Name: Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Öğrenin vibratome kullanarak organotipik hipokampal dilim kültürü hazırlama tekniğini. Bu yöntem nöroproteksiyon ve tümör hücre davranışları araştırmalarında yüksek kaliteli doku elde etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Christine Auste onun desteğiyle video kayıt ve stadyum Ghadban onun mükemmel teknik destek için teşekkür etmek istiyorum. Urszula Grabiec, Roux Programm FKZ 29/18 tarafından desteklenmiştir.

hayvan deneyleri gerçekleştirilen etik ilke ve nörolojik araştırma hayvanlara kullanım ilkesi doğrultusunda Avrupa Toplulukları Konseyi yönergesi 2010/63/AB tarafından Avrupa Parlamentosu onaylanmış ve bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması üzerinde Avrupa Birliği Konseyi.
 1. Kültür ortam ve aygıtlar hazırlık <ol><li>OHSC hazırlanması için aşağıdaki araç kümesi, kullanın: iki küçük makas, iki eğri cımbız, iyi bir ipucu ile bir cımbız üç Bıçaklar (iki boyutu 11, mevcudu 15 biri), Üç neşter sahipleri, yuvarlak filtre kağıtları (çapı: 35 mm), agar, bir tıraş bıçağı, biri Pasteur pipet değiştirilmemiş ve biri Pasteur pipet bir ipucu olmadan değiştirilebilir. Kullanım ( şekil 1) önce bir otoklav içinde tüm malzemeleri sterilize.</li>
	<li>5 g agar tartmak ve 100 mL distile suda çözülür. Bir otoklav içinde 210.8 kPa, 121.7 ° C'de 20 dk için çözüm sterilize. 3 mL sıvı agar çözüm 60 mm Petri yemeklerinde steril cam pipet kullanarak dağıtmak, 5 h için kuvvetlendirmek, kirlenmesini önlemek ve 4 ° C'de daha fazla kullanmak kadar saklamak için plastik parafin film ile karşılamak izin. Agar blok Dilimleme işlemi sırasında beyin stabilize etmek için gereklidir.</li>
	198 mL en az gerekli orta (MEM) ve 2 mL L-glutamin çözüm <li>medya <ol><li>yapmak 200 mL hazırlık orta (pH 7,35) oluşan (son konsantrasyonu 2 mM). Çözüm medyası hazırlama gününde hazırlamak ve 4'te saklayın ° C.</li>
		<li>100 mL 49 mL MEM, 25 mL Hanks oluşan kültür ortamının hazırlamak &#39; dengeli tuz Çözümleri (HBSS), 25 mL (v/v) normal at serum (NHS), 1 mL L-glutamin çözüm (son konsantrasyonu 2 mM), 100 µg insülin, 120 mg glikoz, 10 mg streptomisin , 10.000 U penisilin ve 800 µg daha önce bildirildiği gibi C vitamini. Orta (37 ° C) sıcak, pH 7.4 ve steril filtre (0.2 µm gözenek boyutu) pH değerine ayarlayın. Orta değiştirmeden önce her iki günde (ısınma pH ayarlama, vb,) yordamı yineleyin. Orta en bir hafta boyunca kullanmak saat 4'te saklandığında ° C.</li>
	</ol></li> <li>Bir 35 mm Petri kabına beyin depolamak için hazırlık orta ile doldurun. Doku üzerinde bir soğutma paketi çalışma alanı içinde toplamak için iki boş Petri tabağı yere.</li>
</ol> 2. Hazırlık ve dilimleme bir Vibratome ile <ol><li>Kullanım beyin 7-9 gün eski fareler veya 4-5 gün Stoppini ve ark göre OHSC hazırlık için eski fareler. 4 sonra işten çıkarma hayvanların, deri kafatasından makasla kaldırmak.</li>
	<li>İyi makas bıçak deliği magnum tanıtmak ve kafatası Kaudal (geri) rostral (açık) ekseni boyunca keserek açın. Yapmak iki makas sırasıyla sol ve sağ kulak doğru işaret böylece ilki için dik keser (&#34; T-kesi &#34;).</li>
	<li>Kafatası beyin zarar değil dikkat iyi Forseps ile dikkatlice açın. Bir neşter (bıçak büyüklüğüne 11) ön direğe ve beyincik en rostral parçası kesmek için kullanın.</li>
	<li>Tarafından bir spatula ile beyin kaldırmak ve hazırlık orta ( Şekil 2) ile dolu Petri kabına dikkatle yer anlamına gelir. Beyin numune tutucu üzerinde konumlandırın ve tıbbi siyanoakrilat yapıştırıcı ile düzeltebilirim. Mekanik stabilizasyon temin için agar parçaları kullanın.</li>
	<li>Yatay olarak 350 µm doku teşrih sürgülü vibratome kullanarak kalın OHSC.</li>
	<li>Optik Binoküler mikroskop kullanma dilim değerlendirin. OHSC düşük kalite hemen atın. Hipokampüs orta kısmından izole olduğu gibi cytoarchitecture ile yalnızca bu dilimleri almak önemlidir (bkz. Şekil 3 ve 4) arasında dorsal ve ventral Hipokampus.</li>
	Hipokampal bölgeyi ve neşter (yuvarlak bıçak büyüklüğüne 15; kullanarak entorhinal korteks <li>ayrı şekil 3). Perforant yolu ve entorhinal korteks korunmalıdır.</li>
	<li>6-8 OHSC her beyin elde edilir. 2-3 dilim içine bir hücre kültür ekleme (gözenek boyutu 0.4 µm) aktarmak ve 1 mL kültür orta iyi ücret içeren bir 6-şey kültür yemeğin bir şey yerleştirebilirsiniz.</li>
	<li>6-iyi yemekler %5 (v/v) CO 2 ile tam olarak oksijen bir ortamda 35 ° C'de kuluçkaya ve hücre kültür orta iki günde değiştirin. 
	Not: 6 gün vitro (div), senin deney. İnflamatuar reaksiyonları Dilimleme yordamı ile ilişkili gün 6 tarafından yok olur. Bu aşamada, mikroglial hücre ramified Morfoloji yeniden göstermek ve sinaptik bağlantıları olgunlaştı.</li>
</ol> 3. Doku niteliğinin <ol><li>fiksasyon, etiketleme ve görsel olarak yozlaşıyor nöronların OHSC <ol><li>deneyler gerçekleştirdikten sonra fiksasyon önce 2 h 5 µg/mL propidium iyodür (PI) ile OHSC içinde kuluçkaya nöronların oluşan bozucu çekirdekleri leke için sipariş. 
		Dikkat: PI şüpheli bir kanserojen, her zaman kişisel koruyucu ekipman (PPE) gibi eldiven giymek.</li>
		<li>0.1 M fosfat tampon (pH 7,4) ile OHSC yıkama ve paraformaldehyde (PFA) 24 h için %4 (v/v) çözeltisi ile tamir 
		Dikkat: PFA şüpheli ve zehirli kanserojen olduğu. İş duman başlık altında ve KKE giymek.</li>
		<li>OHSC ekler 1 mL PBS ile yıkayın ve membran dilimleri ayırmak için bir de fırça kullanın.</li>
		<li>Etiket OHSC IB 4 boya 24-şey plaka ( şekil 5).</li>
	</ol></li> <li>Tek hücreleri iletim tümör işgali deneyler fluorescently kullanarak etiketli <ol><li>bir deney başlamadan önce 24 h etiket tümör hücreleri floresan boya Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl kullanarak Ester (CFDA SE).</li>
		<li>Ayır ve Neubauer odası kullanarak tümör hücreleri saymak.</li>
		<li>Süspansiyon 10 µL istenen cep numarasını (normalde 50.000 veya 100.000 hücreleri) içerir öyle ki Orta, hücrelerde resuspend.</li>
		<li>Hücre süspansiyon dilim kültür üzerine 10 µL uygulayın ve 3 gün boyunca işgal hücrelere izin.</li>
		<li>Deneme sonunda %4 (v/v) İngiltere'de yılın 24 h için kullanma dilim kültürler düzeltmek ve PI başka bir 24 h için cytoarchitecture görselleştirmek için yardımcı kültürlerle etiket. 
		Dikkat: PFA şüpheli ve zehirli kanserojen olduğu. İş duman başlık altında ve KKE giymek.</li>
		<li>Üzerine bir kapak notu montaj medya kullanarak daha ayrıntılı bir çözümleme için ortak kültürler mount.</li>
	</ol></li></ol> 4. OHSC deneyler değerlendirilmesi OHSC confocal lazer mikroskop (CLSM) tarama bir analiz. 543 PI tespiti etiketli, nöronların oluşan bozucu veya cytoarchitecture etiketli PI kullanın monokromatik ışık dalga boyu λ = nm ve emisyon grubu pass filtre dalga boyu λ için 585-615 nm =. Tümör hücreleri veya IB 4 microglia CFDA etiketli, bir uyarma dalga boyu λ kullanmak 488 = nm. Deneysel her iki türü için bir z-yığın 2 µm kalınlığında optik dilim ile kayıt ve değerlendirme için kullanılan.

