Name: Forskolin kaynaklı bağırsak Organoids şişme: Bir İn Vitro Deney Kistik Fibrozis Hastalarında İlaç Tepki değerlendirilmesi için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Öğrenin kistik fibrozis hastalarından elde edilen bağırsak organoidlerinde forskolin kaynaklı şişme yöntemiyle CFTR fonksiyonunu ve ilaç yanıtını değerlendirmeyi. Bu kişiselleştirilmiş yaklaşım, hastaların tedavi seçeneklerini belirlemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Hollandalı CF kuruluşundan (NCFS), ZonMW (40-00812-98-14103), Wilhelmina Çocuk Hastanesi Araştırma Fonu ve CZ ve Zilverenkruis / ACHMEA HIT-CF programı tarafından desteklenmiştir. Biz S. Heida-Michel, M. Geerdink, KM de Winter-de Groot ve G. Berkers (Pediatrik Göğüs, Wilhelmina Çocuk Hastanesi, UMC Utrecht Bölümü), ve RHJ Houwen (Pediatrik Gastroenteroloji, Wilhelmina Bölümü teşekkür etmek istiyorum hastaları yaklaşan ve CF Biobank üretimi için biyopsi almak için Çocuk Hastanesi, UMC Utrecht).

<ol><li>De Boeck, K., Amaral, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+therapies+for+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Progress in therapies for cystic fibrosis.</a> Lancet Respir Med. 4 (8), 662-674 (2016).</li>
<li>Cutting, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis+genetics%3A+from+molecular+understanding+to+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis genetics: from molecular understanding to clinical application.</a> Nature Rev Genet. 16 (1), 45-56 (2015).</li>
<li>Sosnay, P. R., Siklosi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+disease+liability+of+variants+in+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genet%22%5BJournal%5D)">Defining the disease liability of variants in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene.</a> Nature Genet. 45 (10), 1160-1167 (2013).</li>
<li>Zielenski, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10773783">Genotype and phenotype in cystic fibrosis.</a> Respiration. 67 (2), 117-133 (2000).</li>
<li>Van Goor, F., Hadida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+CF+airway+epithelial+cell+function+in+vitro+by+a+CFTR+potentiator%2C+VX-770%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Rescue of CF airway epithelial cell function in vitro by a CFTR potentiator, VX-770.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 106 (44), 18825-18830 (2009).</li>
<li>Van Goor, F., Hadida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+the+F508del-CFTR+protein+processing+defect+in+vitro+by+the+investigational+drug+VX-809%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Correction of the F508del-CFTR protein processing defect in vitro by the investigational drug VX-809.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 108 (46), 18843-18848 (2011).</li>
<li>Accurso, F. J., Rowe, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+VX-770+in+persons+with+cystic+fibrosis+and+the+G551D-CFTR+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of VX-770 in persons with cystic fibrosis and the G551D-CFTR mutation.</a> N Engl J Med. 363 (21), 1991-2003 (2010).</li>
<li>Ramsey, B. W., Davies, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CFTR+potentiator+in+patients+with+cystic+fibrosis+and+the+G551D+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">A CFTR potentiator in patients with cystic fibrosis and the G551D mutation.</a> N Engl J Med. 365 (18), 1663-1672 (2011).</li>
<li>De Boeck, K., Munck, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+ivacaftor+in+patients+with+cystic+fibrosis+and+a+non-G551D+gating+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of ivacaftor in patients with cystic fibrosis and a non-G551D gating mutation.</a> J Cyst Fibros. 13 (6), 674-680 (2014).</li>
<li>Boyle, M. P., Bell, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CFTR+corrector+%28lumacaftor%29+and+a+CFTR+potentiator+%28ivacaftor%29+for+treatment+of+patients+with+cystic+fibrosis+who+have+a+phe508del+CFTR+mutation%3A+a+phase+2+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Respir+Med%22%5BJournal%5D)">A CFTR corrector (lumacaftor) and a CFTR potentiator (ivacaftor) for treatment of patients with cystic fibrosis who have a phe508del CFTR mutation: a phase 2 randomised controlled trial.</a> Lancet Respir Med. 2 (7), 527-538 (2014).</li>
<li>Wainwright, C. E., Elborn, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumacaftor-Ivacaftor+in+Patients+with+Cystic+Fibrosis+Homozygous+for+Phe508del+CFTR%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Lumacaftor-Ivacaftor in Patients with Cystic Fibrosis Homozygous for Phe508del CFTR.</a> N Engl J Med. 373 (3), 220-231 (2015).</li>
<li>Van Goor, F., Yu, H., Burton, B., Hoffman, B. J. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1569199313001136">Effect of ivacaftor on CFTR forms with missense mutations associated with defects in protein processing or function.</a> J Cyst Fibros. 13 (1), 29-36 (2014).</li>
<li>Neuberger, T., Burton, B., Clark, H., Van Goor, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+primary+cultures+of+human+bronchial+epithelial+cells+isolated+from+cystic+fibrosis+patients+for+the+pre-clinical+testing+of+CFTR+modulators%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Use of primary cultures of human bronchial epithelial cells isolated from cystic fibrosis patients for the pre-clinical testing of CFTR modulators.</a> Methods Mol Biol. 741, 39-54 (2011).</li>
<li>Randell, S. H., Fulcher, M. L., O'Neal, W., Olsen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+epithelial+cell+models+for+cystic+fibrosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Primary epithelial cell models for cystic fibrosis research.</a> Methods Mol Biol. 742, 285-310 (2011).</li>
<li>Karp, P. H., Moninger, T. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+of+differentiated+human+airway+epithelia.+Methods+for+establishing+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">An in vitro model of differentiated human airway epithelia. Methods for establishing primary cultures.</a> Methods Mol Biol. 188, 115-137 (2002).</li>
<li>Sato, T., Vries, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Sato, T., Stange, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon%2C+adenoma%2C+adenocarcinoma%2C+and+Barrett%27s+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li>
<li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+development+and+disease+with+Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Modeling development and disease with Organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li>
<li>Dekkers, J. F., Wiegerinck, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+CFTR+assay+using+primary+cystic+fibrosis+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Med%22%5BJournal%5D)">A functional CFTR assay using primary cystic fibrosis intestinal organoids.</a> Nature Med. 19 (7), 939-945 (2013).</li>
<li>Dekkers, J. F., van der Ent, C. K., Beekman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+opportunities+for+CFTR-targeting+drug+development+using+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Rare+Diseases%22%5BJournal%5D)">Novel opportunities for CFTR-targeting drug development using organoids.</a> Rare Diseases. 1 (1), e27112(2014).</li>
<li>Servidoni, M. F., Sousa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rectal+forceps+biopsy+procedure+in+cystic+fibrosis%3A+technical+aspects+and+patients+perspective+for+clinical+trials+feasibility%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Rectal forceps biopsy procedure in cystic fibrosis: technical aspects and patients perspective for clinical trials feasibility.</a> BMC gastroenterology. 13, 91(2013).</li>
<li>Ommen, D. D. Z. -V., Vijftigschild, L. A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+premature+termination+codon+suppression+by+read-through+agents+in+cystic+fibrosis+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Limited premature termination codon suppression by read-through agents in cystic fibrosis intestinal organoids.</a> J Cyst Fibros. 15 (2), 158-162 (2016).</li>
<li>Dekkers, J. F., Gogorza Gondra, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+correction+of+distinct+CFTR+folding+mutants+in+rectal+cystic+fibrosis+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Optimal correction of distinct CFTR folding mutants in rectal cystic fibrosis organoids.</a> Eur Respir J. , (2016).</li>
<li>Dekkers, J. F., Van Mourik, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiator+synergy+in+rectal+organoids+carrying+S1251N%2C+G551D%2C+or+F508del+CFTR+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Potentiator synergy in rectal organoids carrying S1251N, G551D, or F508del CFTR mutations.</a> J Cyst Fibros. , (2016).</li>
<li>Dekkers, J. F., Berkers, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+responses+to+CFTR-modulating+drugs+using+rectal+organoids+derived+from+subjects+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Characterizing responses to CFTR-modulating drugs using rectal organoids derived from subjects with cystic fibrosis.</a> Sci Transl Med. 8 (344), 344ra84(2016).</li>
<li>Li, H., Sheppard, D. N., Hug, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transepithelial+electrical+measurements+with+the+Ussing+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Transepithelial electrical measurements with the Ussing chamber.</a> J Cyst Fibros. 3, 123-126 (2004).</li>
<li>Sheppard, D. N., Carson, M. R., Ostedgaard, L. S., Denning, G. M., Welsh, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+in+a+model+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Expression of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in a model epithelium.</a> Am J Physiol. 266 (4 Pt 1), L405-L413 (1994).</li>
<li>Farin, H. F., van Es, J. H., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redundant+sources+of+Wnt+regulate+intestinal+stem+cells+and+promote+formation+of+Paneth+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Redundant sources of Wnt regulate intestinal stem cells and promote formation of Paneth cells.</a> Gastroenterology. 143 (6), 1518-1529 (2012).</li>
<li>Drost, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+culture+systems+for+prostate+epithelial+and+cancer+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Organoid culture systems for prostate epithelial and cancer tissue.</a> Nat Protoc. 11 (2), 347-358 (2016).</li>
<li>Vijftigschild, L. A. W., Berkers, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B22-adrenergic+receptor+agonists+activate+CFTR+in+organoids+and+subjects+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">β2-adrenergic receptor agonists activate CFTR in organoids and subjects with cystic fibrosis.</a> Eur Respir J. 48 (3), 768-779 (2016).</li>
<li>Dekkers, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bioassay+using+intestinal+organoids+to+measure+CFTR+in+human+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">A bioassay using intestinal organoids to measure CFTR in human plasma.</a> J Cyst Fibros. 14 (2), 178-181 (2015).</li>
<li>Graeber, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+Current+Measurements+Detect+Activation+of+Mutant+CFTR+in+Patients+with+Cystic+Fibrosis+with+the+G551D+Mutation+Treated+with+Ivacaftor%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Intestinal Current Measurements Detect Activation of Mutant CFTR in Patients with Cystic Fibrosis with the G551D Mutation Treated with Ivacaftor.</a> Am J Respir Crit Care Med. 192 (10), 1252-1255 (2015).</li>
<li>Van Goor, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ivacaftor+potentiation+of+multiple+CFTR+channels+with+gating+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%3A+Official+Journal+of+the+Eur+Cyst+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Ivacaftor potentiation of multiple CFTR channels with gating mutations.</a> Journal of Cystic Fibrosis: Official Journal of the Eur Cyst Fibrosis. 11 (3), 237-245 (2012).</li>
</ol>

