Name: Sütunlar ve Katmanlar dendritik Morfoloji Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Keşfedin, Drosophila medulla nöronlarının dendritik yönlendirmesini çift görüş görüntüleme ve hesaplamalı araçlarla 3D uzayda analiz etme yöntemini. Bu teknik, sinir devrelerini haritalamada ve hücre tiplerini morfolojiye göre belirlemede araştırmacılara yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri İntramural Araştırma Programı tarafından desteklenen, Çocuk Sağlığı ve İnsan Gelişimi (C-HL hibe HD008913) Eunice Kennedy Shriver Ulusal Enstitüsü ve Bilgi Teknolojileri Merkezi (PGM, NP, ESM ve MM).

<ol><li>Kaas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographic+maps+are+fundamental+to+sensory+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Topographic maps are fundamental to sensory processing.</a> Brain Res Bull. 44 (2), 107-112 (1997).</li>
<li>Sanes, J. R., Zipursky, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+principles+of+insect+and+vertebrate+visual+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Design principles of insect and vertebrate visual systems.</a> Neuron. 66 (1), 15-36 (2010).</li>
<li>Huberman, A. D., Clandinin, T. R., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+mechanisms+of+lamina-specific+axon+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular mechanisms of lamina-specific axon targeting.</a> CSH Perspect Biol. 2 (3), a001743(2010).</li>
<li>Clandinin, T. R., Feldheim, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+a+visual+map%3A+mechanisms+and+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Making a visual map: mechanisms and molecules.</a> Curr Opin Neurobiol. 19 (2), 174-180 (2009).</li>
<li>Luo, J., McQueen, P. G., Shi, B., Lee, C. H., Ting, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wiring+dendrites+in+layers+and+columns%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Wiring dendrites in layers and columns.</a> J Neurogenet. 30 (2), 69-79 (2016).</li>
<li>Meinertzhagen, I. A., Hanson, T. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMeinertzhagen%2C+IA+%22The+development+of+the+optic+lobe.+In+The+Development+of+Drosophila+melanogaster%22">The development of the optic lobe. In The Development of Drosophila melanogaster</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. NY. 1363-1491 (1993).</li>
<li>Takemura, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+visual+motion+detection+circuit+suggested+by+Drosophila+connectomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A visual motion detection circuit suggested by Drosophila connectomics.</a> Nature. 500 (7461), 175-181 (2013).</li>
<li>Takemura, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+circuits+and+their+variations+within+different+columns+in+the+visual+system+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Synaptic circuits and their variations within different columns in the visual system of Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (44), 13711-13716 (2015).</li>
<li>Gao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neural+substrate+of+spectral+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The neural substrate of spectral preference in Drosophila.</a> Neuron. 60 (2), 328-342 (2008).</li>
<li>Karuppudurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hard-wired+glutamatergic+circuit+pools+and+relays+UV+signals+to+mediate+spectral+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A hard-wired glutamatergic circuit pools and relays UV signals to mediate spectral preference in Drosophila.</a> Neuron. 81 (3), 603-615 (2014).</li>
<li>Strother, J. A., Nern, A., Reiser, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+observation+of+ON+and+OFF+pathways+in+the+Drosophila+visual+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct observation of ON and OFF pathways in the Drosophila visual system.</a> Curr Biol. 24 (9), 976-983 (2014).</li>
<li>Ting, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor-derived+activin+promotes+dendritic+termination+and+restricts+the+receptive+fields+of+first-order+interneurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor-derived activin promotes dendritic termination and restricts the receptive fields of first-order interneurons in Drosophila.</a> Neuron. 81 (4), 830-846 (2014).</li>
