaşım burada tanımlanmış ve işitme parametreleri, koklear sitomimari ve inflamatuar belirteçlerin ekspresyonu üzerindeki etkisi açısından karşılaştırılmıştır.

Fare İç Kulak Hedefli İlaç Dağıtım Yöntemleri Karşılaştırmalı İncelemesi: Bullostomy Karşı Transtimpanik Enjeksiyon

Bu iletişim kuralının amacı decellularize ve fare cochleae doku mühendisliği uygulamaları için iskele olarak kullanımı için decalcify için etkili bir yöntem göstermektir.

Fare Cochleae iç kulak doku mühendisliği için Decellularizing için bir iletişim kuralı

Koklear implant hayvan modelleri elektrik stimülasyonu ile kalıcı sensorinöral işitme kaybı tedavisinde teknolojik üsler bilgisine ilerletebilirsiniz. Bu çalışmada akut sağır edici ve fareler hem de işlevsel değerlendirme İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ile bir elektrot dizinin koklear implantasyon için cerrahi bir Protokolü sunar.

Koklear Implant ameliyatı ve elektriksel olarak uyarılmış işitsel beyin sapı yanıt kayıtları C57BL/6 farelerde

Bu makalede, yetişkin fare kokleae immünohistokimya için 10 mm yuvarlak kapak fişleri koklear epitel parçaları yapıştırmak için bir hücre ve doku yapıştırıcı kullanımı ve kireçlenme gerektiren değiştirilmiş bir koklear yüzey hazırlama yöntemi sunar.

Yetişkin Farede Koklear Yüzey Hazırlama

Bu çalışma, farklı yaşlarda farenin iç kulağından endolenfatik kesenin nasıl diseksiyon yapılacağını açıklamaktadır. Benzer bir diseksiyonun sonucu, endolenfatik kesenin genişlemesinin bir Slc26a4-null fare modelinde gösterilmiştir. Endolenfatik kese içinde eksprese edilen bir floresan raportöre sahip bir transgenik fare, endolenfatik kesesi kolayca görselleştirmek için bir model ve eğitim aracı olarak sunulmaktadır.

Farelerden Endolenfatik Kesenin Diseksiyonu

Stria vascularis, endokoklear potansiyelin oluşumu için hayati öneme sahiptir. Burada, yetişkin fare stria vascularis'in tek çekirdekli dizileme veya immün boyama için diseksiyonu sunulmuştur.

Tek çekirdekli dizileme veya immün boyama için yetişkin fare stria vascularis'in diseksiyonu

Burada, farelerden birincil koklear saç hücrelerinin izole edilmesi ve kültürlenmesi için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Başlangıçta, Corti'nin organı yenidoğan (3-5 günlük) murin koklealarından mikroskop altında diseke edildi. Daha sonra, hücreler enzimatik olarak tek hücreli bir süspansiyona sindirildi ve kültürde birkaç gün sonra immünofloresan kullanılarak tanımlandı.

Yenidoğan Farelerden Primer Koklear Saç Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü

Burada, fare stria vascularis'ten birincil marjinal hücrelerin izolasyonu, saflaştırılması ve kültürü için bir protokol sunuyoruz ve koklear yan duvar bozukluklarını incelemek için oksidatif stres ve hücresel yaşlanma için in vitro modeller oluşturulmuştur.

Stria vascularis'in Primer Marjinal Hücrelerinin Yenidoğan Farelerden İzolyasyonu ve Kültürü

Öğrenin, doğum sonrası farelerde işitsel bulla ve kemikçiklerin diseksiyon yöntemini. Bu teknik, histolojik analiz ve morfojenez araştırmaları için anatomik yapıları izole etmeyi sağlar.

Doğum sonrası Farelerde İşitsel Bulla diseksiyonu: Orta Kulak Kemikler ve histolojik analiz izolasyonu

Daha fazla video keşfet