Name: İzolasyon ve Roman Yüzey Etiket Kombinasyon ile tanımlanır Karaciğer progenitör Alt Grupları zenginleştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Keşfedin karaciğer progenitör hücre alt gruplarını akış sitometrisi ile değerlendirme ve yeni yüzey belirteç kombinasyonu kullanarak yüksek saflıkta izolasyon yöntemini. Bu teknik karaciğer hasarı araştırmalarında in vitro analiz için kritik öneme sahiptir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma VLK Alexander von Humboldt Vakfı Sofja Kovalevskaja Ödülü ile desteklenmiştir.

<ol><li>Dolle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+isolation+of+liver+progenitor+cells+by+aldehyde+dehydrogenase+activity+in+naive+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Successful isolation of liver progenitor cells by aldehyde dehydrogenase activity in naive mice.</a> Hepatology. 55 (2), 540-552 (2012).</li>
<li>Dolle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quest+for+liver+progenitor+cells%3A+a+practical+point+of+view%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">The quest for liver progenitor cells: a practical point of view.</a> J Hepatol. 52 (1), 117-129 (2010).</li>
<li>Dorrell, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+markers+for+the+murine+oval+cell+response%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Surface markers for the murine oval cell response.</a> Hepatology. 48 (4), 1282-1291 (2008).</li>
<li>Gouw, A. S., Clouston, A. D., Theise, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ductular+reactions+in+human+liver%3A+diversity+at+the+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Ductular reactions in human liver: diversity at the interface.</a> Hepatology. 54 (5), 1853-1863 (2011).</li>
<li>Tarlow, B. D., Finegold, M. J., Grompe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+tracing+of+Sox9%2B+liver+progenitors+in+mouse+oval+cell+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Clonal tracing of Sox9+ liver progenitors in mouse oval cell injury.</a> Hepatology. 60 (1), 278-289 (2014).</li>
<li>Shin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxl1-Cre-marked+adult+hepatic+progenitors+have+clonogenic+and+bilineage+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Foxl1-Cre-marked adult hepatic progenitors have clonogenic and bilineage differentiation potential.</a> Genes Dev. 25 (11), 1185-1192 (2011).</li>
<li>Furuyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+cell+supply+from+a+Sox9-expressing+progenitor+zone+in+adult+liver%2C+exocrine+pancreas+and+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine.</a> Nat Genet. 43 (1), 34-41 (2011).</li>
<li>Font-Burgada, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+Periportal+Hepatocytes+Regenerate+the+Injured+Liver+without+Giving+Rise+to+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hybrid Periportal Hepatocytes Regenerate the Injured Liver without Giving Rise to Cancer.</a> Cell. 162 (4), 766-779 (2015).</li>
<li>Kuramitsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+fibrotic+liver+regeneration+in+mice+is+linked+to+a+severe+fibrogenic+response+driven+by+hepatic+progenitor+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Failure of fibrotic liver regeneration in mice is linked to a severe fibrogenic response driven by hepatic progenitor cell activation.</a> Am J Pathol. 183 (1), 182-194 (2013).</li>
<li>Pritchard, M. T., Nagy, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+fibrosis+is+enhanced+and+accompanied+by+robust+oval+cell+activation+after+chronic+carbon+tetrachloride+administration+to+Egr-1-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Hepatic fibrosis is enhanced and accompanied by robust oval cell activation after chronic carbon tetrachloride administration to Egr-1-deficient mice.</a> Am J Pathol. 176 (6), 2743-2752 (2010).</li>
<li>Spee, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+the+liver+progenitor+cell+niche+in+liver+diseases%3A+potential+involvement+of+Wnt+and+Notch+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Characterisation of the liver progenitor cell niche in liver diseases: potential involvement of Wnt and Notch signalling.</a> Gut. 59 (2), 247-257 (2010).</li>
<li>Eckert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Podoplanin+discriminates+distinct+stromal+cell+populations+and+a+novel+progenitor+subset+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Podoplanin discriminates distinct stromal cell populations and a novel progenitor subset in the liver.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 310 (1), G1-G12 (2016).</li>
<li>Epting, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+antigen-1+is+necessary+for+cell-cycle+withdrawal+and+myoblast+differentiation+in+C2C12+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Stem cell antigen-1 is necessary for cell-cycle withdrawal and myoblast differentiation in C2C12 cells.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 25), 6185-6195 (2004).</li>
<li>Tirnitz-Parker, J. E., Tonkin, J. N., Knight, B., Olynyk, J. K., Yeoh, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture+and+immortalisation+of+hepatic+oval+cells+from+adult+mice+fed+a+choline-deficient%2C+ethionine-supplemented+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture and immortalisation of hepatic oval cells from adult mice fed a choline-deficient, ethionine-supplemented diet.</a> Int J Biochem Cell Biol. 39 (12), 2226-2239 (2007).</li>
<li>Rountree, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CD133-expressing+murine+liver+oval+cell+population+with+bilineage+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">A CD133-expressing murine liver oval cell population with bilineage potential.</a> Stem Cells. 25 (10), 2419-2429 (2007).</li>
<li>Rountree, C. B., Ding, W., Dang, H., Vankirk, C., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+CD133%2B+liver+stem+cells+for+clonal+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of CD133+ liver stem cells for clonal expansion.</a> J Vis Exp. (56), (2011).</li>
<li>Sidney, L. E., McIntosh, O. D., Hopkinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+Change+and+Induction+of+Cytokeratin+Expression+During+In+Vitro+Culture+of+Corneal+Stromal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Phenotypic Change and Induction of Cytokeratin Expression During In Vitro Culture of Corneal Stromal Cells.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (12), 7225-7235 (2015).</li>
<li>Hass, R., Kasper, C., Bohm, S., Jacobs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+populations+and+sources+of+human+mesenchymal+stem+cells+%28MSC%29%3A+A+comparison+of+adult+and+neonatal+tissue-derived+MSC%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Different populations and sources of human mesenchymal stem cells (MSC): A comparison of adult and neonatal tissue-derived MSC.</a> Cell Commun Signal. 9, 12(2011).</li>
<li>Schmelzer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+hepatic+stem+cells+from+fetal+and+postnatal+donors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Human hepatic stem cells from fetal and postnatal donors.</a> J Exp Med. 204 (8), 1973-1987 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları var.

Karaciğer iltihabı, farklı kökenlerden gelen hasarı progenitör hücre genişlemesi ve aktivasyon 2, 3 ile birlikte karaciğerdeki yenilenme sürecini tetikler. Bu karaciğer progenitör hücrelerin hücre özelliklerini kök sahip ve büyük olasılıkla çeşitli karaciğer hastalıklarının mekanizmasında önemli bir rol oynamaktadır. Karaciğer progenitör hücrelerin heterojenliği uzun önerilmiştir. Farklı yüzey belirteçleri taşıyan alt kümelerini beli...

Karaciğer yenilenmesi çok hepatosit kendini yenileme kapasitesi ile ilişkilidir. Bununla birlikte, kronik karaciğer yaralanması ve hepatositlerin cholangiocytes, 1, 2, 3, 4 ayırt etme kabiliyetleri ile ilişkilendirilmiştir progenitör hücre aktivasyonu ve genişleme ile meydana gelir. Kronik yaralanma sırasında hepatosit proliferasyonu etkili değildir, çünkü bu özellikle geçerlidir. Progenitör hücreleri hedef alan çok sayıda genetik izleme çalışmalara rağmen, karaciğer rejenerasyonu rolleri 5, 6, 7, 8 tartışmalıdır. Ayrıca, progenitör hücrelerin aktivasyon yaralanmalarında 9 sırasında tam rolü hakkında sorular ortaya çıkarmaktadır karaciğerde artan fibrotik yanıtı, bağlantılı olmuştur10. Progenitör hücre bölmesine heterojen doğası uzun mikrodiseksiyon veya hücre sıralama tabanlı yöntemler 1, 11 ile tek bir yüzey işaretleyici ifade eden progenitör hücreler izole edilmiş gen ekspresyon çalışmaları ile öne sürülmüştür. Gerçekten de, en son, yeni bir yüzey markör kombinasyonu kullanılarak gp38 (podoplanin) açık bir şekilde, çeşitli alt-12 progenitör hücrelerin önceki tek belirteçleri bağlandı. Önemlisi, bu alt-gruplar sadece yüzey işaretleyici ifadesinde farklılık değil, aynı zamanda yaralanmaların 12 sırasında işlevsel değişiklikler sergilemiştir. Çoklu hayvan modelleri progenitör hücre aktivasyonu ve karaciğer rejenerasyonu araştırmak için kullanılmıştır. Çeşitli yaralanma türleri progenitör hücrelerin 12 alt kümelerini farklı aktivasyonunu teşvik gibi görünüyor. Bu ph açıklayabilirİnsanlarda 4 gözlenen kanalsal reaksiyon enotypic sapma. Böylece, progenitör hücrelerin karmaşık fenotipik ve fonksiyonel analizleri kendi yaralanmalarda rolü ve karaciğer hastalıklarında kanalsal reaksiyonun gerçek önemini anlamak için çok önemlidir. Yüzey işaretleyici kombinasyonları yanı sıra, hücre izolasyonu protokolleri önemli farklılıklar daha önceki çalışmalarda 2 dayanarak sonuçları zorlaştırıyor. Bazı çalışmalar, önemli miktarda büyük ölçüde izole protokolünde farklıdır progenitör hücreler (örneğin, karaciğer ayrılma (enzim kombinasyonu ve işlemin süresi), yoğunluk, orta ve santrifüj hızı) rolünü ele 2. Optimize edilmiş izolasyon tekniği, nadir hücre popülasyonlarının daha iyi canlılığı sağlayan ve alt küme bileşiminin yansıtıcı, gelişmiş ve son zamanlarda 12 yayımlanmıştır. Bu makalenin amacı, bir daha det sağlamaktırBu karaciğer hücre izolasyon prosedürü ve alt küme analizi ailed protokol tekniğinin uygun üreme için izin vermek. Ayrıca, protokol yeni protokole göre farklılıklar göstermek için önceki izolasyon yöntemi ile bir karşılaştırmasını içerir.