<li>Ting, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tiling+of+R7+axons+in+the+Drosophila+visual+system+is+mediated+both+by+transduction+of+an+activin+signal+to+the+nucleus+and+by+mutual+repulsion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Tiling of R7 axons in the Drosophila visual system is mediated both by transduction of an activin signal to the nucleus and by mutual repulsion.</a> Neuron. 56 (5), 793-806 (2007).</li>
<li>Peng, H., Ruan, Z., Long, F., Simpson, J. H., Myers, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((V3D+enables+real-time+3D+visualization+and+quantitative+analysis+of+large-scale+biological+image+data+sets%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">V3D enables real-time 3D visualization and quantitative analysis of large-scale biological image data sets.</a> Nat Biotechnol. 28 (4), 348-353 (2010).</li>
<li>Takemura, S. Y., Lu, Z., Meinertzhagen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+circuits+of+the+Drosophila+optic+lobe%3A+the+input+terminals+to+the+medulla%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Synaptic circuits of the Drosophila optic lobe: the input terminals to the medulla.</a> J Comp Neurol. 509 (5), 493-513 (2008).</li>
<li>Takemura, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+circuits+integrate+neighboring+visual+signals+in+a+Drosophila+motion+detection+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Cholinergic circuits integrate neighboring visual signals in a Drosophila motion detection pathway.</a> Curr Biol. 21 (24), 2077-2084 (2011).</li>
<li>Keller, P. J., Schmidt, A. D., Wittbrodt, J., Stelzer, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+zebrafish+early+embryonic+development+by+scanned+light+sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of zebrafish early embryonic development by scanned light sheet microscopy.</a> Science. 322 (5904), 1065-1069 (2008).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+isotropic+four-dimensional+imaging+with+dual-view+plane+illumination+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Spatially isotropic four-dimensional imaging with dual-view plane illumination microscopy.</a> Nat Biotechnol. 31 (11), 1032-1038 (2013).</li>
<li>Popko, J., Fernandes, A., Brites, D., Lanier, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+analysis+of+NeuronJ+tracing+data%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Automated analysis of NeuronJ tracing data.</a> Cytometry A. 75 (4), 371-376 (2009).</li>
<li>Meijering, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+validation+of+a+tool+for+neurite+tracing+and+analysis+in+fluorescence+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Design and validation of a tool for neurite tracing and analysis in fluorescence microscopy images.</a> Cytometry A. 58 (2), 167-176 (2004).</li>
<li>Pool, M., Thiemann, J., Bar-Or, A., Fournier, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NeuriteTracer%3A+a+novel+ImageJ+plugin+for+automated+quantification+of+neurite+outgrowth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">NeuriteTracer: a novel ImageJ plugin for automated quantification of neurite outgrowth.</a> J Neurosci Methods. 168 (1), 134-139 (2008).</li>
<li>Scorcioni, R., Polavaram, S., Ascoli, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-Measure%3A+a+web-accessible+tool+for+the+analysis%2C+comparison+and+search+of+digital+reconstructions+of+neuronal+morphologies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">L-Measure: a web-accessible tool for the analysis, comparison and search of digital reconstructions of neuronal morphologies.</a> Nat Protoc. 3 (5), 866-876 (2008).</li>
<li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonparametric+Estimation+from+Incomplete+Observations%5BTitle%5D)+AND+%22JASA%22%5BJournal%5D)">Nonparametric Estimation from Incomplete Observations.</a> JASA. 53, 457-481 (1958).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada, nasıl görüntü ve Drosophila medulla nöronların dendritik milleri analiz göstermektedir. Birinci bölüm, çift görüntüleme görüntüleme, yüksek çözünürlüklü görüntü yığını haline dekonvulasyon ve iki görüntü yığınlarının kombinasyonunu açıklar. İkinci bölüm, dendrit izleme ve kayıt, referans sütun dizisine medulla nöronların Dendritlerin izleme ve kayıt açıklar. Üçüncü bölüm, dendritik analizi, dendritik kalıpları analiz etmek için özel komut kullanımını tarif eder. Birlikte bu protokoller katmanları ve süt...

