Name: Biyomoleküler etkileşimleri algılamak için bir Conductimetric Biyoalgılayıcı β-lactamase tabanlı tahlil kullanımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Öğrenin, hibrit β-lactamase teknolojisiyle iletkenlik biyosensörü kullanarak antikor-antijen etkileşimlerini nasıl tespit edeceğinizi. Bu yöntem, geleneksel immünosensörlere göre daha hızlı ve uygun maliyetli protein-protein etkileşimi analizi sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Valon bölgesi, Belçika SENSOTEM ve NANOTIC araştırma projeleri çerçevesinde yanı sıra ulusal fon için bilimsel araştırma (F.R.S.-F.N.R.S) finansal destek için kabul.

1. protein numune hazırlama
<ol><li>Üretmek ve hibrid protein Bağdat-taksi-Lys3 bizim önceki çalışma15' te bildirildiği gibi arındırmak. 50 mM fosfat tampon pH 7.4 ile aşağıdaki oluşturma protein saklayın: NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na2HPO4 1,44 g ve KH2PO4 800 mL distile su içinde çözünmüş 0,24 g gidermek 7,4 önce çözüm pH nihai çözüm 1 sesini L. filtre sterilize protein çözüm.</li>
	<li>Bir tavuk yumurta akı lizozim (HEWL) stok çözüm hazırlamak. 100 mg (40.000 adet/mg) ticari olarak satın alınan HEWL 10 ml (PBS bkz: adım 2.1.1) fosfat tampon salin geçiyoruz. Protein çözüm 0,22 mikron kesim ile filtreleri kullanarak filtreleme tarafından sterilize.</li>
</ol>2. Biyoalgılayıcı deneyleri
<ol><li>
Çözüm ve tampon hazırlama
	<ol>
<li>50 mM PBS NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na2HPO41,44 g ve KH2PO4 800 mL distile su içinde 0,24 g çözülerek hazırlayın. İçin pH 7.4 1 N HCl veya 1 N NaOH 1 L. filtre sterilize ve 4 ° C'de saklamak için çözüm sesini daha önce ayarlayın</li>
		<li>Kazein hidrolizat yukarıda açıklandığı gibi hazırlanan PBS 100 ml 3 g çözülerek doygunluk/engelleme çözüm hazırlamak (bkz. Adım 2.1.1). Filtre sterilize ve 4 ° C'de depolayın</li>
		<li>Kazein hidrolizat yukarıda açıklandığı gibi hazırlanan PBS 100 ml 1 g çözülerek bağlama çözüm hazırlamak (bkz. Adım 2.1.1). Filtre sterilize ve 4 ° C'de depolayın</li>
		<li>Bir çamaşır çözüm hazırlamak (% 0,1 ara - PBS) yukarıda açıklandığı gibi hazırlanan PBS 100 ml Tween 20 (% 100) 100 μL ekleyerek (bkz. Adım 2.1.1). 4 ° C'de mağaza</li>
		<li>Bir elektrot hazırlık çözüm hazırlamak (%1 Triton X-100-PBS) Triton X-100 (% 100) 1 mL 100 ml yukarıda açıklandığı gibi hazırlanan PBS ekleyerek (bkz. Adım 2.1.1). 4 ° C'de mağaza</li>
		<li>Bir elektrot rejenerasyon çözüm (3.5 M KCl) 26 g KCl son hacim için distile suda çözülerek hazırlamak 100 mL. Filtre sterilize ve mağaza 4 ° C'de</li>
		<li>5 mM NaCl çözüm 0,29 gr NaCl son hacmi 1 L. filtre sterilize ve 4 ° C'de depolamak için distile suda çözülerek hazırlamak Sonra bir algılama çözüm (4 mM benzylpenicillin) benzylpenicillin 20 ml 5 mm NaCl çözüm 26.7 mg çözülerek hazırlayın. Filtre sterilize ve -20 ° C'de depolayın</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sensör hazırlık ve rejenerasyon Not: Polyaniline cips geliştirilmiş olup, lütfen Dr. P. Bogaerts, Dr. S. Yunus ve Prof. Y. Glupczynski'nın (Katolik Üniversitesi of Louvain-la-Neuve - CHU Mont-Godinne) tarafından sağlanan sensör kaplı. Bu sensörler sentezlemek için kullanılan polyaniline elektro-polimerizasyon protokolleri yanı sıra sensör açıklaması onların önceki iş17' ayrıntılı. Kısaca, bu sistem ile klasik baskılı devre kartı (PCB) tekniklerle üretilen sekiz bireysel fiş yeniden kullanılabilir sensörleri kullanır. Bireysel cips üç elektrot oluşan lekeler yuvarlak. Üsttekini çalışma elektrot olan elektro sentezlenmiş hangi polyaniline üzerinde yapıldı. Orta bir referans elektrot ve alt elektrot sayaç elektrot oluşturmaktadır. Hem, başvuru ve sayaç elektrotlar katı Ag/AgCl amalgam karbon tabaka üzerine kullanarak functionalized.<ol>
<li>Elektrot 3 yıkama ipuçları 300 µL/iyi elektrot hazırlık çözüm içeren bir 96-şey plaka kuyu daldırma tarafından gerçekleştirmek (%1 Triton X-100-PBS, bkz: adım 2.1.5.). Her yıkama nazik oda sıcaklığında karıştırma ile 2 min için gerçekleştirin.</li>
		<li>Elektrotlar 300 µL/iyi nazik oda sıcaklığında karıştırma ile 2 min için distile su içeren bir 96-şey plaka kuyu içine belgili tanımlık keyif daldırma tarafından durulayın.</li>
		<li>Elektrotlar ipuçları 300 µL/iyi rejenerasyon çözüm içeren bir 96-şey plaka kuyu daldırma tarafından yeniden (3.5 M KCl, bkz: adım 2.1.6) gecede 4 ° C veya oda sıcaklığında 1 h.</li>
		<li>Elektrot 3 yıkama ipuçları 300 µL/iyi fosfat tampon tuz içeren bir 96-şey plaka kuyu daldırma tarafından gerçekleştirmek (bkz. Adım 2.1.1.). Her yıkama nazik oda sıcaklığında karıştırma ile 2 dakika boyunca gerçekleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tahlil bağlama sensör üzerinde gerçekleştirilen
	<ol>
<li>Kat HEWL 40 µg/mL HEWL elektrot yüzeyine PBS içinde hazırlanan bir 15 µL damla yatırma tarafından elektrot PANI (polyaniline) yüzeyine. Gecede 4 ° C veya oda sıcaklığında 1 saat kuluçkaya.</li>
		<li>Elektrot fosfat tampon salin ile üç yıkama gerçekleştirmek (bkz. Adım 2.1.1) sensör cips elektrot bölümlerini 300 µL/iyi fosfat tampon tuz içeren bir 96-şey plaka kuyu daldırma tarafından. Her yıkama nazik oda sıcaklığında karıştırma ile 2 min için gerçekleştirin.</li>
		<li>Elektrotlar engelleme çözüm bir 50 µL damla ekleyerek emdirmek (bkz. Adım 2.1.2) elektrot yüzeyine. Oda sıcaklığında 1 h için kuluçkaya. O zaman üç kez önceki açıklandığı gibi yıkama (bkz. Adım 2.3.2) adım.</li>
		<li>Bağdat-taksi-Lys3 çözüm çözüm bağlama içinde 20 µg/ml seyreltik (bkz. Adım 2.1.3) ve 15 µL damla elektrotlar üzerine seyreltilmiş Bu çözümün uygulama. Oda sıcaklığında 10 dakika için kuluçkaya. Antijen-nanobody reaksiyon sonra yıkama çözüm kullanarak önceki adımda üç kez açıklanan yıkayın (bkz. Adım 2.1.4). Elektrot kez PBS ile yıkayın (bkz. Adım 2.1.1).</li>
		<li>Tespiti için dijital multimetre için bakır-devreleri bölümü üzerinden sensör çip takın. Sonra bir 50 µL damla algılama çözüm uygulayarak sensör yanıt başlatmak (bkz. Adım 2.1.7) üzerine pozitif elektrotlar ve NaCl 5 mM çözüm (bkz. Adım 2.1.7) negatif elektrot üzerine bir 50 µL damla uygulanıyor. Oda sıcaklığında 30 dk için kuluçkaya. Gürültülerinden dijital multimetre ile izleyin. Not: Multimetre Dr. P. Bogaerts, Dr. S. Yunus ve Prof. Y. Glupczynski'nın (Katolik Üniversitesi of Louvain-la-Neuve - CHU Mont-Godinne. tarafından sağlanan Bu potansiyostat bilgisayar kontrollü yolu ile a USB liman ve aynı anda sekiz farklı fiş sensörün analiz eder. Yunus ve meslektaşları17 tarafından oluşturulan yazılım zamana karşı başvuru ve örnek elektrot arasındaki gürültülerinden farkı ölçümleri temsil eden gerçek zamanlı bir çizim oluşturur.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Higgins, I. J., Lowe, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+to+the+principles+and+applications+of+biosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Introduction to the principles and applications of biosensors.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 316, 3-11 (1987).</li>
<li>Byrne, B., Stack, E., Gilmartin, N., O'Kennedy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-based+sensors%3A+principles%2C+problems+and+potential+for+detection+of+pathogens+and+associated+toxins%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Antibody-based sensors: principles, problems and potential for detection of pathogens and associated toxins.</a> Sensors (Basel). 9, 4407-4445 (2009).</li>
