Name: Hazırlama ve Değerlendirilmesi 99m Bioorthogonal Kimya Kullanarak Öncesi hedeflemek için üç dişli Şelatlar Tc-etiketli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 54 s
Description: Öğrenin, biyootogonal kimya kullanarak teknesyum-99m ile işaretlenmiş tetrazinlerin radyoetiketlenmesi ve önceden hedeflenmiş görüntüleme için hazırlanması. Bu yöntem, yeni radyofarmasötiklerin geliştirilmesine olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC), Ontario Kanser Araştırmaları Enstitüsü (OICR, #P.SI.015.8) ve Kanada Kanser Derneği'nden (CCS, #703857) araştırma hibe fonu ile desteklenmiştir. Yazarlar, makalenin hazırlanmasında yardım sağlayan Dr. Denis Snider'ın katkılarını kabul eder.

Hayvan çalışmaları Hayvan Bakımı Kanada Konseyi (ccac) kurallara uygun olarak McMaster Üniversitesi Hayvan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. 99m Tc ile Tz-üç dişli Ligandlar 1. Radyo-etiketlenmesi DİKKAT: Aşağıdaki prosedürler radyoaktif bileşikler kullanılmasını gerektirir. İş sadece güvenliği ve atılması düzenlemelerine bağlılık ile lisanslı laboratuarda yapılmalıdır. Mikrodalga reaksiyonları, özellikle, kimyasal sentez için tasarlanmış mikrodalga yapılmalıdır. <ol><li> Sentezi [99mTc (CO) 3 (H2O) 3] + 19, 20 <ol><li> Bir mikrodalga şişeye olarak, kombine 8 mg K 2 [BH3 CO2], 15 mg Na 2 CO 3, 20 mg Na 2 B 4 O 7 · 10H 2, O, 25 mg KOCO [CH (OH)]2 COONa · 4H 2 O Boşaltma argon gazı ile 10 dakika boyunca bir tüpe konulmuştur. </li><li> Şişeye% 0.9 tuzlu su içinde (~ 1.100 MBq, ~ 30 mCi) - toplam maliyet masrafı 4 99m 4 ml. </li><li> reaktiflerin bir karışım elde etmek karıştırma 10 saniye sonra, 110 ° C&#39;de 3.5 dakika boyunca bir mikrodalga reaksiyon ısı. </li><li> ~ 400 uL 1 M HCI kullanılarak 3.5-4 çözeltinin pH&#39;ının ayarlanması. pH kağıdı kullanarak doğrulayın. </li></ol></li><li> Tetrazin radyo-etiketlenmesi, 1-5 ligandları <ol><li> 250 uL, MeOH 21 her ligandın 2 mg (bileşikler 1-5) içinde çözülür. </li><li> 250 uL ekleyin [99m Tc (CO) 3 (H 2 O) 3] + (~ 74 MBq ~ 2 mCi) her çözüm. </li><li> 60 ° C&#39;de 20 dakika boyunca bir mikrodalga kullanarak reaksiyon karışımı ısıtılır. Not: Bu adım, tüm 5 tetrazinler için aynıydı. </li><li> Bileşikler 2-5 için, solvent ve yeniden dissol buharlaşması1 h / h, DCM: TFA 1 1 mL elde edilen ürünler ve. </li><li> 6 dakika boyunca (2-4) ya da 10 dakika (5) için bir mikrodalga içinde 60 ° C sıcaklıkta çözülmüş, reaksiyon ürünleri (2-5) ısıtın. </li><li> Oda sıcaklığına kadar soğutulduktan sonra, bir buharlaştırıcı kullanılarak çözücü (36 ° C, 8 mbar, 3 dakika, 6000 rpm) ve buharlaştınlarak 1 kurutulmuştur bileşiği çözmek: 1 ACN: H2, O ya da 1: 1 MeOH: H2O, HPLC ile arıtma öncesi. </li><li> HPLC (C18 ters fazlı) ile, etiketlenmemiş tetrazin ligand etiketli ürünün ayrılması dahil olmak üzere, 99mTc-etiketli bileşikler (1-5), saflaştınlır. Tipik haliyle, 30:70 ACN gradyanı kullanılmaktadır: H2O (her ikisi de% 0.1 TFA ile birlikte) 40:60 ACN: H2O 20 dakika boyunca (18 dakika) ve bir C18 analitik 4.6 x 100 mm kolonu üzerinde. UV (254 nm) ve gama algılama hem de kullanın. <ol><li> Her bir işaretlenmiş ürünün küçük bir örneği alın ve bir ko-inj edilene olan HPLC alıkoyma süresi karşılaştırınyansıtılmaktadır, radyoaktif olmayan, standart yeniden etiketli (% 20 0.125 mg metanol-H2O). Yeniden etiketli standart bir UV HPLC izi tespit edilir ve γ-HPLC izleme 99mTc-etiketli bileşik ile aynı zamanda Zehir. Bu ko-enjeksiyon bileşik Tc-etiketli 99m kimliğini doğrulayan, karşılaştırılabilir tutma zamanlarda doruklarını gösterir. </li></ol></li><li> bir evaporatör (36 ° C, 8 mbar, 3 dakika, 6000 rpm) kullanılarak HPLC fraksiyonlardan çözücü buharlaşır. </li><li> % 0.5 BSA ve% 0.01 Tween-80 ihtiva eden, 7,4 kBq / PBS uL konsantrasyonunda saflaştırılarak bileşik formüle. </li><li> Etiketli bileşikler stabil olmasını sağlamak için, bir in vitro stabilitesi çalışma gerçekleştirin. stabilitesini değerlendirmek için, her zaman noktasında HPLC karışımın küçük bir miktar (3.7 MBq) enjekte, 1, 4 ve 6 saat boyunca 37 ° C &#39;de formüle edilen bileşiğin inkübe edin. </li></ol></li></ol> 2. Ön hedefli Bio-dağıtım Çalışmaları <ol><lHayvanların i&gt; hazırlanması <ol><li> 7-9 haftalık dişi Balb / c fareleri kullanılarak (n = 3), kuyruk ven enjeksiyon yoluyla TCO BP tuzlu su (20 mg / kg) (5 ug / ml) içinde formüle uygulanması. </li><li> fiziksel kısıtlama cihaz fare yerleştirin ve kuyruk yan yüzeylerinde bulunan damarları belirlemek ve alkollü bir bezle silin. kuyruk ucundan yaklaşık 2 cm, ven sığ bir açı paralel bir 30-gauge iğne takın. Yavaşça, enjekte iğneyi çıkarın ve kanama durana kadar hafif basınç ile enjeksiyon yerinde temiz gazlı bez sünger uygulamak için piston bastırın. </li><li> TCO-BP 1 saat sonra enjeksiyon da tatbik ~% 0.5 BSA, 100 uL içinde formüle 99mTc-tetrazin 0.74 MBq (20 uCi),% 0.01 Tween-80, PBS içinde, kuyruk ven enjeksiyon yoluyla. </li></ol></li><li> Biyo-dağılım çalışmaları <ol><li> İstenilen zaman noktasında (t = 6 saat),% 3 izofluran ve% 2 oksijen gaz karışımı kullanılarak Fareler uyuşturan. bir gösterinanestezi fare e tutam çekilme anestezi cerrahi düzlemine altında olduğundan emin olmak için. </li><li> bir şırınga heparin ile ön-muamele ile kalp ponksiyonu ile kanı (1 mL) içinde toplayın. devam anestezi burun konisi burun sırtında yer fare ve hayvan üzerinde kılıç şeklinde sürecini bulun. <ol><li> 20 ° açıyla biraz kılıç şeklinde süreci kapsamında hayvanın orta hatta sol, 25 G iğne takın. Tam iğneyi ve yavaş yavaş kalp delinmiş eğer iğne hub kan görmek için piston geri çekin. Gerekirse kalbi delmek, dalgıç tutarken biraz iğneyi yeniden ayarlayın. Yavaş yavaş şırınga içine kan çizmek. </li></ol></li><li> anestezi altında iken, servikal dislokasyon ile hayvan Euthanize. </li><li> Bir plastik torba içinde her hayvan koyun ve tüm vücut aktivite düzeyini ölçmek için bir doz kalibrasyon cihazı (99m Tc ayarı) kullanın. </li><li> aşağıdaki doku ve sıvı toplama öncesi ağırlığındakan, kemik (diz ve omuz), safra kesesi, böbrekler, karaciğer, (içindekiler) ile mide, (içindekiler) ile ince bağırsak, kalın bağırsak ve (içeriği ile) caecum, tiroid ve trakea, idrar ile idrar kesesi: ed tüpleri sayma ve kuyruk. </li><li> Uygun sayım tüpleri dokuları yerleştirmeden önce kan kaldırmak ve kuru leke PBS (kan, safra kesesi ve idrar kesesi hariç) uygun dokuları durulayın. </li><li> plastik bir torbaya hayvan karkas yerleştirin ve bir doz kalibratörü ile artık tüm vücut aktivitesini ölçmek. </li><li> Doku örneği içeren her tüp tartılır. Tüpün çıkarma başlangıç ​​ağırlık doku kütlesi elde edilmiştir. </li><li> Her bir fare için enjeksiyon esnasında bir test numunesi (100 uL) etkinlik miktarını ölçmek için, bir doz kalibrasyon cihazı (99mTc ayarı) kullanın. Not: Bu test örneği, böylece enjeksiyon esnasında aktivite sayımı veren enjeksiyon hacmine eşittir. </li><li> Doku ölçümü bir zamandadaha önce kullanılmış olan test örneğinin liquot 5 uL. Bir çok dedektörlü gama sayacı (99m Tc ayarı) kullanın ve 5 uL test örneği için dakika (CPM) başına sayımı elde etmek saymak. </li><li> Bir dönüşüm faktörü (CPM uCi -1) elde etmek için denklem 1 kullanılarak aktivite ve CPM ilişkiyi hesaplamak için 2.2.9 ve 2.2.10 elde edilen iki değer kullanın. (1) <img alt="denklem 1" src="/files/ftp_upload/55188/55188eq1.jpg" /></li><li> Her bir doku veya sıvı örneğinde radyoaktivite miktarını ölçmek için gama sayacını kullanın. </li><li> toplam enjekte edilen dozun ölçüm nisbetle zamanda her bir doku veya akışkan içinde etkinlik miktarını hesaplamak için Denklem 1 kullanın. Bu değer daha sonra, organ ağırlığı ile normalize ve doku gramı başına enjekte edilen doz yüzdesi (yani,% ID / g) olarak rapor edilir. </li><li> Absen 99m Tc-etiketli tetrazin ligandlar kullanılarak negatif kontrol deney yapmak için adımları 2.2.13&#39;ün için 2.1.2 izleyinTCO-BP ce. Kurban fareleri (n = 3) ve 0.5, 1, 4 ve 6 saat sonra enjeksiyonda doku ya da yukarıda tarif edildiği gibi sıvı elde. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Jurisson, S. S., Lydon, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+Technetium+Small+Molecule+Radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Potential Technetium Small Molecule Radiopharmaceuticals.</a> Chem. Rev. 99 (9), 2205-2218 (1999).</li>
<li>Kluba, C. A., Mindt, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Click-to-chelate%3A+Development+of+Technetium+and+Rhenium-Tricarbonyl+Labeled+Radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Click-to-chelate: Development of Technetium and Rhenium-Tricarbonyl Labeled Radiopharmaceuticals.</a> Molecules. 18, 3206-3226 (2013).</li>
<li>Amato, I. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/cen-v087n036.p058">Nuclear Medicines Conundrum.</a> Chem. Eng. News. 87 (36), 58-70 (2009).</li>
<li>Hnatowich, D. J., Virzi, F., Rusckowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigations+of+Avidin+and+Biotin+for+Imaging+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">Investigations of Avidin and Biotin for Imaging Applications.</a> J. Nucl. Med. 28 (8), 1294-1302 (1987).</li>
<li>Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine+Ligation%3A+Fast+Bioconjugation+Based+on+Inverse-Electron-Demand+Diels-Alder+Reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Tetrazine Ligation: Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactivity.</a> J. Am. Chem. Soc. 130 (41), 13518-13519 (2008).</li>
<li>Devaraj, N. K., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine-Based+Cycloadditions%3A+Application+to+Pretargeted+Live+Cell+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Tetrazine-Based Cycloadditions: Application to Pretargeted Live Cell Imaging.</a> Bioconjugate Chem. 19 (12), 2297-2299 (2008).</li>
<li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Chemistry+for+Pretargeted+Tumor+Imaging+in+Live+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.%2C+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">In Vivo Chemistry for Pretargeted Tumor Imaging in Live Mice.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 49 (19), 3375-3378 (2010).</li>
<li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+Pretargeted+Strategy+for+the+PET+Imaging+of+Colorectal+Carcinoma+via+the+Modulation+of+Radioligand+Pharmacokinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Optimization of a Pretargeted Strategy for the PET Imaging of Colorectal Carcinoma via the Modulation of Radioligand Pharmacokinetics.</a> Mol. Pharmaceutics. 12 (10), 3575-3587 (2015).</li>
<li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Reactive+trans-Cyclooctene+Tags+with+Improved+Stability+for+Diels-Alder+Chemistry+in+Living+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Highly Reactive trans-Cyclooctene Tags with Improved Stability for Diels-Alder Chemistry in Living Systems.</a> Bioconjugate Chem. 24 (7), 1210-1217 (2013).</li>
<li>Rossin, R., Robillard, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretargeted+Imaging+Using+Bioorthogonal+Chemistry+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Pretargeted Imaging Using Bioorthogonal Chemistry in Mice.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 21, 161-169 (2014).</li>
<li>Denk, C., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.201404277/abstract">Development of a 18F-Labeled Tetrazine with Favorable Pharmacokinetics for Bioorthogonal PET Imaging.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 53 (36), 9655-9659 (2014).</li>
<li>Herth, M. M., Andersen, V. L., Lehel, S., Madsen, J., Knudsen, G. M., Kristensen, J. L. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2013/CC/c3cc41027g#!divAbstract">Development of a 11C-labeled Tetrazine for Rapid Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation.</a> Chem. Commun. 49 (36), 3805-3807 (2013).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine-Trans-Cyclooctene+Ligation+for+the+Rapid+Construction+of+18F+Labeled+Probes%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation for the Rapid Construction of 18F Labeled Probes.</a> Chem. Commun. 46 (42), 8043(2010).</li>
<li>Nichols, B., Qin, Z., Yang, J., Vera, D. R., Devaraj, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga+Chelating+Bioorthogonal+Tetrazine+Polymers+for+the+Multistep+Labeling+of+Cancer+Biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">68Ga Chelating Bioorthogonal Tetrazine Polymers for the Multistep Labeling of Cancer Biomarkers.</a> Chem. Commun. 50 (40), 5215-5217 (2014).</li>
<li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pretargeted+PET+Imaging+Strategy+Based+on+Bioorthogonal+Diels-Alder+Click+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">A Pretargeted PET Imaging Strategy Based on Bioorthogonal Diels-Alder Click Chemistry.</a> J. Nucl. Med. 54 (8), 1389-1396 (2013).</li>
<li>García, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S096808961630061X">99mTc-Bioorthogonal Click Chemistry Reagent for In Vivo Pretargeted Imaging.</a> Bioorg. Med. Chem. 24 (6), 1209-1215 (2016).</li>
<li>Russell, R. G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bisphosphonates%3A+The+First+40+Years%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Bisphosphonates: The First 40 Years.</a> Bone. 49 (1), 2-19 (2011).</li>
<li>Yazdani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Bone-Seeking+Trans-Cyclooctene+for+Pretargeting+and+Bioorthogonal+Chemistry%3A+A+Proof+of+Concept+Study+Using+99mTc+and+177Lu-Labeled+Tetrazines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">A Bone-Seeking Trans-Cyclooctene for Pretargeting and Bioorthogonal Chemistry: A Proof of Concept Study Using 99mTc and 177Lu-Labeled Tetrazines.</a> J. Med. Chem. , (2016).</li>
<li>Alberto, R., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja980745t">A Novel Organometallic Aqua Complex of Technetium for the Labeling of Biomolecules: Synthesis of [99mTc(OH2)3(CO)3]+ from [99mTcO4]- in Aqueous Solution and its Reaction with a Bifunctional Ligand.</a> J. Am. Chem. Soc. 120 (31), 7987-7988 (1998).</li>
<li>Alberto, R., Ortner, K., Wheatley, N., Schibli, R., Schubiger, A. P. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja003932b">Synthesis and properties of boranocarbonate: A convenient in situ CO source for the aqueous preparation of [99mTc(OH2)3(CO)3.</a> J. Am. Chem. Soc. 123 (13), 3135-3136 (2001).</li>
<li>Lu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960894X12011584">Synthesis and SAR of 99mTc/Re-labeled Small Molecule Prostate Specific Membrane Antigen Inhibitors with Novel Polar Chelates.</a> Bioorg. Med. Chem. Lett. 23 (5), 1557-1563 (2013).</li>
<li>Maresca, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0020169312001764">Small Molecule Inhibitors of PSMA Incorporating Technetium-99m for Imaging Prostate Cancer: Effects of Chelate Design on Pharmacokinetics.</a> Inorg. Chim. Acta. 389, 168-175 (2012).</li>
<li>Bartholomä, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insight+into+the+Mode+of+Action+of+Re%28CO%293+Thymidine+Complexes%5BTitle%5D)+AND+%22ChemMedChem%22%5BJournal%5D)">Insight into the Mode of Action of Re(CO)3 Thymidine Complexes.</a> ChemMedChem. 5 (9), 1513-1529 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Farklı kutuplar tetrazin-bağlı üç dişli şelatların koleksiyonu hazırlandı ve in vivo olarak bir TCO türevi ile IEDDA reaksiyonunda kendi 99mTc komplekslerinin yardımcı değerlendirildi. Etkili ve tekrarlanabilir 99mTc etiketleme yöntemi ligand konsantrasyonu etiketleme adım (Bileşikler 2-5), t-butil gruplarının korumasının kaldırılması izledi 10 -3 M, beş tetrazin-çelatları için geliştirilmiştir. Ligandın konsantrasyonu yüksek radyokimyasal verim artırma...

