Name: Ölçme ve Modelleme Kontraktil Kurutma İnsan stratum korneumdaki (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-01T10:30:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Keşfedin insan stratum korneumunda kontraktil kurutma ölçme ve modelleme yöntemini. Bu teknik, kozmetik biliminde cilt biyomekaniğini ve kimyasal tedavilerin etkilerini hızlıca değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarların teşekkür hakkı yok.

Bir muaf onayı (3002-13) CFR 46,101 45 (b) (4) verildi, de tanımlanan Sağlık Bakanlığı&#39;na göre doku örnekleri ve İnsan Hizmetleri düzenlemeleri kullanarak araştırma yürütmek için. Tam kat deri elektif cerrahi alınır. Bu makalede, doku kaynağı 66 yaşındaki Kafkas kadın meme olduğunu. Elastomer Kaplı lameller hazırlanması 1. <ol><li> 20 mL&#39;lik bir cam şişeye, 5,893 g baz ile Sylgard 184 sertleştirme maddesinin 0.107 g karıştırın. toplam karışım kütlesi 55 ajan oranı kür için bir baz ile 6 gr: 1. </li><li> homojenliği sağlamak için bir cam çubuk ile karıştırma sonra tüm kabarcıklarını çıkarmak için bir vakum bölmesi ve gazını cam şişe yerleştirin. </li><li> bir eğirme kaplayıcı merkezinde bir cam kapak-slip (55 mm x 25 mm) yerleştirin. kapak kayma merkezi üzerine karışımı ~ 1 ml ekleyin. makasla kesilmiş ucu ile 5000 mcL pipet kullanın. Spin kat 60 saniye süreyle 2,000 rpm&#39;de kapak-slip. <ol><li> Bu p tekrarlayınroses 5-6 yüzeyler oluşturmak için. </li></ol></li><li> 60 ° C&#39;de 12 saat boyunca bir fırın içinde kapak slipleri Cure. </li><li> kısmen kurban substrattan elastomer filmi kaldırmak için bir jilet kullanın. elastomer film ve maruz cam topside işaretlemek için silinmez bir kalem kullanın. </li><li> ters bir mikroskop örnek monte edin ve iki işaretleri odak düzlemleri arasındaki z yükseklik farkını kaydetmek için bir uzaktan odak aksesuarını kullanın. Bunun, elastomer tabaka kalınlığı, h karşılık gelir. </li></ol> Stratum corneum&#39;un 2. Hazırlık <ol><li> 60 ° C yarım deiyonize su (DW) ile doldurulmuş, cam kabı ısıtmak için bir su banyosu ya da ısıtılmış bir karıştırma plakası kullanın. biyolojik güvenlik kabini içinde, 4 dakika boyunca suda tam kat insan derisini batırmayın. </li><li> Hemen DW 4 dakika boyunca 10 ° C &lt;soğutuldu ihtiva eden bir beher içine deri örneği aktarın. beher dolgu yarısı biyolojik tehlikesi olan materyallerle sıçramasını en aza indirir. </li><li> bükülmüş burunlu doku bir cımbız kullanarak epidermis izole hafifçe bir Petri kabındaki beher, yerden deri kaldırmak ve. </li><li> gazlı bez ile kaplı bir Petri kabındaki aşağı izole epidermis bazal tarafını yerleştirin. bazal tabaka tamamen gazlı bez ile temas halinde olduğundan emin olun. <ol><li> % 0.25 (ağırlık / hacim), oda sıcaklığında, 6-8 saat boyunca, 0.1 M fosfat tamponlu tuzlu su içinde eritilmiş IX-S, domuz pankreas tripsin solüsyonu türü gazlı bekletin. tül ıslak kapta yalnızca yeterli tripsin ekleyin. </li></ol></li><li> Doku cımbız ile gazlı bez kaldırın ve kısmen DW ile dolu bir kap içinde yüzer. Yavaşça gazlı ayırmak için SC çekin. </li><li> SC bağlı kalır bakiye epidermal doku kaldırmak için DW stratum corneum 3-4 kez yıkayın. </li><li> DW% 0.4 Glycine max (soya fasulyesi) tripsin inhibitörü çözeltisi izole SC Float. 10 dakika boyunca doku ajite bir plaka çalkalayıcı kullanın. </li><li> kısmen Petri kabındaki SC FloatDW ile dolu. 10 dakika boyunca doku ajite bir plaka çalkalayıcı kullanın. </li><li> oda sıcaklığında 48 saat süre ile ultra ince plastik ağ izole SC tabaka kurutulur (25 ° C,% 40 bağıl nem (RH)). </li><li> mesh SC ayırın ve yuvarlak bir delik yumruk kullanarak bireysel dairesel R = 3 mm yarıçaplı örnekleri kesip. Mark silinmez bir kalem kullanarak küçük bir sarmal işareti dışarıdaki yüz merkezi. Bu SC topside tanımak için görsel bir ipucu sağlar. NOT: silinmez işareti kurutma deformasyonlar küçük olacak numunenin merkezinde, uygulanmalıdır. Bu kaydedilen kurutma deplasman profilleri üzerinde işaretleyici etkisini en aza indirecektir. </li></ol> 3. Numune Tedavi ve Biriktirme <ol><li> 90 uL, floresan markör boncuk içeren 15 ml DW 30 dakika boyunca SC örnekleri karıştırın (505/515 nm, 1 mikron çapında, karboksilat-değiştirilmiş). Bu