23 Ocak 2018
Davranışsal sınama önceden klinik çalışmalarda bir hastalık veya bir hayvanın refah tedavi fenotipik etkilerini değerlendirmek için kullanılır. Genel olarak motor işleyişini değerlendirmek için biz genel hareket, kas gücü ve koordinasyon için testler seçili: açık alan test, kafes test ve rotarod testi, anılan sıraya göre.
Bu davranışsal test dizisinin genel amacı, farelerde genel hareketi, kas gücünü ve koordinasyonu gözlemlemektir. Bu yöntemler, farelerde tedavi sonuçlarının motilite üzerindeki yararı gibi, çoklu klinik öncesi çalışmalarda farklı tedavilerin uygulanmasıyla ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hareketin çoklu yönlerinin ve boyutlarının bu davranışsal test dizisi tarafından ölçülmesi ve değerlendirilmesidir.
Prosedürü göstermek, laboratuvarımızda yüksek lisans öğrencisi olan Meera olacak. Açık alan test programını açarak ve bilgisayarı kameraya veya açık alan kutusuna bağlayarak başlayın. Açık Alan simgesinde seçici SmartWare yazılımını başlatın.
Tamam'ı seçin. Mümkünse, kamera seçeneklerinden Dijital Analog Dönüştürücü kaynağını seçin. Açık alan kutusunu kaplayacak uygun boyutları yapmak için talimatları izleyin.
Ardından, yazılımın uygun bölümünü kalibre ederek farenin açık alanın sınırları içinde algılandığından emin olun. Fareleri test etmek için belirli bir süreyi önceden ayarlamak için zamanı tıklayın. Bu durumda, beş dakika ayarlayın.
Dosyaları tıklayıp dosyalar için uygun adı yazarak konuları girin. Örneğin, birinci aşama, birinci oturum. Ardından, açık alanların ortasına bir fare yerleştirin ve programın kayda başlamasını istemek için başlat simgesine tıklayın.
Beş dakika sonra, programın otomatik olarak bir sonraki konuya geçtiğini gözlemleyin. Bu durumda, testi tamamlayan fareyi çıkarın ve bir sonraki konuyu programın açık alanına yerleştirin. Ardından başlat'a tıklayın.
Son olarak, verileri analiz etmek için ekranın sağ üst köşesindeki analiz simgesine tıklayın. Yeniden çözümle'ye ve ardından özet rapor'a tıklayın. Bir fareyi bir ağın ortasına yerleştirerek başlayın.
Ve ağı, şeffaf bir kabın 20 santimetre üzerinde kiraya verin. Ters çevrildikten sonra zamanlayıcıyı başlatın. Farenin ağdan düşmesi için gecikme süresini kaydedin.
Fare 60 saniye içinde düşmezse, ona 60 saniyelik bir puan verin ve başka deneme yapmayın. Ardından, farenin en az beş dakika dinlenmesine izin verin. Sonra rotarodu ve bilgisayarı açın.
Ve veri kaydı için doğru şekilde bağlandıklarından emin olun. Hızlandırılmış protokolü çalıştırmak için, rotarod üzerinde istenen süreyi 300 saniyeye, şerit sayısını beşe, başlangıç ve bitiş hızını dakikada sırasıyla dört ve kırk dönüşe ve rampa süresini 300 saniyeye ayarlamak için tuş takımındaki kodları kullanın. Ardından üniteyi fare ileri moduna ayarlayın.
Denemeye başlamadan önce tüm manyetize şeritlerin dengelendiğinden emin olun ve rotarodun her şeridine bir fare yerleştirin. Ardından, programı başlatmak için başlat düğmesine basın. Fareler düştükçe, diğer şeritlere takılmamalarını sağlamak için onları derhal şeritlerinden çıkarın.
Son olarak, farelerin 10 dakikalık bir denemeler arası aralık boyunca dinlenmesine izin verin. Bu aralık sırasında, bir sonraki fare seti için denemeye başlayın. Bu veriler, tedavi edilen farelerin normal heterozigot farelere kıyasla nasıl davrandığını görmek için bir araç olarak rotarodun kullanımını göstermektedir.
İki grubun 40 haftada ayrılması, tedavi grubunun normal kontrollere kıyasla azalmış koordinasyonunun başlangıcını gösterir. Aylık davranışsal testler üzerinden, tedavi edilen fareler normal heterozigot kontrollere, açık alan testine, rotarod ve ağ testine benzer şekilde performans gösterdi. 12 haftada, tedavi edilen hayvanlar, açık alan testinde zamanında hareket etme ve ağ testinde düşme gecikmesi konusunda tedavi edilmeyen hayvanlardan daha iyi performans gösterir.
Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, uygun şekilde gerçekleştirilirse, protokol boyunca 20 fareyi tamamlamak için iki buçuk saat içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, fareler ve kafesler arasında olası kontaminasyonları önlemek için her farenin denemesi arasında cihazı temizlemeyi unutmamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, biyodağılım testleri, enzim aktivitesi testleri, histoloji testleri veya hafıza ve öğrenme testleri gibi tedavi etkinliği ile ilgili ek soruları yanıtlamak için daha ileri davranışsal ve biyokimyasal testler gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir.
Geliştirildikten sonra, bu teknik, psikoloji alanlarındaki ve daha sonra sinirbilimdeki araştırmacıların, çeşitli tedavilerin ve koşulların model organizmalar üzerindeki etkisini keşfetmelerinin yolunu açtı. Videoyu izledikten sonra, genel hareket, kas gücü ve koordinasyon için davranış testinin nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız. Farelerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman uygun kişisel koruyucu ekipman giymek gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu makale, farelerde genel lokomosyonu, kas gücünü ve koordinasyonu değerlendirmek için tasarlanmış bir dizi davranışsal testi ele almaktadır. Bu testler, preklinik çalışmalarda tedavilerin etkilerini değerlendirmek açısından kritik öneme sahiptir.
Farelerde kantitatif davranışsal testler; motor fonksiyonun, kas gücünün ve koordinasyonun güçlü bir şekilde değerlendirilmesine olanak tanıyarak preklinik etkinlik çalışmaları için kritik fenotipik son noktalar sağlar. Bu çok boyutlu test bataryası, moleküler müdahaleleri fonksiyonel sonuçlarla ilişkilendirerek translasyonel sürekliliği destekler ve erken evre ilaç keşfindeki devam/durdurma kararlarına doğrudan bilgi sağlar. Objektif lokomosyon ve koordinasyon metriklerinin entegrasyonu, öngörü güvenilirliğini artırır ve nöromüsküler ile MSS hedefli portföylerin geliştirilme sürecindeki riskleri azaltır.
Bu davranışsal batarya, keşif biyolojisi ile preklinik etkinliğin kesişme noktasında yer alarak, hedef doğrulaması ile translasyonel sonuç ölçümleri arasında köprü kurmaktadır.