Name: Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: Keşfedin in vitro ve in vivo yöntemlerle T, B ve myeloid hücrelerin süpresif kapasitesini değerlendirme tekniklerini. Bu protokol, sıçanlarda transplantasyon toleransı indüksiyonu ve bağışıklık yanıtlarının analizi için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser ANR (ANR-11-LABX-0016-01) ve aynı zamanda tarafından finanse edilen IHU Cesti projesi tarafından yönetilen "Investissements d'Avenir" Fransız hükümeti programı'nın parçası olan Labex IGO proje (n ° ANR-11-LABX-0016-01) bağlamında gerçekleşmiştir " Fransız Ulusal araştırma Ajansı (ANR tarafından) (ANR-10-IBHU-005) yönetilen Investissements d'Avenir"Fransız hükümeti programı. IHU Cesti projesi de Nantes Métropole ve Région Pays de la Loire tarafından desteklenmektedir.

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Evlat edinen toplam splenocytes aktarım yeni aşılı alıcı içine indüklenen veya bir tedavi ile potentiated düzenleyici satır olup olmadığını belirlemek için etkili bir yoldur. Ana ışınlama kaynaklı geçici lymphopenia transferden sonra hücre hayatta kalma ve hoşgörü kurulması teşvik etmektedir. Ayrıca, alt öldürücü ışınlama sırasında bağışıklık sulandırma, bulaşıcı tolerans34denilen bir fenomen yeni düzenleyici hücrelere dönüştürmek tolerogenic özelliklere sahip hücreleri için zaman bırakır. Genelli...

