Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. ve Pseudocapillaria tomentosa Zebra balığı sistemlerinde çevre tarama

Bu örnekleme tekniğinin genel amacı, sağlık izleme için kullanılan balık sayısını azaltmak ve karantinada ithalatın taranması da dahil olmak üzere patojen tespitinin cirosunu, maliyetini ve hassasiyetini optimize etmektir. Bu teknik, sığınma kolonilerinin sağlık tüzüklerini tanımlamaya yardımcı olur. Bu yöntem, tedavi verimliliğini okurken veya değerlendirirken yararlı bir araçtır.

Bu tekniğin temel avantajlarından biri, karantinada ithalatın taranması ve triyajıdır. Su tesisinin biyogüvenlik planını güçlendirir. Protokole başlamak için, devridaim sisteminden temiz sekiz litrelik bir tank ayarlayın.

Depoyu haznelerden alınan yaklaşık sekiz litre su ile doldurun. Sistemlerden ekrana iki seramik boncuk veya sünger küp biyomedya ekleyin. Daha sonra, tesisteki baskın genetik geçmişe sahip vahşi tip balıkları kullanarak, litre başına Danio rerio yapmak için bir tane ekleyin, örneğin A B. En az altı balık seçin.

Balıkları günde bir kez besleyin. Nöbetçilerin zebra balığı tesisinde kullanılan tüm diyetlere maruz kaldığından emin olmak için diyetleri değiştirin. Su değişimini gerçekleştirmek için, biyomedyadaki nöbetçileri geçici bir tanka aktarın.

Sentinel tankını tamamen boşaltın ve temizleyin. Nöbetçi tankını sadece karter suyuyla doldurun ve nöbetçileri ve biyomedyayı geri yerleştirin. Nöbetçileri dört ay boyunca hazne suyuna maruz bıraktıktan sonra, balığı aşırı dozda 2-fenoksietanol çözeltisine daldırmak gibi onaylanmış bir yöntemle ötenazi yapın.

Ölümü doğrulamak için, operkulum hareketinin kesilmesinden sonra on dakika bekleyin. Kadavrayı forseps ile alın ve belirlenen bir kapta eksi 80 santigrat derecede tamamen dondurun. Plastik şaftlı steril bir kuru çubuk hazırlayın ve eldiven giyin.

Sürüntü almak için yüzeyi bulun. Düşük akışlı bir karter yüzeyi, su yüzeyindeki karter duvarını seçin ve yüzeye kolay erişimi engelleyen herhangi bir öğeyi çıkarın. Ardından, dış ambalajı çıkararak swabı kınından çıkarın ve steril pamuk ucunu havaya maruz bırakın.

Karter suyu yüzey seviyesindeki suyu ve biyofilmi emmek için karter duvarını beş ila 10 santimetreden fazla temizleyin. Ardından swabı geri kılıflayın veya ucu steril bir santrifüj tüpüne kırın. Numuneyi etiketleyin ve PCR testi için gönderin veya eksi 80 santigrat derecede dondurun.

Mikroskopi ile çamur analizi yapmak için, bir karterin altındaki çamuru aspire etmek için 60 mililitrelik bir şırınga kullanın. Numuneyi 15 mililitrelik tüplere bölün. Kapakları vidalayın ve tüpleri etiketleyin.

15 mililitrelik tüpleri, yerçekiminin 175 ila 250 katı hızda, salıncak kovalı bir santrifüjde on dakika boyunca santrifüjleyin. Tüpleri boşaltın. Boşalttıktan sonra tortuları saklayın.

Daha sonra 227 gram toz şeker ve 177 mililitre sıcak suyu manyetik bir karıştırıcı ile karıştırarak şekere doymuş çözeltiyi hazırlayın. Tüpleri yarıya kadar şekere doymuş çözelti ile doldurun. Kapakları vidalayın ve tortuyu çözelti ile iyice karıştırın.

