Name: Xeno-ücretsiz Koşullarda 3-D Kültürler Üretim ve Tedavi Mezenkimal Kök Yönetim / Stromal Cell (MSC) küremsi Astarlı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 5 s
Description: Öğrenin mezenkimal kök hücrelerin xeno-ücretsiz koşullarda küremsi agregatlarını üretmeyi ve enjekte etmeyi. Bu yöntemler hücre tutunumu ve işlevselliğini artırarak rejeneratif tıpta MSC terapilerinin etkinliğini iyileştirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüsü'nden P40RR17447 hibe ve Teksas Kanser Önleme ve Araştırma Enstitüsü'nden ödül RP150637 ile finanse edilmiştir. Projeye verdiği destek için Dr. Darwin J. Prockop'a teşekkür ederiz.

<ol><li>Keating, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells%3A+New+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells: New directions.</a> Cell Stem Cell. 10 (6), 709-716 (2012).</li>
<li>English, K., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+in+transplantation+rejection+and+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect.Med%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells in transplantation rejection and tolerance.</a> Cold Spring Harb Perspect.Med. 3 (5), a015560(2013).</li>
<li>Le Blanc, K., Mougiakakos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+mesenchymal+stromal+cells+and+the+innate+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Rev.Immunol%22%5BJournal%5D)">Multipotent mesenchymal stromal cells and the innate immune system.</a> Nat.Rev.Immunol. 12 (5), 383-396 (2012).</li>
<li>Follin, B., Juhl, M., Cohen, S., Perdersen, A. E., Kastrup, J., Ekblond, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+Paracrine+Immunomodulatory+Potential+of+Mesenchymal+Stromal+Cells+in+Three-Dimensional+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.Part+B.Rev%22%5BJournal%5D)">Increased Paracrine Immunomodulatory Potential of Mesenchymal Stromal Cells in Three-Dimensional Culture.</a> Tissue Eng.Part B.Rev. , (2016).</li>
<li>Cesarz, Z., Tamama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid+Culture+of+Mesenchymal+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Spheroid Culture of Mesenchymal Stem Cells.</a> Stem Cells Int. , 9176357(2016).</li>
<li>Achilli, T. M., Meyer, J., Morgan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+formation%2C+use+and+understanding+of+multi-cellular+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.Biol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Advances in the formation, use and understanding of multi-cellular spheroids.</a> Expert Opin.Biol. Ther. 12 (10), 1347-1360 (2012).</li>
<li>Sart, S., Tsai, A. C., Li, Y., Ma, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+aggregates+of+mesenchymal+stem+cells%3A+cellular+mechanisms%2C+biological+properties%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.Part+B.Rev%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional aggregates of mesenchymal stem cells: cellular mechanisms, biological properties, and applications.</a> Tissue Eng.Part B.Rev. 20 (5), 365-380 (2014).</li>
<li>Bartosh, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregation+of+human+mesenchymal+stromal+cells+%28MSCs%29+into+3D+spheroids+enhances+their+antiinflammatory+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A%22%5BJournal%5D)">Aggregation of human mesenchymal stromal cells (MSCs) into 3D spheroids enhances their antiinflammatory properties.</a> Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 107 (31), 13724-13729 (2010).</li>
<li>Potapova, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+support+migration%2C+extracellular+matrix+invasion%2C+proliferation%2C+and+survival+of+endothelial+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells support migration, extracellular matrix invasion, proliferation, and survival of endothelial cells in vitro.</a> Stem Cells. 25 (7), 1761-1768 (2007).</li>
<li>Frith, J. E., Thomson, B., Genever, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+three-dimensional+culture+methods+enhance+mesenchymal+stem+cell+properties+and+increase+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.Part+C.Methods%22%5BJournal%5D)">Dynamic three-dimensional culture methods enhance mesenchymal stem cell properties and increase therapeutic potential.</a> Tissue Eng.Part C.Methods. 16 (4), 735-749 (2010).</li>
<li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+hMSCs+Improve+Myocardial+Infarction+in+Mice+because+Cells+Embolized+in+Lung+Are+Activated+to+Secrete+the+Anti-inflammatory+Protein+TSG-6%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Intravenous hMSCs Improve Myocardial Infarction in Mice because Cells Embolized in Lung Are Activated to Secrete the Anti-inflammatory Protein TSG-6.</a> Cell Stem Cell. 5 (1), 54-63 (2009).</li>
<li>Bartosh, T. J., Ylostalo, J. H., Bazhanov, N., Kuhlman, J., Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+compaction+of+human+mesenchymal+stem%2Fprecursor+cells+into+spheres+self-activates+caspase-dependent+il1+signaling+to+enhance+secretion+of+modulators+of+inflammation+and+immunity+%28PGE2%2C+TSG6%2C+and+STC1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Dynamic compaction of human mesenchymal stem/precursor cells into spheres self-activates caspase-dependent il1 signaling to enhance secretion of modulators of inflammation and immunity (PGE2, TSG6, and STC1).</a> Stem Cells. 31 (11), 2443-2456 (2013).</li>
