Name: İlkel ve kesin hematopoetik ataları insan Pluripotent kök hücrelerden farklılaşma yönetmen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-01T12:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 37 s
Description: Öğrenin, insan pluripotent kök hücrelerinden CD34+ hematopoetik öncü hücrelere farklılaşmayı yönlendirme yöntemini. WNT sinyalinin evre özgü manipülasyonu ile ilkel ve kesin hematopoiezi inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser Bakanlığı iç hastalıkları, Hematoloji bölümü, Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi tarafından desteklenmiştir. CD T32HL007088 Ulusal kalp, akciğer ve kan Enstitüsü tarafından desteklenmiştir. CMS bir Amerikan Derneği, Hematoloji bilim adamı Ödülü tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282 (5391), 1145-1147 (1998).</li>
<li>Murry, C. E., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+embryonic+stem+cells+to+clinically+relevant+populations%3A+lessons+from+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development.</a> Cell. 132 (4), 661-680 (2008).</li>
<li>Ditadi, A., Sturgeon, C. M., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+view+of+human+haematopoietic+development+from+the+Petri+dish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A view of human haematopoietic development from the Petri dish.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 18 (1), 56-67 (2017).</li>
<li>Chen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythroid%2Fmyeloid+progenitors+and+hematopoietic+stem+cells+originate+from+distinct+populations+of+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Erythroid/myeloid progenitors and hematopoietic stem cells originate from distinct populations of endothelial cells.</a> Cell Stem Cell. 9 (6), 541-552 (2011).</li>
<li>McGrath, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+Sources+of+Hematopoietic+Progenitors+Emerge+before+HSCs+and+Provide+Functional+Blood+Cells+in+the+Mammalian+Embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Distinct Sources of Hematopoietic Progenitors Emerge before HSCs and Provide Functional Blood Cells in the Mammalian Embryo.</a> Cell Rep. 11 (12), 1892-1904 (2015).</li>
<li>McGrath, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+definitive+erythroid+lineage+with+unique+regulation+of+the+beta-globin+locus+in+the+mammalian+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A transient definitive erythroid lineage with unique regulation of the beta-globin locus in the mammalian embryo.</a> Blood. 117 (17), 4600-4608 (2011).</li>
<li>Palis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+emergence+of+high+proliferative+potential+hematopoietic+precursors+during+murine+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal emergence of high proliferative potential hematopoietic precursors during murine embryogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (8), 4528-4533 (2001).</li>
<li>Palis, J., Robertson, S., Kennedy, M., Wall, C., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+erythroid+and+myeloid+progenitors+in+the+yolk+sac+and+embryo+proper+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Development of erythroid and myeloid progenitors in the yolk sac and embryo proper of the mouse.</a> Development. 126 (22), 5073-5084 (1999).</li>
<li>Boiers, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphomyeloid+contribution+of+an+immune-restricted+progenitor+emerging+prior+to+definitive+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Lymphomyeloid contribution of an immune-restricted progenitor emerging prior to definitive hematopoietic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 13 (5), 535-548 (2013).</li>
<li>Bertrand, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cells+derive+directly+from+aortic+endothelium+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cells derive directly from aortic endothelium during development.</a> Nature. 464 (7285), 108-111 (2010).</li>
<li>Hadland, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+requirement+for+Notch1+distinguishes+2+phases+of+definitive+hematopoiesis+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A requirement for Notch1 distinguishes 2 phases of definitive hematopoiesis during development.</a> Blood. 104 (10), 3097-3105 (2004).</li>
<li>Kumano, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+but+not+Notch2+is+essential+for+generating+hematopoietic+stem+cells+from+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Notch1 but not Notch2 is essential for generating hematopoietic stem cells from endothelial cells.</a> Immunity. 18 (5), 699-711 (2003).</li>
<li>Medvinsky, A., Rybtsov, S., Taoudi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+origin+of+the+adult+hematopoietic+system%3A+advances+and+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Embryonic origin of the adult hematopoietic system: advances and questions.</a> Development. 138 (6), 1017-1031 (2011).</li>