Sıçan kalp homogreft hoşgörü indüksiyon tedavisi, hoşgörü indüksiyon ve bakım, mekanizmaları deşifre değerlendirmek için bir güvenilir organ nakli model ve işlevsel olarak yetkili ve baskın düzenleyici hücreleri uyarmak için bir potansiyele sahiptir. Aşağıdaki protokolleri bir tam uyuşmazlığı heterotopik kalp nakli Lewis 1W donör sıçan (LEW.1W, RT1u) dan Lewis 1A alıcı fareye (LEW.1A, RT1bir) açıklar. Bu greft birlikte akut ret hızla (yaklaşık 7 gün içinde) oluşur ve kolayca palpasyonla karın üzerinden ölçüm yenerek greft tarafından tespit edilebilir. Burada sıçan kalp homogreft tolerans ikna etmek için üç Protokolü öneriyorum. Bu modeller tolerans indüklenen ve/veya farklı düzenleyici hücre tipleri tarafından yapılmaktadır. İlk, bir adenovirus CD40Ig kodlama ile CD40-CD40L etkileşimleri engelleme (AdCD40Ig) indüklenen CD8 nesil+ Tregs tolerans adoptively ne zaman ikna yeteneğine sahip ikincil aşılı alıcıların1' e transfer. Ayrıca, CD8 tükenmesi+ hücreleri (anti-CD8α antikorlar ile) AdCD40Ig tedavi alıcılar oluşturulan Bregs ve RegMCs2'. CD8 derin analizi+ özellikleri vurgulanır İnterlökin-34 (IL-34) ve Fibroleukin-2 (FGL-2)3,4,5,6 tanımlanan çeşitli immunoregulatory moleküllerin önemli rol Tregs . IL-34 overexpression (bir AAV vektör ile) Tregs RegMCs üretimi ile indüklenen ise overexpression FGL-2 Bregs, karmaşık ağ düzenleyici hücrelerin temel indüklenen.
Kronik ret yavaş yavaş gelişir ve uzun vadeli bir derinlemesine analiz kronik ret karşı tolerans ayırt etmek zorundadır. Greft için hücre infiltrasyonu, genellikle değerlendirildi fibrozis, kalınlaşma yükünün vasküler duvar ve tamamlayıcı C4d tarafından immunohistology7. Histoloji yöntemleri hayvan kurban gerektirir veya biyopsi grefti iken, burada biz tolere homogreft farklı özelliklerini değerlendirmek için basit bir yöntem tarif: ortaya çıkması ve düzenleyici hücreleri ve kan Anti-donör spesifik antikor yanıtlarını fonksiyonu Akış Sitometresi tarafından örnek (burada, Floresans aktif hücre (FACS) sıralama kullanılır).
Bakım tedavisi tutuklanması sonra homogreft için hoşgörü genellikle düzenleyici hücreleri8indüksiyon ile ilişkilidir. Son yıllarda çalışmalar odaklı CD4 üzerinde+Tregs oybirliği ile karakterize onlar anahtar işaretleri Foxp3 tarafından+, CD25yüksekve CD127-9,10,11. Benzer şekilde, çeşitli işaretçileri için CD8 atfedilmiştir+ Tregs, CD122 gibi+, CD28-, CD45RCdüşük, PD1+ve Helios+ 1,12,13,14 , 15 , 16 , 17. yaş, GITR, CTLA4 ve sitokinler ifadesi üzerinde (IL-10, TGFβ, Il-34, IL-35, FGL-2) bir Treg profil3,4,6,13, ayrıca ilişkili bulunmuştur 18,19,20,21. Ancak, Bregs, RegMCs veya NKTregs, gibi gelişmekte olan düzenleyici hücre popülasyonlarının ilgili belirli işaretleri yok. Gerçekten de, Bregs çoğunlukla olgunlaşmamış CD24 rapor edilen+ hücreleri, belirsiz CD27 ifade ve bazen üretimi IL-10, TGFβ veya granzyme B22,23,24. Myeloid hücre lineage karmaşıklığı CD14, CD16, CD80, CD86, CD40, CD209a veya CD16325,26gibi onların Düzenleyici veya proinflamatuar profili tanımlamak için birkaç işaretleri bir arada gerektirir. Son olarak, bazı işaretleri NKTregs CD11b gibi tanımlamak için bildirilmiş olan+, CD27+, TGFβ+, ama daha fazla çalışmalar hakkında diğer phenotypically27,28,29 açıklamak için gerekli ,30,31,32. Böylece, delillerin baskılayıcı aktivitenin daha fazla yeni biyolojik, tanımlanması için fenotipik açıklama meşrulaştırmak için gerekli olan yeni immunoregulatory arabulucu ve yeni hücre tedaviler kapsamı genişletmek için.
