Rapid Deletion Production in Fungi via <em>Agrobacterium</em> Mediated Transformation of OSCAR Deletion Constructs

Scott E. Gold; Zahi Paz; Mar&#237;a D. Garc&#237;a-Pedrajas; Anthony E. Glenn

doi:10.3791/55239

Yoluyla mantarlarda hızlı Silme Üretimi Agrobacterium OSCAR Silme Yapılarının Aracı Dönü...

JoVE Journal
Genetics

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Genetics

Rapid Deletion Production in Fungi via Agrobacterium Mediated Transformation of OSCAR Deletion Constructs

Yoluyla mantarlarda hızlı Silme Üretimi Agrobacterium OSCAR Silme Yapılarının Aracı Dönüştürülmesi

Full Text

10,505 Views

11:24 min

June 12, 2017

DOI: 10.3791/55239-v

Scott E. Gold¹, Zahi Paz², María D. García-Pedrajas³, Anthony E. Glenn¹

¹Toxicology and Mycotoxin Research Unit,NPRC, USDA-ARS, ²Hazera Seeds LTD, Brurim, ³Instituto de Hortofruticultura Subtropical y Mediterránea “La Mayora” - Universidad de Málaga - Consejo Superior de Investigaciones Científicas (IHSM-UMA-CSIC), Estación Experimental “La Mayora”

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Homolog rekombinasyon yoluyla üretilen gen silme mutantları, gen fonksiyonu çalışmaları için altın standarttır. Silme yapılarının hızlı oluşturulması için OSCAR (Agrobacterium-Rekombinasyona hazır plasmidler'in Bir Adımlı Yapısı) yöntemi anlatılmıştır. Agrobacterium aracılı fungal transformasyon izlenir. Son olarak, fungal transformantlarda gen çıkarılmalarının PCR tabanlı onay yöntemi.

Bu prosedürün genel amacı, mantarlarda kesin gen delesyon mutantları üretmektir. Bu yöntem, mantarların fonksiyonel genetiğinde, belirli bir ilgilenilen genin bir mantarın hastalığa neden olma yeteneğinde ne gibi bir rol oynadığı gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, hassas delesyonlar oluşturmak için plazmitlerin çok hızlı bir şekilde oluşturulmasına izin vermesidir.

Bu yöntem sayesinde, etkili bir homolog rekombinasyon sistemine sahip herhangi bir mantar hakkında bilgi sağlayabilir. Potansiyel olarak protist veya vermilyon hücreleri gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Bu yöntem için ilk olarak, Oscar ile ilgili olan, ancak agrobakteri yerine protoplast dönüşümü için kullanılan DelsGate sistemini geliştirdiğimizde aklımıza geldi.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos