Yeni Bir Yöntemi Kullanarak Serbest Dolaşan Yenidoğan Sıçanlarında EEG Kaydı

Bu yöntemin genel amacı, bir hafta veya daha uzun süre stabil olan yeni bir elektrot kurulumu kullanarak, serbestçe hareket eden yenidoğan sıçan yavrularından EEG'leri kaydetmektir. Bu yöntem, sinirbilim alanındaki temel soruları cevaplamış olacak ve yenidoğan epilepsisinin incelenmesinde faydalı olacaktır. Bu tekniği kullanarak, daha uzun zaman dilimleri için yüksek kaliteli ve stabil EEG sinyalleri kaydedilebilir.

Bu, çeşitli nöro-patolojik bozuklukların teşhisinde yardımcı olacaktır. Genel olarak, bu yönteme yeni olan bireyler mücadele edecektir çünkü p8 ila p15'teki yenidoğan sıçanlarının idare edilmesi çok zordur ve büyük özen gerektirir. Elektrotun, iletişim cihazlarıyla sinyal arayüzü olarak işlev görmesi için uçlu bir kontak gerekir.

Bir bilgisayar pini lo sai bu rolü doldurur. Erkek ve dişi pimleri pense kullanarak bir bilgisayar piminden dikkatlice ayırın. Ardından, bir elektrot oluşturmak için erkek ve dişi pimleri birbirine bağlayın ve bağlantıyı siyanoakrilat ile sabitleyin.

Bu tür birkaç elektrot yapın. Bağlar sertleştikten sonra, elektrotları on dakika boyunca damıtılmış suyla dolu bir behere koyun. Ardından, elektrotları temizlemek için bunları ultrasonik bir temizleyiciye yerleştirin.

Daha sonra kabı 45 santigrat dereceye ayarlanmış bir fırına aktarın ve yarım saat ısıtın. Son olarak, elektrotları 30 dakikalık bir UV maruziyeti ile sterilize edin. Bir biyo-güvenlik başlığında, önce sterilize edilmiş cerrahi aletleri ve ameliyat için sterilize edilmiş bir stereotaksik aparatı ayarlayın.

Daha sonra, yenidoğan sıçan yavrusunu yüzde iki nokta beş izofluran kullanarak uyuşturun. Yavru derin anestezi uygulandığında, izofluranı yüzde bire düşürün. Devam etmeden önce, farenin yeterince uyuşturulduğundan emin olmak için bir ayak parmağınızı sıkıştırın.

Daha sonra, yavrunun kafasını stereotaksik aparata sabitleyin. Kulak çubuklarını kulak kanallarına yerleştirin ve çubukları hafifçe sıkın. Dikkatli olun: yenidoğan kafatası çok yumuşaktır.

Şimdi, kafatasına on beş milimetrelik bir orta hat kesisi yapın. Ardından, kesiği genişletmek için forseps ile kafa derisini nazikçe ayırın. Kesiği açık tutmak için tuzlu suya batırılmış bir parça pamuk kullanın.

Şimdi, bregma ve lambda'yı bulun ve bir kalemle işaretleyin. Aşağıdaki elektrot implantasyon adımları kritiktir ve hassas bir şekilde uygulanmalıdır. İlk olarak, 26 gauge bir iğne kullanarak, prefrontal kortekse, bregmanın iki milimetre önünde ve orta hattın sıfır noktası beş milimetre içinde bir çapak deliği açın.

Daha sonra, bregmanın sekiz milimetre arkasında ve orta hattın beş milimetre kenarında sıfır noktasında hipokampusa bir çapak deliği açın. Beyin hasarını en aza indirmek için iğne kortikal yüzeyin iki milimetreden fazla altına nüfuz etmemelidir. Şimdi, forseps kullanarak, referans elektrodu korteks deliğine yerleştirin ve kayıt elektrotlarını hipokampus deliğine yerleştirin.

Daha sonra, elektrotların etrafına eritromisin merhem sürün ve elektrotları siyanoakrilat ile yerine sabitleyin. Tutkal yapışırken, yapışkan ve viskoz bir kıvamda diş çimentosu hazırlayın. Diş çimentosunun viskozitesi kritiktir.

Diş çimentosu çok inceyse, elektrotun altında istenmeyen bir yalıtım tabakası oluşmasına neden olabilir. Çimento çok yoğunsa, fazla kütle nedeniyle elektrotlar daha kolay ayrılacaktır. Çimentoyu uygulamadan önce kafatasını ve elektrotları iyice kurulayın.

Ardından, elektrotları diş çimentosu ile kafatasına sabitleyin. Bunu takiben, onlara başka bir koruma katmanı eklemek için elektrotların üzerine bir miktar pikrik asit uygulayın. Şimdi, hayvanı stereotaksik çerçeveden çıkarın ve deri altına 300 mikrolitre yüzde on glikoz çözeltisi enjekte edin.

Ardından, hayvanı yürüyene kadar 37 santigrat derecede tutmak için ısıtılmış bir battaniyeye aktarın. Ayağa kalktıktan sonra, ameliyat sonrası ağrıya aracılık etmek için buprenorfin uygulayın ve yavruyu barajıyla birlikte ev kafesine aktarın. İmplantı kullanmadan önce, yavrunun iyileşmesi için en az iki gün bekleyin.

İyileşme döneminden sonra, yavrunun çevreye aşina olabilmesi için yaklaşık on dakika kayıt yapmak için yavruyu tek başına barındırın. Elektrotları bir amplifikatöre bağlayın ve amplifikatörü bir bilgisayara bağlı bir AD dönüştürücüye bağlayın. Bu bağlantıları dolaştırmamaya dikkat edin.

Ardından, veri toplama ünitesinde, kayıt için en az 10.000 hertz'lik bir örnekleme hızı seçin ve uygun veri iletimini kontrol edin. Temel bir kayıt toplayın. Bir başlangıç kaydı yaptıktan sonra, epileptik nöbetleri indüklemek için yavruya intraperitoneal olarak kainik asit enjekte edin.

Enjeksiyondan on beş dakika sonra, epileptik deşarjları gözlemleyin ve kaydedin. Sayısallaştırılmış verileri kaydedin ve sinyal işleme yazılımını kullanarak analiz edin. Güç spektrumu analizini kullanarak yenidoğan EEG'lerindeki farklı frekans bileşenlerinin güç seviyesini ortaya çıkarın.

EEG bandı olan bir ila yüz hertz arasında kök ortalama kare genliğini bularak bir dakikalık zaman dilimlerinden gücü hesaplayın. Kainik asit enjeksiyonundan on dakika sonra tekrarlayan interiktal ve iktal EEG deşarj paternleri kaydedildi. Kaydedilen en yaygın nöbetler tonik klonik tipti.

İktal tonik süresi yaklaşık on beş saniye sürdü. Tonik boşalmaları klonik patlamaların takip ettiği de gözlenmiştir. Bu videoyu izledikten sonra, p8 ila p15 yenidoğan sıçan yavrularından elektrotların nasıl implante edileceğini ve yüksek kaliteli EEG kayıtlarının nasıl elde edileceğini iyi anlamış olmalısınız.

Bir kez toplandıktan sonra, servikal implantasyon, ameliyatın karmaşıklığına bağlı olarak on dakikadan daha kısa sürede yapılabilir.