Biz süpresif etkinliği hücre değerlendirmek için iki tamamlayıcı yöntem öneriyoruz. İlk olarak, etiketli efektör T hücrelerle hücreler (ZPT) farklı oranlarıyla 6 gün içinde sunulması allojeneik donör antijen tarafından uyarılan süpresif hücre kültürü çalışmalarının vitro yöntemi oluşur ve efektör analiz T Hücre proliferasyonu bu bağışıklık suppression donör yönetmen yansıtır. Tedavi fareler hücrelerden doğrudan hücrelere saf fareler ve aşılı fareler süpresif etkinliği için (veya diğer düzenleyici hücre nüfus), tedavi olmayan, bir bastırıcı: efektör oranları aralığındaki karşılaştırılabilir. Ayrıca, bu yöntem does değil istemek birisi nakli ve sonuçları 6 gün içinde alınır. İkincisi, in vivo yöntemi amaçlanan düzenleyici hücreleri tedavi bir sıçan gelen yeni radyasyonlu aşılı alıcıya transfer oluşur. Üzerinden B hücreleri, myeloid hücrelerin veya T hücreleri iken saf olmayan tedavi fareler genellikle akut ret inhibe ve greft hayatta kalma evlat edinen transferi üzerine uzatmak mümkün değildir, bu öznitelikleri hücreleri aktivitesiyle potentiated süpresif tedavi alıcılardan gelen var 1,2,3,4,33. Alıcının ışınlama tarafından indüklenen Lymphopenia adoptively transfer edilen hücreleri kan homeostazı tarafından etkilenmez ve daha kolay Anti-donör bağışıklık yanıtı master için izin vermek için önerilir. Her iki yöntem de allojeneik vitro kullanımı üçüncü parti ZPT veya vivo içinde evlat edinen transferini süpresif için bir üçüncü taraf kalp ile aşılı alıcılar hücrelere Anti-donör özgüllük analizine izin. Vivo yöntemi temsil önemli bir sayı bir hücre, kötü gerektirir, ancak hücre altgrupları daha kolay süpresif etkinlik vitro33için tespit edilebilir.
Humoral yanıt tolerans durumunu ve donör antijenleri için yönlendirilmiş antikor yanıt kontrolünü değerlendirmek için ölçülebilir. Nitekim, tolerans verici doğru humoral yanıt yokluğu ama alıcıların humoral yanıt-e doğru yeni antijenleri geliştirmek kapasite korunması ve bellek yanıtları korunması tarafından karakterize edilebilir. İlk olarak, alloantibody algılama prensibi üzerinde donör hücre tanıma alıcı antikorlar kuluçka donör hücre türü serum ile aşılı bir alıcıdan takip romanından uyarlandı. Eksojen antijenleri için yönettiği ikinci, humoral yanıt aşağıdaki uyarılması değerlendirildi: uzun vadeli hoşgörülü alıcılar ile anahtar deliği vantuzlu Hemocyanin (tam Freund's adjuvan ile emülsiyon KLH) olabilir. Belirli IgM ve IgG antikorlar antijenlere karşı varlığı 4 ila 13 gün, sırasıyla, ardından bağışıklama, enzim bağlantılı ImmunoSorbent Assay (ELISA)34ile tespit edilebilir. Üçüncü olarak, bağışıklık belleği yanıt korunması ve gün nakli alıcı serumu gün toplanan ile + 8 ve nakli takip +17 boyama RBCs -7 ve 3 xenogeneic kırmızı kan hücreleri (RBCs) enjeksiyonu ile tespit edilebilir. Tüm bu yöntemler belirli ikincil antikorlar ve hızlı FACS boyama tarafından daha az 1,5 saat sonuçlarında edinimi veya ELISA birkaç saat kullanarak immünglobulin alt türlerinden tanımlanması için izin.
Son olarak, bu protokoller nakli modelleri karakterizasyonu için tasarlanmıştır ve Otoimmün hastalık modelleri için uygulanan bir ölçüde olabilir. Yöntem ilkeleri tüm türler için aktarılmış.