99m Tc dünya çapında yılda 1, 2, 3 başına yapılan 50 milyon görüntüleme işlemleri ile teşhis nükleer tıpta kullanılan baskın radyoizotop kalır. Klinik olarak kullanılan 99m Tc ajanların çoğunluğu perfüzyon tipi radyofarmosötik. 99mTc, bir hedef yapıya ligasyon aracılığıyla belirli bir biyomarker bağlamak için yönlendirildiği aktif hedef bileşiklerin sınırlı vardır. Hedeflenen 99m Tc radyofarmasötik oluşturulması genellikle ilgi biyobelirteci bağlamak için hedef molekülün yeteneği 99m Tc-ligand komplekslerinin etkisiyle tarafından engellendiği ya da izotoplar yarı ömrü daha yüksek molekül ağırlıklı biyomoleküllerin kullanım için yeterince uzun değildir antikorlar gibi. görüntüleri Tiss olmayan hedefinden temizlemek biyomolekülün için sırayla edinilen önce ikincisi genellikle birkaç gün gerektirir<html> ues. Ön hedefleme bu zorlukların üstesinden gelmek için alternatif bir yaklaşım sunuyor. Bioorthogonal kimya ile birlikte ön hedefleme hem floresan ve radyo-görüntüleme 4, 5, 6, 7, 8 yeni moleküler görüntüleme probları geliştirmek için etkili bir yol olduğu görülmüştür. Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, 1,2,4,5-tetrazin (Tz) ve trans -cyclooctene (TCO) türevleri arasında ters elektron talebi Diels-Alder (IEDDA) Reaksiyon, 6, özellikle etkili olduğu gösterilmiştir. Bu bileşenleri ile IEDDA reaksiyonu ve yüksek seçicilik, in vivo ön hedefleme uygulamalar 9, 10 için idealdir (2 ≈ 6,000 M -1 s -1 k) PBS içinde hızlı kinetik sergileyebilirler. e_content &quot;&gt; en sık kullanılan yaklaşım TCO türetilen hedefleme vektör uygulanması ve yeterli bir gecikme süresinden sonraki kapsar, bir radyo-etiketli tetrazin uygulanır. Radyoaktif tetrazinler olmuştur 11 ° C, 18 F, 64 Cu, 89 Zr ve 111 In dayalı , 13, 12, 11, 14, 15 bildirilmiştir. Buna karşın, in vivo olarak proteine bozulmasını önlemek için ko-ligand kullanımını gerektiren HYNIC tipi ligand kullanılarak hazırlanmıştır Tz Tc-99m etiketli, tek yayın vardır 16. bir alternatif olarak, + çekirdek [3 99mTc (CO)], bir kararlı üç dişli kompleksleri oluşturan bağların bir ailesi kullanılarak tetrazinler etiketli burada 99mTc (I) &#39;in sentezi açıklanmıştır. Şekil 1: tetrazin ve trans -cyclooctene arasındaki bioorthogonal IEDDA reaksiyonu. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55188/55188fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Hazırlanan ligandlar ailesi polarite ve metal bağlanma bölgesi ve Tz (Şekil 2) arasında bağlayıcı grubun doğasına değişir üç dişli şelatları içerir. Amaç, yüksek hedef-to-hedef dışı oranları elde etmek amacıyla, Tc-tetrazin etkin bir şekilde lokalize ve TCO-etiketli in vivo siteleri ve bağlı değilken hızla net ile reaksiyona olabilir inşa eden 99m belirlemektir. Ligandları test etmek için, bir bisfosfonat bir TCO-türevi (TCO-BP) 17 kullanılmıştır. Bu TCO-BP aktif kemik metabolizmasının bölgelerine lokalize ile reaksiyona girerek daha önce göstermiştirin vivo 18 radyo-etiketli tetrazinler. Bu tek bir aşamada hazırlanabilir ve deneyler lokalizasyon esas olarak eklem (diz ve omuz) meydana gelir, normal farelerde gerçekleştirilebilir, çünkü yeni bir tetrazinler test etmek için uygun bir reaktiftir.