<li>Robert-Moreno, A., Espinosa, L., de la Pompa, J. L., Bigas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RBPjkappa-dependent+Notch+function+regulates+Gata2+and+is+essential+for+the+formation+of+intra-embryonic+hematopoietic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">RBPjkappa-dependent Notch function regulates Gata2 and is essential for the formation of intra-embryonic hematopoietic cells.</a> Development. 132 (5), 1117-1126 (2005).</li>
<li>Chadwick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+BMP-4+promote+hematopoietic+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Cytokines and BMP-4 promote hematopoietic differentiation of human embryonic stem cells.</a> Blood. 102 (3), 906-915 (2003).</li>
<li>Davis, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+a+GFP+reporter+gene+to+the+MIXL1+locus+of+human+embryonic+stem+cells+identifies+human+primitive+streak-like+cells+and+enables+isolation+of+primitive+hematopoietic+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Targeting a GFP reporter gene to the MIXL1 locus of human embryonic stem cells identifies human primitive streak-like cells and enables isolation of primitive hematopoietic precursors.</a> Blood. 111 (4), 1876-1884 (2008).</li>
<li>Kaufman, D. S., Hanson, E. T., Lewis, R. L., Auerbach, R., Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+colony-forming+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic colony-forming cells derived from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (19), 10716-10721 (2001).</li>
<li>Kennedy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+lymphocyte+potential+marks+the+emergence+of+definitive+hematopoietic+progenitors+in+human+pluripotent+stem+cell+differentiation+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">T lymphocyte potential marks the emergence of definitive hematopoietic progenitors in human pluripotent stem cell differentiation cultures.</a> Cell Rep. 2 (6), 1722-1735 (2012).</li>
<li>Ledran, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+hematopoietic+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+on+stromal+cells+derived+from+hematopoietic+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Efficient hematopoietic differentiation of human embryonic stem cells on stromal cells derived from hematopoietic niches.</a> Cell Stem Cell. 3 (1), 85-98 (2008).</li>
<li>Ng, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primitive+streak+gene+Mixl1+is+required+for+efficient+haematopoiesis+and+BMP4-induced+ventral+mesoderm+patterning+in+differentiating+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The primitive streak gene Mixl1 is required for efficient haematopoiesis and BMP4-induced ventral mesoderm patterning in differentiating ES cells.</a> Development. 132 (5), 873-884 (2005).</li>
<li>Pick, M., Azzola, L., Mossman, A., Stanley, E. G., Elefanty, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+in+serum-free+medium+reveals+distinct+roles+for+bone+morphogenetic+protein+4%2C+vascular+endothelial+growth+factor%2C+stem+cell+factor%2C+and+fibroblast+growth+factor+2+in+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human embryonic stem cells in serum-free medium reveals distinct roles for bone morphogenetic protein 4, vascular endothelial growth factor, stem cell factor, and fibroblast growth factor 2 in hematopoiesis.</a> Stem Cells. 25 (9), 2206-2214 (2007).</li>
<li>Vodyanik, M. A., Bork, J. A., Thomson, J. A., Slukvin, I. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+CD34%2B+cells%3A+efficient+production+in+the+coculture+with+OP9+stromal+cells+and+analysis+of+lymphohematopoietic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived CD34+ cells: efficient production in the coculture with OP9 stromal cells and analysis of lymphohematopoietic potential.</a> Blood. 105 (2), 617-626 (2005).</li>
<li>Vodyanik, M. A., Thomson, J. A., Slukvin, I. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukosialin+%28CD43%29+defines+hematopoietic+progenitors+in+human+embryonic+stem+cell+differentiation+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Leukosialin (CD43) defines hematopoietic progenitors in human embryonic stem cell differentiation cultures.</a> Blood. 108 (6), 2095-2105 (2006).</li>
<li>Yu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+enhances+the+generation+of+hematopoietic+progenitors+from+human+embryonic+stem+cell-derived+hemato-vascular+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid enhances the generation of hematopoietic progenitors from human embryonic stem cell-derived hemato-vascular precursors.</a> Blood. 116 (23), 4786-4794 (2010).</li>
<li>Zambidis, E. T., Peault, B., Park, T. S., Bunz, F., Civin, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+progresses+through+sequential+hematoendothelial%2C+primitive%2C+and+definitive+stages+resembling+human+yolk+sac+development%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic differentiation of human embryonic stem cells progresses through sequential hematoendothelial, primitive, and definitive stages resembling human yolk sac development.</a> Blood. 106 (3), 860-870 (2005).</li>
<li>Sturgeon, C. M., Ditadi, A., Awong, G., Kennedy, M., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+Signaling+Controls+the+Specification+of+Definitive+and+Primitive+Hematopoiesis+From+Human+Pluripotent+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Wnt Signaling Controls the Specification of Definitive and Primitive Hematopoiesis From Human Pluripotent Stem Cells.</a> Nat Biotechnol. 32 (6), 554-561 (2014).</li>
<li>Choi, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+hemogenic+endothelial+progenitor+and+its+direct+precursor+in+human+pluripotent+stem+cell+differentiation+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Identification of the hemogenic endothelial progenitor and its direct precursor in human pluripotent stem cell differentiation cultures.</a> Cell Rep. 2 (3), 553-567 (2012).</li>
<li>Ditadi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Definitive+Haemogenic+Endothelium+and+Arterial+Vascular+Endothelium+Represent+Distinct+Lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Human Definitive Haemogenic Endothelium and Arterial Vascular Endothelium Represent Distinct Lineages.</a> Nat Cell Biol. 17 (5), 580-591 (2015).</li>
<li>Conner, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+embryo+fibroblast+%28MEF%29+feeder+cell+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse embryo fibroblast (MEF) feeder cell preparation.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter 23, Unit 23.2 (2001).</li>
<li>La Motte-Mohs, R. N., Herer, E., Zuniga-Pflucker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+T-cell+development+from+human+cord+blood+hematopoietic+stem+cells+by+Delta-like+1+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Induction of T-cell development from human cord blood hematopoietic stem cells by Delta-like 1 in vitro.</a> Blood. 105 (4), 1431-1439 (2005).</li>
<li>Schmitt, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+T+cell+development+and+establishment+of+T+cell+competence+from+embryonic+stem+cells+differentiated+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Induction of T cell development and establishment of T cell competence from embryonic stem cells differentiated in vitro.</a> Nat Immunol. 5 (4), 410-417 (2004).</li>
<li>Holmes, R., Zuniga-Pflucker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+OP9-DL1+system%3A+generation+of+T-lymphocytes+from+embryonic+or+hematopoietic+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">The OP9-DL1 system: generation of T-lymphocytes from embryonic or hematopoietic stem cells in vitro.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2009 (2), (2009).</li>
<li>Polychronopoulos, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+for+the+synthesis+of+indirubins+as+potent+and+selective+inhibitors+of+glycogen+synthase+kinase-3+and+cyclin-dependent+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Structural basis for the synthesis of indirubins as potent and selective inhibitors of glycogen synthase kinase-3 and cyclin-dependent kinases.</a> J Med Chem. 47 (4), 935-946 (2004).</li>
<li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule-mediated+disruption+of+Wnt-dependent+signaling+in+tissue+regeneration+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer.</a> Nat Chem Biol. 5 (2), 100-107 (2009).</li>
<li>Sugimura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+and+progenitor+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem and progenitor cells from human pluripotent stem cells.</a> Nature. , (2017).</li>
<li>Ohgushi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathway+and+cell+state+responsible+for+dissociation-induced+apoptosis+in+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Molecular pathway and cell state responsible for dissociation-induced apoptosis in human pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (2), 225-239 (2010).</li>
<li>Peschle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic----Fetal+Hb+switch+in+humans%3A+studies+on+erythroid+bursts+generated+by+embryonic+progenitors+from+yolk+sac+and+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Embryonic----Fetal Hb switch in humans: studies on erythroid bursts generated by embryonic progenitors from yolk sac and liver.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 81 (8), 2416-2420 (1984).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Bu iletişim kuralı için ilkel veya kesin hematopoetik ataları farklılaşma hızlı, serum-Alerjik, stroma ücretsiz yöntemi açıklar. Mezodermal ilkel veya kesin hematopoetik ataları tayini güvenilir benzersiz olarak kanonik WNT sinyal, küçük molekül inhibitörleri patlatır bizim iletişim kuralı kullanılarak elde edilebilir. WNT inhibisyon PORCN inhibitörü IWP234 tarafından ilkel hematopoetik mesoderm26belirtir, ancak sahne alanı özgü WNT etkinleştirme GSK3β inhibitörü CHIR99021<...

İnsan pluripotent kök hücreler (hPSCs) insan embriyonik kök hücreleri (hESCs) ve İnsan İndüklenmiş pluripotent kök hücreler (hiPSCs) kapsayan olarak tanımlanır ve uygun büyüme koşullarda kendini yenileme geçiren sadece benzersiz yeteneği var, Ama aynı zamanda, tüm hücre türleri ayırt etmek için kapasite elde edilen üç germ katmanlardan: endoderm, mesoderm ve ektoderm1. Bu benzersiz yetenekleri nedeniyle hPSCs rejeneratif tıp, hastalık modelleme ve hücre tabanlı terapiler2büyük sözü tutun. Birden çok hücre tipleri başarıyla hPSCs farklılaşmış iken, bir önemli sorun sadece yetişkin gibi hPSC kaynaklı hematopoetik kök hücre (HSCs) ve kesin hematopoetik ataları vitro belirtimidir.
Bir büyük olasılıkla insan HSCs geliştirilmesi için hPSCs gelen insan embriyo3içinde birden çok hematopoetik program varlığı engeldir. Ortaya çıkıyor, "ilkel hematopoiesis," olarak adlandırdığı ilk programı içinde extraembryonic sarısı sac doku kaynaklı ve geçici üretiminin erythroblast ataları (EryP-CFC), makrofajlar ve megakaryocytes tarafından en iyi karakterizedir. Özellikle, bu bilgisayar programı does değil vermek artış HSCs için ne o does vermek artış T ve B lenfoid ataları için. Ancak, sarısı sac geçici erythro myeloid yaratıcı (EMP4,5,6,7,8) gibi sınırlı kesin hematopoetik ataları ortaya çıkmasına ve erythroid-eksik lenfoid astarlanmalıdır multipotent progenitör (LMPP9). Ancak, tam olarak multipotent veya yetişkin alıcılar HSC benzeri engraftment yeteneğine ne EMP'leri ne de LMPPs. Buna ek olarak, daha sonra gelişmede, embriyonun uygun, HSC dahil olmak üzere tüm yetişkin hematopoetik soy için sebebiyet veren aort-erbezi-mesonephros bölgesinde klasik tanımlamak "kesin" hematopoetik bilgisayar programı belirtilir. Endotel-için-hematopoetik geçişe hemogenic endotel (o)3,10,11 üzerinden bir çentik bağımlı moda bu içi embriyonik kesin hematopoetik hücreler tayini oluşur ,12,13,14. Sulandırma kapasitesi dışında EMP ve (gözden başvuruları3' te,13 LMPP bu kesin hematopoetik ataları ayırmak için multilineage potansiyel ve çentik-bağımlılık bu hücre kullanılabilir ).
HPSCs ilkel ve kesin hematopoetik belirtiminden yöneten mechanism(s) anlama olası hPSC hatları çeşitli genelinde kesin hematopoetik ataları tekrarlanabilir üretimi için önemlidir. Yakın zamana kadar multipotent ilkel ve kesin hematopoetik ataları ayrı hPSC farklılaşma protokolleri15,16,17,18yoktu, 19,20,21,22,23,24,25. Pek çok yaklaşım fetal sığır serum (FBS) ve/veya stromal ortak kültür ilk kullanarak ilkel kesin hematopoetik potansiyel15,ve16karışımları ile hPSC farklılaşma potansiyeli hematopoetik özetlenen, 17,19,22,23,25. Ayrıca, birçok serum-Alerjik hematopoetik protokolleri mesoderm hematopoetik potansiyel18,20,21, liman hPSCs üzerinden tayini için sinyal gereksinimleri tarif var 24. ancak, bu yöntemleri hala her iki program heterojen karışımları için doğuran gibi kullanımları klinik uygulamaları ve anlayış gelişimsel mekanizmaları sınırlı olabilir.
Biz son zamanlarda AKTİVİN/NODAL ve hPSC elde edilen mesoderm18,26 hematopoetik belirtiminde ilkel ve kesin WNT sinyal için sahne özel sinyal gereksinimleri ana hatlarıyla bu çalışmalar, yerleşik . İkincisi özellikle benzersiz sahne özgü WNT sinyal işleme kullanımı sadece ilkel ya da sadece kesin hematopoetik ataları26belirtimi için sağlar. Sırasında mesoderm belirtimi, kurallı WNT sinyal PORCN inhibitörü IWP2 ile inhibisyon CD43 belirtiminde sonuç+ EryP-CFC ve hiçbir tespit lenfoid potansiyeli ile Miyeloid ataları. Keskin aksine, kurallı WNT GSK3β inhibitörü ile CHIR99021, farklılaşma aynı aşaması sırasında sinyal stimülasyon tespit CD43 tam yokluğunda sonuçlandı.+ aynı anda lider ise EryP-CFC, için CD34 tayini+CD43− o. Bu nüfus sahip Miyeloid, HBG-erythroid ve T-lenfoid potansiyeli ifade etmek. Daha sonraki analizler bu CD7327,28 ve CD18428ve hematopoetik potansiyel ifadesi eksik olarak ÇENTİK bağımlı28olduğunu tespit etti. Ayrıca, tek hücreli klonal analizleri bu kesin hematopoetik soy multipotent tek hücreleri28elde edilebilir gösterdi. Birlikte ele alındığında, bu çalışmalar sahne özgü WNT sinyal işleme saf ilkel hematopoetik ataları veya multipotent ÇENTİK bağımlı kesin hematopoetik ataları belirtebilirsiniz gösteriyor.
Burada, biz sadece ilkel veya kesin hematopoetik ataları, kurallı WNT Mezodermal desenlendirme ve onların aşağı akım hematopoetik soyu sırasında deneyleri sinyal manipülasyonu yoluyla verir bizim farklılaşma strateji anahat. Bu ilkel veya kesin hematopoetik ataları hPSCs rejeneratif tıp uygulamaları için gelen üretiminde ilgilenen araştırmacılar için çok değerli bir protokoldür.

<table><tbody><tr><td>Iscove'un Modifiye Dulbecco'nun Orta (IMD)</td> <td>Corning</td><td>10-016</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS), ES hücre dereceli</td><td>Gemini Biyoürünler</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> <td>Hiplon</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamin, 200 mM çözelti</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin</td><td>Yaşam Teknolojiler</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>%0.25 Tripsin-EDTA</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>%0.05 Tripsin-EDTA</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Jelatin, domuz derisi, Tip A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890</td><td></td></tr><tr><td>Alpha-MEM</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>12000-022</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Corning</td><td>10-092-CV</td><td></td></tr><tr><td>Nakavt serum replasmanı</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10828028</td><td>"KOSR"</td></tr><tr><td>Esansiyel olmayan amino asitler (NEAA)</td><td>Life Technologies</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>b-merkaptoetanol, 55 mM çözelti</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Fraksiyon V, Sığır Serumu Albümin</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>BP1605</td><td></td></tr><tr><td>Ham'ın F12</td><td>Corning</td><td>10-080</td><td></td></tr><tr><td>N2 takviyesi</td><td>Life Technologies</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>B27 takviyesi, A vitamini yok</td><td>Life Technologies</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Stempro-34 (SP34)</td><td>Life Technologies</td><td>10639011</td><td>"SP34"</td></tr><tr><td>Büyüme faktörü azaltılmış Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td> <td>"MAT "</td></tr><tr><td>L-emici asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4403</td><td></td></tr><tr><td>İnsan serum transferrini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10652202001</td><td></td></tr><tr><td>Monotiyogliserol (MTG)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>M6145</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz B</td><td>Roche</td><td>11088831001</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz II</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>17101015</td><td></td></tr><tr><td>DNaseI</td><td>Calbiochem</td><td>260913</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Serum (PBS)</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R& D Sistemleri</td><td>233-FB</td><td></td></tr><tr><td>BMP4</td><td>Ar-Ge D Systems</td><td>314-BP</td><td></td></tr><tr><td>Activin A Ar-Ge</td><td> D Systems</td><td>338-AC</td><td></td></tr><tr><td>VEGF</td><td>Ar-Ge D Systems</td><td>293-VE</td><td></td></tr><tr><td>SCF</td><td>Ar-Ge D Sistemleri</td><td>255-SC</td><td></td></tr><tr><td>IGF-1</td><td>Ar-Ge D Sistemleri</td><td>291-G1</td><td></td></tr><tr><td>IL-3</td><td>Ar-Ge D Sistemleri</td><td>203-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-6</td><td>Ar-Ge D Sistemleri</td><td>206-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-7</td><td>Ar-Ge D Sistemleri</td><td>207-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-11</td><td>Ar-Ge D Sistemleri</td><td>218-1L</td><td></td></tr><tr><td>TPO</td><td>Ar-Ge D Systems</td><td>288-TP</td><td></td></tr><tr><td>EPO</td><td>Peprotech</td><td>100-64</td><td></td></tr><tr><td>Flt-3 ligand (FLT3-L)</td><td>R& D Sistemleri</td><td>308-FK</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Tocris</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>IWP2</td><td>Tocris</td><td>3533</td><td></td></tr><tr><td>Anjiyotensin II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9525</td><td></td></tr><tr><td>Losartan Potasyum</td><td>Tocris</td><td>3798</td><td></td></tr><tr><td>CD4 PerCP Cy5.5 Klon RPA-T4</td><td>BD Biosciences</td><td>560650</td><td>Seyreltme 1:100; T hücresi tahlili,</td></tr><tr><td>CD8, PE Klonu, RPA-T8</td>, <td>BD Biosciences,</td><td>561950</td>, <td>Seyreltme, 1:10; T hücresi tahlili,</td></tr><tr><td>CD34 APC Klonu 8G12</td>, <td>BD Biosciences</td><td>340441</td><td>Seyreltme 1:100; EHT testi</td></tr><tr><td>CD34 PE-Cy7 Klonu 8G12</td><td>BD Biosciences</td><td>348801</td><td>Seyreltme 1:100; Heojenik endotel</td></tr><tr><td>CD43 FITC Klonu 1G10</td><td>BD Biosciences</td><td>555475</td><td>Seyreltme 1:10; Heojenik endotel</td></tr><tr><td>CD45 APC-Cy7 Klon 2D1</td><td>BD Biosciences</td><td>557833</td><td>Seyreltme 1:50; T hücresi deneyi</td></tr>, <tr><td>CD45, eFluor450, Klon, 2D1</td>, <td>BD, Biosciences</td><td>642284</td>, <td>Seyreltme 1:50; EHT tahlili</td></tr><tr><td>CD56 APC Klonu B159</td><td>BD Biosciences</td><td>555518</td><td>Seyreltme 1:20; T hücresi tahlili,</td></tr><tr><td>CD73 PE Klon AD2</td>, <td>BD Biosciences</td><td>550257</td><td>Seyreltme 1:50; Heojenik endotel</td></tr><tr><td>CD184 APC Klonu 12G5</td><td>BD Biosciences</td><td>555976</td><td>Seyreltme 1:50; Heojenik endotel</td></tr><tr><td>4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td> <td>BD Biosciences</td><td>564907</td><td>Seyreltme 1: 10.000; T hücresi deneyi</td></tr><tr><td>OP9 DL4 hücreleri</td><td></td><td></td><td>Holmes, R. ve J.C. Zuniga-Pflucker. Soğuk Bahar Harb Projesi, 2009. 2009(2): s. pdb prot5156</td></tr><tr><td>MethoCult H4034</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>4034</td> <td>"MeC"</td></tr> <tr><td>Milli-Q su arıtma sistemi</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%5 CO2 inkübatör</td><td></td><td></td><td>37 C'de ayarlayın</td></tr><tr><td>Çoklu gaz inkübatörü</td><td></td><td></td><td>37 C'de ayarlayın, %5 CO2, %5 O2</td></tr><tr><td>6 kuyulu doku kültürü plakası</td><td>Corning</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>24 kuyulu doku kültürü plakası</td><td>Corning</td><td>353226</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyulu düşük yapışmalı doku kültürü plakası</td><td>Corning</td><td>3471</td><td></td></tr><tr><td>24 kuyulu düşük aderanslı doku kültürü plakası</td><td>Corning</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>35 mm doku kültürü kapları</td><td>Corning</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>Künt uçlu iğne, 16 gauge</td><td>Corning</td><td>305198</td><td></td></tr><tr><td>3 cc şırınga</td><td>Corning</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>5 mL polipropilen test tüpü</td><td>Corning</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>5 mL polistiren test tüpü</td><td>Corning</td><td>352058</td> 15 mL polipropilen konik Corning 430791 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mL polipropilen konik</td><td>Corning</td><td>430921</td><td></td></tr><tr><td>2 mL serolojik pipet</td><td>Corning</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>5 mL serolojik pipet</td><td>Corning</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>10 mL serolojik pipet</td><td>Corning</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>25 mL serolojik pipet</td><td>Corning</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>Hücre sıyırıcılar</td><td>Corning</td><td>353085</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL kriyoviyaller</td><td>Corning</td><td>430488</td><td></td></tr><tr><td>40 & mikro ile 5 mL test tüpü; M hücreli süzgeç</td><td>Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>40 & M hücre süzgeci</td><td>Corning</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü santrifüjü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biyogüvenlik başlığı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACS AriaII veya eşdeğeri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRii veya eşdeğeri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo yazılımı</td><td>TreeStar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu</td><td></td><td></td><td>37 C'de ayarlayın</td></tr><tr><td>0.22 ve mikro; M filtrasyon sistemi</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Otoklav</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 C buzdolabı-20</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>C Dondurucu-80</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>C Dondurucu</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

İlkel ve kesin hematopoetik ataları insan pluripotent kök hücrelerden farklılaşma yönetmen

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

Rejeneratif tıp için önemli amaçlarından biri üretimi ve hematopoetik kök hücre (HSCs) insan pluripotent kök hücrelerden (hPSCs) elde edilen bakımı sağlamaktır. Yakın zamana kadar hPSCs HSCs ayırt etmek için çabaları ağırlıklı olarak HSC potansiyel eksikliği ve bunun yerine sarısı sac hematopoiesis benzer hematopoetik ataları üretilip. Elde edilen bu hematopoetik ataları yarar vitro hastalığı modelleme çeşitli yetişkin hematopoetik bozukluklar, özellikle de lenfoid soy için sınırlı olabilir. Ancak, son zamanlarda erythro-myelo-lenfoid multilineage kesin hematopoetik ataları burada anahat bir sahne özel yönlendirilmiş ayırt etme protokolünü kullanarak hPSCs oluşturmak için yöntemleri anlatmıştık. Enzimatik ayrılma hPSCs membran matris kaplı plasticware Tarih, embryoid organları (EBs) oluşur. EBs farklı mesoderm için kesin hematopoetik programa GSK3β inhibitörü, CHIR99021 daha sonra belirtilen rekombinant BMP4 tarafından. Alternatif olarak, ilkel hematopoiesis PORCN inhibitörü, IWP2 belirtilir. Hematopoiesis daha fazla rekombinant VEGF eklenmesi ve destekleyici hematopoetik sitokinler sürülür. Bu yöntem kullanılarak oluşturulan elde edilen hematopoetik ataları hastalık ve gelişimsel modelleme, içinde vitroiçin kullanılmak üzere potansiyeline sahiptir.

İlkel ve kesin hematopoetik ataları hPSCs üzerinden indüksiyon resmeden bir şematik Resim 1' de gösterilmiştir. Kurallı WNT gün 2-3 farklılaşma, hematopoetik progenitör belirtimine göre takip sırasında ortaya çıkan sinyal tarafından biçimlenme mesoderm.
Temsilcisi akış sitometrik çözümlemesi ve methylcellulose deneyleri hematopoetik farklılaşma hPSC kaynaklı kültürlerin oluşturan colony <strong clas...

Burada, insan pluripotent kök hücre (hPSC) kültür hPSCs CD34 ayırt etmek için kullanılan iletişim kuralları, mevcut+ hematopoetik ataları. Bu yöntem kurallı WNT ya kesin veya ilkel hematopoetik program sadece hücrelere belirtmek sinyal manipülasyon sahne özgü kullanır.

İlkel ve kesin hematopoetik ataları insan Pluripotent kök hücrelerden farklılaşma yönetmen

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Bu yöntemin genel amacı, evreye özgü bir sinyal manipülasyonu yaklaşımı kullanarak İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinin Diferansiyasyonunu Primitif veya Definitif Hematopoetik Program'a yönlendirmektir. Bu yöntem, insan definitif hematopoiezinin sinyal ve transkripsiyonel regülatörlerinin anlaşılması gibi alandaki birçok temel soruyu yanıtlayabilir. Bu tekniğin temel avantajı, evreye özgü manipülasyonu anlık olarak uygulamasıdır.Bu prosedürü, laboratuvarımdaki doktora sonrası araştırmacı Carissa Dege uygulamaktadır. Protokole başlamak için, daha önce hazırlanmış, fare embriyonik fibroblastları (MEF'ler) üzerinde %70 ila %80 konfluens düzeyine ulaşana kadar %5 CO2 içeren 37 °C'lik bir inkübatörde büyütülmüş İnsan Pluripotent Kök Hücre Hatlarını (HPSC'ler) temin edin. HPSC medyasını aspire edin ve her bir kuyucuğa bir dakika boyunca bekletilmek üzere 37 °C'de 1 mL %0,25 Trypsin EDTA ekleyin.Bir dakika sonra, Trypsin'i aspire edin ve her kuyucuğa bir mililitre stok besiyeri ekleyin. Bir hücre kazıyıcı kullanarak hücreleri plakadan kazıyın. Ardından, her kuyucuğa bir mililitre yıkama tamponu ekleyin.İki mililitrelik bir serolojik pipet yardımıyla, büyük kümeleri dağıtmak için hücreleri ü

directed-differentiation-primitive-definitive-hematopoietic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerden T lenfositlerin Nesil T hücre tabanlı immünoterapi için embriyonik kök hücreler kullanarak alternatif bir yaklaşım verir. Yöntem kullanılarak ya da...

