Revizyon artroplastisi roman tanılama: Sonication ve Multiplex Polimeraz zincir reaksiyonu

Eklem aspirasyonu, multipleks polimeraz zincir reaksiyonu ve sonikasyon ile tarif edilen prosedürlerin genel amacı, şüpheli peri-protez eklem enfeksiyonu vakalarında ortopedi cerrahlarına hızlı ve güvenilir mikrobiyolojik sonuçlar sunmaktır. Bu yöntem, peri-protez eklem enfeksiyonunun tanı ve tedavi alanında, patojenlerin erken bulguları ve dolayısıyla erken hedefe yönelik tedavi gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniklerin temel avantajı, hızlı sonuçların verilmesidir.

Şüpheli peri-protez eklem enfeksiyonu vakalarında ayırıcı tanıyı hızlandırabilir. Hastayı muayene yatağında sırtüstü pozisyonda konumlandırın. Diz delinecekse, dizin hafifçe bükülmüş bir pozisyonda durması için hastanın dizinin altına bir diz rulosu yerleştirin.

Yoğun veya uzun vücut kıllarını kısaltmak için elektrikli kesme makineleri kullanın. Daha sonra alet masasını hazırlayın ve metin protokolüne göre ameliyat için giyinin. Ardından, delinme bölgesinde hastanın cildini iyice yıkamak için bir cilt dezenfektanı kullanın.

Fenestre steril bir örtü ile delinme bölgesini örtün. Ardından, örtünün içinden delinme bölgesini tanımlayın. Sivri uçlu bir neşter bıçağı kullanarak, kesi yerinde deriden küçük bir bıçak kesisi yapın.

Kanülü şırınganın luer kızağına takın. Ardından kanülü bıçak kesisinden geçirin. Diz ekleminin üst girintisinde, patellanın üst kutbunun altında, girintiye doğru 45 derecelik bir açıyla dorsal ve medial hedefleyin ve iğneyi yaklaşık 5 cm derinliğe kadar sokun.

Şırınganın pistonunu çekerek eklem sıvısını aspire edin. Hematom oluşumunu önlemek için, bir pansuman uygulayın, ardından bıçak kesiğine bir bandaj uygulayın. Pediatrik kan kültürü şişesinin zarını dezenfekte etmek için alkollü dezenfektan kullanın.

Daha sonra şırınganın üzerine taze bir kanül koyun ve şişeye 1 ila 3 mL aspire eklem sıvısı enjekte edin. Hafif çalkalama veya döndürme ile karıştırın. Doğal bir eklem aspirat örneği hazırlamak için kanülü şırıngadan çıkarın.

Daha sonra katkı maddesi içermeyen bir kan alma tüpü açın ve toplama tüpüne 1 mL aspirat enjekte edin. PCR analizi için kapağı değiştirin ve sabitleyin. Eklem aspiratının 1 ila 4 mL'sini hücre sayımı ve farklılaşması için EDTA içeren bir kan alma tüpüne aktarın.

Ana karışım tüpünü oda sıcaklığına ayarlayarak buzunu çözün. Toplanan numunenin 180 mcL'sini numune tüpüne aktarın. Numune tüpünü, tüm iş akışının kalite kontrolü için protein kinaz K ve dahili bir kontrol geni içeren numune tüpü kapağıyla kapatın.

Kokpitte, sol alt köşedeki Yeni Test düğmesine dokunarak çalıştırma yazılımını açın. Hastanın verilerini veya bir numuneyi girmek için dokunmatik ekranı kullanın ID.To açılır menüden numuneyi seçin, önce ITI Kartuşunu, ardından uygulama modu olarak Ortopedi'yi seçin ve son olarak numune türü olarak Sinovyal Sıvı veya Sonikasyon Sıvısı'nı seçin. Ardından Başlat düğmesine basın.

Numune tüpünün altındaki barkodu tarayın. Ardından numune tüpünü Lysator'a yerleştirin. Ardından, Lysator'dan numune tüpünün kilidini açmak için kokpit ekranında numuneyi seçin.

Ardından numune tüpünü Lysator'dan çıkarın ve Lysator'ın üst kapağını kapatın. Numune tüpünü s'ye aktarınampPCR kartuşunun tüp yuvası. Ardından buzu çözülmüş ana karışım tüpünü PCR kartuşunun ana karışım yuvasına yerleştirin.

PCR kartuşunu ana karışım ve numune tüpü ile taramak için kokpit monitöründeki talimatları izleyin. PCR kartuşunu analizörün belirtilen kartuş yuvasına yerleştirin. Sol alt köşedeki kokpit dokunmatik ekranında Aktif Testler'i seçin, ardından test sonuçlarını görüntülemek için doğru numune kimliğini seçin.