mevduat SC yüzeyine boncuk Not: birlikte l çökelmesiSC boncuk arge sayılar, sonradan elde edilebilir düzlem deformasyon alanları uzaysal çözünürlüğü boncuklar mevcut 12 olmadan numunelerin marjinal yavaş kuruma göreli maksimize edecek olabilir. Ilave tanecik hacmi seçimi bu nedenle özel yapılmalıdır. </li><li> SC örnekleri çıkarın ve kısmen DW ile dolu bir Petri kabındaki koyun. </li><li> Kısmen 15-30 ° sığ bir açıyla DW bir substratı batırmayın. </li><li> substrat ve su arayüzü arasındaki temas hattında yüzen SC numunenin bir kenar sabitleyin. Dikey sorunsuz kırışıklıklar ya da sıkışan hava kabarcığı olmadan substrata SC örnek laminat olacaktır sudan substratın çekilmesi. </li><li> Adımı yineleyin 3.4 her yüzey üzerine 6 SC örneklerinin kadar koyun. numuneler arasında en az 2-3 mm boşluk bırakın ve yüzey kenarına yakın örnek laminasyon kaçının. Bu başka bir örnek etkileyen kurutma değiştirmeler kurumasını engeller. </li&gt; <li> 60 dakika boyunca laboratuvar koşullarında monte SC örnekleri kurulayın. Bu SC ve alt tabaka arasındaki artık su buharlaşmaya izin verir ve tam doku yapışmasını sağlar. Not: Bu noktada, SC örnekleri zaman gerekli bir süre için istenen bir çözelti içinde alt üst tabakaları yerleştirerek bir kimyasal ya da kozmetik formülasyonlarda 7, 8 ile birlikte tedavi edilebilir. Tedavi aşamasında bir kez adımı yineleyin 3.6 gerçekleştirilir. Kurutma işleminden sonra, alt-tabaka SC örneklerinin tam olmayan yapışma geçen ışık mikroskobu kullanılarak kontrol edilebilir. SC numune veya delamine kenarları altında sıkışıp kabarcıklar iyi tanımlanmış kenarları numunedeki net kontrast varyasyonları oluşturacaktır. </li><li> kısmen hava geçirmez şekilde kapatılmış bir kap içinde su ile dolu bir Petri kabı yerleştirerek bir rutubet gözünün oluşturun. </li><li> 24 saat boyunca bölme içine bir yer alt-tabakalar% 99 nispi neme dengelenmeye. Petr içine substratlar koymayınBen çanak. </li></ol> 4. Mikroskop Çevresel Kontrol <ol><li> Bir mikroskop monte perfüzyon odasına bağlı bir nem kontrol sistemi ile çevresel koşulların kontrolünü elde edin. Nem kontrol sistemi ayrıntıları ve ark Almanca verilmiştir. (2013) 7 ve Liu ve Alman (2015) 8. </li><li> , Mikroskop alt tabakayı monte alt tabaka üzerine perfüzyon odasına yerleştirin ve vakum gres kullanarak elastomer perfüzyon odasının kenarları mühür. </li><li> Bir kez monte önce deneye% 99 RH iç hava dengelenmesi. Bu deney öncesinde suyun buharlaşmasını önler. bölümleri 5 veya 7 görüntüleme başladıktan sonra, istenen değere iç hava nemi azaltır. NOT: Bu yazıda, SC örnekleri% 25 RH kurutulur </li></ol> Düzlem Kurutma Ötelenmeler 5. Görüntüleme <ol><li> ters bir microsco kullanarak SC örneklerinin görüntülerini elde1X objektif lens ile pe. FITC filtresi (503-530 nm emisyon bant geçişi) ile hafif bir motoru kullanarak floresan boncuk Excite. Çoklu numuneler otomatik xy sahne kullanarak kuruma boyunca sırayla görüntülenebilir. </li><li> Kayıt floresan ve 1392 x 1040 piksel çözünürlükte bir dijital CCD kamera kullanılarak iletilen ışık görüntüler. her görüntünün görüş alanı tam SC örneği yakalamak için tek bir görüntü sağlayan 8.98 x 6.71 mm vardır. 16 saat 10 dakikalık bir frekans ile görüntü alabilir. </li></ol> Kalınlığı Ölçüm 6. Yüzey Hazırlığı <ol><li> Bazı küçük plastik kap, bir kimyasal davlumbaz, 1 ml silan (≥98% 3-aminopropiltrietoksisilan) yerleştirin. Bölüm 1 ve 5 saat için bir sızdırmaz kılınmış bir kap içinde kapağından elastomer tabakaları yerleştirin. substratlar silan ile doğrudan temas etmesine izin vermeyin. </li><li> 1.5 ml bir tüp içinde (≥99% etilkarbodiimid hidroklorid - - (3-Dimetilaminopropil) N) 5 EDC mg ekleyin. 50 ekleEDC için DW 0 uL. vorteks karıştırıcı ile 10 saniye için çözüm çalkalayın. </li><li> 20 ml DW 0.076 g sodyum tetraborat ve 0.1 g borik asit ekleyin. 70 ° C&#39;de (1 saat), bir manyetik karıştırıcı kullanılarak karıştırılır. pH 7.4 olana kadar borik asit ekleyin. </li><li> 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpüne borat tamponu 20 mL ekleyin. borat tamponu 1 um boncuk (535/575 nm, karboksilat ile modifiye edilmiş) 60 ul ekle. Son olarak, 200 uL EDC çözüm şişe ekleyin. 