gelişimi sırasında, karmaşık ama basmakalıp dallı desenleri nöronlar ayrıntılı dendrit kendi presinaptik ortakları ile sinaps oluşturur. Dendritik dallanma desen nöronal kimlik ve işlevleri ile ilişkilidir. dendritik karmaşıklığı ve saha boyutları giriş numarasını yöneten dallanma sırasında dendritik milleri yerleri, aldıkları presinaptik girdilerin türünü belirlemek. Böylece, dendritik morfolojik özellikleri sinaptik bağlantı ve nöronal hesaplanması için kritik belirleyicidir. Böyle sinek optik loblar ve gözdeki gibi karmaşık beyinleri, birçok bölgesinde, sinaptik devreler bilgi işlem 1, 2 kolaylaştırmak için sütun ve katmanlar halinde organize edilir. Böyle bir sütun ve katman organizasyonda, farklı bir yöntem proje akson presinaptik nöronlar belirli bir katmana (sözde katman özel hedefleme) sona erdirme ve düzenli bir iki boyutlu bir dizi oluşturmak için (yani-called topografik harita), postsinaptik nöronlar belirli katmanlarında uygun boyutlarda dendrit uzatmak ise doğru tip ve sayıları presinaptik girişler almak için. Katmanlara ve sütunlara hedefleme aksonal iyi 3, 4 çalışılmıştır olsa da, çok daha az dendritler belirli katmanlara yönlendirilir ve doğru presinaptik ortaklarla 5 ile sinaptik bağlantıları oluşturmak üzere açık alanları uygun genişletmek boyutlandırılır nasıl bilinir. görüntüleme ve katmanlar ve sütunlar hedefleyen nicel dendritik zorluk sütunlu ve lamine beyin yapılarında dendritik gelişim çalışma engellemiştir. Drosophila medulla nöronlar sütunlar ve katmanlar halinde dendritik yönlendirme ve devre düzeneğinin çalışmak için ideal bir model vardır. Sinek medulla neuropil 3D 10 katmanları kafes ve yaklaşık 750 sütun olarak düzenlenmiştir. Her sütun p dahil afferentleri bir dizi, innerve edilirolan aksonal terminaller katman özgü moda 6 topografik haritalar oluşturan L5, - hotoreceptors R7 / R8 ve lamina nöronlar L1. Medulla nöronların yaklaşık 38 çeşit bu afferentleri 7 girdileri almak için her medulla sütun ve belirli katmanlarda ve uygun alan boyutlarıyla ayrıntılı dendritler mevcuttur. medulla sinaptik devreler elektron mikroskobik düzeyde yeniden inşa edilmiştir; böylece, sinaptik ortaklıklar iyi 8 7 kurulur. Ayrıca, medulla nöronların çeşitli etiketleme genetik araçlar 9, 10, 11 mevcuttur. transmedulla üç tip (Tm) nöronlar (Tm2, Tm9 ve TM20) inceleyerek, daha önce iki hücre türüne özgü dendritik özelliklerini belirledik: (i) Tm nöronlar ya ön veya arka yönde dendritler proje (düzlemsel projection yönü), hücre tipine bağlı olarak ve (ii) medulla nöronlarının dendritleri hücre türüne özgü bir şekilde (tabakaya özgü sonlandırma) 12 belirli medulla tabakalarını sonlanır. tabaka ve kolon ipuçlarına Tm yanıtları bozan mutasyonlar bu niteliklerin farklı yönlerini etkileyen ise düzlemsel projeksiyon yönü ve katman özgü sonlandırma, Tm nöronların bu üç tip ayırt etmek için yeterlidir. Burada, sütunlar ve katmanlar (Şekil 1) Drosophila medulla nöronların dendritik desenlendirme incelemek için tam bir iş akışı sunuyoruz. İlk olarak, iki konfokal görüntü birleştirmek için özelleştirilmiş bir yazılım kullanan bir çift görünümü görüntüleme yöntemi, yüksek kaliteli izotropik görüntüleri oluşturmak için yığınlarının göstermektedir. Bu yöntem, süper çözünürlük mikroskobu başvurmadan, dendritik dalların güvenilir izleme izin yüksek kaliteli görüntüler oluşturmak için sadece konvansiyonel konfokal mikroskopi gerektirir böyle birs STED (Uyarılmış Emisyon tükenmesi) veya yapısal aydınlatma. İkincisi, biz dendritik milleri izlemek için ve bir referans sütun dizisi elde edilen nörit izlerini kayıt için bir yöntem mevcut. Üçüncü olarak, dendritik dallanma ve sonlandırma frekanslar için tahmin yürütülürken yanı sıra, düzlemsel projeksiyon yönü ve dendritler tabaka özgü fesih hakkında bilgi ayıklamak için hesaplama yöntemleri göstermektedir. Birlikte, bu yöntemler, 3D, dendritik morfolojileri göre hücre tiplerinin sınıflandırılması dendritik desen karakterizasyonu ve mutant potansiyel kusurların belirlenmesine izin verir.