<table><tbody><tr><td>animals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LEW.1W ve LEW.1A sıçanları</td><td>Janvier Labs, Fransa</td><td></td><td>8 haftalık,&nbsp;</td></tr><tr><td>BN üçüncü taraf donör fareler</td><td>Janvier Labs, Fransa</td><td></td><td>8 haftalık,&nbsp;</td></tr><tr><td>name</td><td>company</td><td>katalog numarası</td><td>comments</td></tr><tr><td>reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AdCD40Ig</td><td>Viral Vektör Çekirdeği, INSERM UMR 1089, Nantes, Fransa</td><td></td><td>ev yapımı plazmitler</td></tr><tr><td>IL34-AAV</td><td>Viral Vektör Çekirdeği, INSERM UMR 1089, Nantes, Fransa</td><td></td><td>ev yapımı plazmitler</td></tr><tr><td>FGL2-AAV</td><td>Viral Vektör Çekirdeği, INSERM UMR 1089, Nantes, Fransa</td><td></td><td>ev yapımı plazmitler</td></tr><tr>Avrupa Hücre Kültürü Koleksiyonundan<td>anti-TCRab</td><td>Hibridom, Salisbury, UK</td><td>R7/3 klonu</td> Avrupa Hücre Kültürü Koleksiyonundan <td>ev yapımı kültür, saflaştırma ve flororofor birleştirme</td></tr><tr><td>anti-CD25</td><td>Hibridom, Salisbury, UK</td><td>OX39 klonu</td><td></td></tr><tr><td>Avrupa Hücre Kültürü Koleksiyonu, Salisbury, UK</td><td>OX8 klonundan</td> ev yapımı kültür, saflaştırma ve flororofor birleştirme<td>anti-CD8</td> Hibridoma Avrupa Hücre Kültürü Koleksiyonundan <td>ev yapımı kültür, saflaştırma ve flororofor birleştirme</td></tr><tr><td>anti-CD45RA</td><td>Hibridom, Salisbury, UK</td><td>OX33 klonu</td><td>Ev yapımı kültür, saflaştırma ve flororofor birleştirme</td></tr><tr><td>anti-CD161</td><td>Avrupa Hücre Kültürü Koleksiyonu'ndan Hibridom, Salisbury, Birleşik Krallık</td><td>3.2.3 klonu</td><td>Ev yapımı kültür, saflaştırma ve flororofor birleştirme</td></tr><tr><td>anti-CD11b/c</td><td>Avrupa Hücre Kültürü Koleksiyonu'ndan Hibridom, Salisbury, UK</td><td>OX42 klonu</td> Avrupa Hücre Kültürü Koleksiyonu'ndan <td>ev yapımı kültür, saflaştırma ve flororofor birleştirme</td></tr><tr><td>anti-TCRgd</td><td>Hibridom, Salisbury, Birleşik Krallık</td><td>V65 klonu</td><td>Avrupa Hücre Kültürü Koleksiyonundan ev yapımı kültür, saflaştırma ve flororofor birleştirme</td></tr><tr><td>anti-CD45RC</td><td>Hibridom, Salisbury, UK</td><td>OX22 klonu</td> Avrupa Hücre Kültürü Koleksiyonundan <td>ev yapımı kültür, saflaştırma ve flororofor birleştirme</td></tr><tr><td>anti-CD4</td><td>Hibridom, Salisbury, UK</td><td>OX35 klonu</td><td>Ev yapımı kültür, saflaştırma ve flororofor birleştirme</td></tr><tr><td>anti-CD45R</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td> <td># 554881, His24 klon</td><td></td></tr><tr><td>sıçan önleyici IgG-FITC</td><td>Jackson İmmünoAraştırma Laboratuvarları, INC, Baltimore, ABD</td> <td># 112-096-071</td><td></td></tr><tr><td>sıçan önleyici IgG1</td><td>Serotec</td><td>#MCA 194</td><td></td></tr><tr><td>sıçan önleyici IgG2a</td><td>Serotec</td><td>#MCA 278</td><td></td></tr><tr><td>sıçan önleyici IgG2b</td><td>Serotec</td><td>#MCA 195</td><td></td></tr><tr><td>sıçan önleyici IgM-FITC</td><td>Jackson İmmünoAraştırma Laboratuvarları, INC, Baltimore, ABD</td> <td># 115-095-164</td><td></td></tr><tr><td>streptavidin HRP</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td> <td># 554066</td><td></td></tr><tr><td>KLH</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, ABD</td> <td># 9013-72-3</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1X</td><td>Thermo Fisher&nbsp; Scientific Inc, kalsiyum</td> ve magnezyum içermeyen ABD <td></td><td>Fosfat Tampon Çözeltisi,&nbsp;</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma, Saint-Louis, ABD</td> <td># 9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>TMB substrat reaktif kiti</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td> <td># 555214</td><td></td></tr><tr><td>CellTraceTM CFSE hücre proliferasyon kiti</td><td>Thermo Fisher&nbsp; Scientific Inc, ABD</td><td></td><td></td></tr>#C34554 <tr><td>RPMI 1640 orta 1X</td><td>Thermo Fisher&nbsp; Scientific Inc, ABD</td> <td># 31870-025</td><td></td></tr><tr><td>penisilin streptomisin</td><td>Thermo Fisher&nbsp; Scientific Inc, ABD</td> <td># 15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Hepes Tampon</td><td>Termo Fisher&nbsp; Scientific Inc, ABD</td> <td># 15630-056</td><td></td></tr><tr><td>esansiyel olmayan amino asitler</td><td>Thermo Fisher&nbsp; Scientific Inc, ABD</td> <td># 11140-035</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Thermo Fisher&nbsp; Scientific Inc, ABD</td> <td># 11360-039</td><td></td></tr><tr><td>2 beta merkaptoetanol</td><td>Sigma, Saint-Louis, ABD</td><td></td><td></td></tr>#M3148 <tr><td>Hücre Proliferasyon Boyası eFluor > 450 Hücre</td><td>Termo