10 cm çapında Petri kabı içine dökün sonra boncuk çözüm karıştırmak ve tüp sallayın. </li><li> kaptan silanlanmış substratları çıkarın ve onları boncuk çözeltisi içine aşağı film tarafı elastomer yerleştirin. sıkışma kabarcıklarını engellemek için çok yavaş yapın. İki substrat her Petri kabındaki uyacaktır. </li><li> 45 dakika boyunca damla çözeltisi içinde yüzer tabakaları bırakın. </li><li> Daha sonra, boncuk çözeltisinden yüzeyler kaldırmak bağlanmamış boncuk kaldırmak için DW durulama için cımbız kullanın. </li><li> Hava yüzeyler kurutun. üzerinde basınçlı hava üflemeelastomer film yüzeyi su lekeleri oluşmasını azaltır. </li><li> SC örnek birikimi kadar boncuk foto-ağartma önlemek için bir opak kutuya yüzeylerde Seal. </li></ol> SC 7. Görüntüleme Kalınlığı <ol><li> Ancak bölüm 3. kullanarak bir alt tabaka üzerine Mevduat SC örnekleri, DW floresan boncuk eklemeden adımı 3.1 gerçekleştirin. Buna ek olarak, adım 3.6 tamamlamadan önce bir pipetle her bir biriktirilmiş SC numunenin yüzeyine seyreltilmemiş floresan markör boncuk çözeltisi (505/515 nm, 0.1 mikron çapında) içindeki bir 5 uL damla uygulanır. </li><li> 40X objektif lens ile mikroskop kullanılarak SC kalınlığı ölçümlerini kurmak. SC-substrat arayüzü bulunan iki boncuk tabaka odak düzlemleri ve SC üst tarafında arasındaki z yükseklik farkını kaydetmek için bir uzaktan odak aksesuarını kullanarak zamanla SC örneklerinin kalınlığını ölçün. </li><li> 3 saat kuruma süresi boyunca her SC örnek 3 bölgelerin kalınlığı ölçülür. KalınlıkSC örnekleri bu zaman dilimi 8 içinde kararlı durum değerine ulaşır. </li></ol> 8. ükler ve Modelleme Doku Deformasyon <ol><li> Kaydedilen her zaman adımında floresan görüntüleri mekansal çözülmesi düzlem kurutma deplasmanları elde etmek için parçacık görüntüleyerek hız ölçümü 13 kullanın. </li><li> Her radyal simetrik SC numunenin deplasman alanından azimut ortalama radyal ve azimuthal deplasman profilleri elde etmek için MATLAB kullanın. NOT: Bir örnek veri kümesi (başlıklı &#39;d.mat&#39;) ve bu adımı ve adımı 8.3 hem de gerçekleştiren MATLAB kodu (başlıklı &#39;PIV-processing.m&#39;) ek bilgi sağlanmıştır. </li><li> Bir küçülen doğrusal elastik dolaşım sistemlerini olarak kuruma SC açıklayan bir model 7, 8, 14, 15, 16 radyal deplasman profilleri FitE. SC varsayalım bir esneme modülü olan bir deforme olabilir esnek bir yüzeye yapıştırılır kalınlığı H SC, çapındaki, Rı ve elastik modülü, E SC, değişen zaman R disk iyi tanımlanmış ve sürekli Poisson oranı, ν SC = 0.4 7 8. Minimum en küçük kareler yaklaşımı kullanarak en iyi uyuyor edinin. NOT: montaj için kullanılan model modifiye Bessel fonksiyonları açısından radyal yer değiştirmelere açıklar gibidir: <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq2.jpg" /> (1) ile <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq3.jpg" /> , <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq4.jpg" /> ve <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq13.jpg" /> Dönem <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq6.jpg" /> tarafından verilen penetrasyon derinliğine karşılık gelir, <img alt= &quot;Denklem&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 55336 / 55336eq7.jpg&quot; /&gt;. <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq8.jpg" /> Bir alt-tabaka sertliği parametresini gösterir; geçerli örnek boyutları alt tabaka kalınlığının çok daha büyük olduğunda. Burada, parametreler, <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq9.jpg" /> ve <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq10.jpg" /> sırasıyla substrat kalınlığı Poisson oranı ifade etmektedir. Silikon elastomer substrat 17 Poisson oranı ν = 0.5 olduğunu. </li><li> Model parametreleri radyal yer değiştirme profilinin Eşitlik (1) arasında uygun en küçük kareler, her adımda a ve β elde edilir. <ol><li> Ifadesini kullanarak, SC elastik modülü, E SC elde etmek için uydurma parametre p istihdam <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq11.jpg" /></li><li> kasılma kurutma stre değişen zaman elde uydurma parametre a&#39;yı kullanınss, PSC, ifadesini kullanarak, <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55336/55336eq12.jpg" /></li></ol></li></ol>