<ol><li>Gähwiler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+cultures%3A+a+technique+has+come+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice cultures: a technique has come of age.</a> Trends Neurosci. 20 (10), 471-477 (1997).</li>
<li>Bahr, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-Term+Hippocampal+Slices%3A+A+Model+System+for+Investigating+Synaptic+Mechanisms+and+Pathologic+Processes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Long-Term Hippocampal Slices: A Model System for Investigating Synaptic Mechanisms and Pathologic Processes.</a> J Neurosci Res. 42 (3), 294-305 (1995).</li>
<li>Dailey, M. E., Eyo, U., Fuller, L., Hass, J., Kurpius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+microglia+in+brain+slices+and+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protoc%22%5BJournal%5D)">Imaging microglia in brain slices and slice cultures.</a> Cold Spring Harbor Protoc. 2013 (12), 1142-1148 (2013).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> Journal of Neurosci Methods. 37 (2), 173-182 (1991).</li>
<li>Kleinberger-Doron, N., Schramm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+mature+hippocampus+slices+for+4+days+in+a+newly+developed+medium%3A+preservation+of+transmitter+release+and+leucine+incorporation+into+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Culture of mature hippocampus slices for 4 days in a newly developed medium: preservation of transmitter release and leucine incorporation into protein.</a> Brain Res. 533 (2), 239-247 (1990).</li>
<li>Legradi, A., Varszegi, S., Szigeti, C., Gulya, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+rat+hippocampal+slices+as+in+vitro+models+for+neurodegeneration+Studies+on+cell+viability+and+apoptotic+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Adult rat hippocampal slices as in vitro models for neurodegeneration Studies on cell viability and apoptotic processes.</a> Brain Res Bull. 84 (1), 39-44 (2011).</li>
<li>Gähwiler, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+Monolayer+Cultures+of+Nervous+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Organotypic Monolayer Cultures of Nervous Tissue.</a> J Neurosci Methods. 4, 329-342 (1981).</li>
<li>Gähwiler, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+cultures+of+neural+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic cultures of neural tissue.</a> Trends Neurosci. 11 (11), 484-489 (1988).</li>
<li>Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LTP+in+cultured+hippocampal-entorhinal+cortex+slices+from+young+adult+%28P25-30%29+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats.</a> J Neurosci Methods. 130 (1), 19-32 (2003).</li>
<li>Kim, H., Kim, E., Park, M., Lee, E., Namkoong, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23159795">Organotypic hippocamal slice culture from the adult mouse brain: A versatile tool for translational neuropsychopharmacology.</a> Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 41, 36-43 (2013).</li>
<li>Xiang, Z., Hrabetova, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+maintenance+of+mature+hippocampal+slices+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Long-term maintenance of mature hippocampal slices in vitro.</a> J Neurosci Methods. 98, 145-154 (2000).</li>
<li>Adamchik, Y., Frantseva, M. V., Weisspapir, M., Carlen, P. L., Perez Velazquez, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+induce+primary+and+secondary+traumatic+damage+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+rRes+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods to induce primary and secondary traumatic damage in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Brain rRes Brain Res Protoc. 5, 153-158 (2000).</li>
<li>Cho, S., Wood, A., Bowlby, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+slices+as+models+for+neurodegenerative+disease+and+screening+platforms+to+identify+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Neuropharmacol%22%5BJournal%5D)">Brain slices as models for neurodegenerative disease and screening platforms to identify novel therapeutics.</a> Curr Neuropharmacol. 5 (1), 19-33 (2007).</li>
<li>Noraberg, J., Poulsen, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+hippocampal+slice+cultures+for+studies+of+brain+damage%2C+neuroprotection+and+neurorepair%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets+CNS+Neurol+Disord%22%5BJournal%5D)">Organotypic hippocampal slice cultures for studies of brain damage, neuroprotection and neurorepair.</a> Curr Drug Targets CNS Neurol Disord. 4 (4), 435-452 (2005).</li>
<li>De Simoni, A., Griesinger, C. B., Edwards, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+Development+of+rat+CA1+neurones+in+acute+versus+organotypic+slices%3A+role+of+experience+in+synaptic+morphology+and+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">a Development of rat CA1 neurones in acute versus organotypic slices: role of experience in synaptic morphology and activity.</a> J Physiol. 550 (Pt 1), 135-147 (2003).</li>
<li>Poindrom, P., Piguet, P., Förster, E. New Methods for Culturing Cells from Nervous Tissues. , BioValley Karger. Basel, Switzerland. (2005).</li>
<li>Berger, T., Frotscher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+morphological+characteristics+of+oligodendrocytes+in+the+rat+hippocampus+in+situ+and+in+vitro%3A+An+immunocytochemical+study+with+the+monoclonal+Rip+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Distribution and morphological characteristics of oligodendrocytes in the rat hippocampus in situ and in vitro: An immunocytochemical study with the monoclonal Rip antibody.</a> J Neurocytol. 23 (1), 61-74 (1994).</li>
<li>Haber, M., Vautrin, S., Fry, E. J., Murai, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtype-specific+oligodendrocyte+dynamics+in+organotypic+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Subtype-specific oligodendrocyte dynamics in organotypic culture.</a> Glia. 57 (9), 1000-1013 (2009).</li>
<li>Bonde, C., Sarup, A., Schousboe, A., Gegelashvili, G., Zimmer, J., Noraberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotoxic+and+neuroprotective+effects+of+the+glutamate+transporter+inhibitor+DL-threo-beta-benzyloxyaspartate+%28DL-TBOA%29+during+physiological+and+ischemia-like+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Int%22%5BJournal%5D)">Neurotoxic and neuroprotective effects of the glutamate transporter inhibitor DL-threo-beta-benzyloxyaspartate (DL-TBOA) during physiological and ischemia-like conditions.</a> Neurochem Int. 43 (4-5), 371-380 (2003).</li>
<li>Derouiche, A., Heimrich, B., Frotscher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+layer-specific+astrocytic+glutamine+synthetase+immunoreactivity+in+slice+cultures+of+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Loss of layer-specific astrocytic glutamine synthetase immunoreactivity in slice cultures of hippocampus.</a> Eur J Neurosci. 5 (2), 122-127 (1993).</li>
<li>Hailer, N. P., Jarhult, J. D., Nitsch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+microglial+cells+in+vitro%3A+analysis+of+morphology+and+adhesion+molecule+expression+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Resting microglial cells in vitro: analysis of morphology and adhesion molecule expression in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Glia. 18 (4), 319-331 (1996).</li>