<li>Ylostalo, J. H., Bartosh, T. J., Coble, K., Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells+cultured+as+spheroids+are+self-activated+to+produce+prostaglandin+E2+that+directs+stimulated+macrophages+into+an+anti-inflammatory+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem/stromal cells cultured as spheroids are self-activated to produce prostaglandin E2 that directs stimulated macrophages into an anti-inflammatory phenotype.</a> Stem Cells. 30 (10), 2283-2296 (2012).</li>
<li>Ylostalo, J. H., Bartosh, T. J., Tiblow, A., Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+characteristics+of+human+mesenchymal+stromal%2Fprogenitor+cells+pre-activated+in+3-dimensional+cultures+under+different+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Unique characteristics of human mesenchymal stromal/progenitor cells pre-activated in 3-dimensional cultures under different conditions.</a> Cytotherapy. 16 (11), 1486-1500 (2014).</li>
<li>Texas A&M Health Science Center College of Medicine Institute for Regenerative Medicine at Scott & White. , 
 <a target="_blank" href=" http://www.medicine.tamhsc.edu/irm/msc-distribution.html"> http://www.medicine.tamhsc.edu/irm/msc-distribution.html</a> (2016).</li>
<li>Pittenger, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilineage+potential+of+adult+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells.</a> Science. 284 (5411), 143-147 (1999).</li>
<li>Uccelli, A., Moretta, L., Pistoia, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Rev.Immunol%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in health and disease.</a> Nat.Rev.Immunol. 8 (9), 726-736 (2008).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li>
<li>Fontaine, M. J., Shih, H., Schafer, R., Pittenger, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+Mesenchymal+Stromal+Cells%27+Paracrine+Immunomodulatory+Effects%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.Med.Rev%22%5BJournal%5D)">Unraveling the Mesenchymal Stromal Cells' Paracrine Immunomodulatory Effects.</a> Transfus.Med.Rev. 30 (1), 37-43 (2016).</li>
<li>Nemeth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+stromal+cells+attenuate+sepsis+via+prostaglandin+E%282%29-dependent+reprogramming+of+host+macrophages+to+increase+their+interleukin-10+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Med%22%5BJournal%5D)">Bone marrow stromal cells attenuate sepsis via prostaglandin E(2)-dependent reprogramming of host macrophages to increase their interleukin-10 production.</a> Nat.Med. 15 (1), 42-49 (2009).</li>
<li>Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+two+negative+feedback+loops+place+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells+at+the+center+of+early+regulators+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: two negative feedback loops place mesenchymal stem/stromal cells at the center of early regulators of inflammation.</a> Stem Cells. 31 (10), 2042-2046 (2013).</li>
<li>Krampera, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cell+%27licensing%27%3A+a+multistep+process%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cell 'licensing': a multistep process.</a> Leukemia. 25 (9), 1408-1414 (2011).</li>
<li>Saleh, F. A., Genever, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+round%3A+multipotent+stromal+cells%2C+a+three-dimensional+revolution%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Turning round: multipotent stromal cells, a three-dimensional revolution?</a> Cytotherapy. 13 (8), 903-912 (2011).</li>
<li>Tsai, A. C., Liu, Y., Yuan, X., Ma, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compaction%2C+fusion%2C+and+functional+activation+of+three-dimensional+human+mesenchymal+stem+cell+aggregate%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.Part+A%22%5BJournal%5D)">Compaction, fusion, and functional activation of three-dimensional human mesenchymal stem cell aggregate.</a> Tissue Eng.Part A. 21 (9-10), 1705-1719 (2015).</li>
<li>Yeh, H. Y., Liu, B. H., Hsu, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+calcium-dependent+regulation+of+spheroid+formation+and+cardiomyogenic+differentiation+for+MSCs+on+chitosan+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The calcium-dependent regulation of spheroid formation and cardiomyogenic differentiation for MSCs on chitosan membranes.</a> Biomaterials. 33 (35), 8943-8954 (2012).</li>
<li>Lee, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spherical+bullet+formation+via+E-cadherin+promotes+therapeutic+potency+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+human+umbilical+cord+blood+for+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.Ther%22%5BJournal%5D)">Spherical bullet formation via E-cadherin promotes therapeutic potency of mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord blood for myocardial infarction.</a> Mol.Ther. 20 (7), 1424-1433 (2012).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Bazı araştırmalar ve klinik uygulamalarda kullanım için uygun MSC çok onların yarar en üst düzeye çıkarmak için aktif, ve tercihen FBS olarak ksenogeneik ortam bileşenlerinden potansiyel antigenlerin gönderimini en aza indirmek için, kimyasal olarak tanımlanmış XF koşullar altında hazırlanmalıdır. Burada anlatılan protokollerin olarak,: 1) için yöntemler göstermiştir parçacıklarının oluşumuyla 3D kültür MKH&#39;lerin aktive 2) XF koşullar altında MSC 3D aktivasyonuna ulaşırlar, 3) anti- açısından küremsi MSC aktivasyon ...