<ol><li>Van Hal, D., Jeremiasse, E., Junginger, H. E., Spies, F., Bouwstra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+fully+hydrated+human+stratum+corneum%3A+a+freeze-fracture+electron+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Structure of fully hydrated human stratum corneum: a freeze-fracture electron microscopy study.</a> J. Invest. Dermatol. 106 (1), 89-95 (1996).</li>
<li>Norlén, L., Al-Amoudi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stratum+corneum+keratin+structure%2C+function%2C+and+formation%3A+the+cubic+rod-packing+and+membrane+templating+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Stratum corneum keratin structure, function, and formation: the cubic rod-packing and membrane templating model.</a> J. Invest. Dermatol. 123 (4), 715-732 (2004).</li>
<li>Liu, X., Cleary, J., German, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+mechanical+properties+and+multi-scale+failure+mechanics+of+heterogeneous+human+stratum+corneum%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">The global mechanical properties and multi-scale failure mechanics of heterogeneous human stratum corneum.</a> Acta Biomater. , (2016).</li>
<li>Geerligs, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGeerligs%2C+M+%22Skin+layer+mechanics%22">Skin layer mechanics</a>. , Technische Universiteit Eindhoven. (2010).</li>
<li>Farage, M. S., Miller, K. W., Maibach, H. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFarage%2C+MS+%22Textbook+of+Aging+Skin%22">Textbook of Aging Skin</a>. , (2010).</li>
<li>Levi, K., Kwan, A., Rhines, A. S., Gorcea, M., Moore, D. J., Dauskardt, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emollient+molecule+effects+on+the+drying+stresses+in+human+stratum+corneum%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Emollient molecule effects on the drying stresses in human stratum corneum.</a> Br. J. Dermatol. 163 (4), 695-703 (2010).</li>
<li>German, G. K., Pashkovski, E., Dufresne, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+treatments+influence+drying+mechanics+in+human+stratum+corneum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomech%22%5BJournal%5D)">Surfactant treatments influence drying mechanics in human stratum corneum.</a> J. Biomech. 46 (13), 2145-2151 (2013).</li>
<li>Liu, X., German, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+barrier+disruption+and+moisturization+on+the+dynamic+drying+mechanics+of+human+stratum+corneum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mech.+Behav.+Biomed.+Mater%22%5BJournal%5D)">The effects of barrier disruption and moisturization on the dynamic drying mechanics of human stratum corneum.</a> J. Mech. Behav. Biomed. Mater. 49 (13), 80-89 (2015).</li>
<li>Levi, K., Weber, R. J., Do, J. Q., Dauskardt, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drying+stress+and+damage+processes+in+human+stratum+corneum%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cosmet.+Sci%22%5BJournal%5D)">Drying stress and damage processes in human stratum corneum.</a> Int. J. Cosmet. Sci. 32 (4), 276-293 (2010).</li>
<li>Levi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+glycerin+on+drying+stresses+in+human+stratum+corneum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dermatol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of glycerin on drying stresses in human stratum corneum.</a> J. Dermatol. Sci. 61, 129-131 (2011).</li>
<li>Fluhr, J. W., Darlenski, R., Surber, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycerol+and+the+skin%3A+holistic+approach+to+its+origin+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Glycerol and the skin: holistic approach to its origin and functions.</a> Br. J. Dermatol. 159 (1), 23-34 (2008).</li>
<li>German, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+drying+stresses+in+stratum+corneum%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous drying stresses in stratum corneum.</a> Biophys. J. 102 (11), 2424-2432 (2012).</li>
<li>Willert, C. E., Gharib, M. <a target="_blank" href="http://link.springer.com/article/10.1007/BF00190388">Digital particle image velocimetry.</a> Exp. Fluids. 10 (4), 181-193 (1991).</li>
<li>Mertz, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaling+of+traction+forces+with+the+size+of+cohesive+cell+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Rev.+Lett%22%5BJournal%5D)">Scaling of traction forces with the size of cohesive cell colonies.</a> Phys. Rev. Lett. 108 (19), 1-5 (2012).</li>
<li>Banerjee, S., Marchetti, M. C. <a target="_blank" href="https://arxiv.org/pdf/1106.0929.pdf">Substrate rigidity deforms and polarizes active gels.</a> Euro Phys. Lett. 96 (2), 28003(2011).</li>
<li>Edwards, C. M., Schwarz, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+localization+in+contracting+cell+layers%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Rev.+Lett%22%5BJournal%5D)">Force localization in contracting cell layers.</a> Phys. Rev. Lett. 107 (12), 128101(2011).</li>
<li>Cesa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterned+silicone+elastomer+substrates+for+high+resolution+analysis+of+cellular+force+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Sci.+Instrum%22%5BJournal%5D)">Micropatterned silicone elastomer substrates for high resolution analysis of cellular force patterns.</a> Rev. Sci. Instrum. 78 (3), 34301(2007).</li>
<li>Wu, K. S., Van Osdol, W. W., Dauskardt, R. H. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/235089062_Mechanical_and_Microstructural_Properties_of_Stratum_Corneum">Mechanical And Microstructural Properties Of Stratum Corneum.</a> Mater. Res. Soc. 724, 27-33 (2002).</li>
<li>Yuan, Y., Verma, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+microelastic+properties+of+stratum+corneum%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surf.+B%22%5BJournal%5D)">Measuring microelastic properties of stratum corneum.</a> Colloids Surf. B. 48 (1), 6-12 (2006).</li>
<li>Christensen, M. S., Hargens, C. W., Nacht, S., Gans, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscoelastic+properties+of+intact+human+skin%3A+instrumentation%2C+hydration+effects%2C+and+the+contribution+of+the+stratum+corneum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Viscoelastic properties of intact human skin: instrumentation, hydration effects, and the contribution of the stratum corneum.</a> J Invest. Dermatol. 69 (3), (1977).</li>
<li>Pailler-Mattei, C., Bec, S., Zahouani, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurements+of+the+elastic+mechanical+properties+of+human+skin+by+indentation+tests%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Eng.Phys%22%5BJournal%5D)">In vivo measurements of the elastic mechanical properties of human skin by indentation tests.</a> Med. Eng.Phys. 30 (5), 599-606 (2008).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu yazıda, dinamik kurutma davranışları ve insan SC mekanik özelliklerini ölçmek için kullanılan bir tekniği açıklar. Daha önce yapılan çalışmalar, bu teknik, genel olarak SC 7, 8 dinamik kuruma davranışı üzerindeki kozmetik temizleyiciler ve nemlendiriciler kullanılan çevre koşulları ve kimyasal ürünlerin etkisini ölçmek için kullanılabileceğini gösterdiler. protokolde önemli adımlar vardır. Birincisi, SC su içeriği ile özellikle şişer; Bu nedenle, SC kalınlığı...