<table><tbody><tr><td>Argon gazı</td><td>Alphagaz</td><td>------</td><td></td></tr><tr><td>Na2CO3</td><td>EMD Millipore 106395</td><td></td><td>---</td></tr><tr><td>Na2B4O7&#183; 10H2O</td><td>Anachemia</td><td>S9640</td><td>---</td></tr><tr><td>KNaC4H4O6&#183; 4H2O</td><td>Anachemia</td><td></td> <td>217255---</td></tr><tr><td>Technelite 99mTc jeneratör</td><td>Lantheus medikal görüntüleme</td><td>---</td><td>99mTcO4-</td></tr><tr><td>0.9% kaynağı Saline</td><td>Lantheus tıbbi görüntüleme</td><td>---</td><td>Jeneratörü elüte etmek için</td></tr><tr><td>1 M HCl</td><td>Lab Chem</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>MeOH</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>ACN</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>HPLC sınıfı</td></tr><tr><td>Millipore H2O</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Barnstead Nanopure</td><td>---</td></tr><tr><td>DCM</td><td>Caledon</td><td>------</td><td></td></tr><tr><td>TFA</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td>pH 7.4 1x</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td>---</td></tr><tr><td>Tween80</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8047</td><td>---</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>CDMV</td><td>108737</td><td>Tedarikçi: Fresenius Kabi Hayvan Sağlığı</td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Suları</td><td>1525 İkili Pompa, 2998 Fotodiyot Dizi Dedektörü, E-SAT/IN, Bioscan Flowcount PMT dedektörü (ürün # 15590)</td><td>---</td></tr><tr>2-4 Phenomenex <td>bileşiklerinin analizi ve saflaştırılması için HPLC sütunu</td><td></td><td>00G-4435-E0</td><td>İkizler > 5 & mikro; m C18 110&nbsp; &Aring;, LC Kolonu 250 x 4,6 mm</td></tr><tr><td>HPLC kolonu 1 ve 5 Sularının analizi ve saflaştırılması için</td><td>&nbsp;</td><td>186003115</td><td>XBridge BEH C18 Sütunu, 130 &aring;, 5 &mikro; m, 4.6 mm x 100 mm</td></tr><tr><td>Mikrodalga Reaktörü&nbsp;</td><td>Biyotaj&nbsp;</td><td>Başlatıcı 8</td><td>---</td></tr><tr><td>Biotage V10 Evaporatör</td><td>Biotage&nbsp;</td><td>Seri # V1041</td><td></td></tr><tr><td>---Doz kalibratörü</td><td>Capintec, Inc.&nbsp;</td><td>CRC-25R---</td><td></td></tr><tr><td>Gama sayacı</td><td>Perkin Elmer</td><td>Wizard 1470 Otomatik Gama Sayacı</td><td>---</td></tr><tr><td>Hayvan odası baskülü&nbsp;</td><td>Mettler Toledo</td><td>XP105 Delta Serisi</td><td>---</td></tr><tr><td>Mikrodalga şişeleri&nbsp;</td><td>Biyotaj&nbsp;</td><td>355629</td><td>0.5-2 mL&nbsp;</td></tr></tbody></table>

