15 Mart 2017
İnsektisit değerlendirmeler genellikle yetişkin böcekler yerine olgunlaşmamış aşamalarında karşı hedeflenir. Burada, ilk nimf yatak böcek aşamasına bir karşılaştırma ile yatak hata yumurta karşı böcek değerlendirmek için bir protokol mevcut. Bu protokoller, yetişkin olmayan yaşam evrelerinde insektisit etkinliğini değerlendirmek için başka böcekler için ayarlanabilir.
Bu deneyin genel amacı, insektisitlerin tahta biti yumurtalarını ve birinci instarları öldürmedeki etkinliğini değerlendirmektir. Bu yöntem, toksikolojik analizlerin tahta biti yumurtaları ve küçük nimfler üzerindeki etkileri gibi entomoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, özellikle yumurta evresi olmak üzere, böceğin insektisitlerle tedavi edilmesi zor bir yaşam evresi için tasarlanmış olmasıdır.
Deneye başlamak için, bir koloniden beş ila 10 adet çiftleşmiş, iyi beslenmiş yetişkin dişi tahtakurusu seçin ve dişileri filtre kâğıdı içeren bir Petri kabına yerleştirin. İnsektisit analizi için yeterli yumurta olduğundan emin olmak adına 10 replikat hazırlayın. Dişilerin yumurtlayıp yumurtlamadığını kontrol etmek için kapları her gün inceleyin.
Dişiler yumurtaları bıraktıktan sonra, dişileri her gün Petri kabından çıkarın ve yeni filtre kağıdı içeren yeni Petri kaplarına yerleştirin. Eski ve yeni Petri kaplarındaki verileri kaydedin. Analize başlamadan önce yumurtaların dört ila beş gün boyunca olgunlaşmasını bekleyin.
Yumurtalar uygun süre boyunca yaşlandırıldıktan sonra, tahta biti yumurtalarını yumuşak uçlu pensler kullanarak filtre kağıtlarından nazikçe çıkarın. Filtre kağıdına yapışık olan yumurtanın alt kısmını pensle hafifçe kazıyın ve ardından tahta biti yumurtalarının fırlamasını önlemek için çok fazla baskı uygulamadan yumurtayı nazikçe kavrayın. Çıkarılan tahta biti yumurtalarını plastik Petri kapları içindeki ilgili gruplarına yerleştirin.
Yatak böceği yumurtalarının savrulmasını önlemek için statik elektriği sınırlamak amacıyla her Petri kabının dış alt kısmını bir yumuşatıcı mendille silin. Ardından, beş farklı konsantrasyon aralığı elde etmek için insektisitlerin seri dilüsyonlarını ve kontrol grubu olarak sadece musluk suyundan oluşan, her biri 20 mL hacminde çözeltiler hazırlayın. mL çizgisinden önceden kesilmiş 50 mL'lik santrifüj tüpleri alın ve ardından ince gözenekli ağı kapağa sığacak büyüklükte kareler halinde kesin.
Santrifüj tüpü kapağını kullanarak, herhangi bir çıkıntı kalmayacak şekilde gözenekli ağı santrifüj tüplerine sıkıca vidalayın. Ardından, bir resim fırçası kullanarak, bir grup tahtakurusu yumurtasını santrifüj tüpünün içindeki ağın üzerine yerleştirin. Kesilmiş santrifüj tüpünün içindeki tahtakurusu yumurta grubunu beş saniye boyunca bir insektisit konsantrasyonuna daldırın.
Santrifüj tüpünü insektisit çözeltisinden çıkarın. İçinde yumurtaların bulunduğu ağı kurutmak için santrifüj tüpünü doğrudan laboratuvar peçetesi üzerine yerleştirin. Kuruma işleminin ardından, yumurta grubunu küçük, ince kıllı bir boya fırçası kullanarak santrifüj tüpünden çıkarın ve temiz bir filtre kağıdı içeren temiz bir Petri kabına yerleştirin.