En dış epidermis tabakası veya Stratum corneum (SC), bir lipid bakımından zengin matris 1, 2 çevrili uyumlu korneosit hücrelerden oluşur. SC bileşimi ve yapısal bütünlüğü mikroorganizmalardan istilasını engeller ve mekanik kuvvet ve aşırı su kaybı 4 hem dayanıklı doğru engelleyici özelliğe 3 korumak için gereklidir. Korumak veya cildin bariyer fonksiyonunu aşağılamak için kişisel bakım ürünleri kapasite cilt sağlık ve kozmetik sanayi 5 büyük ilgi olduğunu. Kişisel bakım ürünleri günlük uygulama SC 6, 7, 8 mekanik özelliklerini değiştirmek için bilinmektedir. Örneğin, kozmetik temizleyiciler içinde ihtiva yüzey aktif maddeler önemli ölçüde elastik modül artış ve bir oluşmasına neden olabilirdokusunun eğilimini artırarak SC kurutma gerilmeler, 9, 7 çatlamak. Neredeyse tüm kozmetik nemlendiriciler bulunan gliserol SC yumuşatmak ve doku yırtılması olasılığını azaltarak kuruma gerilmeler 8, 10, 11, birikmesini azaltabilir. Bu makalede açıklanan yöntem, dinamik kurutma davranış ve kontrol ortamları 7 SC kurutma mekanik özellikleri, 8 miktarının yeteneğine sahiptir. Daha önce, bu teknik dinamik kurutma davranış değişiklikleri ve SK doku mekanik özellikleri farklı kozmetik ürünlerin etkisini açıklık yeteneğine sahip olduğu gösterilmiştir. Bu basit bir ile kurutma yer değiştirmeleri uydurma, yumuşak bir elastomer yüzeye yapıştırılır insan SC dokusunun kuruma kaynaklı büzülme miktarının elde edilirkontraktilite modeli ve ardından elastik modülü ayıklanması ve monte profilden stres kurutulması. Birden SC örneklerinin test edilmesi gerekmektedir, bu yöntem, tek eksenli tensometry için daha hızlı bir alternatif, daha az doku kullanır ve örnek alt buharlaşma önleyerek daha fazla fizyolojik olarak uygun kurutma sağlar sunmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Silikon elastomer taban</td><td>Dow-Corning</td><td>1064291</td><td></td></tr><tr><td>Silikon elastomer Kürleme Maddesi</td><td>Dow-Corning</td><td>1015311</td><td></td></tr><tr><td>FluoSpheres Karboksilat 0.1 ve mikro; m sarı yeşil floresan 505/515&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>F8803</td><td></td></tr><tr><td>FluoSpheres Karboksilat 1 ve mikro; m sarı yeşil floresan 505/515&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>F8823</td><td></td></tr><tr><td>FluoSpheres Karboksilat 1 ve mikro; M Nil Kırmızı Floresan 535/575&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>F8819</td><td></td></tr><tr><td>Domuz pankreasından Tripsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6567</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin inhibitörü tip II-s</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9128</td><td></td></tr> <tr><td>(3-aminopropil) trietoksisilan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>440140</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum tetraborat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221732</td><td></td></tr><tr><td>Borik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B0294</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7059</td><td></td></tr><tr><td>N-(3-Dimetilaminopropil)-N-etilkarbodiimid hidroklorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7750</td><td></td></tr><tr><td>Vortekser karıştırıcı</td><td>VWR</td><td>58816-123</td><td></td></tr><tr><td>6 mm çaplı delgeç</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z708860</td><td></td></tr><tr><td>SOLA 6-LCR-SB&nbsp;</td><td>Lummencor hafif motor</td><td>No.3526</td><td></td></tr><tr><td>Cfi Plan Achro Uw 1X Objektif</td><td>Nikon Plan UW</td><td>MRL00012</td><td></td></tr><tr><td>CFI Plan Fluor 40X Yağ Objektif 1.3 na - 0.20&nbsp; mm wd</td><td>Nikon Plan Fluor</td><td>MRH01401</td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ti-U ters mikroskop&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>MEA53200</td><td></td></tr><tr><td>Clara-E Kamera</td><td>Andor</td><td>DR-328G-C02-SIL</td><td></td></tr><tr><td>Uzaktan Odak Eklentisi E-RFA Ergo Tasarım</td><td>Nikon</td><td>99888</td><td></td></tr><tr><td>Ti-S-E Motorlu Sahne</td><td>Nikon</td><td>MEC56110</td><td></td></tr></tbody></table>