<li>Hailer, N. P., Wirjatijasa, F., Roser, N., Hischebeth, G. T. R., Korf, H. W., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+factors+protect+neuronal+integrity+and+reduce+microglial+activation+in+an+in+vitro+model+of+N-methyl-D-aspartate-induced+excitotoxic+injury+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocytic factors protect neuronal integrity and reduce microglial activation in an in vitro model of N-methyl-D-aspartate-induced excitotoxic injury in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Eur J Neurosci. 14 (2), 315-326 (2001).</li>
<li>Bahr, B. A., Kessler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+maintenance+of+glutamate+receptors+and+other+synaptic+components+in+long-term+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Stable maintenance of glutamate receptors and other synaptic components in long-term hippocampal slices.</a> Hippocampus. 5 (5), 425-439 (1995).</li>
<li>Holopainen, I. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+hippocampal+slice+cultures%3A+A+model+system+to+study+basic+cellular+and+molecular+mechanisms+of+neuronal+cell+death%2C+neuroprotection%2C+and+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Organotypic hippocampal slice cultures: A model system to study basic cellular and molecular mechanisms of neuronal cell death, neuroprotection, and synaptic plasticity.</a> Neurochem Res. 30 (12), 1521-1528 (2005).</li>
<li>Guy, Y., Rupert, A. E., Sandberg, M., Weber, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+measuring+organotypic+tissue+slice+culture+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for measuring organotypic tissue slice culture thickness.</a> J Neurosci Methods. 199 (1), 78-81 (2011).</li>
<li>Grabiec, U., Koch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endocannabinoid+N-arachidonoyldopamine+%28NADA%29+exerts+neuroprotective+effects+after+excitotoxic+neuronal+damage+via+cannabinoid+receptor+1+%28CB+1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">The endocannabinoid N-arachidonoyldopamine (NADA) exerts neuroprotective effects after excitotoxic neuronal damage via cannabinoid receptor 1 (CB 1).</a> Neuropharmacology. 64 (4), 1797-1807 (2012).</li>
<li>Daviaud, N., Garbayo, E., Schiller, P. C., Perez-Pinzon, M., Montero-Menei, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+cultures+as+tools+for+optimizing+central+nervous+system+cell+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Organotypic cultures as tools for optimizing central nervous system cell therapies.</a> Exp Neurol. 248, 429-440 (2013).</li>
<li>Ebrahimi, F., Hezel, M., Koch, M., Ghadban, C., Korf, H. W., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+neuronal+damage+in+excitotoxically+lesioned+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">Analyses of neuronal damage in excitotoxically lesioned organotypic hippocampal slice cultures.</a> Ann Anat. 192 (4), 199-204 (2010).</li>
<li>He, S., Shao, L. R., Wang, Y., Bausch, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+and+extrasynaptic+plasticity+in+glutamatergic+circuits+involving+dentate+granule+cells+following+chronic+N-methyl-D-aspartate+receptor+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Synaptic and extrasynaptic plasticity in glutamatergic circuits involving dentate granule cells following chronic N-methyl-D-aspartate receptor inhibition.</a> J Neurophysiol. 109 (6), 1535-1547 (2013).</li>
<li>Kann, O., Taubenberger, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/51802845_Muscarinic_receptor_activation_determines_the_effects_of_store-operated_Ca2-entry_on_excitability_and_energy_metabolism_in_pyramidal_neurons">Muscarinic receptor activation determines the effects of store-operated Ca2+-entry on excitability and energy metabolism in pyramidal neurons.</a> Cell Calcium. 51 (1), 40-50 (2012).</li>
<li>Pérez-Gómez, A., Tasker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+neurogenesis+in+organotypic+cultures+of+rat+hippocampus+after+transient+subfield-selective+excitotoxic+insult+induced+by+domoic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enhanced neurogenesis in organotypic cultures of rat hippocampus after transient subfield-selective excitotoxic insult induced by domoic acid.</a> Neuroscience. 208, 97-108 (2012).</li>
<li>Raineteau, O., Rietschin, L., Gradwohl, G., Guillemot, F., Gähwiler, B. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15207849">Neurogenesis in hippocampal slice cultures.</a> Mol Cell Neurosc. 26 (2), 241-250 (2004).</li>
<li>Pozzo Miller, L. D., Mahanty, N. K., Connor, J. A., Landist, D. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyramidal+Cell+Death+in+Slice+Cultures+From+Rat+Hippocampus+Is+Prevented+By+Glutamate+Receptor+Antagonists%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pyramidal Cell Death in Slice Cultures From Rat Hippocampus Is Prevented By Glutamate Receptor Antagonists.</a> Neuroscience. 63 (2), (1994).</li>
<li>Koch, M., Kreutz, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20135626">The cannabinoid WIN 55,212-2-mediated protection of dentate gyrus granule cells is driven by CB 1 receptors and modulated by TRPA1 and Ca v2.2 channels.</a> Hippocampus. 21 (5), 554-564 (2011).</li>
<li>Pukrop, T., Dehghani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+colonization+of+brain+tissue+by+breast+cancer+cells+in+a+Wnt-dependent+way%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Microglia promote colonization of brain tissue by breast cancer cells in a Wnt-dependent way.</a> Glia. 58 (12), 1477-1489 (2010).</li>
<li>Kohl, A., Dehghani, F., Korf, H. W., Hailer, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bisphosphonate+clodronate+depletes+microglial+cells+in+excitotoxically+injured+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The bisphosphonate clodronate depletes microglial cells in excitotoxically injured organotypic hippocampal slice cultures.</a> Exp Neurol. 181 (1), 1-11 (2003).</li>
<li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochem Biophys Res Commun. 269 (2), 513-520 (2000).</li>
<li>Aaberg-Jessen, C., Nørregaard, A., Christensen, K., Pedersen, C. B., Andersen, C., Kristensen, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+primary+glioma-+and+cell+line-derived+spheroids+implanted+into+corticostriatal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Invasion of primary glioma- and cell line-derived spheroids implanted into corticostriatal slice cultures.</a> Int J Clin Exp Pathol. 6 (4), 546-560 (2013).</li>
<li>Vinci, M., Box, C., Eccles, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+%283D%29+tumor+spheroid+invasion+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional (3D) tumor spheroid invasion assay.</a> J Vis Exp. (99), e52686(2015).</li>
<li>Hagemann, C., Fuchs, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+MACC1+on+human+malignant+glioma+progression+and+patients+%27+unfavorable+prognosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Impact of MACC1 on human malignant glioma progression and patients ' unfavorable prognosis.</a> Neuro Oncol. 15 (12), 1696-1709 (2013).</li>
<li>Hohmann, T., Grabiec, U., Ghadban, C., Feese, K., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+Biomechanical+Properties+and+Cannabinoids+on+Tumor+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Adh+Migr%22%5BJournal%5D)">The Influence of Biomechanical Properties and Cannabinoids on Tumor Invasion.</a> Cell Adh Migr. 11 (1), 54-67 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa yoktur

Mevcut protokolünü OHSC hazırlanması açıklar. Bu model iç yetenekleri ve beyin dokusu reaksiyonları fizyolojik ve patolojik bir çekim gücü uygulamadan sonra test sağlar. Elektrofizyolojik parametrelerinin analizler, yanı sıra OHSC lesioned olabilir ve hasar etkisi tüm hücre türleri belirlenebilir. Farklı maddeler ve lesioning işlemler veya makrofajlar ve lenfositler yokluğunda şifa ayrıntılı açıklaması ile tedavi mümkündür.
The Most kritik adımlar için bir başarılı Hazırlık ve kodlamayla için:...

OHSC nöronlar, astrocytes ve microglia1fizyolojik ve patolojik özelliklerini incelemek için iyi karakterize vitro modeli vardır. Hücre dışı ortam kontrol etmek ve hücresel ve morfolojik değişiklikler sonra çeşitli uyaranlara izlemek kolaydır. Hipokampal nöronlar organizasyonu ve bağlantıları sonra hazırlık2,3iyi korunmuş. Çeşitli yararları dışarı OHSC izin hayvan ameliyat olmadan beyin hasarı ve tümör işgalinin izleme. Altı ya da sekiz OHSC tek bir kemirgen beyinden elde edilebilir. OHSC bu nedenle önemli ölçüde hayvan sayısını azaltmak ve birden fazla ilaç konsantrasyonları, genetik manipülasyon veya farklı lezyon modelleri aynı hayvan test izin vermek için yardımcı olur. Dilim tabanlı deneyleri içinde deneysel koşullar tam olarak kontrol edilebilir. Ayrıca, ikincil hasar gibi patolojik durumlardan zaman bağımlı geliştirme kolayca zaman hata görüntüleme tarafından izlenebilir.
Başlangıçta Stoppini ve ark. tarafından kurulan belirli iletişim kuralı 4, hazırlık adımları açıklanmıştır ve uygun dilimleri seçimi için önemli morfolojik yerler vurgulanır. Doğum sonrası gün 7-9 fareler veya doğum sonrası 4-5 gün fareler hazırlanması tavsiye ediyoruz. Bu dönemlerde OHSC mekanik travmalar ve nöronal devreler yeniden yapılanma yüksek bir potansiyel güçlü bir direnç gösteriyor. Buna ek olarak, ürünleri embriyonik veya yetişkin fareler üzerinden hızla yapılarını değiştirmek ve onların organotypic Morfoloji ekimi sırasında kaybetmek ve bu nedenle temel araştırma5,6 ' uzun vadeli işlemler çalışmak için daha az uygun , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. Difüzyon ve böylece besin kaynağı sınırlı12,13,14OHSC hayatta kalma oranı için başka bir kritik nokta dilim kalınlığı 's.

<table><tbody><tr><td>6 Kuyulu</td><td>Falcon</td><td>35-3046</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fluka</td><td>5040</td><td></td></tr><tr><td>Otoklav</td><td>Systec</td><td>DX-45</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>CFDA&nbsp; Thermo Fisher</td><td>V12883</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal lazer tarama mikroskobu (CLSM) LSM700</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eagle&akut; s Minimal Esansiyel Ortam&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>32360-034</td><td></td></tr><tr><td>Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I</td><td>Vector Labs</td><td>FL-1101</td><td></td></tr><tr><td>Glukoz</td><td>Merk</td><td>1083371000</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Hank ve akut; s Dengeli Tuz Çözeltisi (Ca2 + ve Mg ile 2 + )</td> <td>İnvitrojen</td><td>24020-133</td><td></td></tr><tr><td>Hank ve akut; s Dengeli Tuz Çözeltisi (Ca 2 + ve Mg 2 + olmadan)</td> <td>İnvitrojen</td><td>14170-138</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I5500</td><td></td></tr><tr><td>L-askorbik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>LN229</td><td>Hücre Hatları Servis</td><td>300363</td><td></td></tr><tr><td>Tıbbi siyanoakrilat yapıştırıcı (Histoakril yapıştırıcı)</td><td>B.Braun</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>Milicell Kültür Ekleri</td><td>Milipore</td><td>PICMORG50</td><td></td></tr><tr><td>NMDA N-metil-D-aspartik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M3262</td><td></td></tr><tr><td>Normal At Seum</td><td>Invitrogen</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Petri kapları (tüm boyutlarda)</td><td>Greiner</td><td>627160/664160/628160</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Roth</td><td>0335.1</td><td>toksik</td></tr><tr><td>Propidium iyodid (PI)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>81845-25MG</td><td>toksik</td></tr><tr><td>U138</td><td>ATCC</td><td>HTB-14</td><td></td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Leica Leica</td><td>VT 1200</td><td></td></tr></tbody></table>

organotypic hipokampal dilim kültürler çalışma neuroprotection ve tümör hücrelerinin invasiveness model olarak

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypic Hipokampal dilim kültürler (OHSC), sinir hücreleri ve gliyal hücreler morfolojik ve fonksiyonel özellikleri iyi korunmuş. Bu model dahil çalışmaları nöronlar, nöronal ağlar veya tümör işgali üzerinde Elektrofizyolojik deneyler neuroprotection üzerinde farklı araştırma soruları ele almak için uygundur. Hipokampal mimarisi ve multisynaptic devrelerde nöronal aktivite iyi OHSC, düz-se bile Dilimleme yordam başlangıçta lezyonlar ve gliyal yara oluşumuna yol açar korunmuş. Yara oluşumu muhtemelen mekanik özellikleri ve küçük moleküller, vbdiffusive davranışını değiştirir. Dilimleri Saat bağımlı süreçlerinin beyin hasarı hayvan cerrahi ve çeşitli beyin türetilmiş hücre tipleri, yani astrocytes, microglia ve fizyolojik ve patolojik altında nöronlar arasındaki etkileşimler çalışmaları olmadan sonra izleme izin koşullar. Bu model kararsız bir yönünü kan akımı ve bağışıklık kan hücreleri olmaması. Nöronal yaralanma ilerleme sırasında bağışıklık hücreleri kan oynamak önemli bir rol geçirme. Bu hücreleri dilimler halinde eksik olduğundan, içsel süreçleri kültür dış müdahale gözlenen. Ayrıca, OHSC orta-dış ortam bileşimi tam olarak kontrol edilir. Bu yöntem bir başka kurban hayvanların standart hazırlıkları için karşılaştırıldığında daha düşük sayıda avantajdır. Birkaç OHSC birden çok tedavileri ile eşzamanlı çalışmalar bir hayvan edinerek bir hayvandan elde edilebilir. Bu nedenlerden dolayı OHSC sonra doku hasarı veya tümör işgali sırasında yeni koruyucu tedavi etkilerini çözümlemek için uygundur.
Sunulan Protokolü burada üreten son derece tekrarlanabilir sağlar OHSC hazırlama yöntemi açıklar, iyi korunmuş deneysel araştırma, neuroprotection veya tümör işgali çalışmalar gibi çeşitli için kullanılan dilimler.

Neuroprotection çalışmaları: Nöronal hasar, PI olumlu çekirdek ve IB4 microglia dentat gyrus (DG) granül hücre Katmanı (un) her üçüncü optik bölümünde sayılan olumlu sayısını belirlemek için. Tümör işgali deneyler için maksimum yoğunluk z-projeksiyon yığının tümör hücreleri tarafından işgali ve farklı işgali desenleri (şekil 6) görselleştirmek için bir tedbir olarak bölgeyi hesaplamak için kullanıldı.
<p class="jove_content" fo...

Organotypic Hipokampal dilim kültürler (OHSC) vivo durumu çok iyi taklit bir vitro modeli temsil. Burada biz vibratome tabanlı açıklar yüksek kaliteli dilimleri tümör hücreleri biyolojik davranışını veya yeni maddeler nöroprotektif potansiyelini değerlendirmek amacıyla elde etmek için iletişim kuralı Dilimleme geliştirilmiş.

Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

Vibratom ile hazırlama ve dilimleme. Dilimleme prosedürü sırasında beyni stabilize etmek için üç agar blok gereklidir. Kontaminasyonu önlemek için Otoklavlanmış bir alet seti kullanın.Agarı uzaklaştırın. Metal plakaya tıbbi Siyanoakrilat yapıştırıcı ile yapıştırılmadan önce filtre kağıdı üzerinde kurutulmalıdır. Bir spatula yardımıyla beyni çıkarın ve dikkatlice hazırlama ortamı ile doldurulmuş Petri kabına yerleştirin.Ardından, beyni filtre kağıdı üzerinde kısa süreyle kurulayın. Metal plakayı tıbbi Siyanoakrilat yapıştırıcı ile kaplayın. Beyni numune tutucuya yerleştirmek için pens ve spatulayı kullanın.Her iki yandan mekanik stabilite sağlamak için önceden hazırlanmış iki parça agarı kullanın. Bu noktada, dilimleme sırasında hasarı önlemek için beyin, agar bloğunun yanına yerleştirilmeli ve iki ek blokla sabitlenmelidir. Metal plakayı vibratoma yerleştirin ve dokuyu soğuk hazırlama ortamı ile kaplayın.Ardından, dokuyu kayar vibratom kullanarak 350 micrometers kalınlığında OHSC şeklinde yatay olarak diseke edin. Kesitleri toplamak için kırık bir Pasteur pipetinin arkasını kullanarak kesitleri Petri kabına aktarın. Beyin kesitlerini soğuk hazırlama ortamında tutun.Kesitleri binoküler mikroskop altında optik olarak değerlendirin. Hipokampal bölgeyi ayırın ve 15 numara yuvarlak uçlu bir bistüri kullanarak iç kortekse girin. Dorsal ve ventral hipokampus arasındaki hipokampusun orta kısmından izole edilen, sadece sağlam cytoarchitecture yapısına sahip kesitlerin alınması önemlidir.Düşük kaliteli OHSC'ler derhal atılmalıdır. Elde edilen kesitlerden ikisini veya üçünü, 0,4 mikrometre gözenek boyutuna sahip bir hücre kültürü insertine aktarın. Bir Pasteur pipeti kullanarak hücre kültürü insertinin üst kısmındaki hazırlama ortamını aspire edin.İnserti, her kuyucukta bir milimetre kültür ortamı içeren altı kuyucuklu bir kültür plağına yerleştirin. Altı kuyucuklu plakları, %5 CO2 içeren tam nemlendirilmiş bir atmosferde 35 °C'de inkübe edin ve hücre kültür ortamını iki günde bir değiştirin. Sıçan dokusu için kültürde altı gün, fare dokusu için ise 14 gün geçtikten sonra, dilimleme işleminin kendisiyle ilişkili inflamatuar reaksiyonlar ortadan kalkmış olacaktır.Deneyler artık yürütülebilir. Nöroproteksiyon çalışmaları için temsili sonuçlar. Görüntü A bölümü, kontrol dilimleri olarak hizmet eden, herhangi bir işlem uygulanmadan dokuz gün boyunca in vitro kültür ortamında tutulan lezyonsuz OHSC'leri göstermektedir.Konfokal lazer taramalı mikroskopi ile doğrulandığı üzere, kontrol OHSC iyi nöronal koruma göstermiştir. İzolektin B4 pozitif mikroglial hücreler temel olarak moleküler ve pleksiform tabakalarda yerleşmişti ve dallanmış bir fenotip sergilemekteydi. Dentat girusun granüler hücre tabakasında, yalnızca çok az sayıda İzolektin B4 pozitif mikroglial hücre ve neredeyse hiç Propidium Iodide pozitif çekirdek bulunmamıştır.Görüntünün B bölümünde gösterilen bir diğer OHSC seti, altı gün boyunca kültür ortamında tutulmuş, dört saat boyunca 50 micromolar NMDA ile lezyonlanmış ve ardından üç gün daha kültür ortamında bekletilmiştir. NMDA lezyonundan sonra, dentate gyrus'un tüm katmanları boyunca, nöronal hasar bölgesine aktive olmuş Isolectin B4 pozitif mikroglial hücrelerin yoğun bir birikimi yapışmıştır.Kantitatif analizler, dentat girusun granüler hücre tabakasında, lezyonlu OHSC'deki Isolectin B4 pozitif mikroglial hücre sayısının kontrol koşullarına kıyasla daha yüksek olduğunu ortaya koymuştur. Benzer şekilde, NMDA lezyonlu kesitlerin granüler hücre tabakasında Propidium Iodide pozitif dejenere olan nöron sayısı güçlü bir şekilde artış göstermiştir. Tümör invazyon çalışmaları için örnek sonuçlar.Tüm görüntüler, konfokal lazer taramalı mikroskopla görüntülenen OHSC kullanılarak gerçekleştirilen tümör invazyonu SS sonuçlarını göstermektedir. Kırmızı renk OHSC'nin sitomimarini, yeşil renk ise tümör hücrelerini etiketlemektedir. Görüntü A, dört gün boyunca invaze olmasına izin verilen U138 glioblastoma hücreleri için tipik bir invazyon paternini göstermektedir.Berrak, küresel ve belirgin tümörler gözlemlenebilir ve OHSC yapısı, açıkça görülebilen dentate gyrus ve Cornu Ammonis ile birlikte bozulmamış görünmektedir. Görüntü B, dört gün sonra LN229 glioblastoma hücreleri tarafından oluşturulan farklı bir invazyon paternini göstermektedir. Bu durumda, cytoarchitecture, deforme olmamış dentate gyrus ve Cornu Ammonis ile birlikte bozulmamış kalsa da, OHSC'nin büyük bir kısmını kaplayan ağ yapısı nedeniyle tekil tümörler net bir şekilde ayırt edilememektedir.Ayrıca, LN229 hücrelerinin U138 hücrelerinden daha invaziv olduğu sonucuna varılabilir. Görüntü C ve D, dört günlük invazyon süresi sonrası LN229 hücreleri için aynı tümör invazyon sonucunu göstermektedir. Sol tarafta, tümör kitlesinin görüş alanının neredeyse tamamını kapladığı gözlemlenebilir.Görüntü D, karşılık gelen Propidium Iodide boyamasını göstermektedir. Bu lamda, Cornu Ammonis artık görünmediği ve dentate gyrus da deforme olduğu için cytoarchitecture artık bozulmuştur. Böyle bir sonucun olası nedeni, deneyin başlangıcında tam olarak sağlam olmayan bir OHSC, uygulanan tümör hücre sayısının çok yüksek olması veya gözlemlenen yapı kaybına yol açan çok uzun bir invazyon süresi olabilir.Bu nedenle, bu tür invazyon sonuçları göz ardı edilmelidir. Organotipik hipokampal dilim kültürleri, bozulmamış nöronal bağlantılarla beyin fizyolojisini yansıtan çok iyi bir in vitro model teşkil eder. Tek bir model olarak, birden fazla dilim kültürü elde edilebildiğinden, tek bir hayvandan alınan dokuda çok sayıda koşulun test edilmesine olanak tanır ve sonuçlar yüksek düzeyde tekrarlanabilirdir.Yüksek erişilebilirlik derecesi nedeniyle, organotipik hipokampal dilim kültürleri çok sayıda deney tipi için mükemmel düzeyde uygundur. Buna elektrofizyolojik ve nörojenez çalışmalarıyla birlikte, nöroproteksiyon, tümör invazyonu ve tümör hücrelerinin sağlıklı beyin dokusuyla etkileşimleri üzerine yapılan deneyler de dahildir.

organotypic-hippocampal-slice-cultures-as-model-to-study

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Organoptypic hipokampal kesit kültürü...

Nöronal Sakatlık incelenmesi için Organotipik Hipokampal Dilim Kültür Modeli

Biz diğer beyin bölgelerine kolayca adapte edilebilir Organotipik hipokampal dilim hazırlamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Beyin dilimlerini bir arayüz oluşturmak için izin gözenekli membranlar ve kültür ortamı üzerine koydu. Bu yöntem, kültür 2 hafta kadar hipokampus brüt mimarisi korur.

Organotipik Hipokampal Dilim Kültürler

Bu video, bir 3B ortak kültür sisteminin gelişimini göstermektedir. Fare beyni dilimleri bir zar üzerine yerleştirilir ve floresan olarak etiketlenmiş insan beyni tümör hücrelerinin üzerinde büyümesine izin verilir. Sistem hazır olduğunda, görüntüleme için boyanır.

Organotipik Dilim Ko-kültür Modelinde Beyin Tümörü Kurulması

Video, glioblastoma dokusundan organotipik dilim kültürlerinin oluşturulmasını ve sürdürülmesini göstermektedir. İzole edilen doku bir agaroz matrisine gömülür ve bir vibratom kullanılarak ince kesitler elde edilir. Bu bölümler daha sonra bir mikroplaka içindeki geçirgen membran eklerine yerleştirilir ve uzun süreli bakım için bir dilim kültür bakım ortamında kültürlenir.

İnsan Glioblastoma Dokusundan Dilim Kültürlerinin Oluşturulması ve Sürdürülmesi

Karsinom hücreleri ile Organotipik beyin kesit kokültürü beyin dokusu karsinoma hücre istilası sürecinde floresan gibi parlak saha (video) mikroskopisi ile görselleştirme morfolojik değişiklikler sağlar. Bu model sistem ayrıca hücre değişimi ve ikmal yaklaşımlar sağlar ve manipülasyonlar ve analizlerin bir yelpazede sunuyor.

Bir Organotipik Beyin Dilim ve kanser hücrelerinin 3D Sferoid ile Coculture Sistemi

Iskemik beyin hasarı birçok açıdan üreyen veriyor entorhino-hipokampal organotipik dilim kültürleri için bir protokol, sunulmuştur. Nöronlarda değişikliklere ek olarak neurovasculature değişiklikleri inceleyerek, bu protokol yaralanma sonrası nöral dokuda plastik değişiklikleri incelemek için çok yönlü bir araçtır.

Içinde Neurovascular Yaptırma Analizi Entorhino-hipokampal Organotipik Dilim Kültürler

Burada organotipik dilim kültür tekniği kullanılarak hipokampal doğum sonrası nöron incelemek için bir teknik tarif. Bu yöntem, yetişkin nöron in vitro müdahale edilebilmesini sağlar ve kültürlenmiş hipokampus farmakolojik maddelerin doğrudan uygulama için izin verir.

POSTNATAL nöron Çalışmaları için organotipik Dilim Kültürler

İnsan beyni tümörlerinin birçok türü, beynin belirli bölgelerine lokalizedir ve kültürde büyümesi zordur. Bu protokol, tümör mikroçevresinin rolünü ele alır ve organotipik bir fare beyin diliminde büyüyen floresan primer beyin tümörü hücrelerini analiz ederek yeni ilaç tedavilerini araştırır.

İlaç Tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve Hedeflenen A Beyin Tümörü / Organotipik Dilim Co-kültür Sistemi

Günümüzde glioblastoma (GBM) 'nin ex vivo modelleri, insan tümörü invazyonunun fizyolojik olarak ilgili çalışması için optimize edilmemiştir. Burada, taze insan GBM dokusundan alınan organotipik dilim kültürlerinin üretimi ve bakımı için bir protokol sunuyoruz. Zaman atlamalı mikroskopi ve kantitatif hücre göç analiz tekniklerinin bir açıklaması sağlanmıştır.

Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli

Burada, renal korteks-hipokampus organotipik dilimlerin hazırlanmasını anlatıyoruz. Serumun kademeli ve kontrollü yoksunluğu altında, bu dilimler gelişen epileptik benzeri olayları tasvir eder ve epileptogenezin ex vivo modeli olarak kabul edilebilir. Bu sistem, spontan aktivitenin dinamiklerini izlemek ve epileptogenez boyunca nöroinflamatuar özelliklerin ilerlemesini değerlendirmek için mükemmel bir aracı temsil eder.

Renal Korteks-Hipokampus Organotipik Dilim Kültürlerinde Epileptogenez Modeli

Meme kanseri beyin metastatik hücrelerinin gerçek zamanlı ilaç ve radyasyon yanıtını ölçmek için organotipik bir beyin dilimi modelinde bir protokol sunuyoruz. Yöntemler, çeşitli tedavilerin meme kanserinden beyin metastazları üzerindeki terapötik etkilerini, beyin mikroçevre arayüzü içinde ex vivo bir şekilde araştırmak için nicel bir test sağlar.

Meme Kanseri Beyin Metastatik Tümör Büyümesini İncelemek ve Hedeflemek için Ex Vivo Beyin Dilimi Modeli

Öğrenin vibratome kullanarak organotipik hipokampal dilim kültürü hazırlama tekniğini. Bu yöntem nöroproteksiyon ve tümör hücre davranışları araştırmalarında yüksek kaliteli doku elde etmeyi sağlar.

Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak

Daha fazla video keşfet