Mezenkimal kök / stromal hücreler (MKH), çeşitli rejeneratif tıp yaklaşımları için büyük bir potansiyel göstermiştir. MSC&#39;ler, başlangıçta, kemik iliği stromal bileşeni olarak izole edildi, ancak bu yana adipoz doku 1, 2, 3 dahil olmak üzere, pek çok diğer yetişkin dokulardan elde edilmiştir. İlginç bir şekilde, temel izolasyon yöntemi MSC gibi önemli bir özelliğe fetal sığır serumu (FBS) varlığında doku kültürü plastik üzerine sıkı bir şekilde yapışmasına içine alır. Bu geleneksel izolasyon tekniği iki boyutlu (2D) kültüründe MKH kolay ve hızlı genişlemesine izin veren iken, 5, aynı zamanda çok yapay ve önemli hücresel özellikleri 4 potansiyel kaybına yol açan doğal üç boyutlu (3D) çevrenin önemini göz ardı 6. Bu nedenle, 3D kültürlerde MSC çalışma, buradageleneksel 2B kültürlerin daha fizyolojik olan &quot;kayıp / azalmış&quot; MSC özellikleri arayışında ortaya çıkmıştır. Ayrıca, büyük ilgi klinik uygulamalar için hücreler daha müsait hale böylece MSC kültür ve aktivasyonu için xeno-free (XF) kimyasal olarak tanımlanmış koşulları tanımlamak ve yükseldi. Birçok çalışma biyomalzeme ve küresel agrega ya da küresel cisimler hem MKH 3D kültürünü gösteren yayınlanmıştır. MKH sfero kültürleri klinik öncesi veya klinik çalışmalarda tedaviler için hücrelerin uygulanmasından sonra in vivo MSC davranışlarını anlamak için bir yol olarak görüldü oysa biyomalzeme MKH başlangıçta, hücre numaralı seribaşı iskeleleri ile hasarlı dokuların yerine doku mühendisliği yaklaşımları için tasarlanmış 4, 5, 7. İlginçtir, MKH formu sferoidler kendiliğinden doku kültürü plastik bağlılık izin verilmez zaman8, 9, 10. Geleneksel olarak, hücre birikme Spinner şişesi yöntemleri ya da sıvı kaplama teknikleri, tümör mikro taklit deneyin çabalarında Kanser biyolojisinde başlangıç ​​olarak kullanılan yöntemler ile kolaylaştırıldı. Daha yakın zamanda, ilave yöntemler kültür tabaklarına hücre toplanması hücre-plastik yapışma 4, 5, 6 önlemek için özel kimyasallar ile önceden kaplanmış göstermektedir ki ortaya çıktı. MSC sferoidler oluşturmak için en basit ve en ucuz yöntemlerden biri, genellikle, embriyonik kök hücreleri embriyoid organları üretmek için kullanılan bir teknik, asılı damla kültür bunların etmektir. damla kültürü tekniği asılı olan, doku kültürü plastik hücre yapışması, hücre aggreg kolaylaştırmak için yerçekimi, bir doku kültürü kabı kapağının altında ortamının bir drop içinde süspansiyona ettirilip engellenirdamla tepesinde yer tirme. sfero boyutu kolayca, hücre konsantrasyonunu veya açılan hacmini değiştirerek kontrol etmek son derece kolay asılı damla kültürleri yaparak manipüle edilebilir. MKH 3D kültürü üzerindeki ilk çalışmalar onların 2B meslektaşları 6, 8, 9 ile karşılaştırıldığında 3D hücrelerin özelliklerinde radikal farklılıklar göstermiştir. Aynı zamanda, in vivo koşullarında raporlar MSC yararlı etkileri, yanıt olarak, mikro çevre hareketlerine göre aktive olma, anti-enflamatuar ve bağışıklık düzenleyici olarak 11 üretme yetenekleri dayanıyordu olduğunu göstermiştir. İlginç bir şekilde, prostaglandin E2 (PGE2), tümör nekroz faktörü ile uyarılan gen 6 (TSG6), hepatosit büyüme faktörü (HGF) ve bu faktörlerin bir çok yol açan geleneksel 2D MSC daha MSC sferoidler göre çok daha büyük miktarlarda üretilmiştir fikrihücreler 8, 12, 13 aktif hale getirmek için 3D kültürleri kullanılmıştır. Ayrıca, 3D kültürlerinde gen aktivasyon fareler 12 içine enjeksiyondan sonra hücre aktivasyonunun, en azından kısmen, mekanizmaları özetlemek ortaya çıktı. In vivo geleneksel MSC etkisi genellikle gecikmeli ve geçici ve &quot;vurmak ve koşmak&quot; olarak tarif edilebilir gibi deneylerde bunların kullanımdan önce MKH&#39;lerin aktive ederek, hücrelerin etkileri uzun süreli ve daha belirgin olabilir. Geçtiğimiz birkaç yıl boyunca, MSC küremsilerin kullanılması önemli fonksiyonel çalışmalar, bunların enflamatuar cevapları bastırma ve sferoidler hazırlanmış MSC 2 çekici formu hale makrofajlar, dendritik hücreler, nötrofiller ve T hücreleri gibi efektör hücrelerin etkileyerek, in vivo olarak bağışıklık modüle olduğunu göstermiştir 3. Buna ek olarak, int anti-kanser moleküllerinin üretimierleukin-24 (IL-24) ve tümör nekroz faktörü ile ilgili apoptoz-indükleyici ligand (TRAIL), erişkin mono tabakasına MSC&#39;ler nisbetle 3D kültürlerinde hedeflenen kanser tedavileri 8, 10, 14 için yararlanılabilir bir olgu artar. Geleneksel MSC kültür doku kültürü plastik değil, aynı zamanda FBS kullanımı sadece gerektiği gibi klinik kullanımı aşılması gereken vardı, başka bir engel MSC sferoidler daha müsait hale getirmek için. Bu engel üstesinden gelmek için, son zamanlarda, belirli kimyasal olarak tanımlanmış XF koşulları altında MSC parçacıklarının oluşumunu göstermiştir ve elde edilen MSC sferoidler FBS 14 koşullarda üretilen parçacıklarının aynı anti-enflamatuar ve anti-kanser molekülleri üretmek üzere aktive edilmiştir saptamıştır. Burada, bu bulgular XF kullanarak 3D kültürlerde önceden aktive MKH nesil gösteren birçok ayrıntılı protokoller sunulmuşturOrtam. Buna ek olarak, protokoller birlikte farelere sağlam sferoidler sunmak için pratik bir yöntem ile, anti-enflamatuar, bağışıklık düzenleyici ve anti-kanser etkilerine açısından MSC aktivasyon seviyelerini değerlendirmek için etkili yollar tarif eden sunulmaktadır.