Tüpleri santrifüj salıncak kovalarına yerleştirin ve üzerlerine kadar şekere doymuş çözelti ile doldurun. Şekere doymuş çözelti ile temas edecek şekilde her tüpün üzerine bir kapak camını nazikçe yerleştirin. Her 60 mililitrelik numune için dört tüpün, santrifüjleme sırasında bazı kapak camlarının düşmesi ve kırılması durumunda olduğunu unutmayın.

Döndürme işlemi tamamlandıktan sonra, kapak camını kaldırın ve bir cam slayt üzerine koyun, ardından slaytı bir kurşun kalem veya keçeli kalemle etiketleyin. Çok fazla kapak camı kırılması meydana gelirse, tüpün çoğunu şekere doymuş çözelti ile doldurun ve tüpü santrifüjleyin. Şekere doymuş çözelti ile üstüne kadar doldurun, ardından kapak camını yavaşça yerleştirin ve 30 dakika bekleyin.

Mikroskopla pseudocapillaria tomentosa yumurtalarını arayın. 400X büyütmede bipolar tıkaçları tanımlayın. P.tomentosa yumurtaları için karantinada ithal edilen hayvanları taramak için, erkek ve dişi Danio rerio'yu bir tanka koyun ve tanktaki yumurtlama tepsisini ekleyin, ancak burada dışkı toplamak için kullanın.

Bir hafta sonra ıslah cihazını çıkarın ve toplanan çamuru daha önce tarif edildiği gibi ıslah cihazında hasat edin. Bir tankın veya haznenin dibindeki çamuru 60 mililitrelik bir şırınga ile aspire edin ve numuneyi 60 mililitrelik bir tüpe aktarın. Tüpü vidalı kapağı ile kapatın ve tüpü etiketleyin.

Şırıngayı atın. 60 mililitrelik tüpü çalkalayın ve 15 mililitreyi 15 mililitrelik bir tüpe aktarın. Tüpü vidalı kapağı ile kapatın ve tüpü etiketleyin.

15 mililitrelik tüpü, yerçekiminin 175 ila 250 katı hızda, salıncak kovalı bir santrifüjde on dakika boyunca santrifüjleyin. Tüpleri boşaltın ve tortuyu tüpte tutun. Dış ambalajı çıkararak swabı kınından çıkarın ve steril pamuk ucunu havaya maruz bırakın.

Tüpteki tortuyu 15 saniye boyunca temizleyin. Swabı geri kılıflayın veya ucunu steril bir santrifüj tüpüne kırın. Örneği etiketleyin.

Eksi 80 santigrat derecede dondurun ve PCR testi için gönderin. Test edilen 115 balığın karter sürüntü yöntemi kullanılarak, numunelerin yüzde beşinde Mycobaterium chelonae ve yüzde üçünde Mycobaterium haemophilum tespit edildi ve tanımlanan tek patojenik tür oldu. Aynı sistemlerden, 49 karter sürüntüsü, beş Mikobateryal türün varlığını ortaya çıkardı.

Olasılık oranları, yüzey karteri sürüntü tekniğinin, zebra balığı tesisini Mycobacterium için taramak için tek başına nöbetçilerin kullanımına değerli bir alternatif olduğunu göstermektedir. Çevresel örnekler ayrıca balık, çamur ve yüzey örneklerinde tespit edilen Aeromonas hydrophila'yı taramak için de kullanıldı ve önerilen tekniklerin balık biyotopunu tarama yeteneğini destekledi. Mycobacterium chelonae ve Mycobacterium fortuitum, yüzey karter sürüntülerinde PCR ile balık örneğine göre daha sık tespit edilir.

Bir kez ustalaştıktan sonra, örnekleme sadece birkaç dakika sürer ve psödocapillaria tomentosa yumurtalarının tespiti bir saat içinde yapılabilir. Bu teknik, çevresel taramayı rutin sağlık izleme programının önemli bir parçası haline getirir. Bu yöntemler, bakteri biyofilmi ve bakteriyel enfeksiyon arasındaki ilişki gibi balık patolojisi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.