T Lenfositler doğru İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Yönetmen Farklılaşma

Biz, gelişimsel biyolojiden elde edilen bilgilere ve yayınlanmış araştırmalara dayanarak, hem insan embriyonik kök hücrelerinden hem de insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden A9 orta beyin dopaminerjik nöronlarını verimli bir şekilde üretmek için optimize edilmiş bir protokol geliştirdik, bu da Parkinson hastalığı için hastalık modellemesi ve hücre replasman tedavisi için yararlı olacaktır.

İnsan Pluripotent Kök Hücreleri dopaminerjik Nöron Farklılaşma Yönetmen

Bu protokol, transkripsiyon faktörlerinin zorlanmış ekspresyonu yoluyla insan pluripotent kök hücrelerinden hemojenik endotel ve multipotansiyel hematopoietik progenitörlerin verimli indüksiyonunu açıklar.

İnsan Pluripotent Kök Hücreleri Transkripsiyon Faktörleri aşırı ifadesinin doğrudan Hemogenic Endotelyumunun uyarılması ve Kan

Burada açıklanan protokol, minimal bir transkripsiyon faktörü setinin aşırı ekspresyonu yoluyla fare embriyonik fibroblastlarında bir hemojenik programın indüksiyonunu detaylandırır. Bu teknoloji, hematopoez, hematolojik hastalık ve hematopoietik kök hücre nakli ile ilgili gelecekteki çalışmalar için platformlar sağlamak üzere insan sistemine çevrilebilir.

Transkripsiyon Faktörleri ile fare embriyonik fibroblastlar yeniden programlama bir Hemogenic Programı tetikleyebilecek

Burada, bir besleyici ve Xeno-ücretsiz durumda insan pluripotent kök hücrelerinden hemogenik endotelyum tam olarak oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem hastalık modelleme ve terapötik bileşikler için tarama geniş uygulamalara sahip olacaktır.

Bir besleyici içinde ınsan pluripotent kök hücrelerinden hemogenik endotelyum farklılaşma-ve Xeno-ücretsiz tanımlı koşul

Burada, dört miyeloid soya immünotipik karakterizasyon ve sitokin kaynaklı cd34+ hematopoetik kök ve ataat hücrelerinin farklılaşması için bir protokol sıyoruz. Bu protokolün uygulamaları cd34+ hücrelerin miyeloid farklılaşması üzerinde miyeloid hastalık mutasyonları veya küçük moleküllerin etkisi üzerine araştırmalar içerir.

İnsan Kordon Kanı Kaynaklı CD34 Pan-miyeloid Farklılaşması+ Hematopoetik Kök ve Progenitor Hücreleri

Bu protokol, insan dermal fibroblastlarında hemojenik bir programın hematopoetik kök ve döl hücreleri üretmek için gata2, GFI1B ve FOS transkripsiyon faktörlerinin zorunlu ekspresyonu ile indüksiyonuna neden olduğunu göstermektedir.

Transkripsiyon Faktörlerinin Zorunlu İfadesi Ile İnsan Fibroblastlarının Hemojenik Yeniden Programlanması

Bu makalenin amacı, insan hepatik progenitörlerin pluripotent kök hücrelerden farklılaşmasına neden olmak için standartlaştırılmış bir yaklaşım sağlamaktır. Bu prosedürün kullanıma hazır ortam formülasyonları ile geliştirilmesi, kullanıcıya biyomedikal araştırma ve çeviri için insan karaciğer hücreleri üretmek için bir facile sistemi sunmaktadır.

Tanımlanmış Bir Farklılaşma Sistemi Kullanarak Pluripotent Kök Hücrelerden Hepatik Progenitör Spesifikasyonu

Burada hemojenik endotel hücrelerinin insan pluripotent kök hücrelerinden yaklaşık 1 hafta içinde yönlendirilmiş farklılaşması için basit bir protokol sunulmaktadır.

Hemojenik Endotel Hücrelerinin İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Yönlendirilmiş Farklılaşması

Bu protokol, insan osteoklastlarının indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) ayırt edilmesini sunar ve osteoklastların ve osteoklast öncüllerinin karakterizasyonu için yöntemleri açıklar.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Osteoklastların Farklılaşması ve Karakterizasyonu

Öğrenin, insan pluripotent kök hücrelerinden CD34+ hematopoetik öncü hücrelere farklılaşmayı yönlendirme yöntemini. WNT sinyalinin evre özgü manipülasyonu ile ilkel ve kesin hematopoiezi inceleyin.

İlkel ve kesin hematopoetik ataları insan Pluripotent kök hücrelerden farklılaşma yönetmen

Daha fazla video keşfet