Batarya-in davranış değerlendirilmesi genel hareket, kas gücü ve koordinasyon farelerde testleri

Bu davranışsal test bataryasının genel amacı, farelerde genel lokomosyonu, kas gücünü ve koordinasyonu gözlemlemektir. Bu yöntemler, farelerde hareketlilik üzerindeki tedavi sonuçlarının faydası gibi, çok sayıda preklinik çalışmada farklı tedavilerin uygulanmasına ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hareketin birçok farklı yönünün ve boyutunun bu davranışsal test bataryası ile ölçülmesi ve değerlendirilmesidir.

Prosedürü laboratuvarımızdaki yüksek lisans öğrencisi Meera uygulamalı olarak gösterecektir. Open field test programını açarak ve bilgisayarı kameraya veya open field kutusuna bağlayarak başlayın. Open Field simgesindeki seçili SmartWare yazılımını başlatın.

Tamam'ı seçin. Eğer uygunsa, kamera seçeneklerinden Dijital Analog Dönüştürücü kaynağını seçin. Açık alan kutusunu kaplayacak uygun boyutları belirlemek için talimatları izleyin.

Ardından, yazılımın uygun kısmını kalibre ederek farenin açık alan sınırları içerisinde tespit edildiğinden emin olun. Fareleri test etmek için bir süre belirlemek üzere "time" (zaman) kısmına tıklayın. Bu durumda süreyi beş dakika olarak ayarlayın.

Dosyalar için uygun ismi tıklayıp yazarak denekleri giriniz. Örneğin; birinci faz, birinci seans. Ardından, bir fareyi açık alanların merkezine yerleştirin ve programın kayda başlamasını sağlamak için başlat simgesine tıklayın.

Beş dakika sonra, programın otomatik olarak bir sonraki deneğe geçtiğini gözlemleyin. Bu durumda, testi tamamlamış olan fareyi çıkarın ve bir sonraki deneği programın açık alanına yerleştirin. Ardından başlat'a tıklayın.

Son olarak, verileri analiz etmek için ekranın sağ üst köşesindeki analiz simgesine tıklayın. Tekrar analiz'e ve ardından özet rapor'a tıklayın. İşleme, fareyi bir ağın merkezine yerleştirerek başlayın.

Ve ağı, şeffaf bir kabın en az 20 santimetre üzerinde ters çevirin. Ters çevirdiğiniz anda zamanlayıcıyı başlatın. Farenin ağdan düşme gecikme süresini kaydedin.

Fare 60 saniye içinde düşmezse, ona 60 saniye puan verin ve başka deneme yapmayın. Ardından, farenin en az beş dakika dinlenmesini sağlayın. Sonrasında rotarod cihazını ve bilgisayarı açın.

Ve veri kaydı için düzgün şekilde bağlandıklarından emin olun. Hızlandırılmış protokolü çalıştırmak için, tuş takımındaki kodları kullanarak rotarod üzerindeki istenen süreyi 300 saniyeye, şerit sayısını beşe, başlangıç ve bitiş hızlarını sırasıyla dakika başına dört ve kırk rotasyona ve rampa süresini 300 saniyeye ayarlayın. Ardından cihazı fare ileri modu ünitesine ayarlayın.

Deneye başlamadan önce tüm manyetik şeritlerin dengelendiğinden emin olun ve rotarodun her bir şeridine bir fare yerleştirin. Ardından, programı başlatmak için başlat düğmesine basın. Fareler düştükçe, diğer şeritleri tetiklemediklerinden emin olmak için onları şeritlerinden derhal çıkarın.

Son olarak, farelerin 10 dakikalık denemeler arası aralık boyunca dinlenmelerine izin verin. Bu aralık sırasında, bir sonraki fare grubu için denemeye başlayın. Bu veriler, rotarod cihazının, tedavi edilen farelerin davranışlarının normal heterozigot farelerle karşılaştırılması amacıyla kullanımını göstermektedir.

İki grubun 40. haftadaki ayrışması, tedavi grubunun normal kontrollere kıyasla koordinasyonunun azalmaya başladığını göstermektedir. Aylık davranışsal testler boyunca tedavi edilen fareler; açık alan testi, rotarod ve mesh testinde normal heterozigot kontrollerle benzer performans göstermişlerdir. 12. haftada, tedavi edilen hayvanlar açık alan testinde hareket halinde geçen süre ve mesh testinde düşme süresi (latens) bakımından tedavi edilmeyen hayvanlardan daha iyi performans sergilemişlerdir.

Bu teknikten yeterinceye varıldığında, prosedür uygun şekilde yürütülürse 20 fare için işlemler iki buçuk saatte tamamlanabilir. Bu işlem gerçekleştirilirken, fareler ve kafesler arasında olası kontaminasyonları önlemek için her farenin denemesi arasında aparatın temizlenmesinin önemli olduğu unutulmamalıdır. Bu prosedürü takiben; biyodağılım analizleri, enzim aktivite analizleri, histoloji analizleri veya bellek ve öğrenme testleri gibi, tedavi etkinliğine ilişkin ek soruları yanıtlamak amacıyla diğer davranışsal ve biyokimyasal analiz yöntemleri uygulanabilir.

Geliştirilmesinin ardından bu teknik, psikoloji ve daha sonra sinirbilim alanlarındaki araştırmacıların, çeşitli tedavilerin ve koşulların model organizmalar üzerindeki etkilerini keşfetmelerine olanak sağlamıştır. Videoyu izledikten sonra, genel lokomosyon, kas gücü ve koordinasyon için davranış testlerinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Farelerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken uygun kişisel koruyucu ekipman kullanımı gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.