<table><tbody><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Huygens Professional</td><td>Scientific Volume Imaging</td><td>sürüm 16.05</td>, <td>görüntü evrişimini giderme (https://svi.nl) için.&nbsp; ticari yazılım</td></tr><tr><td>Görüntü</td><td>birleştirme ve kayıt (http://mipav.cit.nih.gov/) için MIPAV</td><td></td><td>sürüm 7.3.0</td>; ücretsiz</tr><tr><td>MIPAV eklentisi: PlugInDrosophila RetinalRegistration.class</td><td></td><td></td><td>ücretsiz</td></tr><tr><td>MIPAV eklentisi: PlugInDrosophilaStandard ColumnRegistration.class</td><td></td><td></td><td>ücretsiz</td></tr><tr><td>Imaris</td><td>Nöritleri izlemek ve görüntü kaydı için referans noktaları atamak için</td><td>Bitplane</td><td></td> (http://www.bitplane.com);</tr><tr>swc dosyalarını görselleştirmek için ticari yazılım<td>Vaa3D</td><td></td><td></td><td>( https://github.com/Vaa3D/release/releases/); </td></tr><tr><td>dendritlerin morfometrik analizi için</td>ücretsiz<td>Matlab</td><td>Mathworks</td><td>R2014b</td> (http://www.mathworks.com); ticari yazılım</tr><tr><td>Matlab araç kutusu: dendritik</td><td>morfometrik parametreleri analiz etmek için</td>TREES1.14 <td></td><td>v1.14</td> (http://www.treestoolbox.org/download.html); ücretsiz</tr><tr><td>Matlab araç kutusu: Dendritic_Tree_Toolbox</td><td></td><td>v1.0</td><td>Morfometrik parametreleri hesaplamak için (https://science.nichd.nih.gov/confluence/display/snc/Data+collections+for+imagines+combination+and+standardize+column+registration). Freeware</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog numarası<</td><td>strong>Comments</td></tr><tr><td>strong><Sample files</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SWC dosya tanımı</td><td></td><td></td><td>http://www.neuronland.org/NLMorphologyConverter/MorphologyFormats/SWC/Spec.html</td></tr><tr><td>Görüntü kombinasyonu ve kaydı</td><td></td><td></td> için kodlar ve örnek dosyalar <td>https://science.nichd.nih.gov/confluence/display/snc/Data+collections+for+imagines+combination+and+standardize+column+registration</td></tr><tr><td>Referans noktası örneği&nbsp;</td><td></td><td></td><td>https://science.nichd.nih.gov/confluence/download/attachments/117216914/points.csv?version=1&modificationDate= 1471880596000&api=v2</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company<</td><td>strong>Katalog numarası</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Bilgisayar sistemi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MS Windows 7 x64 veya Macintosh OS X 10.7 veya üstü</td><td></td><td></td><td>3GHz 64 bit dört çekirdekli işlemci, 16G RAM (minimum)</td></tr><tr><td>İsteğe bağlı: Quadro4000&nbsp; (veya üstü)</td><td>dendritlerin stereografik görselleştirilmesi için</td> grafik kartı <td>Nvidia</td><td></td>.</tr><tr><td>İsteğe bağlı: NVIDIA 3D vision2</td><td>Nvidia</td><td></td><td>http://www.nvidia.com/object/3d-vision-main.html</td></tr><tr><td>İsteğe bağlı: NVIDIA 3D vision2</td><td></td><td></td> için 120 Hz LCD ekran <td>http://www.nvidia.com/object/3d-vision-system-requirements.html</td></tr><tr><td>Name</strong</td><td>>Company</td><td>Katalog numarası</td><td>Yorumlar</ güçlü</td></tr> <tr><td>> < güçlü > görüntüleme için reaktifler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>24B10 antikoru</td><td>Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma Bankası</td><td>24B10</td><td></td></tr><tr><td>GFP Etiket Antikoru</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>G10362</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Anti-Tavşan (H + L), Alexa Fluor 488</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>A11034</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-Fare (H + L), Alexa Fluor 568</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>A21124</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD Antifade Montaj Ortamı</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>Montaj&nbsp; Kil&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>S04179</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td></td><td></td><td></td>Kapak camlarında% 70 gliserol</tr><tr><td>, yüksek performans, D = 0.17&nbsp; mm</td><td>Zeiss</td><td>474030-9000-000</td><td></td></tr></tbody></table>

sütunlar ve katmanlar dendritik morfoloji analizi

Analyzing Dendritic Morphology in Columns and Layers

Böyle sinek optik loblar ve omurgalı korteks gibi merkezi sinir sistemi, birçok bölgesinde, sinaptik devreler gelişmiş hayvanlarda geliştirme ve bilgi işleme sırasında beyin kablolama kolaylaştırmak için katmanları ve sütunlar halinde düzenlenir. Belirli katmanlarda tip spesifik desen ayrıntılı dendritler postsinaptik nöronlar uygun presinaptik terminalleri ile sinaps için. Uçucu medulla nöropil 10 katman ve yaklaşık 750 sütun oluşmaktadır; her sütun bir tip spesifik biçimde afferentleri bazı 7 tip aksonal terminalleri ile maç medulla nöronların 38 üzerinde türleri, dendritler tarafından innerve edilir. Bu rapor görüntüye prosedürleri ayrıntıları ve medulla nöronların dendritler analiz. iş akışı üç bölümden oluşmaktadır: (i) çift görüntüleme görüntüleme bölümü dendritler bir yüksek çözünürlüklü 3 boyutlu görüntü içine dik yönlerde toplanan iki konfokal görüntü yığınları birleştirir; (Ii) dendrit izleme ve kayıt bölümü dendritik izleri3D milleri ve referans sütun dizisine dendritik izlerini kaydeder; (Iii) dendritik analiz bölümü dendritik milleri tabaka özel sonlandırma ve düzlemsel projeksiyon yönü de dahil olmak üzere sütun ve katmanlar, açısından dendritik desenleri analiz ve dendritik dallanma ve sonlandırma frekanslarının tahminleri türemiştir. protokoller matris laboratuvar dilinde açık kaynak MIPAV (Tıbbi Görüntüleme İşleme, Analiz ve Görselleştirme) platformu ve özel toolbox üzerine inşa özel eklentileri kullanmaktadır. Birlikte, bu protokoller hücre türlerini tanımlamak için, ve mutantlar kusurları tespit etmek, katmanlar ve sütunlarda Drosophila medulla nöronların dendritik yönlendirme analiz etmek tam bir iş akışı sağlar.