<li>Huston, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+engineering+of+antibody+binding+sites%3A+recovery+of+specific+activity+in+an+anti-digoxin+single-chain+Fv+analogue+produced+in+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Protein engineering of antibody binding sites: recovery of specific activity in an anti-digoxin single-chain Fv analogue produced in Escherichia coli.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 85, 5879-5883 (1988).</li>
<li>Mechaly, A., Zahavy, E., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+implementation+of+a+single-chain+Fv+antibody+for+specific+detection+of+Bacillus+anthracis+spores%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development and implementation of a single-chain Fv antibody for specific detection of Bacillus anthracis spores.</a> Appl Environ Microbiol. 74, 818-822 (2008).</li>
<li>Hamers-Casterman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naturally+occurring+antibodies+devoid+of+light+chains%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Naturally occurring antibodies devoid of light chains.</a> Nature. 363, 446-448 (1993).</li>
<li>Sheriff, S., Constantine, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redefining+the+minimal+antigen-binding+fragment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Redefining the minimal antigen-binding fragment.</a> Nat Struct Biol. 3, 733-736 (1996).</li>
<li>Stijlemans, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+targeting+of+conserved+cryptic+epitopes+of+infectious+agents+by+single+domain+antibodies.+African+trypanosomes+as+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Efficient targeting of conserved cryptic epitopes of infectious agents by single domain antibodies. African trypanosomes as paradigm.</a> J Biol Chem. 279, 1256-1261 (2004).</li>
<li>Thanongsaksrikul, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+V+H+H+that+neutralizes+the+zinc+metalloproteinase+activity+of+botulinum+neurotoxin+type+A%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A V H H that neutralizes the zinc metalloproteinase activity of botulinum neurotoxin type A.</a> J Biol Chem. 285, 9657-9666 (2010).</li>
<li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate-specific+antigen+immunosensing+based+on+mixed+self-assembled+monolayers%2C+camel+antibodies+and+colloidal+gold+enhanced+sandwich+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens.+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Prostate-specific antigen immunosensing based on mixed self-assembled monolayers, camel antibodies and colloidal gold enhanced sandwich assays.</a> Biosens. Bioelectron. 21, 483-490 (2005).</li>
<li>Yolken, R. H., Wee, S. B., Van Regenmortel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+beta-lactamase+in+enzyme+immunoassays+for+detection+of+microbial+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">The use of beta-lactamase in enzyme immunoassays for detection of microbial antigens.</a> J Immunol Methods. 73, 109-123 (1984).</li>
<li>Kojima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+circularly+permutated+beta-lactamase+tethered+to+antibody+domains+by+specific+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjug+Chem%22%5BJournal%5D)">Activation of circularly permutated beta-lactamase tethered to antibody domains by specific small molecules.</a> Bioconjug Chem. 22, 633-641 (2011).</li>
<li>Iwai, H., Kojima-Misaizu, M., Dong, J., Ueda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+a+Ligand-Dependent+Enzyme+by+Fusing+Circularly+Permuted+Antibody+Variable+Region+Domains%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjug+Chem%22%5BJournal%5D)">Creation of a Ligand-Dependent Enzyme by Fusing Circularly Permuted Antibody Variable Region Domains.</a> Bioconjug Chem. 27, 868-873 (2016).</li>
<li>Vandevenne, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bacillus+licheniformis+BlaP+beta-lactamase+as+a+model+protein+scaffold+to+study+the+insertion+of+protein+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">The Bacillus licheniformis BlaP beta-lactamase as a model protein scaffold to study the insertion of protein fragments.</a> Protein Sci. 16, 2260-2271 (2007).</li>
<li>Vandevenne, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+easy+development+of+versatile+tools+to+study+protein%2Fligand+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Eng+Des+Sel%22%5BJournal%5D)">Rapid and easy development of versatile tools to study protein/ligand interactions.</a> Protein Eng Des Sel. 21, 443-451 (2008).</li>
<li>Crasson, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+functionalization+of+a+nanobody+using+protein+insertion+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Eng+Des+Sel%22%5BJournal%5D)">Enzymatic functionalization of a nanobody using protein insertion technology.</a> Protein Eng Des Sel. 28, 451-460 (2015).</li>
<li>Yunus, S., Attout, A., Vanlancker, G., Bertrand, P., Ruth, N., Galleni, G. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0925400511002668">A method to probe electrochemically active material state in portable sensor applications.</a> Sensors and Actuators B: Chemical. 156, 35-42 (2011).</li>
<li>Bogaerts, P., Yunus, S., Massart, M., Huang, T. D., Glupczynski, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+BYG+Carba+Test%2C+a+New+Electrochemical+Assay+for+Rapid+Laboratory+Detection+of+Carbapenemase-Producing+Enterobacteriaceae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the BYG Carba Test, a New Electrochemical Assay for Rapid Laboratory Detection of Carbapenemase-Producing Enterobacteriaceae.</a> J Clin Microbiol. 54, 349-358 (2016).</li>
<li>Wang, L. P., Wang, W., Di, L., Lu, Y. N., Wang, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+adsorption+under+electrical+stimulation+of+neural+probe+coated+with+polyaniline%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surf+B+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Protein adsorption under electrical stimulation of neural probe coated with polyaniline.</a> Colloids Surf B Biointerfaces. 80, 72-78 (2010).</li>
<li>Piletsky, S., Piletska, E., Bossi, A., Turner, N., Turner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+functionalization+of+porous+polypropylene+membranes+with+polyaniline+for+protein+immobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Surface functionalization of porous polypropylene membranes with polyaniline for protein immobilization.</a> Biotechnol. Bioeng. 82, 86-92 (2003).</li>
<li>Khatkhatay, M. I., Desai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+performances+of+four+enzymes+used+in+ELISA+with+special+reference+to+beta-lactamase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunoassay%22%5BJournal%5D)">A comparison of performances of four enzymes used in ELISA with special reference to beta-lactamase.</a> J Immunoassay. 20, 151-183 (1999).</li>
<li>Worn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+in+vitro+stability+and+in+vivo+performance+of+anti-GCN4+intrabodies+as+cytoplasmic+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Correlation between in vitro stability and in vivo performance of anti-GCN4 intrabodies as cytoplasmic inhibitors.</a> J Biol Chem. 275, 2795-2803 (2000).</li>