<table><tbody><tr><td>MEM-&alfa; (minimal esansiyel orta alfa)</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>12561049; 12561056; MSC</td> büyüme ortamı (CCM) FBS'nin (fetal sığır serumu) <td>hazırlanması için minimal 12561072 esansiyel besiyeri</td></tr><tr><td>, premium select</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11595; S11510; S11550; S11595-24</td><td>her tür hücre için tam kültür ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>25030081; 25030149;</td><td>25030164 tür hücre için tam kültür ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>ThermoFisher / Gibco</td><td>15070063</td><td>tüm hücre türleri için tam kültür ortamının bileşeni</td></tr><tr><td>Sterilizasyon Filtre Üniteleri, 0.22 ve mikro; m PES membranı</td><td>MilliporeSigma SCGPU01RE</td><td>; SCGPU02RE; SCGPU05RE; SCGPU10RE; SCGPU11RE</td><td>ortamı sterilizasyonu</td></tr><tr><td>150 mm hücre kültürü kabı</td><td>Nunc</td><td>D8554&nbsp; SIGMA</td><td>hücre kültürü</td></tr><tr><td>Thermo Forma su ceketli CO2 nemlendirilmiş inkübatör</td><td>Thermo Fisher</td><td>Model 3110</td><td>kültürlenmiş hücrelerin inkübasyonu</td></tr><tr><td>Erken geçiş MCS'leri</td><td>The Texas A&'da Yetişkin Kök Hücrelerin Hazırlanması ve Dağıtımı Merkezi M Sağlık Bilimleri Merkezi Tıp Fakültesi Rejeneratif Tıp Enstitüsü Scott & </td><td>MSC'lerin su banyosunun 2D ve 3D kültürlerinin</td>beyaz <td>NA</td> hazırlanması</tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>89501-468</td><td>37 &°C'ye kadar ısıtma ortamı; C</td></tr><tr><td>Pipetler</td><td>Eppendorf</td><td>492000904</td><td>manuel sıvı işleme</td></tr><tr><td>Pipet Yardımı</td><td>Drummond Scientific Company</td><td>4-000-300</td><td>sereolojik pipetlerin kullanımı</td></tr><tr><td>Costar steril serolojik pipet (5, 10, 25 ve 50 ml)</td><td>Corning</td><td>4487; 4101; 4251; 4490</td><td>sıvı işleme</td></tr><tr><td>PBS (fosfat tamponlu tuzlu su), pH 7.4</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>10010023; 10010072; 10010031; 10010049</td><td>hücre kültürü işleme</td></tr><tr><td>%0.25 tripsin/EDTA çözeltisi</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>25200056; 25200072; 25200114</td><td>Yapışma hücrelerinin kaldırılması ve hücre agregatlarının dağıtılması</td></tr><tr><td>15 ml konik tüp</td><td>Corning/BD Falcon</td><td>352097</td><td>hücre santrifüjü</td></tr><tr><td>50 ml konik tüp</td><td>Corning/BD Falcon</td><td>352098</td><td>hücre santrifüjü</td></tr><tr><td>Eppendor soğutmalı santrifüj</td><td>Eppendorf/Fisher Scientific</td><td>Model 5810R</td><td>hücre santrifüjleme</td></tr><tr><td>hemositometresi</td><td>Fisher Scientific</td><td>26716</td><td>hücre sayımı</td></tr><tr><td>tripan mavisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td>Hematitometrede hücre sayımı sırasında SIGMA ölü hücre dışlaması</td></tr><tr><td>Tanımlanmış ksenofree MSC orta-1 (XFM-1)</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>A1067501</td><td>İnsan mezenkimal kök hücrelerinin büyümesi ve genişlemesi için özel olarak formüle edilmiş kseno-içermeyen ortam</td></tr><tr><td>Tanımlanmış ksenofree MSC ortam-2 (XFM-2)</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>5420</td><td>İnsan mezenkimal kök hücreleri için tanımlanmış, kseno içermeyen ortam</td></tr><tr><td>HSA (İnsan serum albümini)</td><td>İkizler</td><td>800-120</td><td>Kseno-içermeyen MSC ortamının</td></tr><tr><td>bileşeni rHSA (rekombinant İnsan serum albümini)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9731&nbsp; Kseno</td><td>içermeyen MSC ortamının</td>SIGMA Bileşeni</tr><tr><td>Toplam RNA izolasyonu Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td>Toplam RNA ekstraksiyonu</td></tr><tr><td>Qiashredder</td><td>Qiagen</td><td>79654</td><td>Toplam RNA ekstraksiyonu öncesi numune homojenizasyonu</td></tr><tr><td>RNAse-free DNase Set&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td>Toplam RNA ekstraksiyonu sırasında sütun üzerinde DNA eliminasyonu</td></tr><tr><td>&beta;-merkaptoetanol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6250&nbsp; </td><td>RLT tamponunda RNA'ların ALDRICH inhibisyonu</td></tr><tr><td>Vorteks</td><td>VWR</td><td>97043-562</td><td>karıştırma örneği</td></tr><tr><td>Spektrofotometre</td><td>Biorad</td><td>NA</td><td>RNA konsantrasyonu ve kalitesi</td></tr><tr><td>Yüksek kapasiteli cDNA Ters