Burada sunulan çift görüntüleme görüntüleme prosedürü kullanarak, seyrek etiketli TM20 nöron içeren bir sinek beyin iki dik yönde görüntülendi. görüntüleme öncesi, beyin, zara bağlı GFP ve fotoreseptör aksonlar görselleştirmek için uygun birincil ve ikincil antikor ile boyandı. Görüntüleme için, beyin birinci yatay yönde monte edilmiştir (Şekil 2A, B). GFP-etiketli TM20 nöron ve çevresindeki fotoreseptör aksonlar konfokal mikroskop (Şekil 3A) kullanılara...

Burada, sütunlar ve katmanlar halinde Drosophila medulla nöronların dendritik yönlendirmesini nasıl analiz edileceğini göstermektir. iş akışı, izleme referans sütun dizisine dendritik milleri tescili için ve 3 boyutlu uzayda dendritik yapıların analizi için görüntü kalitesi ve hesaplama araçlarını geliştirmek için bir çift görünümü görüntüleme tekniği içerir.

Sütunlar ve Katmanlar dendritik Morfoloji Analizi

In many regions of the central nervous systems, such as the fly optic lobes and the vertebrate cortex, synaptic circuits are organized in layers and ...

Bu protokolün genel amacı, dendritik paternleri karakterize etmek, morfolojiye dayalı olarak hücre tiplerini belirlemek ve mutantları tanımlamak için yetişkin drosophila medulla nöronlarının kolonlar ve tabakalar halindeki dendritik yönelimlerini analiz etmektir. Bu yöntem, beyin devrelerinin haritalanması ve dendritlerin kablolama mekanizmasının anlaşılması da dahil olmak üzere, nörobilim alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, dendritik özellikleri üç boyutlu uzayda aktarması, böylece dendritik kablolama mantığı ve fonksiyonlarının anlaşılmasını geliştirmesidir.Bu prosedürün amacı, ilgilenilen nöronların iki ortogonal, horizontal ve frontal yönelimde iki görüntü yığını elde etmektir. Standart teknikleri kullanarak, diseke edilmiş sinek beyinlerini tavşan anti-GFP ve fotoreseptör aksonlarını işaretleyen bir antikor primer antikorları ile boyayın. Ardından, primer antikorları floresan sekonder antikorlarla işaretleyin ve beyni %70 glycerol ve 1X PBS içinde berraklaştırın.Beyni yatay yönde sabitlemek için, gliserol ile şeffaflaştırılmış beyni, mikroskop lamının merkezine damlatılmış 20 µL'lik antifade sabitleme ortamı damlasının içine

analyzing-dendritic-morphology-in-columns-and-layers

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Çok sayıda yeni çalışmalar sinaptik proteinlerin beyin patolojileri ile ilişkili mutasyonlar belirledik. Primer kültür kortikal nöronların dendritik omurga morfoloji ve motilite bu hastalıkla ilişkili proteinlerin etkilerini inceleyen büyük esneklik sunar.

Kültür MSS Nöronlar Dendritik Omurga Morfoloji Analizi

Morfolojik analiz Drosophila</emGenetik Mozaikler> Larvaların Periferik Duyusal Nöron Dendritler ve Aksonlar

Biz organotipik serebellar dilim kültürlerde yetişen bireyin Purkinje hücre dendritik ağacın morfolojisi görüntülemek ve kantitatif tayini için izin veren bir protokol mevcut. Bu protokol, Purkinje dendritik hücre gelişme mekanizmaları üzerinde çalışmalar teşvik etmek için tasarlanmıştır.

Organotipik Dilim Kültürleri Purkinje Hücre Dendritik Morfoloji Analizi

Kaynak: Ting, C., et al., Sütunlarda ve Katmanlarda Dendritik Morfolojiyi Analiz Etme. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, bir Drosophila beyni hazırlama, konfokal bir mikroskop altında GFP etiketli medulla dendritlerinin yatay ve önden görüntü yığınlarını yakalama ve katmanlar ve sütunlar arasındaki morfolojilerini analiz etmek için bir 3D rekonstrüksiyon oluşturma prosedürünü göstermektedir.

