Tanımlı ve hepatosit benzeri Hücrelerinin Ölçeklenebilir Nesil insan pluripotent kök hücreleri gelen

Bu protokolün genel amacı, tanımlanmış koşullar altında rekombinant laminin matrisleri kullanarak pluripotent kök hücrelerden insan hepatosit benzeri hücreler üretmektir. Bu yöntem, kullanıcının çanaktaki karaciğer biyolojisini incelemek için fonksiyonel insan hepatositlerini özel olarak yapmasına olanak tanır. Bu tekniğin temel avantajı, tanımlanmış doğasının, yüksek derecede deneysel tekrarlanabilirlik ile hepatositlerin seri üretimine izin vermesidir. Deneye başlamak için, mililitre başına 100 mikrogram rekombinant laminin-521 veya LN-521'i dört santigrat derecede çözün.Çözülmüş LN-521'i buz gibi soğuk 1xDBPS'de kalsiyum magnezyum ile seyreltin ve mililitre başına beş mikrogram çözelti yapın. Altı kuyulu bir plakanın bir kuyusunu kaplamak için mililitre başına beş mikrogram LN-521 çözeltisinden bir mililitre ekleyin ve kuyuya eşit şekilde yaymak için plakayı sallayın. Daha sonra, plakaları acil kullanım için en az iki saat boyunca 37 derece Santigrat %5 CO2 hücre kültürü inkübatöründe inkübe edin. Kaplanmış plakayı inkübatörden doku kültürü başlığına alın. Kaplanmış yüzeye zarar vermeden kaplama LN-521 çözeltisini dikkatlice aspire edin. Ardından hemen bir mililitre önceden ısıtılmış mTeSR ekleyin