Transkripsiyon Kiti</td><td>ThermoFisher/Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4368814</td><td>toplam RNA'nın cDNA'ya transkripsiyonu</td></tr><tr><td>Gen Ekspresyon Testleri</td><td>ThermoFisher/Uygulamalı Biyosistemler</td><td>gerçek zamanlı PCR için primer/prob kombinasyonunu</td> <td>değiştirir</td></tr><tr><td>Hızlı Evrensel PCR Master Mix</td><td>ThermoFisher/Applied Biosystems</td><td>4352042; 4364103; 4366073; Gerçek</td><td>zamanlı PCR reaksiyonu için 4367846 ana karışımı</td></tr><tr><td>Gerçek zamanlı PCR sistemi (ABI Prism 7900 HT Dizi Tespit Sistemi)</td><td>ABI Prizm</td><td>NA</td><td>gerçek zamanlı PCR</td></tr><tr><td>1.5 ml santrifüj tüpü</td><td>Eppendorf</td><td>22364111</td><td>Hücre santrifüjleme, numune toplama ve saklama</td></tr> <tr><td>(-80 &°C; C) dondurucu</td><td>Thermo Fisher</td><td>Model Thermo Forma 8695</td><td>numune saklama</td></tr><tr><td>PGE2 (Prostaglandin E2) ELISA Kiti</td><td>R& D Systems</td><td>,</td><td>numune DMEM'deki sitokin konsantrasyonunun tahminini</td></tr><tr><td>KGE004B (Dulbecco' s modifiye edilmiş Eagle medium)</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>10566-016; 10566-024; 10566-032</td><td>makrofaj kültür ortamı</td></tr><tr><td>J774 fare makrofajları</td><td>ATCC</td><td>TIB-67</td><td>fare makrofaj hücre hattı</td></tr><tr><td>12 kuyulu plaka</td><td>Corning</td><td>3513</td><td> in vitro makrofaj stimülasyonu</td></tr><tr><td>LPS (lipopolisakkarit)</td> <td>Sigma-aldrich</td><td>L4130</td><td> in vitro makrofaj stimülasyonu</td></tr><tr><td>Fare TNF-a ELISA kiti</td><td>R& D Sistemleri</td><td>MTA00B</td><td>numunedeki sitokin konsantrasyonunun tahmini</td></tr><tr><td>Fare IL-10 (interlökin 10) ELISA kiti</td><td>R& D Systems</td><td>M1000B</td><td>numunedeki sitokin konsantrasyonunun tahmini</td></tr><tr><td>RPMI-1640 ortamı</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>11875-085</td><td>splenosit kültür ortamı</td></tr><tr><td>BALB/c fareleri</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>651</td><td>in vivo sferoid iletimi; Splenosit Hazırlama</td></tr><tr><td>Anti-Fare CD3e Fonksiyonel Sınıf Saflaştırılmış</td><td>eBioscience</td><td>145-2C11</td><td> in vitro splenosit stimülasyonu</td></tr><tr><td>70 & mu; m süzgeç&nbsp;</td><td>Corning</td><td>352350</td><td>Splenosit hazırlığı</td></tr>, <tr><td>Kırmızı kan hücresi lizis çözeltisi (1x)</td><td>Affymetrix eBioscience</td><td>00-4333</td>, <td>splenosit izolasyonu sırasında kırmızı kan hücrelerinin çıkarılması</td></tr>, <tr><td>Fare IFN-&#947; (interferon gama) ELISA kiti</td><td>Ar-Ge D Systems</td><td>MIF 00</td> örnek LNCaP prostat kanseri <td>hücrelerinde sitokin konsantrasyonunun tahmini</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1740</td>, <td>3D MSC'lerin kanser hücre hatları üzerindeki etkisini inceler in vitro</td></tr><tr><td>DNA tabanlı hücre proliferasyon test kiti</td> DNA içeriğine dayalı <td>ThermoFisher</td><td>C7026</td><td>hücre sayısı ölçümü</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5150</td><td>lizis reaktifinin bileşeni</td></tr><tr><td>EDTA (etilendiamintetraasetik asit)</td> <td>ThermoFisher</td><td>FERR1021</td><td>kalsiyum şelatörü, lizis reaktifinin bileşeni</td></tr><tr>DNA ölçümü için<td>Rnase A</td><td>Qiagen</td><td>19101</td><td>RNA bozunması</td></tr><tr><td>Filtre tabanlı çok modlu mikroplaka okuyucu</td><td>BMG Teknolojisi</td><td>NA</td><td>Mikroplaka tahlilleri (ELISA, hücre miktar tayini, etc.)</td></tr><tr><td>HBSS (Hanks dengeli tuz çözeltisi), kalsiyum yok, magnezyum yok, fenol kırmızısı</td><td>yok ThermoFisher/Gibco</td><td>14175079</td><td>in vivo enjeksiyonlarından önce MSC sferoidlerinin yeniden üretilmesi</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>MWI Veteriner Tedavisi</td><td></td><td>in vivo enjeksiyonları için anestezi 502017 Tedarik</td></tr><tr><td>Oksijen, sıkıştırılmış gaz</td><td>Praxair</td><td>NA</td><td>İzofluran ile kullanım için</td></tr><tr><td>Thermo Forma BSL-2 kabini</td><td>Thermo Fisher</td><td>Model 1385</td><td>Steril hücre kültürü</td></tr><tr><td>Güvenlik I.V. kateter/iğne stiletto, 20 G, 1 inç</td><td>Terumo</td><td>SR*FNP2025</td><td>Shperoidlerin periton boşluğuna verilmesi</td></tr><tr><td>Steril mikropipet uçları</td><td>Eppendorf</td><td>sıvı/hücre kullanımını</td> <td>değiştirir</td></tr></tbody></table>

xeno-ücretsiz koşullarda 3-d kültürler Üretim ve tedavi mezenkimal kök yönetim / stromal cell (msc) küremsi astarlı

Production and Administration of Therapeutic Mesenchymal Stem/Stromal Cell (MSC) Spheroids Primed in 3-D Cultures Under Xeno-free Conditions

Mezenkimal kök / stromal hücreler (MKH) Biyomühendislik ve rejeneratif tıpta büyük umutlar tutun. MSC&#39;ler doku kültür plastik güçlü yapışması ile birden fazla yetişkin dokulardan izole edildi ve daha sonra en sık fetal sığır serumu (FBS) ile, in vitro olarak genişletilebilir. FBS MKH&#39;ler immünojenik hale gelmesine neden olabilir beri, MSC kültürlerde varlığını hücrelerin hem klinik hem de deneysel uygulamalar sınırlar. MSC kültürleri Bu nedenle, çalışmalar kimyasal olarak tanımlanmış istihdamı xeno-free (XF) medya son derece değerlidir. MSC yararlı etkilerinin büyük bir tümör nekroz faktörü ile uyarılan gen 6 (TSG6) ve prostaglandin E2 (PGE2) gibi başlıca bağışıklık faktörlerin salgılanması sayesinde, inflamasyon ve bağışıklık düzenleme kabiliyetleri bağlanmıştır. Ancak, MKH bu faktörlerin üretmek için aktivasyon gerektirir ve MKH etkisi genellikle geçicidir, çünkü büyük ilgi hücreleri Prio öncesi aktive yollarını keşfetmek için ortaya çıkmıştırkullanımlarına R, ve böylece in vivo olarak aktivasyon için gecikme süresini ortadan kaldırır. Burada üç boyutlu (3D) kültürlerde etkili bir şekilde harekete geçirmek için protokoller ya da asal MKH&#39;lerin sunuyoruz kimyasal olarak tanımlanmış XF koşullar altında ve in vivo bu ön-aktifleştirilmiş MKH&#39;lerin uygulanması. Özellikle, ilk XF orta kullanarak küresel MSC mikro dokuları veya asılı damla &#39;parçacıklarının&#39; oluşturmak ve küreler ve klimalı ortam (CM) çeşitli uygulamalar için hasat edilebilir göstermek için yöntemler açıklanmaktadır. İkinci olarak, gen ekspresyon ekranlarını tarif ve in vitro fonksiyonel deneyleri, hızlı hücre anti-enflamatuar ve anti-kanser potansiyeli vurgulayan parçacıklarının MSC aktivasyon seviyesini değerlendirmek. Üçüncü olarak, in vivo etkinliği test etmek için, fare periton boşluğuna sağlam MSC sferoidler enjekte etmek için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Genel olarak, protokoller burada kimyasal olarak tanımlanmış XF con altında önceden etkinleştirilmiş MKH&#39;lerin elde büyük zorlukların üstesindenkoşullarına ve tedaviler için MSC parçacıklarının yönetmek için esnek bir sistem sağlamak.