<li>Ostermeier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+allosteric+protein+switches+by+domain+insertion%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Eng+Des+Sel%22%5BJournal%5D)">Engineering allosteric protein switches by domain insertion.</a> Protein Eng Des Sel. 18, 359-364 (2005).</li>
<li>Choi, J. H., Laurent, A. H., Hilser, V. J., Ostermeier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+of+protein+switches+based+on+an+ensemble+model+of+allostery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Design of protein switches based on an ensemble model of allostery.</a> Nat Commun. 6, 6968(2015).</li>
<li>Collinet, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionally+accepted+insertions+of+proteins+within+protein+domains%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Functionally accepted insertions of proteins within protein domains.</a> J Biol Chem. 275, 17428-17433 (2000).</li>
<li>Betton, J. M., Jacob, J. P., Hofnung, M., Broome-Smith, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creating+a+bifunctional+protein+by+insertion+of+beta-lactamase+into+the+maltodextrin-binding+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Creating a bifunctional protein by insertion of beta-lactamase into the maltodextrin-binding protein.</a> Nat Biotechnol. 15, 1276-1279 (1997).</li>
<li>Ay, J., Gotz, F., Borriss, R., Heinemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+the+Bacillus+hybrid+enzyme+GluXyn-1%3A+native-like+jellyroll+fold+preserved+after+insertion+of+autonomous+globular+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Structure and function of the Bacillus hybrid enzyme GluXyn-1: native-like jellyroll fold preserved after insertion of autonomous globular domain.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 6613-6618 (1998).</li>
<li>Ruth, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+vaccination+for+the+priming+of+neutralizing+antibodies+against+non-immunogenic+STa+enterotoxin+from+enterotoxigenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">DNA vaccination for the priming of neutralizing antibodies against non-immunogenic STa enterotoxin from enterotoxigenic Escherichia coli.</a> Vaccine. 23, 3618-3627 (2005).</li>
<li>Zervosen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+cattle+serum+antibody+responses+against+TEM+beta-lactamase+and+the+nonimmunogenic+Escherichia+coli+heat-stable+enterotoxin+%28STaI%29%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunol+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the cattle serum antibody responses against TEM beta-lactamase and the nonimmunogenic Escherichia coli heat-stable enterotoxin (STaI).</a> FEMS Immunol Med Microbiol. 54, 319-329 (2008).</li>
<li>Chevigne, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+bifunctional+hybrid+beta-lactamases+for+epitope+mapping+and+immunoassay+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Use of bifunctional hybrid beta-lactamases for epitope mapping and immunoassay development.</a> J Immunol Methods. 320, 81-93 (2007).</li>
<li>Ke, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+an+engineered+beta-lactamase+maltose+binding+protein+fusion+protein%3A+insights+into+heterotropic+allosteric+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Structure of an engineered beta-lactamase maltose binding protein fusion protein: insights into heterotropic allosteric regulation.</a> PloS One. 7, 39168(2012).</li>
<li>Saeedfar, K., Heng, L. Y., Ling, T. L., Rezayi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiometric+urea+biosensor+based+on+an+immobilised+fullerene-urease+bio-conjugate%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Potentiometric urea biosensor based on an immobilised fullerene-urease bio-conjugate.</a> Sensors (Basel). 13, 16851-16866 (2013).</li>
<li>D'Orazio, P. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0009898103002419">Biosensors in clinical chemistry.</a> Clin Chim Acta. 334, 41-69 (2003).</li>
<li>Szucs, J., Pretsch, E., Gyurcsanyi, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiometric+enzyme+immunoassay+using+miniaturized+anion-selective+electrodes+for+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">Potentiometric enzyme immunoassay using miniaturized anion-selective electrodes for detection.</a> Analyst. 134, 1601-1607 (2009).</li>
<li>Ding, J., Wang, X., Qin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+galvanostatic+control+of+a+polymeric+membrane+ion-selective+electrode+for+potentiometric+immunoassays%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Pulsed galvanostatic control of a polymeric membrane ion-selective electrode for potentiometric immunoassays.</a> ACS Appl Mater Interfaces. 5, 9488-9493 (2013).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+polymeric+liquid+membrane+electrode+responsive+to+3%2C3%27%2C5%2C5%27-tetramethylbenzidine+oxidation+for+sensitive+peroxidase%2Fperoxidase+mimetic-based+potentiometric+biosensing%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">A polymeric liquid membrane electrode responsive to 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine oxidation for sensitive peroxidase/peroxidase mimetic-based potentiometric biosensing.</a> Anal Chem. 86, 4416-4422 (2014).</li>
<li>Grieshaber, D., MacKenzie, R., Voros, J., Reimhult, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemical+Biosensors+-+Sensor+Principles+and+Architectures%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Electrochemical Biosensors - Sensor Principles and Architectures.</a> Sensors (Basel). 8, 1400-1458 (2008).</li>
<li>Bakker, E., Pretsch, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+potentiometry%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Analyt+Chem%22%5BJournal%5D)">Nanoscale potentiometry.</a> Trends Analyt Chem. 27, 612-618 (2008).</li>
<li>Zhang, D., Liu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosensors+and+bioelectronics+on+smartphone+for+portable+biochemical+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Biosensors and bioelectronics on smartphone for portable biochemical detection.</a> Biosens Bioelectron. 75, 273-284 (2016).</li>
<li>Nemiroski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Universal+mobile+electrochemical+detector+designed+for+use+in+resource-limited+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Universal mobile electrochemical detector designed for use in resource-limited applications.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 11984-11989 (2014).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.gsma.com/connectedliving/wp-content/uploads/2013/06/Socio-economic_impact-of-mHealth_EU_14062013V2.pdf">Socio-economic impact of mHealth- An assessment report for the European Union</a>. , Price Waterhouse Coopers. Commission, T.E (2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu çalışmada biz Bağdat β-lactamase bir taşıyıcı protein kullanarak bir nanobody functionalize için bir yöntem mevcut ve biz başarılı bir şekilde potentiometric sensör assay olarak elde edilen melez protein uygulayabilirsiniz göstereceğiz. Kovalent kaplin elektrik sinyali üretir enzimatik aktivite için antikor bölümünün diğer Biyoalgılayıcı deneyleri için karşılaştırıldığında çalışmalarımızın ana yenilik yönüdür. Bu sözde protein ekleme teknoloji avantajları ve bu bölümün ana odak-ecek var olmak sınırlamalar sunar.
<...