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>21875-034</td><td></td></tr><tr><td>fenol kırmızı içermeyen DMEM</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>31053-028</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz P</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11249002001</td><td></td></tr><tr><td>DNAse-I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td></td><td></td>17105041</tr><tr><td>ACK Lysing Tampon Yaşam</td><td>Teknolojileri</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>14025-050</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Azid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td>%1 stok çözeltisi hazırlayın</td></tr><tr><td>%10 BSA</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS Durulama Çözeltisi</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>%0,5 (h/h) BSA ekleyin ve buz üzerinde saklayın</td></tr><tr><td>Fenol kırmızısı içermeyen DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1145</td><td></td></tr><tr><td>sayma Boncuk Sayısı Bright</td><td>Life Technologies</td><td>C36950</td><td></td></tr><tr><td>PI</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td></td></tr><tr><td>FcR Bloke Reaktif</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-575</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD31 Mikro Boncuklar</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-418</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD45 Mikro Boncuklar</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-052-301</td><td></td></tr><tr><td>Ölü Hücre Temizleme Kiti</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>anti-Biotin Mikro Boncuklar</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-485</td><td></td></tr><tr><td>CD64 Saflaştırılmış</td><td>BioLegend</td><td>139302</td><td>Seyreltme: 1:100</td></tr><tr><td>CD16/32 Saflaştırılmış</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>Seyreltme: 1:100</td></tr><tr><td>CD45 APC/Cy7</td><td>BioLegend</td><td>103116</td><td>Seyreltme: 1:200, hematopoetik hücreleri işaretler</td></tr><tr><td>CD31 Biotin</td><td>BioLegend</td><td>102504</td><td>Seyreltme: 1:200, endotel hücrelerini işaretler</td></tr><tr><td>ASGPR1 Saflaştırılmış</td><td>Bio-Techne</td><td>AF2755-SP</td><td>Seyreltme: 1:100, hepatositleri</td></tr><tr><td>işaretler Podoplanin APC</td><td>BioLegend</td><td>127410</td><td>Seyreltme: 1: 1.400, progenior hücreleri işaretler</td></tr><tr><td>Podoplanin Biotin</td><td>BioLegend</td><td>127404</td><td>Seyreltme: 1: 1.400</td></tr><tr><td>CD133 PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-102-210</td><td>kullanım 3 & mikro; L, progenitör hücreleri işaretler</td></tr><tr><td>CD133 Biotin</td><td>BioLegend</td><td>141206</td><td>Seyreltme: 1:100</td></tr><tr><td>CD34 Biotin</td><td>eBioScience</td><td>13-0341-81</td><td>Seyreltme: 1:100</td></tr><tr><td>CD90.2 Pasifik Mavisi</td><td>BioLegend</td><td>140306</td><td>Seyreltme: 1:800</td></tr><tr><td>CD157 PE</td><td>BioLegend</td><td>140203</td><td>Seyreltme: 1:600</td></tr><tr><td>EpCAM Brilliant Violet 421</td><td>BioLegend</td><td>118225</td><td>Seyreltme: 1:100</td></tr><tr><td>Sca-1 Biotin</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-101-885</td><td>10 & mikro kullanın; L</td></tr><tr><td>Fare IgG2b, &kappa; PE</td><td>BioLegend</td><td>400311</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan IgG1 PE</td><td>BioLegend</td><td>400407</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan IgG2b, &kappa; APC/Cy7</td><td>BioLegend</td><td>400624</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan IgG2a, &kappa; Biotin</td><td>BioLegend</td><td>400504</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan IgG2a, &kappa; Parlak Menekşe 421</td><td>BioLegend</td><td>400535</td><td></td></tr><tr><td>Suriye Hamsterı IgG APC BioLegend</td><td></td><td>402012</td><td></td></tr><tr><td>Suriye Hamsterı IgG Biotin</td><td>BioLegend</td><td>402004</td><td></td></tr><tr><td>Normal Keçi IgG Kontrolü Saflaştırılmış</td><td>Bio-Techne</td><td>AB-108-C</td><td></td></tr><tr><td>Eşek Anti-Keçi IgG Alexa Fluor 488</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>A11055</td><td>Seyreltme: 1:800</td></tr><tr><td>Streptavidin Alexa Fluor 405</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>S32351</td><td>Seyreltme: 1:400</td></tr><tr><td>100 & mikro; m Filtre ağı</td><td>A. Hartenstein</td><td>PAS3</td><td></td></tr><tr><td>LS Sütun</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>QuadroMACS ayırıcı</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>MACSQuant Analiz Cihazı 10</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-343</td><td></td></tr><tr><td>AutoMACS Pro Ayırıcı</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-545</td><td></td></tr><tr><td>FACS AriaTMIII</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACSDiva yazılımı</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polipropilen Yuvarlak alt tüp</td><td>Falcon</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy plus mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74134</td><td>RLT lizis tamponu dahildir</td></tr></tbody></table>