hazırlama ve değerlendirilmesi<sup&gt; 99m</sup&gt; bioorthogonal kimya kullanarak Öncesi hedeflemek için üç dişli Şelatlar tc-etiketli

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Biyoortogonal kimya ile birleştirilmiş ön hedefleme, yeni radyofarmasötikler oluşturmanın etkili bir yolu olarak ortaya çıkmaktadır. Mevcut yöntemlerden, bir biyomoleküle bağlı radyoaktif işaretli tetrazinler ve trans-siklookten (TCO) arasındaki ters elektron talebi Diels-Alder (IEDDA) sikloilavesinin, spesifik biyolojik hedeflerin görüntülenmesinde oldukça etkili bir biyoortogonal yaklaşım olduğu kanıtlanmıştır. Teknesyum-99m'nin tanısal nükleer tıpta en yaygın kullanılan izotop olmaya devam etmesine rağmen, 99mTc etiketli tetrazinleri hazırlamak için yöntem kıtlığı vardır. Burada, tridentat-şelat-tetrazin türevleri ve bunların Tc (I) komplekslerinden oluşan bir ailenin hazırlanmasını rapor ediyoruz. Şimdiye kadar bilinmeyen bu bileşikler, mikrodalga destekli bir yöntem kullanılarak %31 ila %83 radyokimyasal verimle 99mTc ile radyoaktif olarak işaretlendi. Ürünler salin ve PBS'de stabildir ve in vitro TCO türevleri ile hızlı bir şekilde reaksiyona girer. İn vivo ön hedefleme yetenekleri, aktif kemik metabolizması veya yaralanma bölgelerine lokalize olan bir TCO-bifosfonat (TCO-BP) türevi kullanılarak gösterildi. Fare çalışmalarında, 99mTc-tetrazinler diz ve omuz eklemlerinde yüksek aktivite konsantrasyonları gösterdi, bu da TCO-BP yokluğunda deneyler yapıldığında gözlenmedi. Hedef olmayan organlardaki ve farmakokinetikteki genel alım, bağlayıcının doğasına ve şelatın polaritesine bağlı olarak büyük ölçüde değişmiştir.

Ligandlar ticari olarak temin edilebilen tetrazin 22, 23, ürünün bağlanması ve ardından basit bir indirgeyici aminasyon stratejisi (Şekil 2), üzerinden farklı bağlayıcılar ve kenetleyiciler kullanılarak sentezlenmiştir. Radyo-etiketlenmesi bütün bileşikler aynı yöntem kullanılarak gerçekleştirilir ve yüksek oranda çoğaltılabilir oldu. % 83 (1),% 45 (2),% 31: İşlem Tc-radyo-etiket...

Burada, ön hedefleme ve biyoortogonal kimya için tridentat 99mTc(I) şelat-tetrazin türevlerinin radyoetiketleme ve in vivo testi için bir protokol açıklıyoruz.

Hazırlama ve Değerlendirilmesi<sup&gt; 99m</sup&gt; Bioorthogonal Kimya Kullanarak Öncesi hedeflemek için üç dişli Şelatlar Tc-etiketli

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

Bu prosedürün genel amacı, hedefleme vektörleri olarak trans-siklookten modifiyeli biyomoleküller ile biyortogonal kimya kullanılarak, ön hedeflemeli görüntüleme için teknesyum-99m işaretli tetrazinler üretmektir. Bu yöntem, yeni radyofarmasötiklerin geliştirilmesi için önemli ve yeni bir platform sunmaktadır. Ön hedefleme yoluyla, burada açıklanan teknesyum kompleksleri çok çeşitli organların, dokuların ve biyobelirteçlerin görüntülenmesi için kullanılabilir.Bu teknik, tanısal tıpta en yaygın kullanılan tıbbi izotop olan technetium-99m ile radyoya işaretlenmiş tetrazinler üretmek için sağlam ve adım adım bir yöntem sunduğundan avantajlıdır. Bu teknik, küçük moleküller ve antikorlar dahil olmak üzere farklı hedefleme vektörleri ile kullanılabilir. Ayrıca, technetium'un renyumun beta yayan izotoplarıyla değiştirilmesi yoluyla radyoterapi için de kullanılabilir.Hayvan prosedürlerinin bir kısmını laboratuvarımızdaki biyoloji teknisyeni Nancy Janzen uygulamalı olarak gösterecektir. Radyo-etiketleme prosedürüne başlamak için, bir mikrodalga şişesinde sekiz mg potasyum boranokarbonat, 15 mg sodyum karbonat, 20 mg sodyum tetraborat dekahidrat ve 25 mg potasyum sodyum tartrat tetrahidratı

preparation-evaluation-99mtc-labeled-tridentate-chelates-for-pre

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Bu video, tümörleri tedavi etmek için immünokonjugatların ve ardından radyoligandların uygulandığı önceden hedeflenmiş radyoimmünoterapi veya PRIT tekniğini açıklar. Bu radyoimmünoterapi, sağlıklı dokulara radyasyon dozlarını azaltır ve antikor bazlı vektörlerle uyumlu olmayan çok düşük yarı ömre sahip radyonüklidleri kullanır.

Önceden Hedeflenmiş Radyoimmünoterapi: Terapötik Radyonüklidlerin Tümörlere Hedefe Yönelik Verilmesi İçin Bir Yöntem

Fare prostat kanseri modelinde tümör stroma içinde pıhtılaşmış plazma proteinlerine özel bir MRT-kontrast maddesi hedefleyen küçük peptid ile MR kanser moleküler görüntüleme göstermek için.

Küçük Moleküler CLT1 Peptide Hedefli Kontrast Agent ile Prostat Kanseri MR Moleküler Görüntüleme

Biz sıralı on-chip bioorthogonal Siklokatılma kimya ve antikor-antijen yakalama kullanarak, küçük moleküllerin hızlı, geri dönüşümlü immobilizasyon ve Yüzey Plazmon Rezonans (SPR) çalışmaları için işlevselleştirilen nanoparçacık meclisleri için bir yöntem mevcut.

Tersi Küçük Moleküller veya Biosensor Uygulamaları için Çok bileşenli Yapılar hareketsiz için microfluidic On-chip Yakalama sikloeklenme Tepki

Biyoortogonal ters elektron talebi Diels-Alder sikloilavesi, kanser için etkili ve modüler önceden hedeflenmiş bir PET görüntüleme stratejisi oluşturmak için kullanılmıştır. Bu protokolde, bu metodolojinin adımları, kolorektal kanser hedefli antikor huA33 ve 64Cu etiketli bir radyoligand kullanan bir model sistem bağlamında açıklanmaktadır.