Ölçme ve modelleme kontraktil kurutma İnsan stratum korneumdaki

Measuring and Modeling Contractile Drying in Human Stratum Corneum

Stratum korneum (SC) en yüzeysel cilt tabakasıdır. dış çevre ile temasını Bu doku katmanı, temizlik maddeleri ve çevre neminin günlük değişimlerine tabi olduğu anlamına gelir; bunların her ikisi de doku su içeriğini değiştirebilir. Şiddetli bariyer disfonksiyonu veya düşük nemli ortamlarda su içeriğinde azalmalar SC sertliği değiştirebilir ve kurutma stresler birikmesini neden olabilir. Aşırı durumlarda, bu faktörler dokunun mekanik kopma neden olabilir. Bu kurutma üzerine SC mekanik özellikleri dinamik değişimleri miktarının bir yüksek verimli bir yöntem oluşturmuştur. Bu teknik kurutma davranış değişiklikleri ve kozmetik temizleyici ve nemlendirici tedaviler ile SC mekanik özelliklerini ölçmek için kullanılabilir. Bu bir elastomer bir yüzeye yapıştırılır, dairesel doku örneklerinin uzamsal olarak çözündürülerek düzlem kurutma değiştirmeler dinamik varyasyonları ölçülerek elde edilir. Düzlem bir radyal kayma AKAKurutma sırasında edinilmiş azimut ortalama ve doğrusal elastik kontraktilite modeline dayalı bir profil ile donatılmıştır. Kurutma stres ve SC elastik modülü dinamik değişimler daha sonra monte modeli profilleri elde edilebilir.

Şekil 1 (a) flüoresan boncuklar (bölüm 3) ile kaplı bir SC numunenin temsili bir floresan görüntü gösterir. Örnek mukabil geçen ışık görüntü (b) &#39;Bağlı örneklerin dairesel simetriye% 25 bağıl nemde 16 saat kurutulduktan sonra meydana uzamsal olarak çözündürülerek kurutma değiştirmeler bir titreme arsa ile kaplanmış 1, Şekil&#39; de gösterilmiştir, bu yer değiştirmeler azimut olabilir ortalama. Şekil 1 (c) ve azimutha...

Bu makalede, uzamsal bir elastomer bir yüzeye yapıştırılır, dairesel doku örneklerinin düzlem kurutma değiştirmeler çözüldü ölçme dinamik kurutma davranış ve startum corneum&#39;un mekanik özelliklerinin ölçülmesi için bir yöntem tarif eder. Bu teknik, kurutma ve doku mekanik özelliklerini değiştirmek ne kadar farklı kimyasal işlemler ölçmek için kullanılabilir.

Ölçme ve Modelleme Kontraktil Kurutma İnsan stratum korneumdaki

Stratum corneum (SC) is the most superficial skin layer. Its contact with the external environment means that this tissue layer is subjected to both ...