Sonuçları makinenin belleğine kaydedin ve daha fazla referans için yazdırın veya dışa aktarın. Mikrobiyologunuzla konuşun ve vaka ayrıntıları hakkında ona bilgi verin, böylece numuneleri derhal analiz etmeye hazır olacaktır. Laminer hava akışlı bir çalışma tezgahının altında, eski dikilmiş protezi ameliyathaneden tutarak plastik kabı açın ve ekilen yabancı cisim en az% 80 kaplanana kadar steril% 0.9 sodyum klorür çözeltisi ekleyin. Plastik kabı kapatın.

Ardından plastik kabı 30 saniye boyunca iyice çalkalayın veya çalkalayın. Plastik kabı sonikasyon banyosuna aktarın. Ardından banyodaki sıvı seviyesini kontrol edin.

Numuneyi, 40 artı veya eksi 2 kilohertz frekansında ve santimetre kare başına 0.22 artı veya eksi 0.04 watt güç yoğunluğu ile beş dakika boyunca sonikleştirin. Daha sonra numuneyi 30 saniye boyunca çalkalayın veya iyice girdaplayın. Laminer akış tezgahının içinde, 50 mL sonikasyon sıvısını toplayın ve tüpü sıkıca kapatmadan önce steril bir tüpe aktarın.

Konsantre bir sonikasyon sıvısı oluşturmak için, tüpü 10 dakika boyunca 4200 kez G'de santrifüjleyin, 10 mL'lik bir artık hacim bırakın, kalan süpernatanı atmak için pipeti kullanın. Pipetleme ve girdaplama ile peleti yeniden askıya alın. Uygun kültür ortamının her bir şişesini 0.5 mL konsantre sonikasyon sıvısı ile aşılayın.

Pediatrik kan kültürü şişesini, bu videoda daha önce gösterildiği gibi 2 mL konsantre sonikasyon sıvısı ile aşılayın. Daha sonra 1 mL konsantre sonikasyon sıvısını PCR analizi için katkı maddesi içermeyen steril bir tüpe aktarın. Aşılanmış kültür ortamını inkübatöre aktarın.

Kültürleri 14 gün boyunca kuluçkaya yatırın ve günlük olarak büyümeyi kontrol edin. Peri-protez eklem enfeksiyonunun varlığı, bir majör kriter veya beş minör kriterden en az üçü mevcut olduğunda kanıtlanmış olarak kabul edildi. Başlıca kriterler arasında fistül varlığı veya iki ayrı mikrobiyolojik örnekte patojen saptanması yer alır.

Minör kriterler arasında eklem aspiratında pozitif hücre sayısı veya pozitif hücre farklılaşması, kan örneklerinde pozitif CRP ve sedimantasyon hızı, doku örneklerinde pozitif histoloji veya sadece bir mikrobiyolojik örnekte bir patojenin tespiti yer alır. Buradaki sonuçlar, sonikasyon sıvısı ve eklem aspiratının PCR teşhisi için orta derecede bir duyarlılık gösterdi, ancak PCR eklem aspiratında veya sonikasyon sıvısında pozitif bir bulgu gösterdiğinde,% 100'lük çok güçlü bir özgüllük gösterdi, aynı patojen daha sonra geleneksel mikrobiyolojik kültürlerden birinde tespit edildi. Enfeksiyon olmayan vakaların farklı örneklerinin PCR'si yanlış pozitif sonuç göstermedi.

Sonikasyon sıvısı örneklerinde 16 gerçek patojenden altısı ve eklem sıvısı kültüründen 13 patojenden beşi PCR tespiti ile kaçırıldı. Her iki malzemenin, eklem aspiratının ve sonikasyon sıvısının birleşik PCR teşhisi, 18 enfeksiyon vakasından 12'sini doğru bir şekilde tanımladı. Bu videoyu izledikten sonra, peri-protez eklem enfeksiyonunda tanı yolunuzu nasıl iyileştireceğinizi iyi anlamış olmalısınız.

Mikrobiyologların ve ortopedi cerrahlarının ayırıcı teşhisi mümkün olduğunca iyileştirmek için nasıl yakın bir şekilde birlikte çalışmaları gerektiğini görebilirsiniz. Doğru yapılırsa, eklem aspirasyonundan sonraki beş saat içinde kartuş bazlı multipleks PCR'den klinik olarak değerli sonuçlar elde edersiniz. Bu prosedürü denerken, tüm süreç boyunca steril çalışmayı unutmamak önemlidir.

İnsan dokusu örnekleri veya mikrobiyolojik örneklerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın. Bu işlem yapılırken kişisel koruyucu donanımlar gibi tüm önlemler her zaman alınmalıdır.