Pretargeted PET Görüntüleme Bioorthogonal Ters Elektron Talep Diels-Alder Katılma Harnessing

Çok günlük radyoaktif yarılanma ömrü ve uygun bozunma özellikleri nedeniyle, pozitron yayan radyometal 89Zr, PET görüntüleme için antikor bazlı radyofarmasötiklerde kullanım için son derece uygundur. Bu protokolde, 89Zr işaretli antikorun biyokonjugasyonu, radyosentezi ve klinik öncesi uygulaması anlatılacaktır.

Bioconjugation ve radiosynthesis<sup&gt; 89</sup&gt;, Zr-DFO-etiketli antikorlar

125-etiketli azid sentezi ve bir bakır içermeyen tıklama reaksiyonu kullanılarak dibenzocyclooctyne (DBCO) -grubu ile konjüge edilmiş 13-mil ölçekli altın nanopartiküllerinin radyo-etiketlenmesi için ayrıntılı bir işlem tarif edilmektedir.

Bir Kullanarak Altın Nanopartiküller Verimli Radyoaktif bir Optimize Protokolü<sup&gt; 125</sup&gt; I-etiketli Azid Protez Grubu

Bir transgenik fare, T hücresi reseptörüne bağlanan bir 64Cu-modifiye edilmiş monoklonal antikorun hazırlanmasını takiben, T hücreleri, canlılık, fonksiyonellik, etiketleme stabilitesi ve apoptoz için analiz, in vivo olarak radyoaktif işaretli olan ve adoptif bir nefes yolu gecikmeli tipte aşırı duyarlılık ile farelere aktarıldı pozitron emisyon tomografisi / bilgisayarlı tomografi (PET / BT) ile invazif olmayan görüntüleme için reaksiyon.

tarafından Kemirgen Lenfosit Etiketleme<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-Antikor Reseptör için hedefleme<em&gt; In Vivo</em&gt; PET / CT ile hücre Trafik

Antikor-conjugates için (ACs) birleştiğinde Viral kaynaklı peptidler, moleküler yükleri artan tümör hücre birikmesi ile teslim etme potansiyeli nedeniyle ivme kazanıyor bir yaklaşım var. Peptid konjügasyon, AC ve hücre içi yük birikimi ve tümör hedefleme değerlendirmek için ortak yöntemleri kullanarak, bu protokolü anahtar ilk geliştirme aşamalarında araştırmacılar yardımcı olur.

Antikor conjugates ilk değerlendirilmesi ile Viral kaynaklı peptidler hücresel birikimi artan ve tümör hedefleme artırmak için değiştirilmiş

Sentez ve karakterizasyonu bir trans- cyclooctene (TCO) bu protokolünü açıklar-modifiye antikor ve 177Lu etiketli tetrazine (Tz) radioligand pretargeted radioimmunotherapy (PRIT) için. Buna ek olarak, bu iki yapıları kullanımı vivo içinde biodistribution ve boyuna terapi çalışmaları kolorektal kanser, bir fare modeli için ayrıntıları.

Pretargeted Radioimmunotherapy ters elektron talep Diels-Alder reaksiyonu üzerinde dayalı

Bu protokol için biz BAKLA, bir phenyoxadiazolyl metil sulfone tabanlı reaktif yükler site seçici bağlantı için biomolecules, özellikle antikorlar thiols sentezi anlatacağız. Buna ek olarak, biz malzemelerin ve BAKLA taşıyan bifonksiyonel şelatör ve onun konjugasyon bir modeli antikor için anlatacağız.

Sentez ve Site seçici olarak oluşturulması için Thiol reaktif reaktif Bioconjugation Immunoconjugates modifiye

Burada sunulan, kullanıma hazır bir radyoetiketleme synthonu, [89 Zr]Zr-p-izotiyosiyatobenzil-desferrioksamin ([89Zr]Zr-p-izotiyosiyatobenzil-desferrioksamin ([89 Zr]Zr-DBN) kullanılarak bir pozitron emisyon tomografisi (PET) radyoizotopu, 89Zr (t1/2 78.4 h) ile radyoetiket hücrelerine yönelik bir protokoldür. [89Zr] Zr-DBN ile radyo-etiketleme hücreleri, uygulamadan sonra 7 güne kadar PET ile vücutta uygulanan radyoaktif işaretli hücrelerin invaziv olmayan izlenmesine ve görüntülenmesine izin...

Hücre Kaçakçılığının Pozitron Emisyon Tomografisi Görüntülemesi: Bir Hücre Radyo-Etiketleme Yöntemi

Öğrenin, biyootogonal kimya kullanarak teknesyum-99m ile işaretlenmiş tetrazinlerin radyoetiketlenmesi ve önceden hedeflenmiş görüntüleme için hazırlanması. Bu yöntem, yeni radyofarmasötiklerin geliştirilmesine olanak tanır.

Hazırlama ve Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet