Revizyon artroplastisi roman tanılama: Sonication ve Multiplex Polimeraz zincir reaksiyonu

Eklem aspirasyonu, multipleks polimeraz zincir reaksiyonu ve sonikasyon ile açıklanan prosedürlerin genel amacı, peri-prostetik eklem enfeksiyonu şüphesi olan vakalarda ortopedi cerrahlarına hızlı ve güvenilir mikrobiyolojik sonuçlar sunmaktır. Bu yöntem, peri-prostetik eklem enfeksiyonunun tanı ve tedavi alanındaki patojenlerin erken saptanması ve dolayısıyla erken hedefe yönelik tedavi gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniklerin temel avantajı, sonuçların hızla iletilmesidir.

Peri-protez eklem enfeksiyonu şüphesi olan vakalarda ayırıcı tanıyı hızlandırabilir. Hastayı bir muayene masasına sırtüstü pozisyonda yatırın. Diz ponksiyonu yapılacaksa, dizin hafif fleksiyonda kalmasını sağlamak için hastanın dizinin altına bir diz rulosu yerleştirin.

Yoğun veya uzun vücut tüylerini kısaltmak için elektrikli tıraş makinesi kullanın. Ardından, metin protokolüne uygun olarak enstrüman masasını hazırlayın ve cerrahi önlemleri alın. Sonrasında, ponksiyon bölgesindeki hastanın cildini tamamen temizlemek için bir cilt dezenfektanı kullanın.

Fenestreli steril bir örtü ile ponksiyon bölgesini kapatın. Ardından, örtü üzerinden ponksiyon bölgesini belirleyin. Sivri uçlu bir bistüri ucu kullanarak, insizyon bölgesindeki cilt üzerinden küçük bir stab insizyon yapın.

Kanülü şırınganın luer-slip ucuna takın. Ardından kanülü stab insizyonundan içeri yerleştirin. Diz ekleminin üst resesüsünde, patellanın üst kutbunun altında, resesüse doğru dorsal ve medial yönde 45 derecelik bir açıyla hedefleyin ve iğneyi yaklaşık 5 cm derinliğe kadar yerleştirin.

Şırınga pistonunu geri çekerek eklem sıvısını aspire edin. Hematom oluşumunu önlemek için giriş insizyonuna önce bir pansuman, ardından bir bandaj uygulayın. Pediyatrik bir kan kültürü şişesinin membranını dezenfekte etmek için alkollü dezenfektan kullanın.

Ardından şırıngaya yeni bir kanül takın ve aspire edilen eklem sıvısından 1 ila 3 mL'yi balona enjekte edin. Hafifçe çalkalayarak veya döndürerek karıştırın. Natif bir eklem aspirat örneği hazırlamak için kanülü şırıngadan çıkarın.

Ardından, katkısız bir kan toplama tüpü açın ve toplama tüpüne 1 mL aspirat enjekte edin. PCR analizi için kapağını kapatıp sabitleyin. Hücre sayımı ve diferansiyasyonu için eklem aspiratının 1 ila 4 mL'sini EDTA içeren bir kan toplama tüpüne aktarın.

Master mix tüpünü oda sıcaklığında bekleterek çözdürün. Toplanan numuneden 180 mcL'yi numune tüpüne aktarın. Numune tüpünü, tüm iş akışının kalite kontrolü için protein kinaz K ve bir internal kontrol geni içeren numune tüpü kapağı ile kapatın.

Kontrol panelinde, sol alt köşedeki New Test düğmesine dokunarak işletim yazılımını açın. Hasta verilerini veya numune kimliğini girmek için dokunmatik ekranı kullanın. Numuneyi açılır menüden seçmek için önce ITI Cartridge seçeneğini, ardından uygulama modu olarak Orthopedics seçeneğini ve son olarak numune tipi olarak Synovial Fluid veya Sonication Fluid seçeneğini belirleyin. Ardından Start düğmesine basın.

Numune tüpünün altındaki barkodu taratın. Ardından numune tüpünü Lysator'a yerleştirin. Son olarak, numune tüpünün Lysator'dan serbest bırakılması için kokpit ekranından ilgili numuneyi seçin.

Ardından örnek tüpünü Lysator'dan çıkarın ve Lysator'un üst kapağını kapatın. Örnek tüpünü PCR kartuşunun örnek tüpü yuvasına yerleştirin. Daha sonra, çözülmüş master mix tüpünü PCR kartuşunun master mix yuvasına yerleştirin.

Master mix ve örnek tüpü içeren PCR kartuşunu taramak için kokpit monitöründeki talimatları izleyin. PCR kartuşunu analizörün belirtilen kartuş yuvasına yerleştirin. Kokpit dokunmatik ekranının sol alt köşesinden Aktif Testler'i seçin, ardından test sonuçlarını görüntülemek için doğru örnek kimliğini belirleyin.

Sonuçları cihazın belleğine kaydedin ve daha sonra başvurmak üzere yazdırın veya dışa aktarın. Mikrobiyoloğunuzla görüşün ve onu vaka detayları hakkında bilgilendirin, böylece örnekleri hızlı bir şekilde analiz etmeye hazır olacaktır. Laminer hava akışlı bir çalışma tezgahı altında, ameliyathaneden gelen eksize edilmiş protezi içeren plastik kabı açın ve eksize edilen yabancı cismin en az %80'i kapanana kadar steril %0.9 sodyum klorür çözeltisi ekleyin. Plastik kabı kapatın.

Ardından plastik kabı 30 saniye boyunca iyice çalkalayın veya karıştırın. Plastik kabı sonikasyon banyosuna yerleştirin. Sonrasında banyodaki sıvı seviyesini kontrol edin.

Numuneyi 40 ± 2 kHz frekansında ve 0,22 ± 0,04 W/cm² güç yoğunluğunda beş dakika boyunca sonikasyona tabi tutun. Ardından numuneyi 30 saniye boyunca sallayın veya iyice vorteksleyin. Laminar akış kabini içerisinde, sonikasyon sıvısından 50 mL toplayın ve tüpü sıkıca kapatmadan önce steril bir tüpe aktarın.

Konsantre bir sonikasyon sıvısı hazırlamak için, tüpü 4200 ×g'de 10 dakika boyunca santrifüj ederek 10 mL'lik bir kalıntı hacim bırakın ve kalan süpernatantı atmak için pipet kullanın. Peleti pipetleme ve vorteksleme yoluyla yeniden süspande edin. Uygun kültür ortamı içeren her bir balonu 0,5 mL konsantre sonikasyon sıvısı ile inoküle edin.

Bu videoda daha önce gösterildiği gibi, pediatrik kan kültürü şişesini 2 mL konsantre sonikasyon sıvısı ile ekimleyin. Ardından, PCR analizi için 1 mL konsantre sonikasyon sıvısını katkısız steril bir tüpe aktarın. Ekimlenmiş kültür ortamını inkübatöre yerleştirin.

Kültürleri 14 gün boyunca inkübe edin ve her gün büyümeyi kontrol edin. Bir majör kriterin veya beş minör kriterden en az üçünün mevcut olması durumunda, peri-prostetik eklem enfeksiyonu kanıtlanmış olarak kabul edildi. Majör kriterler arasında fistül varlığı veya iki ayrı mikrobiyolojik örnekte patojen tespit edilmesi yer almaktadır.

Minör kriterler arasında eklem aspiratında pozitif hücre sayısı veya pozitif hücre diferansiyasyonu, kan örneklerinde pozitif CRP ve sedimentasyon hızı, doku örneklerinde pozitif histoloji veya yalnızca bir mikrobiyolojik örnekte patojen saptanması yer alır. Buradaki sonuçlar, sonikasyon sıvısı ve eklem aspiratının PCR tanıları için orta düzeyde bir sensitivite, ancak %100 oranında çok güçlü bir spesifite göstermiştir. PCR, eklem aspiratında veya sonikasyon sıvısında pozitif bir bulgu gösterdiğinde, aynı patojen daha sonra geleneksel mikrobiyolojik kültürlerin birinde tespit edilmiştir. Enfeksiyon dışı vakaların farklı örneklerinin PCR analizleri hiçbir yalancı pozitif sonuç göstermemiştir.

Sonikasyon sıvısı örneklerindeki 16 gerçek patojenden altısı ve eklem sıvısı kültüründeki 13 patojenden beşi PCR tespitiyle kaçırılmıştır. Eklem aspiratı ve sonikasyon sıvısı olmak üzere her iki materyalin kombine PCR tanıları, 18 enfeksiyon vakasının 12'sini doğru şekilde tanımlamıştır. Bu videoyu izledikten sonra, periprostetik eklem enfeksiyonunda tanı yolunuzu nasıl iyileştireceğiniz konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

Mikrobiyologların ve ortopedik cerrahların, ayırıcı tanıları mümkün olduğunca iyileştirmek için nasıl yakın bir şekilde birlikte çalışmaları gerektiğini görebilirsiniz. Doğru şekilde uygulandığında, eklem aspirasyonundan sonraki beş saat içinde kartuş tabanlı multipleks PCR'den klinik olarak değerli sonuçlar elde edeceksiniz. Bu prosedürü uygularken, tüm süreç boyunca steril çalışmayı hatırlamak önemlidir.

İnsan doku örnekleri veya mikrobiyolojik örneklerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın. Bu prosedür gerçekleştirilirken kişisel koruyucu donanım gibi tüm önlemler her zaman alınmalıdır.