Bu yöntemin genel amacı, farklı kimyasal işlemler sonrası insan stratum corneum ex vivo örneklerinde dinamik mekanik sertliği ve kuruma streslerinin oluşumunu nicelendirmektir. Bu yöntem, stratum corneum bileşiminin veya cilt dokusunun kişisel bakım ürünleri ilele tedavi edilmesinin, mekanik özelliklerini ve dinamik kuruma davranışını nasıl etkileyebileceği gibi biyomekanik ve kozmetik bilim alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, diğer mekanik değerlendirme yöntemlerine göre daha hızlı bir alternatif sunması, önemli ölçüde daha az cilt dokusu gerektirmesi ve örneğin alt kısmından buharlaşmayı önleyerek fizyolojik açıdan daha ilgili bir kuruma sağlamasıdır.Elastomer kaplı lamel camlar hazırlamak için, önce Sylgard 184 kürleme ajanını, baz katılarıyla 55'e bir baz-kürleme ajanı oranında, homojen hale gelene kadar karıştırın. Toplamda altı grama ihtiyaç vardır. Ardından, solüsyonun gazını alın.Ardından, lamelleri kaplamak için çözeltiyi bir spin kaplama cihazında kullanın. Geniş ağızlı bir pipet yardımıyla, karışımın bir mililitresini bir lamelin merkezine damlatın. Ardından lameli 2, 000 rpm hızında 60 saniye boyunca spin kaplamaya tabi tutun.Bu yöntemle beş veya altı adet kaplanmış lamel hazırlayın. Lamelleri kürlemek için 60 °C'lik fırında 12 saat bekletin. Ertesi gün, elastomer filmlerin kalınlıklarını ölçün.Elastomer filmin bir kenarını lamelden kaldırmak için bir jilet kullanın. Ardından, elastomer filmin üst tarafını ve altındaki işlem görmüş lameli işaretlemek için silinmez bir kalem kullanın. Şimdi, bir evirtilmiş mikroskop kullanarak, film kalınlıklarını ölçmek için işaretlerin odak düzlemleri arasındaki Z yüksekliğini ölçün.SC dokusunu hazırlamak için standart prosedürleri uygulayın. Numuneleri oluşturmak için, SC'den altı milimetre çapında biyopsiler alın. Numunelerin en dış yüzeyinin merkezine silinmez bir kalemle işaret koyun. Ardından, numuneleri yaklaşık 90 µL boncuk konsantresi içeren 15 mL su içerisinde yüzdürerek, SC yüzeyine floresan işaretleyici boncuklar yerleştirin.30 dakika boyunca hafifçe ajite edin ve boncuk konsantrasyonunu gerektiği gibi ayarlayın. İşlemden sonra, her bir örneği elastomer üzerine monte etmek için suya daldırın. Kaplamalı bir lamı, elastomer SC'nin alt tarafına bakacak şekilde, SC'nin altına 15 ila 30 derecelik sığ bir açıyla yerleştirin. Ardından, SC yukarıya yapışmış halde lamı sudan kaldırarak SC örneğini kırışıklık veya hapsolmuş hava olmadan pürüzsüzce lamine edin.Ardından, monte edilen numuneleri ortam koşullarında yaklaşık bir saat boyunca kurutun. Kuruma tamamlandığında, numuneleri içinde bir kap su bulunan hermetik olarak mühürlenmiş bir hazneye aktarın. Numunelerin neme dengelenmesi için 24 saat bekleyin.Ertesi gün, uzun süreli bir görüntüleme oturumu için bir örneği perfüzyon odasına monte edin. Perfüzyon odasını substratın üzerine yerleştirin ve perfüzyon odasının kenarlarını vakum gresi kullanarak elastomere sızdırmaz hale getirin. Ardından, tüm SC örneğini yakalayacak kadar geniş bir görüş alanı ile floresan ve geçirgen ışık görüntülerini kaydedin.Sonraki 16 saat boyunca, her 10 dakikada bir görüntü alın. Kimyasal çeker ocakta, küçük bir plastik kapağa bir mililitre silan doldurun. Kapağı, doğrudan temas etmeyecek şekilde, bir adet elastomer astarlı lamet içeren sızdırmaz bir kaba yerleştirin.Bunları oda sıcaklığında beş saat boyunca inkübe edin. Bekleme süresince, metin protokolüne uygun olarak 20 mililitre boncuk çözeltisi hazırlayın ve ardından bunu 10 santimetrelik bir kaba boşaltın. Beş saat sonra, silanlanmış substratları elastomer tarafı aşağı gelecek şekilde yavaşça boncuk çözeltisinin içine yerleştirin.Her bir kaba iki substrat yerleştirin ve substratların boncuklarla 45 dakika boyunca reaksiyona girmesini bekleyin. Daha sonra, cımbız kullanarak substratları çıkarın ve bağlanmamış boncukları uzaklaştırmak için distile su ile durulayın. Ardından, substratları hafif bir basınçlı hava akımı altında kurutun ve sızdırmaz, opak bir kutuda saklayın.Önceden açıklanan tekniği kullanarak, SC örneklerini bir su banyosunda işlem görmüş bir substrata aktarın. SC'yi monte ettikten hemen sonra, üzerine beş mikrolitre seyreltilmemiş floresan işaretleyici boncuk çözeltisi damlatın. Ardından SC'nin 60 dakika boyunca kurumasına izin verin.Şimdi, bir perfüzyon odası içindeki 40x objektif lensli mikroskobu kullanarak SC kalınlığını ölçün. İki boncuk tabakası arasındaki Z yüksekliği farkını kaydetmek için uzak odaklama aksesuarı kullanarak SC kalınlığını zaman içinde ölçün. Tabakalardan biri SC substrat arayüzünde, diğeri ise SC'nin üzerindedir. Açıklanan teknikler kullanılarak bir SC örneği hazırlandı ve floresan boncuklarla kaplandı.%25 bağıl nemde 16 saatlik kurutmanın ardından yer değiştirmeler ölçüldü. Numunelerin dairesel simetrisi nedeniyle, bu yer değiştirmelerin azimut ortalamaları alındı. Kurutma boyunca azimut yer değiştirmeleri küçük kalmaktadır.Buna karşın, radyal yer değiştirme profilleri merkezden kenara doğru monotonik olarak artmış ve bir dengeye ulaşılana kadar büyüklükleri artmaya devam etmiştir. 30 dakikalık aralıklarla kaydedilen profiller, düzlem içi yer değiştirmelerin zamana bağlı gelişimini göstermektedir. Ortalama SC kalınlığı, özellikle ilk iki saat boyunca kuruma sırasında azalmıştır.Ardından, yer değiştirme profilleri minimum en küçük kareler yaklaşımı kullanılarak doğrusal, elastik bir kontraktilite modeline uydurularak kuruma dinamiği analiz edildi. Bu modelden, elastik modülün yanı sıra kontraktil kuruma gerilmesi elde edildi. Her iki parametre de kurumanın ilk iki saati boyunca hızla arttı.Bu prosedür uygulanırken, örneklerin substrata tamamen yapıştırıldığından emin olmak önemlidir. Bu prosedürün ardından, belirli kozmetik tedavilerin doku lipid kompozisyonunu nasıl değiştirdiği gibi ek soruları yanıtlamak için lipid boyama gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

measuring-and-modeling-contractile-drying-in-human-stratum-corneum

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu videoda, melanom ilerlemesini incelemek için in vitro 3D organotipik cilt rekonstrüksiyonları oluşturmak için ayrıntılı protokol açıklanmaktadır. Bu cilt modeli, in vivo organların hem mimarisini hem de çok hücreli karmaşıklığını taklit eder.

Organotipik Tam Cilt Rekonstrüksiyonlarının Oluşturulması: İnsan Derisi Örneklerini Kullanarak 3D Cilt Modeli Oluşturma Prosedürü

Bu protokolün amacı, doğal cilde benzeyen üç boyutlu tam kalınlıkta bir cilt eşdeğeri oluşturmaktır. Özel olarak yapılmış bir otomatik yaralama cihazı ile, sterilitenin korunması altında hassas ve tekrarlanabilir yaralar oluşturulabilir.