Geçerli çalışmada, asılı damla kültürleri kompakt küresel mikro-doku veya XF koşullarında aktive MKH &#39;sferoidler&#39; üretmek için kullanılmıştır. Şekil 1&#39;de araştırma yol haritası MKH kendini monte etmek için teşvik edilir sferoidler veya CM küre kaynaklı tedavi edici faktörler ile yüklenen sonra 72 saat için damla asılı asılı zaman sferoidlerde içine alınabilir ve potansiyel hem de kullanılan bu tasvir araştırma ve klinik uygulamaları. Küre üretim için gerekli ...

Mezenkimal kök/stromal hücrelerin (MSC'ler) terapötik potansiyeli iyi belgelenmiştir, ancak hücreleri hastalar için hazırlamanın en iyi yöntemi tartışmalıdır. Burada, deneysel ve klinik uygulamalar için kseno içermeyen koşullar altında hazırlanmış MSC'lerin terapötik küresel agregalarını veya 'sferoidlerini' verimli bir şekilde oluşturmak ve yönetmek için protokoller iletiyoruz.

Xeno-ücretsiz Koşullarda 3-D Kültürler Üretim ve Tedavi Mezenkimal Kök Yönetim / Stromal Cell (MSC) küremsi Astarlı

Mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) hold great promise in bioengineering and regenerative medicine. MSCs can be isolated from multiple adult tissues via ...

Bu deneylerin genel amacı, deneysel ve klinik uygulamalarda, xeno-free koşullar altında hazırlanmış mezenkimal kök/stromal hücrelerin (MSC'ler) terapötik küresel agregalarını veya sferoidlerini verimli bir şekilde üretmek ve enjekte etmektir. Bu yöntemler; dağınık hücrelerin transplantasyonu sonrası ve doku hasarıyla yaygın olarak ilişkilendirilen olumsuz koşullar nedeniyle sıkça görülen yetersiz hücre tutunması, sağkalım ve fonksiyonellik gibi MSC terapötikleri alanındaki temel engellerin aşılmasına yardımcı olabilir.Bu prosedürlerin temel avantajı, MSC sferoidlerinin; şu anda hücrelerin bazı klinik uygulamalarını kısıtlayan ve bazı klinik öncesi verilerin yorumlanmasını da karıştırabilen FBS gibi immünojenik hayvan ürünleri olmadan hazırlanabilmesi, prime edilmesi ve enjekte edilebilmesidir. Bu mekanizma, MSC tabanlı etkinliğin aracılanmasında potansiyel olarak çok faydalı olsa da, MSC aracılı doku onarımını ve diğer medya formülasyonlarının terapötik gen ekspresini nasıl değiştirebileceğini anlamak için de kullanılabilir. Bu prosedürleri, laboratuvarımdan iki teknisyen olan Josh Beaver ve Bret Cloughle gösterecekler.Mezenkimal kök hücreleri, metin protokolüne uygun olarak ekip i

production-administration-therapeutic-mesenchymal-stemstromal-cell

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu protokol deneysel nakli amaçlı otolog yaratmanız serum hayvan kullanmadan mezenkimal stromal hücreleri ve endotel koloni oluşturan hücrelerin izolasyonu ve sonraki genişleme açıklamaktadır.

İnsan Göbek kordonu İzolasyon ve Hayvan Serum Genişleme Mezenkimal stromal hücreler (MKH) ve endotel Koloni Oluşturan Progenitör Hücreler (ECFCs) Türetilmiş

otolog serum ile insan Mezenkimal Stromal Hücreleri (hMSCs) Kültürleme, ksenojenik malzeme ve diğer olumsuz etkileri ile reddi riskini azaltır. Aynı zamanda, taze hMSCs sağlayabilir mezodermal progenitörlerin bir alt kümesi, bir geri kazanımını sağlar. otolog fibrin pıhtısı içinde hMSCs gömülmesi kolay kullanım ve etkin bir cerrahi implantasyon sağlar.

Mezenkimal Stromal Otolog Koşullarında Hücre Kültürü ve Teslimat: Ortopedik Uygulamalar için Akıllı Yaklaşım

Burada, insan periodontal bağ (PDL) hücre kürleri tarafından kitosan filmleri ile ilgili protokoller sunuyoruz. Üç boyutlu (3D) hücresel küreler kültürü geleneksel doku kültürü Polistiren (TCPS) kültür sistemine bir alternatif sağlar.

Kitosan filmlerde ınsan periodontal ligament hücre kürleri oluşumu

Burada, bir 3D biyoreaktör kullanarak sinovyal sıvı mezenkimal kök hücrelerden çok sayıda GMP sınıfı eksozom üretmek için bir protokol sunuyoruz.

Sinovyal Sıvı Mezenkimal Kök Hücre Kaynaklı Eksozomların 3D Biyoreaktör Kültürü ile Büyük Ölçekli Hazırlanması

Burada, hücre süspansiyonunu tohumlamak için otomatik bir pipetleme sistemi kullanarak adipoz türevli stromal/kök hücre (ASC) sferoidlerinin büyük ölçekli üretimini açıklıyoruz, böylece küresel boyut ve şeklin homojenliğini sağlıyoruz. Bu ASC sferoidleri, 3D biyobaskı yaklaşımları için yapı taşları olarak kullanılabilir.

3D Biyobaskı için Adipoz Türevi Kök Hücre Sferoidlerinin Büyük Ölçekli, Otomatik Üretimi

Burada, bir ters akış santrifüjleme sistemi kullanarak çok katmanlı şişelerden yapışkan hücreleri kapalı yarı otomatik bir şekilde toplamak için bir protokol sunuyoruz. Bu protokol, mevcut adımlarda birkaç değişiklikle diğer hücre genişletme platformlarından hem yapışkan hem de süspansiyon hücrelerini toplamak için uygulanabilir.

Kapalı Yarı Otomatik İş Akışı Kullanarak Klinik Uygulamalar için İnsan Mezenkimal Kök Hücre İşleme

Hücre tedavisi hazırlığı/manipülasyon aşamalarında kullanılmaya başlanan ksenojenik (kimyasal veya hayvansal türevli) ürünler, konakçı hastalarda immün reaktivite ve patojenik bulaşma riskinin artmasıyla ilişkilidir. Burada, insan adipoz türevi kök hücrelerin izolasyonu ve in vitro genişlemesi için tam bir ksenojenik içermeyen yöntem açıklanmaktadır.

İnsan Tedavisi için Yenilikçi Bir Ksenojenik İçermeyen Yöntemle İnsan Adipoz Türevi Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Kültürü

Ankraj bağımlı hücrelerin mikrotaşıyıcı-mikrobiyoreaktör üretimi için bir protokol, potansiyel hücre tabanlı tedaviler olarak tanımlanır. Akut solunum sıkıntısı sendromunun kullanım durumunu hedefleyen bir durum, karşılaştırılabilir hücre verimi ve flask bazlı süreç koşullarına göre olumlu gen ekspresyonu gösterilmiştir. Bu protokol, diğer demirleme bağımlı hücrelere ve hedef endikasyonlarına genişletilebilir.

Akut Solunum Sıkıntısı Sendromu İçin Hazırlanmış Anchorage-Bağımlı Mesenkimal Stromal Hücrelerin Mikrobiyoreaktor Tabanlı Üretimi

Bu yazıda izolasyon ve bu dokulardan mezenkimal kök / stromal hücreler (MSC) genişlemesi, ardından insan terim plasenta, fetal ve maternal dokuların diseksiyonu için yöntemler açıklanmaktadır.

İnsan Plasenta Doku türetilen İzolasyon ve mezenkimal kök Genişleme / Stromal hücreler

Aksenik ve gnotobiyotik koşullarda Drosophila melanogaster yetiştirme için bir yöntem sunulmuştur. Fly embriyolar, sodyum hipoklorit dechorionated steril diyet aseptik transfer ve kapalı kaplarda yetiştirilir. Bakteri ile diyet ve embriyolar aşılamak gnotobiyotik dernekler yol açar ve bakteriyel varlığı tüm vücut Drosophila homojenatları kaplama ile teyit edilir.

Meyve Fly Yetiştirme<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Aksenik ve gnotobiyotik Koşullarında

Öğrenin mezenkimal kök hücrelerin xeno-ücretsiz koşullarda küremsi agregatlarını üretmeyi ve enjekte etmeyi. Bu yöntemler hücre tutunumu ve işlevselliğini artırarak rejeneratif tıpta MSC terapilerinin etkinliğini iyileştirir.

Xeno-ücretsiz Koşullarda 3-D Kültürler Üretim ve Tedavi Mezenkimal Kök Yönetim / Stromal Cell (MSC) küremsi Astarlı

Daha fazla video keşfet