Tüm yumurtaların açılması için yeterli sürenin geçtiğinden emin olmak amacıyla 14 gün boyunca yumurta mortalitesini kaydedin. Kontrol grubundaki mortaliteyi Abbott formülünü kullanarak düzeltin. LC50 değerlerini hesaplamak için kaydedilen mortalite verilerini ilgili konsantrasyonlarla birlikte analiz yazılımına girin.
Önceki gün beslenmiş beş adet yetişkin erkek ve beş adet yetişkin diş tahtakurusundan oluşan bir grubu ayırın ve filtre kağıdı içeren bir Petri kabına yerleştirin. Yetişkin tahtakuruslarının sekiz gün boyunca çiftleşmelerine ve yumurta bırakmalarına izin verin. Ardından, yetişkinleri Petri kaplarından çıkarın ve yumurtaların Petri kapları içerisinde birinci instarlara çıkmasını bekleyin.
Aynı yaştaki beslenmemiş birinci instarları bir boya fırçası kullanarak toplayın ve insektisit denemesine kadar yeni, temiz Petri kaplarına yerleştirin. Önceden hazırlanmış beş farklı insektisit dilüsyonunun her birinden ve kontrol grubu için sudan 150 microliter'lık alikotları münferit filtre kağıtlarının üzerine pipetleyin. Damlacıkları filtre kağıdının tüm kenarlarına ve merkezine uygulayarak insektisiti eşit şekilde dağıtın.
İşlenmiş filtre kağıtlarını ayrı ayrı serttavalar üzerine yerleştirin. Birinci instar gruplarını, insektisit ile hala ıslak olan bireysel filtre kağıtlarının üzerine salın ve birinci instarları ters çevrilmiş bir Petri kutusu tabanıyla kapatıp, birinci instar tahtakurularının kaçmasını önlemek için Petri kutusunun üzerine bir ağırlık yerleştirin. Tüm insektisit konsantrasyonlarına 24 saatlik maruziyetten sonra birinci instar tahtakurularının mortalitesini kaydedin.
Kontrol grubundaki mortaliteyi Abbott formülü kullanarak düzeltin. LC50 değerlerini hesaplamak için kaydedilen mortaliteyi ve konsantrasyonları analiz yazılımına girin. Harlin suşu tahtakurusu yumurtalarının beş farklı metokloprid beta-siflutrin konsantrasyonuna karşı verdiği yanıt veya mortalite yüzdesi, doz arttıkça artış göstermiştir.
Test edilen en yüksek konsantrasyonda mortalite %100'e ulaştı. Bu videoyu izledikten sonra, tahta biti yumurtalarına ve birinci instarlarına karşı insektisit etkinliğinin nasıl değerlendirileceği konusunda daha iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu çalışma, insektisitlerin tahtakurusu yumurtaları ve birinci dönem nimfleri üzerindeki etkinliğinin değerlendirilmesi için bir protokol sunmaktadır. Yöntem, geleneksel değerlendirmelerde sıklıkla göz ardı edilen erişkin olmayan yaşam evrelerinde insektisit etkinliğinin belirlenmesindeki zorlukları gidermeyi amaçlamaktadır.
Yumurtalar ve erken instarlar da dahil olmak üzere tüm yaşam evrelerinde insektisit etkinliğinin değerlendirilmesi, biyofarma ve halk sağlığı Ar-Ge'sindeki kapsamlı haşere kontrol stratejileri için kritiktir. Bu yöntem, tahtakurusunun olgunlaşmamış evreleri üzerindeki toksikolojik etkinin nicel olarak değerlendirilmesini sağlayarak vektör kontrol programlarında hedef doğrulamasını ve mekanistik risk azaltmayı destekler. Yetişkin olmayan yaşam evreleri için konsantrasyon-yanıt verileri ve LC50 değerleri üreterek bu yaklaşım, yeni insektisit bileşiklerin erken aşama keşfinde ve portföy önceliklendirmesinde öngörü güvenilirliğini artırır.
Yöntem, özellikle vektör kontrolü ve halk sağlığı insektisit geliştirme çalışmaları için, erken hedef doğrulamadan öncü bileşik tanımlama ve preklinik değerlendirmeye kadar olan keşif sürekliliğine entegre edilmektedir.