Hans Clevers, organoid kültürü ve Forskolin kaynaklı şişme tahlili için patent sahibi bir mucittir. Jeffrey M Beekman, Forskolin kaynaklı şişme tahlili için patent sahibi bir mucittir. Sylvia F Boj ve Robert Vries, Organoid Teknolojisinin münhasır lisansına sahip olan Hubrecht Organoid Technology Vakfı (HUB) tarafından istihdam edilmektedir. Aksi takdirde, yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Burada, insan kolorektal organoids üretimi, genişleme işlemi, dondurma ve eritme için tam bir protokol sağlar. Insan organoid Kültürlerin biraz zaman önce 17 kurduk iken, bazen uygulamalı eğitim olmadan başka laboratuarlarda teknolojiyi kurmak zor olduğu kanıtlanmıştır. Biz bu protokoller bu eğitimi yerini alacak tahmin ediyoruz. Wnt-3A klimalı ortam oluşturulması ve organoid kültür uzun vadeli korumada başarılı olmak için en önemli reaktiflerin biridir. Nitekim, orga...

CF bir epitel anyon kanalı kodlar kistik fibrozis transmembran iletkenlik regülatör (CFTR) geninde mutasyon neden olur. CF dünya çapında 1 yaklaşık 85.000 kişiyi etkilemektedir. 2000&#39;den fazla CFTR mutasyonları (tespit edilmiştir <a href="http://www.genet.sickkids.on.ca">www.genet.sickkids.on.ca</a> ). Bu çeşitlilik, kısmen görülen hastalık fenotipleri (çok geniş bir yelpaze açıklar <a href="http://www.CFTR2.org">www.CFTR2.org</a> ) 2, 3. CFTR mutasyonu altı sınıfları CFTR proteini ifade ve işlevi üzerindeki etkisi göre tanımlanmıştır: (i) sentezi (II) bozulmuş trafik, (III) hatalı kanalı geçit (IV) &#39;değiştirilmiş iletkenliği, (V), normal olarak, azaltılmış seviyelerde CFTR işleyen ve (VI) bozulmuş hücre yüzey kararlılığı 4. Ortak CFTR mutasyonlar iyi çalışılmış olmasına rağmen, CFTR fonksiyonu ve klinik durumu ile ilişkisi poorl kalıry özellikle nadir &quot;yetim&quot; mutasyon (büyük bir grup için, birey düzeyinde anlaşılan <a href="http://www.CFTR2.org">www.CFTR2.org</a> ) 1, 3. Son zamanlarda, ilaçların mutasyon belirli bir tarz içinde CFTR proteini hedef geliştirilmiştir. CFTR proteini hedefleme ilaçların iki sınıf klinik şu anda kullanımda olan ve eylem farklı modu var. Böyle VX-770 olarak Potansryatörler, apikal-lokalize mutant CFTR açık olasılığını artırmak ve hücrelerin 5 onların ilavesinden sonra doğrudan etki. Böyle VX-809 olarak Düzelticiler, endoplazmik retikulum-lokalize katlanan CFTR ticaretini yeniden ve etkileri önce hücreler 6 gözlenmektedir önceden inkübasyon gerektirir. CFTR potensiyatör, VX-770, hem de diğer sekiz olarak, G551D mutasyonu 7, 8 ile denekler için tescil edilmişCFTR S1251N 9 da dahil olmak üzere mutasyon yolluk; Birlikte, bu mutasyonların KF deneklerin% 5 tarafından taşınır. Diğer klinik çalışmalar, VX-770, düzeltici VX-809 ile birlikte, akciğer fonksiyonu üzerinde henüz önemli etkileri sınırlı olduğu belirtilmiştir ve hastaların 10% 45-50 taşıdığı F508del mutasyonu için homozigot bireylerde alevlenme oranlarında azalmaya neden var 11. KF hastalarının kalan% 50 içinde uyuşturucu duyarlı kişileri belirlemek geleneksel klinik çalışmalar maliyetli ve zaman alıcıdır ve çok nadir CFTR genotipleri olan bireyler için uygun değildir. Roman, maliyet-etkin, kişiselleştirilmiş yöntemler CFTR mutasyonu her türlü taşıma bireylere CFTR modülatörlerinin artan sayıda maç için çok önemlidir. Şimdiye kadar, belirli CFTR mutasyonları taşıyan hasta gruplarında deneme eklenmesi h mutant CFTR gen transfeksiyon kullanarak çalışmalar rehberliğinde edilmiştirodaları 5, 6, 12 Ussing elektrofizyolojik çalışmalar takip eterologous hücre sistemleri. Nedeniyle CF akciğer eksplant malzemeleri elde edilen hava-sıvı arayüz diferansiye bronşiyal epitel hücrelerinin yeterli CF hayvan modellerinde, ilaç etkinlik çalışmaları eksikliğine ilaç geliştirme 13, 14, 15 kullanılmıştır. Ancak, akciğer eksplant doku ve invaziv prosedürlerin sınırlı sayıda daha az yaygın CFTR mutasyonlar analizini engel son dönem hastalığı olmayan kişilerde bronş hücreleri almak ve kişiselleştirilmiş bir şekilde uyuşturucu testi önlemek için. Bu sınırlamaları gibi kolorektal organoids, burun hava yolu hücreleri ve uyarılmış pluripotent kök hücrelerinden elde edilen havayolu hücreleri gibi &quot;kolay erişim&quot; dokuların, üstesinden gelmek için, şu anda kişiselleştirilmiş ilaç tedavileri için araştırılmaktadır. 