Biyosensörler fiziksel veya kimyasal sinyal aygıtları için güç çeviriciler1adlandırılan biyo moleküler bir etkileşim birleştirmek analitik cihazlar vardır. Kaydedilen sinyalleri yorumlanır ve immobilize ve ücretsiz ortakları arasındaki etkileşimleri izlemek için dönüştürülür. Biyosensörler çoğu analitler hormonlar veya farklı patojen işaretleri2gibi algılamak için bir antikor kullanımı gerektirir. Farklı sensör biçimleri kullanılabilir ve kitle tabanlı, manyetik, optik ve elektrokimyasal biyosensörler içerir. İkincisi arasında en sık kullanılan sensörler vardır ve bir bağlama olayı elektrik sinyaline dönüştürerek işlev. Performansları ve hassasiyetleri tüm antikor tabanlı biyosensörler, güçlü aslında iki parametre üzerinde bağlıdır: i) antikor ve II)2sinyal oluşturmak için kullanılan sistem özelliklerini kalitesi.
Antikorlar iki ağır zincir ve iki hafif zincirleri oluşan yüksek moleküler kütlesi dimerik (150-160 kDa) proteinlerdir. Hafif ve ağır zincirleri arasındaki etkileşimi çoğunlukla hidrofobik etkileşimler yanı sıra bir korunmuş disülfür bağ stabil. Her zincir antijen aslında tamamlayıcı belirlenmesi bölgeleri (CDR1-2-3) adlı üç hypervariable bölgeler ile etkileşim bir değişken etki alanı içerir. Alan, tam uzunlukta antikorlar düşük maliyetli ifade sistemleri (örneğin, E. coli) ile büyük ölçekli bir ifade çok sayıda gelişmeler rağmen genellikle istikrarsız ve toplanan protein üretimi için açar. Bu yüzden3 (ScFvs ≈ 25 kDa) tek-zinciri değişken parçaları gibi çeşitli antikor parçaları mühendislik. Bunlar sırasıyla bir ağır ve kovalent sentetik amino asit dizisi tarafından bağlanan bir hafif zincirleri değişken etki alanından oluşur. Ancak, bu parçaları kez zavallı bir istikrar görüntülemek ve toplamak, onların hidrofobik bölgeler solvent4büyük bir bölümünü ortaya çıkarmak bu yana eğilimi var. Bu bağlamda, tek zincir Devegiller antikor parçaları, nanobodies veya VHHs, olarak anılacaktır ScFvs mükemmel alternatifler görünmektedir. Bu etki alanları Devegiller tek zincir antikorlar değişken adlarına karşılık. Geleneksel antikorlar, aksine Devegiller antikorlar yoksun hafif zincirleri yüklenir ve yalnızca iki ağır zincir5içerir. Bu nedenle, nanobodies en küçük monomeric antikor (12 kDa) geleneksel antikorlar6için benzer bir ilgi ile bir antijen bağlamak mümkün oluşuyor. Ayrıca, geliştirilmiş kararlılık ve diğer tam uzunlukta antikorlar veya antikor parçaları ile karşılaştırıldığında çözünürlük mevcut. Son olarak, kendi küçük boyutları ve genişletilmiş kendi CDR3 döngüleri onları şifreli epitopları tanımak ve enzim etkin sitelere7,8' e bağlamak izin verir. Günümüzde, bu etki alanlarının büyük ilgi alıyorsanız ve Biyoalgılayıcı teknoloji kombine edilmiştir. Örneğin, Huang ve ark. nanobody tabanlı Biyoalgılayıcı algılama ve miktar insan Prostat spesifik antijen (PSA)9için geliştirdik.
Bahsedilen-yukarıda olarak, elektrik sinyal oluşturmak için kullanılan sistemin verimliliği Biyoalgılayıcı deneyleri önemli bir parametre belirtilir. Bu nedenle, elektrokimyasal biyosensörler enzim tabanlı artan ilgisini çekti var ve sağlık, gıda güvenliği ve çevre izleme gibi çeşitli uygulamalar için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu biyosensörler bir substrat katalitik hidroliz üzerinde elektrik sinyali oluşturmak için sana bir enzim tarafından güveniyor. Bu bağlamda, β-laktamaz daha belirli, daha duyarlı ve kolaylaştırmak alkalen fosfataz veya horseradish peroksidaz10gibi birçok diğer enzimler deneysel olarak gösterilmiştir. Β-laktamaz onları hidrolize tarafından Beta-laktam antibiyotik bakteriyel direnç sorumlu olan enzimlerdir. Onlar monomeric, çok kararlı, verimli ve küçük boyutu var. Ayrıca, etki alanı/peptid eklemeleri β-laktamaz içine protein-ligand etkileşimleri eğitim için verimli araçlar olmak gösterildi BI fonksiyonel chimeric proteinleri üretir. Gerçekten de, son yıllarda yapılan çalışmalarda TEM1 β-lactamase sonuçları antikor değişken parçaları bu ekleme onun hedef antijen için yüksek benzeşimli bağlamak mümkün kalır bir chimeric protein göstermiştir. İlginçtir, antijen bağlayıcı TEM1 katalitik aktivitesi11,12allosteric yönetmelik ikna etmek için gösterildi. Ayrıca, protein etki alanı ekleme izin veren bir döngü Bacillus licheniformis Bağdat β-lactamase protein-ligand etkileşimleri13 izlemek için uygundur fonksiyonel chimeric proteinler oluşturduğu çeşitli çalışmalarda gösterdi ,14. Biz son zamanlarda taksi-Lys3, Bağdat15bu keyfi ekleme site adında bir nanobody takılı. Bu nanobody tavuk-yumurta-beyaz lizozim (HEWL) bağlamak için ve onun enzimatik aktivite16etkisizleştirmek için gösterildi. Biz Bağdat-taksi-Lys3, adında oluşturulan melez protein yüksek özgüllük muhafaza / β-lactamase aktivite kaldı HEWL karşı benzeşme değişmeden gösterdi. Sonra başarıyla hibrid β-lactamase teknolojisi bir elektrokimyasal Biyoalgılayıcı için kombine ve üretilen elektrik sinyal miktarı Bağdat-taksi-Lys3 ve bir elektrot üzerinde immobilize HEWL arasındaki etkileşimin bağımlı olduğunu gösterdi. Nitekim, β-laktam antibiyotik Bağdat tarafından hidroliz nicel bir elektrik sinyali dönüştürülebilir bir proton açıklaması neden olmaktadır. Bu birleşimi bir elektrokimyasal Biyoalgılayıcı hibrid β-lactamase teknolojisiyle hızlı, hassas, nicel ve üretilen sinyal gerçek zamanlı ölçüm sağlar. Bu metodoloji burada açıklanmıştır.

<table><tbody><tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>V000225&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>1551128</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Tris&ndash; HCl</td><td>Roche</td><td>10812846001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4&nbsp;</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>NIST2186II</td><td></td></tr><tr><td>2-merkaptoetanol</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>M6250</td><td></td></tr><tr><td>alanin</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>A7627</td><td></td></tr><tr><td>HClO4</td><td>Fluka</td><td>34288</td><td>1M HClO4 çözeltisi, distribütör : Sigma-Aldricht</td></tr><tr><td>kazein hidrolizatı</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>22090</td><td></td></tr><tr><td>benzilpenisilin sodyum</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>B0900000</td><td></td></tr><tr><td>tavuk yumurtası akı lizozim</td><td>Roche</td><td>10837059001</td><td></td></tr><tr><td>heptan</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>246654</td><td></td></tr><tr><td>metanol</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>322415</td> amonyum hidroksit çözeltisi Sigma-Aldricht 380539<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>% 28 NH3&nbsp; H2O içinde, çift damıtma ile saflaştırılır (konsantre?)</td></tr><tr><td>< güçlü > Laboratuvar sarf malzemeleri< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6 kuyulu plaka&nbsp;</td><td>Greiner Bio-One</td><td>657165</td><td>CELLSTAR 6 Kuyulu Plaka</td></tr><tr><td><güçlü>Ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH ölçer</td><td>WTW</td><td>1AA110</td><td>Lab pH metre inoLab pH 7110</td></tr><tr><td>vakum ve filtrasyon sistemi</td><td>Nalgene</td><td>NALG300-4100</td><td>Alıcılı filtre tutucular, distribütör : Yunus tarafından üretilen VWR</td></tr><tr><td>potansiyometrik sensör çipleri</td><td></td><td></td><td>ve meslektaşları (ref 16)</td></tr><tr><td>PGSTAT30 Autolab</td><td>Metrohm Autolab</td><td></td><td>durduruldu, başarılı Autolab PGSTAT302N</td></tr><tr><td>dijital multimetre, METRAHit 22M</td><td>Gossen Metrawatt</td><td></td><td>durduruldu, halefi Metrahit Base</td></tr></tbody></table>

biyomoleküler etkileşimleri algılamak için bir conductimetric biyoalgılayıcı β-lactamase tabanlı tahlil kullanımı

The Use of a &#946;-lactamase-based Conductimetric Biosensor Assay to Detect Biomolecular Interactions

Biyosensörler patojen algılama, moleküler tanı, çevresel izleme ve gıda güvenliği denetimi gibi çeşitli alanlarda uygulanan ve giderek daha önemli hale gelmektedir. Bu bağlamda, çeşitli protein-protein etkileşim çalışmaları verimli muhabir enzimler olarak β-laktamaz kullanılır. Ayrıca, eklemeleri ve peptidler yapısal proteinler/etki alanlarının kuvvetle kabul yeteneğini chimeric proteinleri oluşturmak için bu enzimler kullanımı teşvik eder. Bir son çalışmada, Bacillus licheniformis Bağdat β-lactamase bir tek etki alanı antikor parçası eklenir. Nanobodies, adı da verilen bu küçük etki alanları üzerinden Devegiller tek zincir antikorların antijen bağlayıcı etki alanları olarak tanımlanır. Ortak çift zincir antikorlar gibi gösteriyorlar yüksek benzeşim ve özelliklerine kendi hedefleri için. Elde edilen chimeric protein β-lactamase aktivite korurken hedefine karşı yüksek bir yakınlık sergiledi. Bu nanobody ve β-lactamase moieties işlevsel kalır göstermektedir. Mevcut çalışma, biz Biyoalgılayıcı teknoloji hibrid β-lactamase sistemi birleştirir detaylı bir protokol raporu. Nanobody hedefine için özel bağlayıcı enzimin katalitik aktivitesi tarafından yayımlanan proton conductimetric bir ölçüm sayesinde tespit edilebilir.

Tasarım ve mühendislik chimeric protein Bağdat-taksi-Lys3
Şekil 1 BalP A sınıfı β-lactamase izin veren bir döngü içine taksi-Lys3 ekleme Bacillus licheniformistemsil eder. Ekleme Asp198 ve Lys199 kalıntıları arasında gerçekleştirildi. Trombin bölünme site taksi-Lys3 her tarafında kullanılmaya başlandı. Bağdat-taksi-Lys3 chimeric protein kodlama bir bünye ifade plazmid ile dönüştürülmüş hücrelerin Ampisilin küçük bir konsan...

Bu çalışmada, protein-protein etkileşimleri hibrid β-lactamase teknolojisini temel alan bir conductimetric Biyoalgılayıcı kullanarak eğitim için yeni bir yöntem rapor. Bu yöntem proton β-lactams hidroliz üzerine sürümü kullanır.

Biyomoleküler etkileşimleri algılamak için bir Conductimetric Biyoalgılayıcı β-lactamase tabanlı tahlil kullanımı

Biosensors are becoming increasingly important and implemented in various fields such as pathogen detection, molecular diagnosis, environmental ...

Bu Kondüktometrik Biyosensör Analizinin genel amacı, hibrit beta-laktamaz teknolojisini kullanarak biyomoleküler etkileşimleri tespit etmektir. Kimera bir beta-laktamaz proteini kullanarak antikor-antijen etkileşimlerini tespit etmeye yönelik bir yöntemi tanımlıyoruz. Bu yöntemin prensibi, beta-laktamaz aktivitesinin proton salınımını ölçerek bağlanmayı tespit etmeye dayanmaktadır.Bu tekniğin geleneksel immünosensörlere göre temel avantajı, analitleri tespit etmek için hibrit bir protein kullanarak daha ucuz ve daha hızlı sensör analizleri sağlayan kimera bir beta-laktamazın kullanılmasıdır. Prosedürü, lisansüstü araştırmacı Mathieu Dondelinger gerçekleştirecek. Bu prosedüre, metin protokolünde açıklandığı şekilde protein örneği ve solüsyon hazırlama aşamalarıyla başlayın. Yeniden kullanılabilir elektrotu, uçlarını her kuyucukta 300 microliters elektrot hazırlama solüsyonu içeren 96 kuyucuklu bir plakanın kuyucuklarına, oda sıcaklığında hafifçe karıştırarak iki dakika boyunca daldırarak hazırlayın.Bu adımı üç kez tekrarlayın. Ardından, uçları, her kuyucukta 300 microliters distile su içeren 96 kuyucuklu bir plakanın kuyucuklarına daldırarak, oda sıcaklığında hafif karıştırma ile iki dakika boyunca elektrotları durulayın. Elektrotları yeniden aktive etmek için, uçları, her kuyucukta 300 microliters rejenerasyon solüsyonu içeren 96 kuyucuklu bir plakanın kuyucuklarına dört degrees Celsius'ta gece boyunca veya oda sıcaklığında bir saat boyunca daldırın.Ardından, elektrot uçlarını, kuyuk başına 300 µL fosfat tamponlu salin içeren 96 kuyucuklu plakadaki kuyucuklara daldırarak elektrotları üç kez yıkayın. Her bir yıkama işlemini, oda sıcaklığında nazikçe karıştırarak iki dakika boyunca gerçekleştirin. Fosfat tamponu içinde hazırlanmış 40 µg/mL HEWL'den 15 µL'lik bir damlayı elektrot yüzeyine damlatarak, elektrodun polianilin yüzeyini tavuk yumurta akı lizozimi ile kaplayın.Elektrodu oda sıcaklığında bir saat inkübe edin. Ardından, sensör çiplerinin elektrot kısımlarını, her kuyucuğunda 300 µL fosfat tamponu bulunan 96 kuyucuklu bir plakanın kuyucuklarına daldırarak elektrotları fosfat tamponu ile üç kez yıkayın. Her yıkama işlemini oda sıcaklığında, hafif karıştırma ile iki dakika boyunca gerçekleştirin.Bloklama çözeltisinden 30 µL'lik bir damlayı elektrot yüzeyine ekleyerek elektrotları doyurun. Oda sıcaklığında bir saat inkübe edin. Ardından, daha önce olduğu gibi üç kez yıkayın.BlaP-cAb-Lys3 veya BlaP çözeltilerini bağlama tamponunda mililitre başına 20 mikrogram olacak şekilde seyreltin. Ardından, bu seyreltilmiş çözeltiden 15 mikrolitrelik bir damlayı elektrotların üzerine uygulayın. Elektrotları oda sıcaklığında bir saat boyunca inkübe edin.Antijen nanobody reaksiyonundan sonra, elektrotları yıkama çözeltisi ile üç kez yıkayın. Ardından, her kuyucuğunda 300 microliter deteksiyon tamponu bulunan 96 kuyucuklu bir plakanın kuyucuğuna daldırarak sensör elektrotlarını deteksiyon tamponu ile yıkayın. Ve bir dakika boyunca kısa süreli olarak inkübe edin.Tespit için dijital multimetreyi bilgisayara bağlayın. Ardından, sensör çipini bakır devre kısmı aracılığıyla dijital multimetreye takın. Pozitif etiketli elektrotların üzerine 50 µL dört mM benzilpenisilin çözeltisi damlatarak sensör yanıtını başlatın.Negatif kontrol olarak kullanılmak üzere, negatif etiketli elektrotların üzerine 50 µL tespit çözeltisi damlatın. Bağlı dijital multimetre ile kondüktometrik değerleri 30 dakika boyunca izleyin. Verileri gerçek zamanlı olarak doğrudan ekranda görüntüleyin veya dijital verileri bir metin dosyası olarak dışa aktarın.Referans ve örnek elektrotlar arasındaki iletkenlik değişimlerinin zamana karşı ölçümlerini temsil eden grafiksel bir çıktı oluşturmak için bu ham veriler grafiğe dökülebilir. Kimera proteini oluşturmak için, taşıyıcı protein olarak A sınıfı beta-laktamaz BlaP kullanılmıştır. Burada, katalitik kalıntılar kırmızı ile gösterilmiştir.Çözücüye açık bir döngüde yer alan ekleme bölgesi sarı ile belirtilmiştir. cAb-Lys3 adlı camelid antikor fragmanı BlaP'ye eklenmiştir. Ortaya çıkan kimera protein olan BlaP-cAb-Lyse3, beta-laktamaz aktivitesi korunurken HEWL'ye bağlanabilmektedir.BlaP-cAb-Lys3 yüklenmeden önce HEWL, polianilin kaplı bir elektrota immobilize edilmiştir. İmmobilize edilen kimera protein tarafından benzylpenicillin hidrolizi sonucu protonların salınması, kullanıcı tarafından yorumlanabilen iletkenlik değişikliklerini tetikler. Sensörler, dört çift şeklinde organize edilmiş sekiz çip içermektedir.Her çip üç elektrot içerir: bir polianilin kaplı çalışma elektrodu, bir referans elektrot ve bir karşı elektrot. Her çift için, negatif olarak etiketlenen çip negatif kontrole karşılık gelirken, pozitif olarak etiketlenen çip test edilen örneğe karşılık gelir. Burada, BlaP-cAb-Lys3'ün HEWL ile spesifik etkileşimini gösteren iletkenlik ölçümleri gösterilmektedir.İletkenlikteki değişimler, immobilize şimerik beta-laktamaz tarafından gerçekleştirilen antibiyotik hidrolizinin tetiklediği proton salınımından kaynaklanmaktadır. Negatif kontrol olan doğal beta-laktamaz BlaP için herhangi bir bağlanma tespit edilememiştir. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, düzgün bir şekilde uygulandığı ve deneysel koşulların optimize edildiği takdirde işlem yarım günde tamamlanabilir.Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, bir antikor fragmanının BlaP'ye eklenmesinin zorluğu nedeniyle güçlük çekebilirler. Bu prosedür uygulanırken, elde edilen verilerin kalitesinin kimera beta-laktamazın işlevselliğine bağlı olacağını unutmamak önemlidir. Bu prosedürün ardından, söz konusu etkileşimin denge birliktelik sabitini belirlemek amacıyla, saptanan etkileşimin miktarının ölçülmesine olanak tanıyan diğer yöntemler uygulanabilir.Geliştirilmesinden sonra bu teknik, immün biyosensör alanındaki araştırmacıların canlı organizmalardan farklı ortamlara kadar çeşitli örneklerdeki moleküler etkileşimleri incelemelerinin önünü açmıştır. Kimera beta-laktamaz teknolojisi, herhangi bir antikoru veya temel bir protein fragmanını fonksiyonelleştirmek için çok yönlü bir araç olduğundan, bu tekniğin etkileri çok sayıda biyomolekülün tespitine kadar uzanmaktadır. Bu nedenle, insan ve hayvan sağlığı gibi birçok alanda ucuz ve hızlı tanı araçları geliştirmek için kullanılabilir.

the-use-lactamase-based-conductimetric-biosensor-assay-to-detect

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz hızlı bakteri bulunması ve belirlenmesi için bir elektrokimyasal sensör test yöntem açıklanmaktadır. Tahlil, ribozomal RNA (rRNA) türe özgü dizileri için DNA oligonükleotid probları yakalama fonksiyonuna sahip bir sensör dizisi içerir. Yakalama prob ve yaban turpu peroksidaz bağlı DNA oligonükleotid dedektör prob ile hedef rRNA Sandwich melezleme ölçülebilir bir amperometrik akım üretir.

Elektrokimyasal Sensörler kullanarak Bakteriyel Algılama ve Tanıma

Bu video, bir antikorun bir dönüştürücü çip üzerinde hareketsiz hale getirilmiş bir hedef antijen ile etkileşimini incelemek için iletken bir biyosensör testini göstermektedir. Biyosensör, iki işlevli bir kimerik proteine sahip olacak şekilde tasarlanmıştır - hareketsizleştirilmiş hedef antijene bağlanmak için bir nano gövdeye kaynaşmış fonksiyonel bir katalitik bölgeye sahip bir β-laktamaz enzimi. Bağlanma üzerine, bir antibiyotik substratının β-laktamaz enzimi tarafından katalitik hidrolizi,...

Protein-Protein Etkileşimleri için β-Laktamaz Tabanlı Kondüktimetrik Biyosensör Testi

Antibiyotiklere kazanılmış dayanıklılık, önemli bir halk sağlık sorunu olduğunu ve şu anda insan yaşamı için en büyük tehditlerden biri olarak DSÖ tarafından sıralanır. Burada dirençli bakterilerin ilaca karşı yeni ve güçlü ajanların keşfi için kritik antibakteriyel direnç ölçmek için konsol teknoloji kullanımı açıklanmaktadır.

İlaç-hedef Etkileşimleri ve Antibakteriyel Direnç Algılama Nanomekaniğe

Burada protokolleri Bio-tabaka interferometrisi ile protein-protein etkileşimleri kinetik analizleri tarif eder. Hücresel enerji metabolizmasında yer alır F tipi ATP sintaz, bakteriler kendi ε alt birimi ile inhibe edilebilir. Biz, ε inhibitör C-terminal alanı ile katalitik kompleksinin etkileşimleri incelemek için Bio-tabaka interferometre adapte edilmiştir.

Protein-protein etkileşimleri ve Allosterik Ligand Etkileri Kinetiği Ölçüm Bio-katman Interferometri

Burada tarif afinite ve dört yaygın biçimde kullanılan biyosensör platformları kullanarak kinetiği bağlayıcı antikor-antijen ölçümü için protokolleri.

Dört Biyosensör Platformları kullanma Yüksek yakınlık Antikor-antijen Cilt Kinetiklerinin Belirlenmesi

Bir mikrosıvısal Biyoalgılayıcı platform tasarlanmıştır ve çeşitli analitlerin hızlı ve hassas miktar için düşük maliyetli kuru film fotorezist teknolojisi kullanılarak imal edilmiştir. Bu tek kullanımlık sistem-küçük parça-immobilize enzim bağlı deneyleri elektrokimyasal göstergesi için stop-akış tekniği yoluyla sağlar.

Kuru zar elektrokimyasal mikrosıvısal Biyoalgılayıcı fotorezist tabanlı Platform: Cihaz imalat, On-chip tahlil hazırlama ve sistemin çalışması

Burada, algılama ve düşük bol moleküllerin miktar için bir protokol kapasitans Biyoalgılayıcı ile birlikte basma moleküler kullanarak karmaşık çözümlerinde mevcut.

Vericiyi biyolojik moleküler sürecinden kullanarak tespiti kapasitif Biyoalgılayıcı dayalı

Burada montaj ve demontaj biolayer Interferometry (BLI) kullanarak şarbon toksini izlemek için bir iletişim kuralı mevcut. Montaj/demontaj biyoalgılayıcı yüzeyinde, büyük protein kompleksleri yüzey Görselleştirme ve elektron mikroskobu ve kütle spektrometresi, sırasıyla kullanarak kompleksleri bileşenlerinin tanımlaması için serbest bırakılır.

Dinamik Protein kompleksleri analiz monte ve kütle spektrometresi ve Elektron Mikroskopisi kullanılarak Biolayer Interferometry biyoalgılayıcı--dan serbest bırakmak

Bu çalışma, ilaç-peptit etkileşimlerini tanımlamak için bir strateji sunmayı amaçlamaktadır. Strateji, bir kuvars-kristal mikro denge (QCM) biyosensörüne dayanan ilaç tanıyan kısa peptitlerin biyopannasyonunu ve ardından ilaç tanıma ve ilaç bağlayıcı bölgelerin proteinler üzerinde ek açıklama için elde edilen bilgileri nicel olarak değerlendirmek için biyoinformatik analizini içerir.

İlaç-protein Etkileşimlerinin Küresel Doğrulanması için Biyosensör Tabanlı Yüksek Verimli Biyopanning ve Biyoinformatik Analiz Stratejisi

Bu makale, streptavidin bazlı bir biyokatman interferometrisi (BLI) sistemi kullanarak DNA-protein etkileşimlerini incelemek için bir protokolü açıklamaktadır. Etkileşimin denge bağlanma afinitesini(KD) belirlemek için temel veya ileri bağlanma kinetiğini kullanmak için temel adımları ve hususları ana hatlarıyla belirtir.

DNA-Protein Etkileşimlerinin Streptavidin Tabanlı Biyotabaka İnterferometrisi ile İncelenmesi

Bu protokol, endüstriyel mikroorganizmalar için standart yüksek verimli tarama iş akışı sunar. ARTP mutagenezi yoluyla mutant bir kütüphane oluşturmayı, otomatik mikrofluidiklerle pozitif damla taraması yapılmasını ve ardından sonuçların doğrulanmasını içerir. İş akışının güvenilirliği, yüksek verimli B. coagulans suşlarının taramasıyla doğrulandı.

L-laktik asit aşırı üreten Bacillus coagulans mutantlarının yüksek verimli taraması otomatik damla mikrofluidik platform kullanılarak

Öğrenin, hibrit β-lactamase teknolojisiyle iletkenlik biyosensörü kullanarak antikor-antijen etkileşimlerini nasıl tespit edeceğinizi. Bu yöntem, geleneksel immünosensörlere göre daha hızlı ve uygun maliyetli protein-protein etkileşimi analizi sunar.

Biyomoleküler etkileşimleri algılamak için bir Conductimetric Biyoalgılayıcı β-lactamase tabanlı tahlil kullanımı

Daha fazla video keşfet