Fisher&nbsp; Scientific Inc, ABD</td> <td># 65-0842-85</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Sigma, Saint-Louis, ABD</td><td></td><td></td></tr>#G3126 <tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher&nbsp; Scientific Inc, ABD</td><td></td><td></td></tr>#D1306 <tr><td>Kollajenaz D</td><td>Roche Teşhis, Almanya</td> <td># 11088882001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma, Saint-Louis, ABD</td><td></td><td></td></tr>#E5134 <tr><td>NaCl% 0.9</td> <td>Fresenius Kabi</td><td>#B230561</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik dynabeads</td><td>Dynal, Invitrogen</td> <td># 11033</td><td>Keçi anti-fare IgG</td></tr><tr><td>One Comp eBeads</td><td>Ebiosciences, San Diego, ABD</td><td># 01-1111-42</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Kurumsal yönergelere</td><td></td><td></td>bakın</tr><tr><td>Isofluran</td><td>Kurumsal yönergelere</td><td></td><td></td>bakın</tr><tr><td>Naplbuphine</td><td>Kurumsal yönergelere</td><td></td><td></td>bakın</tr><tr><td>Terramycine</td><td>Kurumsal yönergelere bakın</td> Buprenorfin Kurumsal yönergelere <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>bakın Kuruma başvurun yönergeler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meloksikam</td><td>Kurumsal yönergelere</td><td></td><td></td>bakın</tr><tr><td>Freund'un adjuvanını</td><td></td><td></td><td></td>tamamlayın</tr><tr><td>Rompun</td><td>Kurumsal yönergelere</td><td></td><td></td>bakın</tr><tr><td>Zil laktat</td><td>Kurumsal yönergelere</td><td></td><td></td>bakın</tr><tr><td>Ketamin</td><td>Kurumsal yönergelere bakın</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kırmızı kan hücresi lizis çözeltisi</td><td></td><td></td><td>8,29 g NH4Cl (Sigma, Saint-Louis, ABD A-9434), 1 g KHCO3 (Prolabo 26 733.292) ve 37.2 mg EDTA (Sigma, Saint-Louis, ABD E5134) 800 ml H2O içinde seyreltin. PH'ı 7.2-7.4'e ayarlayın ve H2O ile 1L'ye tamamlayın.</td></tr><tr><td>Kollajenaz D</td><td></td><td></td><td>1g kollajenazı 500 ml RPMI-1640 + 5 ml Hepes + %2 FCS</td></tr><tr><td>PBS-FCS (%2)-EDTA (%0.5)</td><td></td><td></td> içinde seyreltin, <td>5 mL EDTA 0,1M (Sigma, Saint-Louis, ABD E5134) ve 20ml FCS'yi 1ml PBS'ye ekleyin 1X</td></tr><tr><td>CFSE (Vybrant CFDA SE Hücre İzleme Kiti Invitrogen)</td><td></td><td></td><td>50 & mikro seyreltin; g (= 1 şişe) CFDA SE (bileşen A) 90&mu'da; l 10mM stok çözeltisi elde etmek için DMSO (bileşen B) çözümü. Daha sonra, 0.5&mu elde etmek için stok çözeltisini PBS 1X'te 1/20 000'de seyreltin; 5</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>ml Penisilin (80 birim / ml)-Steptomisin (80 mg / ml), 5 ml L-Glutamin, 5 ml Esansiyel Olmayan Amino Asitler (100X), 5 ml Pirüvat Sodyum (100mM), 5 ml HEPES tamponu (1M), 2.5 ml b merkaptometanol (10 ml RPMI'de seyreltilmiş 7 ml 2-bmerkaptoetanol stoğu), %10 FCS</td></tr><tr><td>name<</td><td>strong>company</td><td>katalog numarası</td><td>comments</td></tr><tr><td>equipments</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>falcon 50ml</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td> <td># 227261</td><td></td></tr><tr><td>şahin 15ml</td><td>BD Biosciences, Dağ Manzaralı, CA</td> <td># 188271</td><td></td></tr><tr><td>elek</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Corning plastik kültür tabakları</td><td>VWR, Pessac</td> <td># 391-0439</td><td></td></tr><tr><td>100 ve mikro; m ve 60 & mikro; m doku filtreleri</td><td>Sefar NITEX, Heiden, İsviçre</td> <td># 03-100 / 44 ve # 03-60/35</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyu U kokültür için alt plakalar</td><td>&nbsp; Falcon U-alt Doku Kültürü plakası, steril, Corning</td> <td># 353077</td><td></td></tr><tr><td>FACS boyama için 96 kuyu V alt</td><td>plakaları ThermoScientifique, Danemark</td> <td># 249570</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyu düz tabanlı ELISA plakaları</td> Dalak ezmek için <td>Nunc Maxisorb</td><td></td><td></td></tr><tr><td>seringue</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td> <td># 309649</td><td></td></tr><tr><td>ELISA okuyucu</td><td>SPARK 10M, Tecan, İsviçre</td><td>SPARK 10M, Tecan, İsviçre</td><td></td></tr><tr><td>benmari santrifüjü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>X ışınları ışınlayıcı</td><td>Lincolshire, İngiltere</td><td>Faxitron CP160</td><td></td></tr><tr><td>güneş karıştırıcı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACS Canto II</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACS Aria II</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>mıknatıs</td><td>Thermo Fisher&nbsp; Bilimsel A.Ş., ABD</td><td>12302D</td><td></td></tr></tbody></table>