Üç-boyutlu Tam Kalınlığı Deri Üretimi Eşdeğer ve Otomatik Yaralama

Bu makromoleküler Crowders (MMC) kullanarak, hücre dışı matris protein açısından zengin hücre-türevi matrisleri elde etmek için bir protokol mevcut. Buna ek olarak, yapının vadesinin korurken kültür süresini azaltır 3D Organotipik bir deri ko-kültür üretimi bölgesi MMC içeren bir protokol mevcut.

Geliştirilmesi 2D ve 3D Cilt<em&gt; İn Vitro</emMakromoleküler Dışlamasını Kullanma&gt; Modeller

hava-sıvı kristal arayüzünde megamolecular biyopolimerlerin kurutma kaynaklı kendini entegrasyon için bir yöntem olup burada sağlanır. Bu metodoloji Biyopolimerlerin makroskopik potansiyellerini anlamak için değil, aynı zamanda biyomedikal ve çevre alanlarında yumuşak malzemeler için bir değerlendirme yöntemi olarak sadece yararlı olacaktır.

Kurutma Hava-LC Arayüz üzerinde Megamolecular Biyopolimerlerin Kendinden entegrasyonu için Yöntemler

Burada, spektral dış atriden çıkarılması ve daha sonra temel özelliklerin çıkarılması için kemometrik yaklaşımlar ile birlikte klinik çalışmalarda insan deneklerinden konfokal Raman spektrasının toplanması için bir protokol saklıyız.

Stratum Corneum'un In Vivo Confokal Raman Spektrumlarından Kemometrik Yaklaşımla Su, Protein ve Lipidlerin Çözülmesi

Bu protokolün amacı, farklı yapay gözyaşı formülasyonlarının bir in vitro model kullanarak insan kornea epitel hücrelerinin desiccation'dan korunup korunamayacağı değerlendirmedir. Yapay gözyaşı formülasyonlarına ve desiccation maruz kaldıktan sonra, insan kornea epitel hücreleri metabolik aktivite için değerlendirilir.

Yapay Gözyaşı Formülasyonlarının Desiccation'a Maruz Kalma sonrası İnsan Kornea Epitel Hücrelerinin Metabolik Aktivitesi Üzerine Etkisi

Bu protokol, üç boyutlu yeniden oluşturulmuş insan epidermisini tekrarlanabilir ve sağlam bir şekilde yetiştirmek için basit bir yöntemi açıklar. Ek olarak, epidermal bariyer modelinin yapı-işlev ilişkisini karakterize eder. Yeniden inşa edilen insan epidermisinin proinflamatuar uyaranlar üzerine biyolojik tepkileri de sunulmaktadır.

Büyük Ölçekte Üç Boyutlu Yeniden Yapılandırılmış İnsan Epidermisi Yetiştirmek

Descemet's Stripping Only, Fuchs Endotelyal Kornea Distrofisinden kaynaklanan merkezi kornea guttası olan hastalarda, periferik hücrelerin endotel tabakasını yenilemesi için Descemet'in zarının sıyrıldığı deneysel bir prosedürdür. Bu yazıda, eFGF1 (NM141) tarafından uyarılan hızlandırılmış iyileşme ile distrofik insan kornealarında ex vivo'da DSO'yu simüle eden yeni metodoloji sunulmaktadır.

Descemet'in Sadece Mühendislik Fibroblast Büyüme Faktörü 1 Tarafından Uyarılan Hızlandırılmış İyileşme ile Sıyırılmasının İnsan Kornea Organ Kültürü Modeli

Kas-iskelet sistemi yaralanması ile ilişkili yara iyileşmesinin incelenmesi genellikle Schwann hücreleri (SC'ler), keratinositler ve fibroblastlar arasındaki in vitro etkileşimlerin değerlendirilmesini gerektirir. Bu protokol, bu birincil hücrelerin insan sünnet derisinden izole edilmesini, kültürlenmesini ve karakterizasyonunu açıklar.

İnsan Sünnet Derisinden Primer Schwann Hücrelerinin, Keratinositlerin ve Fibroblastların İzolasyonu, Kültürü ve Karakterizasyonu

Bu protokol, klinik öncesi gelişim sırasında ilaca bağlı kontraktilitedeki değişiklikleri değerlendirmek için güvenilir bir platform olan MyoBLAZER sistemi ile donör kalplerinden alınan yetişkin insan primer kardiyomiyositlerinde kontraktilitenin nasıl ölçüleceğini açıklar.

İzole Yetişkin İnsan Primer Kardiyomiyositlerinde Kalp Kontraktilitesinin Ölçülmesi

Burada, bir hücre kültürü laboratuvarında rutin araştırmalar için çeşitli 3D cilt modellerini tanıtmak için ucuz ve basit prosedürler sunuyoruz. Araştırmacılar, ticari olarak mevcut modellere güvenmeden ihtiyaçlarına göre uyarlanmış modeller oluşturabilirler.

Çok Sayıda Uygulama için Cilt Modelleri Oluşturma - İki Boyutlu (2D) Monokültürden Üç Boyutlu (3D) Çoklu Kültüre

Keşfedin insan stratum korneumunda kontraktil kurutma ölçme ve modelleme yöntemini. Bu teknik, kozmetik biliminde cilt biyomekaniğini ve kimyasal tedavilerin etkilerini hızlıca değerlendirmeye yardımcı olur.

Ölçme ve Modelleme Kontraktil Kurutma İnsan stratum korneumdaki

Daha fazla video keşfet