Drosophila Medulla Katmanları ve Sütunları Boyunca Dendritik Morfolojinin Analizi

Fare modellerinin hipokampusunda dendritik arborizasyonun görselleştirilmesi ve ölçülmesi için iki yöntem açıklıyoruz: gerçek zamanlı ve genişletilmiş alan derinliği görüntüleme. İlk yöntem, karmaşık topografik izlemeye ve dallanma derecesinin ölçülmesine izin verirken, ikincisi dendritik ağacın hızlı bir şekilde görselleştirilmesine izin verir.

Farelerde Hipokampal Bölgesi Dentate Gyrus dendritik arborization Değerlendirilmesi

Burada ayrıntılı bir Golgi-Cox protokolünü sunuyoruz. Bu güvenilir doku lekesi metodu, minimal sorun giderme ile hipokampustaki ve tüm beyindeki sitolojik mimarinin yüksek kaliteli bir değerlendirmesini sağlar.

Yaşlı Bir Farede Hipokampal Dendritik Karmaşıklığın Golgi-Cox Yöntemi ile Değerlendirilmesi

Bu iletişim kuralı dendritik morfogenez çalışmaları için kullanılan Drosophila, nöronal dendritik arborization karmaşıklık (NDAC) kantitatif analiz üzerinde duruluyor.

Kantitatif analiz Drosophila nöronal dendritik Arborization karmaşıklığı

Nörokimyasal ve davranışsal anormalliklerin altında yatan nöronlar ve dendritik dikenlerde potansiyel morfolojik değişikliklerin değerlendirilmesi için kritik olan piramidal nöronları etiketlemek ve analiz etmek için bir protokol salıyoruz.

Beyin Dilimlerinde ve Birincil Hücre Kültüründe Piramidal Nöronların Balistik Etiketlemesi

Nöronal dendritik morfoloji genellikle fonksiyon alttan. Gerçekten de, nöronların gelişimini etkileyen birçok hastalık süreci morfolojik bir fenotip ile kendini gösterir. Bu protokol, bozulmamış dendritik çardakları ve ilişkili dikenlerini analiz etmek için basit ve güçlü bir yöntemi açıklar.

CLARITY Doku Temizleme Yoluyla Bozulmamış Nöronal Dendritlerin Görüntülenmesi ve Nicelleştirilmesi

Sunulan, 2D floresan görüntülerden nöronal dendritik dalların yönelimlerinin basit ve doğrudan otomatik olarak ölçülmasını sağlayan bir hesaplama aracıdır.

Dendritik Dalların Otomatik Tanımlanması ve Oryantasyonları

Dendritik dikenler, çoğu uyarıcı sinapsın post-sinaptik bölmeleridir. Dendritik omurga morfolojisindeki değişiklikler, nörogelişim, yaşlanma, öğrenme ve birçok nörolojik ve psikiyatrik bozukluk sırasında meydana gelir ve güvenilir dendritik omurga analizinin önemini vurgular. Bu protokol, otomatik üç boyutlu nöron rekonstrüksiyon yazılımı kullanılarak dendritik omurga morfolojisinin doğru ve tekrarlanabilir bir şekilde ölçülmesini açıklar.

Otomatik Üç Boyutlu Nöron Rekonstrüksiyon Yazılımı Kullanılarak Dendritik Omurga Ölçümü

Keşfedin, Drosophila medulla nöronlarının dendritik yönlendirmesini çift görüş görüntüleme ve hesaplamalı araçlarla 3D uzayda analiz etme yöntemini. Bu teknik, sinir devrelerini haritalamada ve hücre tiplerini morfolojiye göre belirlemede araştırmacılara yardımcı olur.

Sütunlar ve Katmanlar dendritik Morfoloji Analizi

Daha fazla video keşfet