16, 17 biçiminde bir mide-bağırsak bir organ kültür epitel kök hücrelerine protokolleri. insan kolon / rektum için kültür koşulları tanımlanmış barındırır büyüme faktörleri (epitel büyüme faktörü (EGF), gastrin, Wnt-3A, R spondin 3 (Rspo3) ve Noggin) küçük moleküller (nikotinamid, A83-01 ile birlikte, bir bazal membran matris içinde ve SB202190). Bu koşullar altında, bir kök hücre ya da küçük doku parçaları dışarıya doğru yönlendirilmiş olan taban yüzü yüksek polarize epitel oluşturduğu kapalı kistik 3D yapıları içine büyür. Tüm hücre tipleri genellikle normal oranlarda ve konumlarda da görünebilir. Organoids haftalık mekanik bozulma ve yeniden kaplama uzun süreler boyunca açılabilir. Bunlar genetik ve fenotipik kararlı ve uzun süreli yayılmasını ve biyo-bankacılık 17 izin saklanabilir. Onlar mükellef bulunmaktadırTüm standart hücre / biyolojik genetik manipülasyonlar ve analitik teknikler 2B hücre hatları 18 için geliştirilmiş. Son zamanlarda CFTR işlevi hali hazırda, bir forskolin kaynaklı şişme (FIS) deneyi 19, 20 kolorektal organoids ölçülebilir olduğunu göstermiştir. Kolera toksini alternatif forskolin (FSK) ya da, maruz kaldıklarında, organoids hızla kendi siklik adenozin monofosfat (cAMP) seviyeleri artıran CFTR kanal 19 açılması yol açmasıdır. Bireylerden, veya kalıntı işlevi ile ilişkili CFTR mutasyonu olan deneklerden Organoids ardından organoid lümen sekretuar ishal in vitro eşdeğer iyonu ve su taşıma bir sonucu olarak şişer. CFTR boş bireylerden türetilen organoids ile gösterildiği gibi kolorektal organoids arasında FIS cevabı, daha önce tam olarak CFTR bağlı olduğu gösterilmiştir birSpesifik bir farmakolojik CFTR önleyicileri 19 kullanımı ile nd. Büyük konuya özel veri setleri biyopsi aldıktan sonra birkaç hafta içinde elde edilebilir. Burada detaylı bir şekilde tarif FIS deneyi için organoids herhangi bir yaşta ve sadece sınırlı bir rahatsızlık 21 elde edilebilir rektal biyopsilerinden kültürlenir. Organoids kolayca yeniden mühürlemek ve yeni organoids oluşturan tek crypts içine mekanik bozulma ile haftalık geçişli. FIS deneyi çalıştırmak için, ~ Bu bozulmuş küçük organoids 30-80, 96 oyuklu bir plaka 19 her çukuruna yerleştirilir. Deney gününde da organoids kalsein yeşil, canlı görüntülenmesini kolaylaştırmaktadır, canlı hücreler içinde yerinde tutulan bir floresan hücre geçirgen boya ile boyanır. Daha sonra, hücre içi cAMP yükseltir ve böylece CFTR aktive FSK,, organoid şişme teşvik etmek için ilave edilir. Apikal CFTR üzerine hareket potansiyatörler eşzamanlı W ilave edilirforskolin i, CFTR ticaretini geri düzelticisi ise FSK ilave edilmeden önce 24 saat eklenir. organoid şişme forskolin ilave edilmesi üzerine, her bir zaman noktası için, tüm fluoresan toplam nesne bölgede göreli bir artış hesaplar otomatik bir görüntü analizi ile saptanır. 3D şişme odaları Ussing 2B kültür havayolu hücrelerinde mevcut elektrofizyolojik CFTR okumalarla üzerinde avantaj ve dezavantajlarını sağlar organoid. Önemli bir avantajı, şişme tahlilin kapasiteye sahip olmasıdır. Hücreler ekilir ve kültür ortamının tek bir türünü kullanarak tahlil edilmiştir ve deneyimli bir teknisyen 12 hasta numunelerinde yaklaşık olarak haftada 1200 veri noktası kültürü haftalık olarak 25 organoid örneğe kadar miktarının süre. Biz geleneksel plaka başına yinelenen veya üç ölçümden tek bir deneysel koşul yazıp üç bağımsız inkübasyon süresi noktalarında bu tür ölçümleri tekrarlayın. Toplamda yaklaşık 300-500 single organoid yapılar daha sonra sınırlı teknik değişkenlik CFTR fonksiyonu çok hassas ölçümler yol açar deneysel koşul başına ölçülür. Bu hassas bize açıkça CFTR modülatörlere rezidüel fonksiyon ve tepki farklılıkları tanımlamak için izin verir ve kolayca özdeş CFTR mutasyonları 19, 22, 23, 24, 25 taşıyan hastalar arasında genetik arka plan efektleri almak için bize izin verir. Veri kalitesi kolaylıkla mikroskop görüntülerinden tespit edilebilir. FIS tam CFTR bağlı iken, CFTR fonksiyonu için dolaylı bir ölçüm sonucudur, sıvı taşıma, iyon taşıma bağlanması neden olan Okuması. Bu transepitelyal iyon akımları 26 ölçmek Ussing odalarına doğrudan CFTR fonksiyonu ölçümleri ile çelişmektedir. Ussing odaları apikal veya bazolateral c seçin uyarılması izinompartments (organoid deney izin vermez); bazolateral membranlar permeabilizing tarafından, apikal CFTR-bağımlı anyon salgılanması seçici 27 ölçülebilir.