İzolasyon ve roman yüzey etiket kombinasyon ile tanımlanır karaciğer progenitör alt grupları zenginleştirilmesi

Isolation and Enrichment of Liver Progenitor Subsets Identified by a Novel Surface Marker Combination

Kronik karaciğer yaralanmaları sırasında, progenitör hücreler aynı zamanda inflamatuar hücre infiltrasyonu ve epitel hücre aktivasyonu görünümünü gerektirir kanalsal reaksiyon denilen bir süreçle, genişletmek. enflamatuar reaksiyonlar sırasında projenitör hücre popülasyonu çok histolojik analiz ile veya akış sitometri tabanlı teknikler ile, ya tek bir yüzey belirteçleri kullanılarak araştırılmıştır. Ancak, yeni yüzey belirteçleri karaciğer atası içinde çeşitli fonksiyonel olarak farklı alt kümeleri tespit / hücre bölmesini kaynaklanıyor. Burada sunulan yöntem, yalıtım ve yeni yüzey işaretleyici kombinasyonlarını kullanarak progenitör alt kümelerinin sitometri analizi ayrıntılı akışını açıklar. Ayrıca, çeşitli progenitör hücre alt yüksek saflıkta manyetik otomatik kullanılarak ve FACS ayıklama bazlı yöntemler ile izole edilebilir gösterilmiştir. Önemlisi, karaciğer roman ve basitleştirilmiş enzimatik ayrılma yüksek canlılığı bu nadir bir hücre popülasyonlarının izolasyonu sağlardiğer mevcut yöntemlere kıyasla üstündür. Bu da, in vitro projenitör hücreleri incelemek için ya da gen tanımlama profili analiz yüksek kaliteli RNA izole edilmesi için özellikle uygundur.

Parankimal olmayan parankimal karaciğer hücreleri (Şekil 1 ve 2a) ihtiva eden bir tek hücre süspansiyonu enzimler sonuçlar için yeni bir karışımı ile karaciğer, sindirim için burada sunulan prosedür. Kırmızı kan hücrelerinin ACK-Lize etme sonrasında tek hücre süspansiyonu sitometri analizi doğrudan akım olanağı (Şekil 1 ve 2) &#39;dir. Yolluk strateji çiftler ve ölü hücreleri (Şekil 2a) dışlanması içerir...

Karaciğer yaralanmaları heterojen bir hücre popülasyonunu temsil progenitör hücre genişlemesi eşlik ediyor. Bu hücresel bölmenin yeni sınıflandırma birden altgruplarının ayırmada sağlar. Burada tarif edilen yöntem, analiz ve başka analizler için de kullanılabilen çeşitli alt-kümelerinin yüksek saflıkta izole sitometri akışı göstermektedir.

İzolasyon ve Roman Yüzey Etiket Kombinasyon ile tanımlanır Karaciğer progenitör Alt Grupları zenginleştirilmesi

During chronic liver injuries, progenitor cells expand in a process called ductular reaction, which also entails the appearance of inflammatory cellular ...

Bu karaciğer sindirim protokolünün genel amaçları, akış sitometrisi ile çeşitli karaciğer progenitör alt kümelerini değerlendirmek ve daha sonraki analizler için yeni bir yüzey belirteç kokteyli kullanarak bu hücreleri yüksek saflıkta izole etmektir. Bu yöntem, örneğin progenitör hücrelerin alt kümesine özgü özelliklerinin neler olduğu ve karaciğer hasarı sırasındaki uzak nedenlerinin neler olduğu gibi, karaciğer progenitör hücrelerinin biyolojisi hakkındaki çeşitli soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, in-vitro analizler için kritik önem taşıyan yüksek saflıkta ve canlılıkta progenitör hücrelerin izole edilmesine olanak sağlamasıdır.Bu sindirim tekniği progenitör hücre biyolojisine dair bilgi sağlasa da, aslında hematopoetik ve endotelyal hücre popülasyonlarının izolasyonu için de kullanılabilir. Fare karaciğerinden tek hücreli bir preparat hazırlamak için, lobları kuru bir petri kabına aktarın ve dokuları yaklaşık iki milimetreküp boyutunda homojen küpler halinde kesmek için bir neşter kullanın. Parçaları, her biri 2,5 ml sindirim tamponu içeren, karaciğer başına iki adet 15 mililitrelik konik santrifüj tüpüne aktarın.Ardından örnekleri, 5 ve 10

isolation-enrichment-liver-progenitor-subsets-identified-novel

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

İşte biz bütün fare karaciğer doku sindirim, hücre zenginleştirme ve flow sitometri izolasyonu gerektiren bir süreçten CD133 eksprese karaciğer kök hücre ve kanser kök hücrelerin izolasyonu tarif. Biz gelişmiş tek hücre izolasyonu ve klonal genişleme için yöntemler içerir.

Klonal Genişleme CD133 + Karaciğer Kök Hücre İzolasyonu

Sitometrisi kemik iliği hematopoietik öncü dağıtımı yanı sıra verimli yalıtmak için son derece saf hematopoetik kök hücreleri (HKH'ler) analiz etmek için bir yöntem tarif edilir. İzolasyon ^ işleminde esas olarak hücresel ve moleküler çalışmalar için HKH'ler arındırmak için sıralama c-Kit + hücreleri ve hücre manyetik zenginleştirme dayanmaktadır.

Mürin Hematopoetik Kök Hücreler ve Lineage-kararlı progenitörlerin Fenotipik Analizi ve İzolasyon

İnsan hepatositlerini ve parankimal olmayan karaciğer hücrelerini aynı donörden izole etmek için bir teknik tanımlanmıştır. Farklı karaciğer hücresi tipleri, fonksiyonel karaciğer modelleri ve doku mühendisliği için temel oluşturur. Bu yeni yöntem, karaciğer hücrelerini yüksek verim ve canlılıkta izole etmeyi amaçlamaktadır.

İlköğretim İnsan Hepatositlerin İzolasyonu ve Non-parankimal karaciğer hücrelerinin Binbaşı popülasyonları İlgili Protokolü

Biz nasıl tanımlanmasını ve yalıtılmasını miyeloid ataları fare kemik iliği bir manyetik kombinasyonu ve floresan (MAC'ler ve FACS) sıralama kullanarak üzerinden 6 alt kümelerini göstermek. Bu iletişim kuralı vitro kültürü deneyleri (methylcellulose ya da sıvı kültürleri), in vivo evlat edinen transfer deneyler ve RNA/protein analizleri için kullanılabilir.

Kimlik ve yalıtım Oligopotent ve Lineage için kabul edilen miyeloid ataları fare kemik iliği dan

Bu protokol, 18 gün içinde insan pluripotent kök hücrelerinden (hPSCs) hepatosit benzeri hücreleri verimli bir şekilde üretmek için bir monolayer, serum içermeyen bir yöntem ayrıntıları. Bu hpscs sırayla ilkel çizgi, kesin endoderm, posterior foregut ve karaciğer tomurcuk ataları hepatosit benzeri hücreler oluşturmadan önce gibi ara hücre türlerine ayırt olarak altı adım gerektirir.

Insan pluripotent kök hücrelerinin karaciğer hücrelerine verimli farklılaşma

Bu makalenin amacı, insan hepatik progenitörlerin pluripotent kök hücrelerden farklılaşmasına neden olmak için standartlaştırılmış bir yaklaşım sağlamaktır. Bu prosedürün kullanıma hazır ortam formülasyonları ile geliştirilmesi, kullanıcıya biyomedikal araştırma ve çeviri için insan karaciğer hücreleri üretmek için bir facile sistemi sunmaktadır.

Tanımlanmış Bir Farklılaşma Sistemi Kullanarak Pluripotent Kök Hücrelerden Hepatik Progenitör Spesifikasyonu

Bu makalede, insan akciğerinin proksimal ve distal bölgelerinden canlı epitel hücrelerinin zenginleştirilmesine izin veren doku dissosiyasyonu ve hücresel fraksiyonasyon yaklaşımları için ayrıntılı bir metodoloji sunulmaktadır. Bu yaklaşımlar, akciğer epitel progenitör hücrelerinin fonksiyonel analizi için 3D organoid kültür modelleri kullanılarak uygulanmaktadır.

Organoid Kültür için İnsan Akciğer Epitel Progenitör Hücrelerinin İzolasyonu ve Zenginleştirilmesi

Burada primer fare karaciğeri sinüzoidal endotel hücresi (LSEC) izolasyonu için bir protokol özetlenmekte ve gösterilmektedir. Protokol, karaciğer kollajenaz perfüzyonu, düşük hızlı santrifüjleme ile parankimal olmayan hücre saflaştırılması ve CD146 manyetik boncuk seçimine dayanmaktadır. Ayrıca bu izole LSEC'leri akış sitometrisi ve taramalı elektron mikroskobu kullanarak fenotipler ve karakterize ediyoruz.

Fare primer karaciğer sinüzoidal endotel hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu

Lipid yüklü hepatositler karaciğer rejenerasyonuna özgüdür, ancak genellikle yoğunluk gradyan santrifüjleme ile kaybolurlar. Burada, steatotik hepatositleri tutan ve farelerde parsiyel hepatektomi sonrası rejenere hepatositlerin temsili popülasyonlarını veren optimize edilmiş bir hücre izolasyon protokolü sunuyoruz.

Farelerde Parsiyel Hepatektomi Sonrası Rejenere Hepatositlerin İzolasyonu

Burada, kararlı durumdaki periferik kandan izole edilen mononükleer hücreleri kullanarak insan otolog karaciğer sferoidleri üretmek için genetik olmayan bir yöntem sunuyoruz.

Karaciğer Hastalığı Çalışmaları için Periferik Kandan İnsan Karaciğer Sferoidleri

Pluripotent kök hücrelerden türetilen hepatositler, mitokondriyal ve aktive edilmiş lökosit hücre adezyon molekülünün (CD166 olarak da bilinen ALCAM) bir kombinasyonu kullanılarak hücre sıralama yoluyla saflaştırılabilir.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Türetilen Hepatositleri Saflaştırmak İçin Hücre Sıralamasında Canlı Mitokondri Boyamanın Uygulanması

Keşfedin karaciğer progenitör hücre alt gruplarını akış sitometrisi ile değerlendirme ve yeni yüzey belirteç kombinasyonu kullanarak yüksek saflıkta izolasyon yöntemini. Bu teknik karaciğer hasarı araştırmalarında in vitro analiz için kritik öneme sahiptir.

İzolasyon ve Roman Yüzey Etiket Kombinasyon ile tanımlanır Karaciğer progenitör Alt Grupları zenginleştirilmesi

Daha fazla video keşfet