vitro ve in vivo değerlendirme t, b ve myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen humoral yanıt

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

Ana endişe Ekiminde indüksiyon düzenleyici hücre aracılığıyla belirli tolerans ulaşmaktır. Dayanıklılık mekanizmaları güvenilir modelleri gerektirir. Burada, costimulation sinyalleri abluka veya gen transferi yoluyla immunoregulatory moleküllerinin upregulation indüklenen sıçan, kardiyak homogreft tolerans modelleri açıklar. Bu modellerin her düzenleyici T hücreleri (Tregs), düzenleyici B hücreleri (Bregs) veya düzenleyici myeloid hücrelerin (RegMCs) gibi düzenleyici hücreleri nesil vivo içinde izin. Bu makale, biz tanımlamak ve kendi sorumluluk tolerans indüksiyon ve bakım. belirlemek için vitro ve in vivo düzenleyici hücre etkinliği tanımlamak için kullanılan iki tamamlayıcı protokol tarif İlk olarak, vitro süpresif tahlil hücre hızlı kimlik efektör bağışıklık yanıtı üzerinde süpresif kapasiteli bir doz bağımlı şekilde izin ve sitokin ölçüm ve sitotoksisite gibi daha fazla çözümleme için kullanılabilir. İkinci olarak, hücreleri yeni radyasyonlu aşılı alıcıya, evlat edinen transferi hoşgörülü arıtılmış alıcıdan gelen vurgulanmış yönetmen graft bağışıklık yanıtı kontrol ve/veya dönüştürme yeni düzenleyici hücre (Bu hücreler tolerogenic özellikleri bulaşıcı tolerans olarak adlandırdığı tabaka). Bu yöntem bilinen fenotipik işaretçileri olan hücrelere sınırlı değildir ve herhangi bir hücre popülasyona uzatılabilir. Ayrıca, donör allospecificity düzenleyici hücre (alanında önemli bir hedefi) üçüncü donör hücreleri kullanarak tespit edilebilir veya içinde vitro veya vivo içindegrefti yönlendirilmiş. Son olarak, düzenleyici bu hücreleri belirli tolerogenic kapasitesini belirlemek için biz humoral Anti-donör antikor yanıt ve yeni veya eski bilinen antijenlere karşı humoral yanıt-e doğru geliştirmek için alıcının kapasitesini değerlendirmek için iletişim kuralları sağlar. Açıklanan tolerans modelleri daha fazla yeni biyolojik ve immunoregulatory molekülleri, belirlemek için düzenleyici hücreleri tanımlamak için kullanılan ve diğer nakli modelleri veya otoimmün hastalıklar kemirgen ya da insan için uyarlanabilir.

Baskılayıcı etkinlik (Resim 2), ZPT (şekil 1), Yanıtlayıcı hücreleri ve Tregs aynı anda boylama takip değerlendirilmesi veya ayrı ayrı (şekil 4), ve diğer sözde düzenleyici hücreler (şekil 3),-ebilmek var olmak Düzenleyici hücrelerin ve vitro ölçüm CFSE parlaklık (şekil 5) tarafından doğrudan enjeksiyon tarafından yapılan vivo i...

Burada, hoşgörü Ekiminde teşvik ve içinde in vitro ve in vivo değerlendirmek için bir protokol farklı hücre alt kümeleri alıcıdan gelen süpresif kapasitesi ve donör veya eksojen antijenleri doğru alıcının bağışıklık durumu mevcut.