<table><tbody><tr><td>Gelişmiş Dulbecco' s Besin Karışımlı Modifiye Eagles Medium F-12 Jambon (Ad-DF) 500 ml&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Bilimsel:&nbsp; Invitrogen</td><td>#12634</td>, <td>4 &°C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>Thermo Fisher Bilimsel:&nbsp; Invitrogen</td> <td># 35050</td><td>4 & derecede saklanır; C</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Thermo Fisher Bilimsel:&nbsp; Invitrogen</td> <td># 15630-056</td>, <td>4 & °C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>Thermo Fisher Bilimsel:&nbsp; Invitrogen</td> <td># 15140-122</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>96 kuyulu kültür plakası</td><td>Cellstar</td> <td># 655180</td><td></td></tr><tr><td>24 kuyulu kültür plakası</td><td>Cellstar</td> <td># 662160</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyulu kültür plakası</td><td>Cellstar</td> <td># 657160</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuzlu Suyu (-) CaCl2 (-) MgCl 2) (DPBS) Life</td> <td>Technologies: Gibco</td> <td># 14190-094</td><td>4 & derecede saklanır; C</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modifiye Eagles Medium&nbsp; (DMEM) 500 ml&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Bilimsel:&nbsp; </td> Wnt-3A Şartlandırılmış Orta Üretim için Invitrogen <td># 31966-021</td><td>. 4 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> <td>Bovogen</td><td>#SFBS LOT # 11113</td><td>Wnt-3A Şartlandırılmış Orta Üretim için. -20 ° C'de saklanır; CL</td></tr><tr><td>Wnt3A hücre hattı</td><td>ATCC</td><td>#CRL-2647</td><td>Wnt-3A Koşulu Orta Üretim için.</td></tr><tr><td>TOP/FOP plazmitleri</td><td>Millipore&nbsp;</td><td>#17-285</td><td>Wnt aktivitesini ölçmek için</td></tr><tr><td>pTK-Renilla</td><td>Promega&nbsp;</td><td>#E2241</td><td>Wnt aktivitesini ölçmek için</td></tr><tr><td>HEK-293</td><td>ATCC</td><td>#CRL-1573</td><td>Wnt aktivitesini ölçmek için</td></tr><tr><td>Çift Lusiferaz Raportör Test Sistemi</td><td>Promega&nbsp;</td><td>#E1910</td><td>Wnt aktivitesini ölçmek için</td></tr><tr><td>Zeocin&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Bilimsel:&nbsp; Invitrogen</td><td>#R250-01</td><td>Wnt-3A için Hücre hattı seçimi</td></tr><tr><td>B27 takviyesi&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Bilimsel:&nbsp; Invitrogen</td> <td># 17504-044</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>N-Asetilsistein</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#A9165-5G</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Nikotinamid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#N0636</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>İnsan Epitelyal Büyüme Faktörü (hEGF)</td><td>PrepoTech</td><td>#AF-100-15</td><td>-20 °C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Gastrin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#G9145</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>TGFb tip I Reseptör inhibitörü (A83-01)&nbsp;</td><td>Tocris</td> <td># 2939</td><td>-20 & derecede saklanır; C</td></tr><tr><td>Y-27632 dihidroklorür (RhoKi)</td> <td>Selleckchem</td><td>#S1049</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>p38 MAPK inhibitörü (p38i) (SB202190)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>#S7067</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>InvivoGen</td><td>#ant-pm-1</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>İnsan Noggin (hNoggin)</td><td>PrepoTech</td> <td># 120-10C</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>İnsan R-spondin 3 (hRspo-3)</td><td>R& D Sistemleri</td> <td># 3500-RS / CF</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Vankomisin</td><td>Sigma Aldrich</td> <td># 861987- 250mg</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Gentamisin</td><td>Yaşam Teknolojileri: Gibco</td> <td># 15710-049</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Etilendiamin tetraasetik asit (EDTA)</td> <td>Sigma Aldrich</td> <td># 431788</td><td>4 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td> <td># 354230</td><td>-80 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>TryplE Ekspres&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri: Gibco</td> <td># 12605-010</td><td>dondurma için organoidleri dondurmak için</td></tr><tr><td>Geri Kazanım Hücre Kültürü Dondurma Ortamı</td><td>Yaşam Teknolojileri: Gibco</td> <td># 12648010</td><td>dondurma</td></tr><tr><td>Calcein</td><td>Yaşam Teknolojileri: Gibco</td><td>#C3100MP</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Ar-Ge D Sistemleri</td> <td># 1099-50 mg</td><td>-80 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Lumacaftor (VX-809)</td><td>Selleckchem</td><td>#s1565</td><td>-80 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Ivacaftor (VX-770)</td><td>Selleckchem</td><td>#s1144</td><td>-80 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td><güçlü>Reaktiflerin / Malzemenin Adı< / güçlü></td><td><güçlü>Çözücü< / güçlü></td><td><güçlü>Stok Konsantrasyonu< / güçlü></td><td><güçlü>Nihai Konsantrasyon< / güçlü ></td></tr> <tr><td>GlutaMax</td><td></td><td>200 mM</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>Hepes</td><td></td><td>1 M</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td></td><td>10K U / ml 10K ve mikro; g / ml</td><td>100 U / ml 100 ve mikro; g/ml</td></tr><tr><td>Zeosin&nbsp;</td><td></td><td>100 mg / ml&nbsp;</td><td>125 ve mikro; g/ml</td></tr><tr><td>B27 takviyesi&nbsp;</td><td></td><td>100x</td><td>1x</td></tr><tr><td>N-Asetilsistein</td><td>MiliQ H2O</td><td>500 mM</td><td></td></tr><tr><td>Nikotinamid</td><td>DPBS</td><td>1 M</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>İnsan Epitelyal Büyüme Faktörü (hEGF)</td><td>DPBS %0,1 BSA</td><td>0,5 mg/ml</td><td>50 ng/ml</td></tr><tr><td>Gastrin</td><td>DPBS</td><td>100 & mikro; M</td><td>10 nM</td></tr><tr><td>TGFb tip I Reseptör inhibitörü (A83-01)&nbsp;</td><td>DMSO</td><td>5 mM</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>Y-27632 dihidroklorür (RhoKi)</td> <td>DMSO</td><td>10 mM</td><td>10 ve mikro; M</td></tr><tr><td>p38 MAPK inhibitörü (p38i) (SB202190)</td> <td>DMSO</td><td>30 mM</td><td>10 ve mikro; M</td></tr><tr><td>Primosin</td><td></td><td>50 mg / ml & nbsp;</td><td>100 ve mikro; g / ml</td></tr><tr><td>İnsan Noggin (hNoggin)</td> <td>DPBS% 0.1 BSA</td><td>100 ve mikro; g/ml</td><td>100 ng/ml</td></tr><tr><td>İnsan R-spondin 3 (hRspo-3)</td><td></td> <td>lot başına değişir</td>: <td>300 ng/ml</td></tr><tr><td>Vankomisin</td><td></td><td>10 mg/ml</td><td>50 &mikro; g/ml</td></tr><tr><td>Gentamisin</td><td></td><td>10 mg/ml</td><td>50 &mikro; g / ml</td></tr><tr><td>Etilendiamin tetraasetik asit (EDTA)</td> <td>MiliQ H < alt > 2 < / alt >O</td><td>0.5 M</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>Calcein</td><td>DMSO</td><td>10 & mikro; g / ml</td><td>3.3 ng / ml</td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>DMSO</td><td>10 mM</td><td>değişken</td></tr><tr><td>Lumacaftor (VX-809)</td> <td>DMSO</td><td>20 mM</td><td>değişken</td></tr><tr><td>Ivacaftor (VX-770)</td> <td>DMSO</td><td>20 mM</td><td>değişken</td></tr></tbody></table>

