Name: tarafından Kemirgen Lenfosit Etiketleme 64 Cu-Antikor Reseptör için hedefleme In Vivo PET / CT ile hücre Trafik (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Öğrenin, fare lenfositlerini bakır modifiyeli radyoaktif monoklonal antikorla etiketleyerek PET/CT ile canlı hücre göçünü 48 saate kadar yüksek kontrastla izleme yöntemini. Bu teknik enflamasyon ve kanser modellerinde bağışıklık hücrelerinin dağılımını takip eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar deneyleri ve veri analizi sırasında destek için Dr. Julia Mannheim Walter Ehrlichmann Ramona Stumm, Funda Cay Daniel Bukala, Maren Harant yanı sıra Natalie Altmeyer teşekkür ederim. Bu çalışma Werner Siemens-Vakfı, SFB685 aracılığıyla DFG (proje B6) ve fal (2309-0-0) tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Cerri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracarotid+Infusion+of+Mesenchymal+Stem+Cells+in+an+Animal+Model+of+Parkinson%27s+Disease%2C+Focusing+on+Cell+Distribution+and+Neuroprotective+and+Behavioral+Effects%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Intracarotid Infusion of Mesenchymal Stem Cells in an Animal Model of Parkinson's Disease, Focusing on Cell Distribution and Neuroprotective and Behavioral Effects.</a> Stem Cells Trans Med. 4 (9), 1073-1085 (2015).</li>
<li>Hasenbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+glioma+tropism+of+bone+marrow-derived+progenitor+cells+by+2-photon+laser+scanning+microscopy+and+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Monitoring the glioma tropism of bone marrow-derived progenitor cells by 2-photon laser scanning microscopy and positron emission tomography.</a> Neuro Oncol. 14 (4), 471-481 (2012).</li>
<li>Sood, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+18F-FDG-Labeled+Autologous+Bone+Marrow+%E2%80%93+Derived+Stem+Cells+in+Patients+With+Type+2+Diabetes+Mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of 18F-FDG-Labeled Autologous Bone Marrow – Derived Stem Cells in Patients With Type 2 Diabetes Mellitus.</a> Clin Nucl Med. 40 (9), 697-700 (2015).</li>
<li>Perez-Diez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4+cells+can+be+more+efficient+at+tumor+rejection+than+CD8+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD4 cells can be more efficient at tumor rejection than CD8 cells.</a> Blood. 109 (12), 5346-5354 (2007).</li>
<li>Muranski, P., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+immunotherapy+of+cancer+using+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adoptive immunotherapy of cancer using CD4+ T cells.</a> Curr. Opin. Immunol. 21 (2), 200-208 (2009).</li>
<li>Braumuller, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-helper-1-cell+cytokines+drive+cancer+into+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-helper-1-cell cytokines drive cancer into senescence.</a> Nature. 494 (7437), 361-365 (2013).</li>
<li>Kochenderfer, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+B-lineage+cells+and+regression+of+lymphoma+in+a+patient+treated+with+autologous+T+cells+genetically+engineered+to+recognize+CD19%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Eradication of B-lineage cells and regression of lymphoma in a patient treated with autologous T cells genetically engineered to recognize CD19.</a> Blood. 116 (20), 4099-4102 (2010).</li>
<li>Cherry, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamentals+of+Positron+Emission+Tomography+and+Applications+in+Preclinical+Drug+Development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Fundamentals of Positron Emission Tomography and Applications in Preclinical Drug Development.</a> J. Clin. Pharmacol. 41 (5), 482-491 (2001).</li>
<li>Tavaré, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Effective+Immuno-PET+Imaging+Method+to+Monitor+CD8-Dependent+Responses+to+Immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An Effective Immuno-PET Imaging Method to Monitor CD8-Dependent Responses to Immunotherapy.</a> Cancer Res. 76 (1), 73-82 (2016).</li>
<li>Tavaré, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+antibody+fragments+for+immuno-PET+imaging+of+endogenous+CD8%2B+T+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Engineered antibody fragments for immuno-PET imaging of endogenous CD8+ T cells in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (3), 1108-1113 (2014).</li>
<li>Dobrenkov, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+Efficacy+of+Adoptively+Transferred+Prostate+Cancer-Targeted+Human+T+Lymphocytes+with+PET+and+Bioluminescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Monitoring the Efficacy of Adoptively Transferred Prostate Cancer-Targeted Human T Lymphocytes with PET and Bioluminescence Imaging.</a> J Nucl Med. 49 (7), 1162-1170 (2008).</li>
<li>Rini, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+with+FDG-labeled+Leukocytes+versus+Scintigraphy+with+111In-Oxine-labeled+Leukocytes+for+Detection+of+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">PET with FDG-labeled Leukocytes versus Scintigraphy with 111In-Oxine-labeled Leukocytes for Detection of Infection.</a> Radiology. 238 (3), 978-987 (2006).</li>
<li>Ritchie, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tracking+of+macrophage+activated+killer+cells+to+sites+of+metastatic+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol.+Immunother%22%5BJournal%5D)">In vivo tracking of macrophage activated killer cells to sites of metastatic ovarian carcinoma.</a> Cancer Immunol. Immunother. 56 (2), 155-163 (2006).</li>
<li>Adonai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+cell+labeling+with+64Cu-pyruvaldehyde-bis%28N4-methylthiosemicarbazone%29+for+imaging+cell+trafficking+in+mice+with+positron-emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Ex vivo cell labeling with 64Cu-pyruvaldehyde-bis(N4-methylthiosemicarbazone) for imaging cell trafficking in mice with positron-emission tomography.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (5), 3030-3035 (2002).</li>
<li>Huang, J., Lee, C. C. I., Sutcliffe, J. L., Cherry, S. R., Tarantal, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiolabeling+Rhesus+Monkey+CD34%2B+Hematopoietic+and+Mesenchymal+Stem+Cells+with+64Cu-Pyruvaldehyde-Bis%28N4-Methylthiosemicarbazone%29+for+MicroPET+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Radiolabeling Rhesus Monkey CD34+ Hematopoietic and Mesenchymal Stem Cells with 64Cu-Pyruvaldehyde-Bis(N4-Methylthiosemicarbazone) for MicroPET Imaging.</a> Mol. Imaging. 7 (1), (2008).</li>
<li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Tracking+of+Th1+Cells+by+PET+Reveals+Quantitative+and+Temporal+Distribution+and+Specific+Homing+in+Lymphatic+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In Vivo Tracking of Th1 Cells by PET Reveals Quantitative and Temporal Distribution and Specific Homing in Lymphatic Tissue.</a> J Nucl Med. 55 (2), 301-307 (2014).</li>
<li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((64Cu+antibody-targeting+of+the+T-cell+receptor+and+subsequent+internalization+enables+in+vivo+tracking+of+lymphocytes+by+PET%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">64Cu antibody-targeting of the T-cell receptor and subsequent internalization enables in vivo tracking of lymphocytes by PET.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 112 (4), 1161-1166 (2015).</li>
<li>McCarthy, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+production+of+high+specific+activity+64Cu+using+a+biomedical+cyclotron%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient production of high specific activity 64Cu using a biomedical cyclotron.</a> Nucl. Med. Biol. 24 (1), 35-43 (1997).</li>
<li>Kalkhof, S., Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chances+and+pitfalls+of+chemical+cross-linking+with+amine-reactive+N-hydroxysuccinimide+esters%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Chances and pitfalls of chemical cross-linking with amine-reactive N-hydroxysuccinimide esters.</a> Anal. Bioanal. Chem. 392 (1), 305-312 (2008).</li>
<li>Bedoya, S. K., Wilson, T. D., Collins, E. L., Lau, K., Larkin Iii,, J, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Th17+Differentiation+of+Naive+CD4+T+Lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Th17 Differentiation of Naive CD4 T Lymphocytes.</a> J Vis Exp. (79), e50765(2013).</li>
<li>Flaherty, S., Reynolds, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Naive+CD4%2B+T+Cell+Isolation+and+In+vitro+Differentiation+into+T+Cell+Subsets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Naive CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets.</a> J Vis Exp. (98), e52739(2015).</li>
<li>Judenhofer, M., Wiehr, S., Kukuk, D., Fischer, K., Pichler, B. Chapter 363. <a target="_blank" href="http://www.springer.com/us/book/9783642129445">Small Animal Imaging. Basics and Practical Guide</a>. , Springer. 363-370 (2011).</li>
<li>Phelps, M. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPhelps%2C+ME+%22PET.+Molecular+Imaging+and+Its+Biological+Applications%22">PET. Molecular Imaging and Its Biological Applications</a>. , Springer-Verlag. 93-101 (2004).</li>
<li>Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+and+Antimatter%3A+The+Resurgence+of+Immuno-PET%5BTitle%5D)+AND+%22JNM%22%5BJournal%5D)">Antibodies and Antimatter: The Resurgence of Immuno-PET.</a> JNM. 50 (1), 2-5 (2009).</li>
<li>Lewis, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+pretargeted+64Cu+for+tumor+imaging+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of pretargeted 64Cu for tumor imaging and therapy.</a> J Nucl Med. 44 (8), 1284-1292 (2003).</li>
<li>Boswell, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+in+vivo+stability+of+copper-64-labeled+cross-bridged+and+conventional+tetraazamacrocyclic+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Comparative in vivo stability of copper-64-labeled cross-bridged and conventional tetraazamacrocyclic complexes.</a> J Med Chem. 47 (6), 1465-1474 (2004).</li>
<li>Ghosh, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+DOTA+and+NODAGA+as+chelators+for+%2864%29Cu-labeled+immunoconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparison of DOTA and NODAGA as chelators for (64)Cu-labeled immunoconjugates.</a> Nucl Med Biol. 42 (2), 177-183 (2015).</li>
<li>Johnson, T. E., Birky, B. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJohnson%2C+TE+%22Health+Physics+and+Radiological+Health%22">Health Physics and Radiological Health</a>. , 4th ed, Lippincott Williams & Wilkins. (2011).</li>
<li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+tissue+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nat Meth. 2 (12), 932-940 (2005).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu protokol, stabil bir şekilde PET in vivo izlenmesi için hücreler radyolabel güvenilir ve kolay bir yöntem sunulur. 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb ve homing ile de radyo-etiketlenebilir, cova-TH1 hücreleri, izole edilmiş ve donör farelerden in vitro olarak genişletilebilir, bu yöntem olabilir kullanan bir Cova sunum siteleri gibi pulmoner ve perithymic LN için takip edilmiştir akut solunum yolu DTHR cova kaynaklı. çelatör mAb modifikasyonu hızlı ve verimli bir şekilde ça...

Invazif olmayan hücre takibi, in vivo olarak, hücre fonksiyonu, göç ve homing izlemek için çok yönlü bir araçtır. Son hücre takibi çalışmaları rejeneratif tıpta, kanser, 3, 4 karşı adoptif hücre tedavileri enflamasyonun veya T lenfositleri otolog periferik beyaz kan hücreleri bağlamında mesenkimal 1, 2 ya da kemik iliği kökenli kök hücreleri 3 üzerine odaklanmıştır. eylem siteleri ve hücre tabanlı tedaviler yatan biyolojik ilkelerin aydınlatılması muazzam öneme sahiptir. CD8 + sitotoksik T lenfositleri, genetik olarak yaygın altın standart olarak kabul edilmiştir kimerik antijen reseptörü (CAR), T hücreleri ya da tümör infiltre edici lenfositler (TILler) tasarlanmıştır. Bununla birlikte, tümör bağlantılı antijen-spesifik Th1 hücrelerinin &lt;etkili bir tedavi seçeneği 4, olduğu kanıtlanmıştır/ sup&gt; 5, 6, 7. Anahtar iltihaplanmada oyuncuların organa özgü otoimmün bir hastalık (örneğin, romatoid artrit veya bronşiyal astım) ve kanser immünoterapisi yüksek ilgi hücreleri gibi, TH1 hücre zamansal dağılımı ve yerleşme kalıpları karakterize etmek için önemlidir. PET ile invaziv olmayan in vivo görüntüleme in vivo hominginde, hücre göçü modellerini incelemek için bir nicel, çok hassas bir yöntem 8. sunulur, ve iltihap, alerji, enfeksiyon ya da tümör rejeksiyon 9, 10, 11 sırasında T hücresi eylem ve tepkilerinin siteleri. Klinik olarak, In-oksin 111 2-deoksi-2- (18 ise, iltihap ve enfeksiyon 12 ayrımı için lökosit sintigrafisi için kullanılırF)-floro-D-glükoz (18F-FDG) genellikle PET 3, 13 ile hücre izleme çalışmaları için kullanılır. Bu PET tracer önemli bir dezavantajı, ancak, 109.7 dk&#39;da radyonüklid 18F ve daha sonraki zaman noktalarında görüntüleme adoptif hücre transferi sonrası engelleyen düşük hücre içi stabilite kısa yarılanma ömrü. Hücrelerde kararsız olmasına rağmen, 64Cu-PTSM sık sık kullanılan PET ile in vivo hücre takibi çalışmalarında uzun vadede için, spesifik olmayan bir hücre 14, T hücre canlılığı üzerindeki minimize zararlı etkiler ile 15 etiket ve 16 işlev görmektedir. Bu protokol, ayrıca bir T hücre reseptörü (TCR) e özgü radyo-etiketli mAb kullanılarak hücre canlılığı ve işlevi üzerinde dezavantajlı etkileri azaltmak için bir yöntemi tarif etmektedir. İlk olarak, radyoizotop 64 Cu, inci ile mAb KJ1-26 konjüge üretimiE şelatör DOTA, ve daha sonra 64 Cu, radyo-etiketleme gösterilmiştir. İkinci bir aşamada, izolasyon ve DO11.10 donör farelerin cova-TH1 hücrelerinin genişlemesi ve 64Cu yüklü DOTA-konjuge mAb KJ1-26 (64Cu-DOTA-KJ1-26) ile radyo işaretli ayrıntılı olarak tarif edilmiştir. Uptake&#39;leri ve bir doz kalibratörle radyoaktivite efflux sırasıyla y-sayımı ile değerlendirme, hem de IFN-y ELISA ile sunulmuştur tripan mavi dışlama ve işlevselliği ile hücre canlılığı üzerindeki 64Cu-radyoaktif etkilerinin değerlendirilmesi . In vivo hücre takibi yayılmayan için adoptif hücre transferi sonrası PET / CT tarafından cova kaynaklı akut solunum yolu DTHR ve görüntü elde olan bir fare modeli ortaya çıkarma açıklanmaktadır. Ayrıca, bu markalama yaklaşım, farklı hastalık modellerinde farklı TCRler veya membrana bağlı reseptörlere veya ekspresyon mar ile ilgili genel hücreleri ile fare T hücreleri aktarılabilirkers sürekli zar 17 mekik yatan.

<table><tbody><tr><td>HCl, Suprapur</td><td>Merck, Darmstadt, Almanya</td><td>1.00318</td><td>64Cu üretimi</td></tr><tr><td>Metanol, Suprapur</td><td>Merck, Darmstadt, Almanya</td><td>1.06007</td><td>64Cu üretimi</td></tr><tr><td>İzopropanol, Suprapur</td><td>Merck, Darmstadt, Almanya</td><td>1.0104</td><td>64Cu üretimi</td></tr><tr><td>Pt/Ir (90/10) plaka</td><td>&Ouml; gussa</td><td>Özel</td> <td>yapım64Cu üretimi</td></tr><tr><td>PEEK odası</td><td>WKL</td><td>Özel yapım</td><td>64Cu üretimi</td></tr><tr><td>64Ni</td><td>Kemotrade</td><td></td><td>64Cu üretimi</td></tr><tr><td>Polygram SIL G/UV 254 plaka</td><td>Macherey-Nagel</td><td>805021</td><td>64Cu üretimi</td></tr><tr><td>İyon değişimi sütun</td><td>BioRad</td><td>AG1-X8</td><td>64Cu üretimi</td></tr><tr><td>PETtrace için katı hal hedef sistemi</td><td>WKL</td><td>costum made</td><td>64Cu production</td></tr><tr><td>64Cu çalışma modülü</td><td>WKL</td><td>costum made</td><td>64Cu üretimi</td></tr><tr><td>Doz kalibratörü</td><td>Capintec</td><td>CRC-25R</td><td></td></tr><tr><td>PETtrace siklotron</td><td>General Electric Medical Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DOTA-NHS</td><td>Makrosiklik</td><td>B-280</td><td>DOTA konjugasyonu</td></tr><tr><td>Anti-cOVA-TCR antikoru (KJ1-26)</td><td></td><td>Hibridoma hücre kültüründen izole edilmiştir</td><td>DOTA konjugasyonu</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71633</td><td>DOTA konjugasyonu</td></tr><tr><td>H+ Chelex 100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7901</td><td>DOTA-konjugasyon</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-15 filtre ünitesi</td><td>Merck Millipore</td><td>UFC910008</td><td>DOTA-konjugasyon</td></tr><tr><td>Rotipuran ultra saf su</td><td>Carl Roth</td><td>HN68.3</td><td>DOTA-konjugasyon</td></tr><tr><td>Amonyum asetat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>32301</td><td>DOTA-konjugasyon</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Üniversitesi Tuebingen</td><td></td><td>DOTA-konjugasyon</td></tr><tr><td>Mikro Bio-spin P-6 sütunu</td><td>Bio-Rad Laboratuvarları</td><td>7326221</td><td>DOTA-konjugasyon</td></tr><tr><td>Sodyum sitrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71497</td><td>DOTA-konjugasyon</td></tr><tr><td>Cyclone Plus PhosphorImager&nbsp;</td><td>Perkin-Elmer</td><td>L2250116</td><td>DOTA-konjugasyon</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Merck Millipore 102568</td><td></td><td>T hücresi ortamı için bileşen&nbsp;</td></tr><tr>T hücre ortamı için <td>FCS</td><td>Merck Millipore</td><td>S0115 / 1004B</td><td>bileşeni&nbsp;</td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Merck Millipore</td><td>L0473</td><td>T hücresi ortamı için bileşen&nbsp;</td></tr><tr>T hücresi ortamı için <td>MEM-amino asitler</td><td>Merck Millipore</td><td>K0293</td><td>bileşeni&nbsp;</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td>T hücresi ortamı için <td>Merck Millipore</td><td>L 1613</td><td>bileşeni&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp; T hücresi ortamı için penisilin / Streptomisin</td><td>Merck Millipore</td><td>A2212</td><td>bileşeni&nbsp;</td></tr><tr>T hücre ortamı için <td>0.05 mM 2-&beta;-merkaptoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td>bileşeni&nbsp;</td></tr><tr><td>DO11.10 fareler</td><td></td><td>, kurum içi ıslah</td>, <td>TH1 hücre kültürü</td></tr>, <tr><td>DPBS,</td><td>Gibco</td><td>, 14190144</td>, <td>TH1 hücre kültürü</td></tr>, <tr><td>Hücre süzgeci, 40 ve mikro; m&nbsp;</td><td>Corning</td><td>352340</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>ACK Lizing Tamponu</td><td>Lonza</td><td>10-548E</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>CD4 Mikro Boncuklar, fare</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-097-145</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>QuadroMACS ayırıcı</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-090-976</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>LS sütunu</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-401</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>anti-CD4 antikoru (Gk1.5)</td><td></td><td>Hibridoma hücre kültüründen izole</td> edilmiştir <td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>anti-CD8 antikoru (5367.2)</td><td></td><td>Hibridoma hücre kültüründen izole</td><td>edilmiştir TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>Anti-sıçan antikoru (MAR18.5)</td><td></td><td>Hibridoma hücre kültüründen izole</td><td>edilmiştir TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>Tavşan tamamlayıcısı MA</td><td>tebu-Bio</td><td>CL3221</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>Anti-IL-4 antikor (11B11)</td><td></td><td>Hibridoma hücre kültüründen izole</td><td>edilmiştir TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>cOVA 323-339-peptid&nbsp;</td><td>EMC-mikro koleksiyonlar</td><td>Özel sipariş</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>CPG1668-oligonükleotidler</td><td>Eurofins MWG Operon</td><td>Özel sipariş</td><td>TH1 hücre kültürü IL-2</td></tr><tr><td></td><td>Novartis</td><td>65483-116-07</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>96 oyuklu plakalar</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>655180</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>24 oyuklu plakalar</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>662160</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>hücre kültürü şişesi</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>660175</td><td>TH1 hücre kültürü</td></tr><tr><td>48 oyuklu plakalar</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>677 180</td><td>hücre etiketleme</td></tr><tr><td>Gammacell 1000</td><td>En İyi Theratronics</td><td>via sorgulama&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Gulmay RT225</td><td>Gulmay</td><td>via sorgulama&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi</td><td>Merck Millipore</td><td>L6323</td><td> in vitro değerlendirme</td></tr><tr><td>Fare IFN -&gama; ELISA</td><td>BD Biosciences</td><td>558258</td><td>in vitro değerlendirmesi</td></tr><tr><td>PE Annexin V Apoptoz Tespit Kiti&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>559763</td><td> in vitro değerlendirmesi</td></tr><tr><td>Tüp 5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>55.476</td><td> in vitro değerlendirme</td></tr><tr><td>Yuvarlak tabanlı tüpler ve nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>352008</td><td> in vitro değerlendirme</td></tr><tr><td>Sihirbazı ve gama;-sayaç</td><td>Perkin-Elmer</td><td>2480-0010</td><td> in vitro değerlendirme</td></tr><tr><td>ELISA Okuyucu MultiscanEX</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>51118177</td><td> in vitro değerlendirme</td></tr><tr><td></td><td>Mikroskop Leica</td><td> aracılığıyla sorgulama&nbsp;</td><td>in vitro değerlendirme</td></tr><tr><td>BD LSRII&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>via sorgulama&nbsp;</td><td>in vitrodeğerlendirme</td></tr><tr><td>BALB/c fareler</td><td>Charles Nehri</td><td>028</td><td>in vivo hücre kaçakçılığı</td></tr><tr><td>Alüminyum jel</td><td>Serva Elektroforezi</td><td>12261.01<</td><td>em>in vivo hücre kaçakçılığı</td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Bayer Sağlık Hizmetleri</td><td>Sipariş Edildi aracılığıyla Üniversite hastanesi</td><td>in vivo hücre kaçakçılığı</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Oranı</td><td>Sipariş edilen aracılığıyla Üniversite hastanesi</td><td>in vivo hücre kaçakçılığı</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>CP-Pharma</td><td>Sipariş edildi aracılığıyla Üniversite hastanesi</td><td>in vivo hücre kaçakçılığı</td></tr><tr><td>30 G iğne</td><td>BD Biosciences</td><td>304000</td><td>in vivo hücre kaçakçılığı</td></tr><tr><td>Şırınga</td><td>BD Biosciences</td><td>11612491</td><td>in vivo hücre kaçakçılığı</td></tr><tr><td>Kılcal damarlar 10 ve mikro; L</td><td>VWR</td><td>612-2439</td><td></td></tr><tr><td>Inveon PET tarayıcı</td><td>Siemens Healthineers</td><td>artık kullanılamıyor</td><td>in vivo hücre kaçakçılığı, alternatif şirketler: Bruker, Mediso&nbsp;</td></tr><tr><td>Inveon SPECT/CT tarayıcı</td><td>Siemens Healthineers</td><td>artık kullanılamıyor</td><td>in vivo hücre kaçakçılığı</td></tr><tr><td>Inveon Research Workplace</td><td>Siemens Healthineers</td><td></td><td>görüntü analizi, alternatif yazılım: Pmod</td></tr></tbody></table>

tarafından kemirgen lenfosit etiketleme<sup&gt; 64</sup&gt; cu-antikor reseptör için hedefleme<em&gt; in vivo</em&gt; pet / ct ile hücre trafik

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Bu protokol, 64Cu üretimini ve kemirgen lenfosit hücre kültürü ve hücre hedefleme 64Cu-reseptörün ardından bir monoklonal antikor (mAb) şelatlayıcı çekimi / Radyo-etiketlenmesi göstermektedir. PET / CT ile bir hava yolu gecikmiş tip aşın duyarlılık reaksiyonunda (DTHR) bir hayvan modelinde radyo-etiket, ve in vivo hücre takibi yayılmayan açıklanmaktadır in vitro değerlendirilmesi. Ayrıntılı olarak, şelatlayıcı 1,4,7,10-tetraazasiklododekan-1,4,7,10-tetraasetik asit (DOTA) bir mAb konjugasyon gösterilmiştir. Radyoaktif 64 Cu, DOTA-konjuge mAb&#39;nin radyoaktif üretimini sonra tarif edilmektedir. Daha sonra, tavuk ovalbumin (cova) e özgü CD4 + interferon genişlemesi (IFN) -γ-üreten T yardımcı hücreleri (cova-TH1) ve cova-TH1 hücrelerinin daha sonra, radyo-etiketleme olarak gösterilmiştir. Çeşitli in vitro teknikler ef değerlendirmek için sunulmuşturtripan mavi dışlama hücre canlılığının belirlenmesi, akış sitometrisi için Annexin V ile apoptosis için boyama ve IFN-γ enzime bağlı immünosorban tahliliyle özelliklerin değerlendirilmesi gibi hücreler üzerinde 64Cu-radyo sınıflandırılmasıyla tama yaptığı, (ELISA) . Bundan başka, hücre içine radyoaktivite alımının ve markalama kararlılığının belirlenmesi detaylı olarak tarif edilmektedir. Bu protokol daha nedenle, BALB / c farelerinde cova kaynaklı akut solunum yolu DHTR indüksiyonu dahil, bir hava yolu DTHR için bir hayvan modeli olarak, hücre izleme çalışmaları yapmak ve açıklamaktadır. Son olarak, görüntü elde etme, yeniden yapılanma, ve analizi dahil sağlam PET / BT iş akışı sunulmuştur. Daha sonra alıcı içselleştirme 64 Cu-antikor reseptörü hedefleyen bir yaklaşım, hücre etiketlenmesi için ortak PET izleyiciler kıyasla yüksek spesifite ve stabilite, düşük hücre toksisitesi ve düşük akış oranlarını sağlar, örneğin, 64Cu-pyruvaldehyde bis (N-4-methylthiosemicarbazone) (64Cu-PTSM). Son olarak, yaklaşım, 48 saat için optimum sinyal-zemin oranı PET / CT ile in vivo hücre takibi yayılmayan sağlar. Bu deneysel yaklaşım içselleştirilir membrana bağlı reseptör ile hayvan modelleri ve hücre tipleri farklı transfer edilebilir.

Şekil 1, 64, Cu-DOTA-KJ1-26-mAb ve in vitro ve bu protokol kaplı vivo çalışmalarda deney tasarımı ile cova-TH1 hücrelerinin etiketlenmesi özetlemektedir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55270/55270fig1.jpg" /> Şekil 1: 64 Cu-DOTA-KJ1-26 mAb Etiketleme Proses ve Deney Tasarımı. 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb ile radyoaktif etiketleme hücre...

Bir transgenik fare, T hücresi reseptörüne bağlanan bir 64Cu-modifiye edilmiş monoklonal antikorun hazırlanmasını takiben, T hücreleri, canlılık, fonksiyonellik, etiketleme stabilitesi ve apoptoz için analiz, in vivo olarak radyoaktif işaretli olan ve adoptif bir nefes yolu gecikmeli tipte aşırı duyarlılık ile farelere aktarıldı pozitron emisyon tomografisi / bilgisayarlı tomografi (PET / BT) ile invazif olmayan görüntüleme için reaksiyon.

tarafından Kemirgen Lenfosit Etiketleme<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-Antikor Reseptör için hedefleme<em&gt; In Vivo</em&gt; PET / CT ile hücre Trafik

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Bu prosedürün genel amacı, inflamasyon veya kanser fare modellerinde PET/CT ile lenfositlerin zamansal dağılımını ve homing paternlerini in vivo olarak takip etmek için fare lenfositlerini bakır ile modifiye edilmiş radyoaktif bir monoklonal antikorla stabil olarak işaretlemektir. Bu yöntem, rejeneratif tıptaki kök hücre tedavileri veya kanser immünoterapileri gibi hücre tabanlı tedavilerin etki bölgelerinin ve temelindeki biyolojik prensiplerin aydınlatılmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hücre göçünün 48 saat boyunca yüksek kontrastla ve hücreler üzerinde minimum zararlı etkiyle görüntülenmesine olanak tanımasıdır.Bu yöntem, spesifik membrana bağlı reseptörlere ve ilgili monoklonal antikorlara sahip herhangi bir hücre tipine kolayca uyarlanabilir. Genellikle, bu yöntemi ilk kez uygulayan kişiler şelatör konjugasyonu ve radyolojik markalama süreçlerinde zorluk yaşayabilirler; bu durum, daha düşük bir immünoreaktif fraksiyon ve hücreye özgü aktivite ile sonuçlanabilir. İşleme, bir DO11.10 faresini %70 etanol ile dezenfekte ederek başlayın.Ardından uzuvları yapışkan bantla sabitleyin ve hayvanın karnı boyunca medial bir insizyon yapın. İnsizyonun her iki yanını la

murine-lymphocyte-labeling-64cu-antibody-receptor-targeting-for-vivo

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu videoda, non-invaziv pozitron emisyon tomografisi görüntülemesi için radyoaktif izotop konjuge monoklonal antikorlar kullanarak T yardımcı hücrelerinin hücre içi radyo-etiketlemesini gösteriyoruz.

Murin T Yardımcı Lenfositlerinin Radyoaktif İşaretli Monoklonal Antikorlar Kullanılarak Etiketlenmesi

Bu video, bir fare modelinde bir tümörün in vivo görüntülenmesi için bir radyoimmünokonjugatı içeren bir tekniği göstermektedir. Radyoimmünokonjugatın enjeksiyonu üzerine, konjugatın antikorları kanser hücreleri üzerindeki spesifik bir membran antijenine bağlanır. Konjugatın radyoizleyicisi, tümörün bir görüntüsünü oluşturmak için bir pozitron emisyon tomografisi (PET) tarayıcısı tarafından tespit edilen enerji üretmek için komşu elektronlarla etkileşime giren pozitronlar yayar.

Radyoaktif İşaretli Antikorlar Kullanarak Bir Murin Modelindeki Tümörleri Tespit Etmek için İn Vivo PET Görüntüleme Tekniği

Ex vivo olarak etiketlenmiş hücreler ile bir fare modelinde, MRI kullanılarak in vivo hücre takibi için genel bir protokol açıklar. Hücre etiketleme, görüntü alma ve işleme ölçümü için tipik bir protokol dahildir.

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

Biyoortogonal ters elektron talebi Diels-Alder sikloilavesi, kanser için etkili ve modüler önceden hedeflenmiş bir PET görüntüleme stratejisi oluşturmak için kullanılmıştır. Bu protokolde, bu metodolojinin adımları, kolorektal kanser hedefli antikor huA33 ve 64Cu etiketli bir radyoligand kullanan bir model sistem bağlamında açıklanmaktadır.

Pretargeted PET Görüntüleme Bioorthogonal Ters Elektron Talep Diels-Alder Katılma Harnessing

Antikor-conjugates için (ACs) birleştiğinde Viral kaynaklı peptidler, moleküler yükleri artan tümör hücre birikmesi ile teslim etme potansiyeli nedeniyle ivme kazanıyor bir yaklaşım var. Peptid konjügasyon, AC ve hücre içi yük birikimi ve tümör hedefleme değerlendirmek için ortak yöntemleri kullanarak, bu protokolü anahtar ilk geliştirme aşamalarında araştırmacılar yardımcı olur.

Antikor conjugates ilk değerlendirilmesi ile Viral kaynaklı peptidler hücresel birikimi artan ve tümör hedefleme artırmak için değiştirilmiş

Bu iletişim kuralı insan akciğer tümörü dilimleri içinde fluorescently eşleşmiş antikorlar ile etiketli görüntü ikamet tümör infiltre CD8 T hücreleri bir yöntem açıklanır. Bu teknik CD8 T hücre göç confocal mikroskobu kullanarak gerçek zamanlı analiz izin verir.

Ex Vivo İnsan akciğer tümörü içinde ikamet CD8 T lenfositlerin görüntüleme Confocal mikroskobu kullanma dilim

Lenfosit kemotaksis ve geçiş kantitatif değerlendirilmesi için protokolleri İmmünoloji araştırma için önemli araçlardır. Burada, bir vitro Protokolü izni gerçek zamanlı, hücre göç değerlendirilmesi yanı sıra bir tamamlayıcı vivo içinde teknik etkinleştirme izlemeyle yerli hücreleri dalak multiplexed açıklanmıştır.

İnsan monosit kemotaksisi Vitro ve In Vivo kaçakçılığı fare lenfosit miktarının

Burada, lökosit çıkış üzerinden saf, iltihaplı, vivo miktar ve malign fare cilt için yöntemleri gösterir. Biz iki model kafa kafaya bir karşılaştırma gerçekleştirir: transdermal FITC uygulama ve in situ photoconversion. Ayrıca, lökosit çıkış kutanöz tümörler izlemek için photoconversion yardımcı programı göstermektedir.

Fare deri ve tümör lenf damarları ile lökosit çıkış miktarının

Bu protokol, organ yapısında değişiklik olmadan lenf düğümlerini boşaltmada farklı hücre popülasyonlarını görüntüleyen bir tekniği tanımlar.

Ex-Vivo Konfokal Mikroskopi ile Lenf Nodal Yapısı nın Ve Hücresel Lokalizasyonun Görselleştirilmesi

Bu protokol, klinik olarak mevcut bir platformla kimerik antijen reseptörlerini in vivo olarak eksprese etmek için genetik olarak tasarlanmış T hücrelerini invaziv olmayan bir şekilde izleme metodolojisini açıklamaktadır.

Kimerik Antijen Reseptör T Hücrelerinin [18F]Tetrafloroborat Pozitron Emisyon Tomografisi/Bilgisayarlı Tomografi ile Dinamik Görüntülenmesi

Bu makale, insana özgü bir anti-CD19 monoklonal antikorun radyo-etiketlenmesi için metodolojiyi ve bunun in vivo PET görüntüleme, ex vivo gama sayımı ve otoradyografi yaklaşımlarını kullanarak bir fare multipl skleroz modelinin periferik dokularındaki B hücrelerini ölçmek için nasıl kullanılacağını detaylandırmaktadır.

Pozitron Emisyon Tomografisi Kullanılarak Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Fare Modelinde CD19+ B Hücrelerinin Görüntülenmesi

Öğrenin, fare lenfositlerini bakır modifiyeli radyoaktif monoklonal antikorla etiketleyerek PET/CT ile canlı hücre göçünü 48 saate kadar yüksek kontrastla izleme yöntemini. Bu teknik enflamasyon ve kanser modellerinde bağışıklık hücrelerinin dağılımını takip eder.

tarafından Kemirgen Lenfosit Etiketleme

Daha fazla video keşfet