forskolin kaynaklı bağırsak organoids şişme: bir<em&gt; İn vitro</em&gt; deney kistik fibrozis hastalarında İlaç tepki değerlendirilmesi için

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Son geliştirilen kistik fibrozis transmembran iletkenlik regülatörü (CFTR) modüle edici ilaçlar, kistik fibrozisli (KF) hastalarda mutant CFTR kanalının yüzey ekspresyonunu ve/veya fonksiyonunu düzeltir. Bu ilaçlardan fayda görebilecek deneklerin belirlenmesi, CFTR mutasyonlarının geniş heterojenliği ve bireysel ilaç etkinliğine katkıda bulunan diğer bilinmeyen faktörler nedeniyle zordur. Burada, bireysel CFTR fonksiyonunu ve CFTR modülatörlerine in vitro yanıtı ölçmek için basit ve nispeten hızlı bir testi açıklıyoruz. Üç boyutlu (3D) epitelyal organoidler, standart organoid besiyerinde rektal biyopsilerden büyütülür. Bir kez kurulduktan sonra, organoidler gelecekteki analizler için biyo-bankaya yatırılabilir. Test için, 30-80 organoid, bazal membran matrisindeki 96 oyuklu plakalara ekilir ve daha sonra ilaçlara maruz bırakılır. Bir gün sonra, organoidler kalsein yeşili ile boyanır ve forskolin kaynaklı şişme, 37 ° C'de konfokal canlı hücre mikroskobu ile izlenir. Forskolin kaynaklı şişme tamamen CFTR'ye bağımlıdır ve farklı ve hatta aynı CFTR mutasyonlarına sahip bireylerin ilaç tepkileri arasında ayrım yapılmasına izin vermek için yeterince hassas ve hassastır. İn vitro şişme yanıtları, tedaviye klinik yanıt ile ilişkilidir. Bu test, CFTR mutasyonlarından bağımsız olarak ilaca duyarlı bireylerin tanımlanması için uygun maliyetli bir yaklaşım sağlar. Ayrıca gelecekteki CFTR modülatörlerinin geliştirilmesinde de etkili olabilir.

Şekil 1A BMM üzerinde gömülü crypts bir temsilcisi taze izolasyon gösterir. kriptler CF konunun kolorektal biyopsi alınmıştır. Genellikle, bir organoid her crypt (- C Şekil 1A) oluşturulur. Nedeniyle CFTR disfonksiyonu, kolon CF organoids çoğu kistik değil, oldukça kompakt ve projeksiyonlar ve buddings (Şekil 2A - 2B) ile vardır. Bununla birlikte, bazı CF kistik şekli (Şekil 2C), vahşi t...

Bu protokol, kistik fibrozisli (KF) deneklerden alınan kültürlenmiş dokuda CFTR fonksiyonunu ve CFTR modülatör yanıtlarını ölçmek için bir testi tanımlar. Biyopsi kaynaklı bağırsak organoidleri, CF organoidlerinde kusurlu (veya güçlü bir şekilde azalmış) bir yanıt olan ve CFTR modülatörlerine maruz bırakılarak geri yüklenebilen bir yanıt olan cAMP güdümlü bir şekilde şişer.

Forskolin kaynaklı bağırsak Organoids şişme: Bir<em&gt; İn Vitro</em&gt; Deney Kistik Fibrozis Hastalarında İlaç Tepki değerlendirilmesi için

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Bu prosedürün genel amacı, Kistik Fibroz hastalarından üretilen intestinal organoidlerde forskolinle indüklenen şişme (FIS) testi kullanarak, CFTR modülatör tedavilerinin etkinliği kapsamında bireysel CFTR fonksiyonunu değerlendirmektir. Bu yöntem, Kistik Fibroz alanındaki temel sorulara yanıt vermektedir. Özellikle, mevcut veya deneysel ilaçlardan uzun vadede fayda görebilecek hastaların belirlenmesine yardımcı olur.Bu tekniğin temel avantajı, yaşa bağlı olmaksızın herhangi bir CF hastasından organoidler üretmek için kolayca erişilebilir dokuların kullanılabilmesidir. Bu tekniğin etkileri, Kistik Fibrozis'in ortoterapisine kadar uzanmakta olup, ilaç etkinliğinin maliyet etkin ve bireysel bir şekilde test edilmesine yönelik acil ve güncel bir ihtiyaca cevap vermektedir. Prosedürü, Hubrecht Organoid Technology'den Marvin Statia ve Jeffrey Beekman grubundan Annelot Vonk uygulamalı olarak gösterecektir.Optimal forskolin kaynaklı şişme analizi verilerini elde etmek için, birden fazla tomurcuklanmaya sahip büyük organoidler içeren bir kültürle çalışmak esastır. Böyle bir kültür belirledikten sonra, bir adet 15 mililitrelik konik tüpü örnek adıyla ve bir adet tüpü "yıkanmış" olarak etike

forskolin-induced-swelling-intestinal-organoids-an-vitro-assay-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Burada, hasat korumak ve patojen ilişkili moleküler modelleri (PAMPS) ve Listeria monocytogenes fare ince bağırsak organoids tedavisi için bir protokol da gen ifadesi ve protein için uygun normalizasyon ağırlıklı olarak, tarif edilmektedir.

<em&gt; Ex Vivo</emFare Bağırsak Organoids ve&gt; Kültür ve Desen Tanıma Reseptör Uyarım

Bu iletişim kuralı insan bağırsak organoids floresan mikroskopi kullanarak gerçek zamanlı aşağıdaki farmakolojik tedavide epitel bariyer geçirgenliği ölçümü açıklar ve cep mikroskobu canlı.

Gerçek zamanlı insan bağırsak Organoids epitel bariyer geçirgenliği ölçümü

Burada insan nazal epitel hücreleri kültürleri üç boyutlu küresel oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Pulcuklarının sonra sürücüye Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatörü (CFTR) teşvik-bağımlı iyon ve CFTR işlevi için bir proxy gibi küresel luminal boyutunda değişiklik miktarının sıvı salgılanması.

İnsan nazal epitel hücre pulcuklarının nesil bireyselleştirilmiş Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatör çalışma için

Burada insan burun epitel hücrelerinden in vitro organoid modeli tanımlamak için ayrıntılı bir protokol sunulmuştur. Protokol, standart laboratuvar ekipmanı gerektiren ölçümler için seçeneklere ve özel ekipman ve yazılımlar için ek olanaklara sahiptir.

İnsan Nazal Epitel Organoidlerinin Kültürü ve Görüntülenmesi

Bu protokol, membran potansiyelindeki değişiklikleri ölçerek elektrojenik membran proteinlerinin incelenmesi için bir yöntem açıklamaktadır. Bu tahlil, epitel hücre hatlarında endojen olarak eksprese edilen çoklu iyon kanallarının fonksiyonel olarak okunması için bir platform sağlar.

İki Epitel Hücre Hattında İki Endojen İyon Kanalının Yüksek Verimli Fonksiyonel Çalışması için Membran Potansiyelinin Floresan Bazlı Bir Analizi

Burada, çift odacıklı, geçirgen bir destek sisteminde köpek bağırsak organoidlerinin kültürünü tanımlayan bir protokol sunuyoruz. Geçirgen desteklerde organoid tohumlama, tek katmanlı bakım ve ardından ilaç geçirgenliği deneyleri anlatılmaktadır.

Çift Odalı Geçirgen Destek Sisteminde Köpek Bağırsak Organoidleri

Biyopsi kaynaklı intestinal organoidler ve çip üzerinde organ teknolojileri, bölgeye özgü bağırsak işlevselliğini özetlemek için mikrofizyolojik bir platformda birleştirilir.

Bağırsak Bölgesine Özgü İşlevselliği Modellemek için İnsan Organoidlerini ve Çip Üzerinde Organ Teknolojisini Birleştirme

Bu protokol, kistik fibroz (KF) için yeni bir tanısal test olan rektal organoid morfoloji analizini (ROMA) tanımlamaktadır. Morfolojik özellikler, yani yuvarlaklık (dairesellik indeksi, CI) ve bir lümenin varlığı (yoğunluk oranı, IR), CFTR fonksiyonunun bir ölçüsüdür. 189 deneğin analizi, CF ve CF olmayan arasında mükemmel bir ayrım olduğunu göstermiştir.

Rektal Organoid Morfoloji Analizi (ROMA): Kistik Fibroziste Tanısal Bir Tahlil

Organoid-fibroblast ko-kültürleri, in vivo kök hücre nişini incelemek için bir model sağlar. Burada, özofagus organoid-fibroblast ko-kültürleri için bir protokol tanımlanmıştır. Ek olarak, fibroblast-organoid etkileşimini görselleştirmek için tüm montaj görüntülemesi kullanılır.

Özofagus Fibroblastlarının Organoid Ko-Kültürler Kullanılarak Fonksiyonel Karakterizasyonu ve Görüntülenmesi

Burada, sıçan bağırsak organoidleri üretmek ve bunları birkaç aşağı akış uygulamasında kullanmak için bir protokol sunuyoruz. Sıçanlar genellikle tercih edilen bir klinik öncesi modeldir ve sağlam bağırsak organoid sistemi, in vivo çalışmalara eşlik edecek bir in vitro sistem ihtiyacını karşılar.

Sıçan Bağırsak Organoidlerinin Üretimi ve Manipülasyonu

Bu çalışma, ince ve kalın bağırsaklardan türetilen 2D tek katmanlı domuz organoidleri oluşturmak için bir protokolün ana hatlarını çizmektedir. Bu tek tabakaların büyümesi, sağlam epitel bütünlüğünü gösteren artan TEER değerleri ile işaretlenir. Ek olarak, bu tek tabakalar, forskolin uygulamasını takiben Ussing odası deneylerinde fizyolojik salgı tepkileri sergiler.

Doğal Bağırsağın Fizyolojik Özelliklerini Yansıtan İki Boyutlu Domuz Bağırsak Organoidleri

Öğrenin kistik fibrozis hastalarından elde edilen bağırsak organoidlerinde forskolin kaynaklı şişme yöntemiyle CFTR fonksiyonunu ve ilaç yanıtını değerlendirmeyi. Bu kişiselleştirilmiş yaklaşım, hastaların tedavi seçeneklerini belirlemeye yardımcı olur.

Forskolin kaynaklı bağırsak Organoids şişme: Bir

Daha fazla video keşfet