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Transplantasyonda tolerans indüksiyonu genellikle düzenleyici hücre popülasyonunun ortaya çıkışıyla ilişkilendirilir. Bu durum, donöre karşı bağışıklık yanıtının yokluğunu, ancak eksojen antijenlere karşı bağışıklığın korunduğunu ifade eder. Herhangi bir düzenleyici hücre alt kümesinin baskılama kapasitesini ve konakçıdan gelen humoral yanıtların durumunu in vitro ve in vivo olarak değerlendirmek için farklı protokollerimiz bulunmaktadır.Donör Lewis 1W sıçanı, beş dakika sonra %1 N20 ile desteklenen izofluran O2 inhalasyonu kullanılarak anesteziye alın. Hayvanı sırt üstü pozisyona getirin ve torakotomi gerçekleştirmek için karnını betadin ile dezenfekte edin. İnferior ve superior vena cava'ları klempleyinn, bağlayın ve ardından kesin.Ardından pulmoner arteri ve aortayı kesin ve grefti soğuk %0.9 NaCl içinde saklayın. Sekiz ila 12 haftalık, 150 gram ağırlığındaki Lewis 1A alıcı sıçanı, N2O %1 ile desteklenmiş izofluran O2 inhalasyonu kullanarak anestezi altına alın. Hayvanı sırtüstü pozisyona getirin ve sefalo-pubik laparotomi gerçekleştirmek için karnı betadine ile dezenfekte edin. Bağırsakları dışarı çıkarın, abdominal kan damarlarını klempleyiniz. Greftlenmiş aorta ile abdominal

in-vitro-vivo-assessment-t-b-myeloid-cells-suppressive-activity

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Tregs bağışıklık sisteminin güçlü bastırıcılar. Bunları tanımlamak için benzersiz yüzey belirteçleri bir eksikliği vardır, dolayısıyla, Tregs tanımları öncelikle fonksiyonel. Burada bir optimize...

Insan In Vitro Bağışıklık Dengesizlik Erken Devlet Tanıma Tarama Aracı Olarak Bastırılması

Mürin kemik iliği nakli insanlarda graft-versus-host hastalığı yöneten immünolojik mekanizmalarla çalışmak için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. T hücre trafiğini modellerini izlemek için...

Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em&gt; In Vivo</emBir MHC-eşlemeli murin Model Kullanma&gt; T Hücre İzleme

Biz potansiyel greft reddi yüksek riski olmadan nakli sonrası immünsüpresyonun sonlandırmaya karar için kullanılabilecek değerli bir tanı testi açıklar. Tahlil Gecikmeli Tip Aşırı duyarlılık ilkelerini kullanır ve alıcılar tarafından monte hem donör özel efektör ve düzenleyici immün yanıtın doğru bir değerlendirme sağlar.

Antijen Özgül Düzenleme için Trans-vivo Gecikmeli Tip Aşırı Duyarlılık Testi

In vivo ayrıntılı olarak T hücresi tepkilerini izlemek için yeteneği, bağışıklık tepkisinin anlamamıza geliştirilmesi için önemlidir. Burada akış sitometresi ile eş zamanlı olarak&gt; 250 parametrelerini değerlendiren bir in vivo T hücresi tahlilinde floresan hedef diziler (STA) kullanımını tarif eder.

T hücre yanıtlarının Değerlendirme Floresan hedef Dizilerin Kullanımı<em&gt; In vivo</em

Bu kağıt sitometrisi görüntüleme akışı kullanarak T hücrelerinin karışık bir popülasyonda alloreaktivitesini ölçülmesi için bir yöntemi tarif etmektedir.

Görüntüleme Akım Sitometri Kullanımı T Hücresi alloreaktivitesini Ölçümü

Burada bir standart immünolojik tekniği için bir uygulama mevcut (CFSE lekeli OT-Ben nükleer silahların yayılmasına karşı) hızla adjuvan-aracılı sitotoksik T lenfosit (CTL) üretimi izlemek amacıyla içinde vivo. Bu hızlı tahmini bir CTL kapasite hücre içi patojenlere karşı koruyucu aşıları aynı zamanda tedavi kanser aşıları gelişimi için yararlıdır.

Adjuvan'ın sitotoksik T lenfositler nesil yeteneklerini hızlı Vivo içinde değerlendirilmesi için aşı geliştirme

Bu iletişim kuralı ex vivo karakterizasyonu immunomodulators, kızamık virüs bispecific T hücre engagers örnek olarak kodlama kullanarak ifade oncolytic virüslerin ve nesil için ayrıntılı bir iş akışı açıklar. Uygulama ve uyarlama diğer vektör platformları ve transgenes klinik çeviri için roman immunovirotherapeutics gelişimi hızlanır.

Paramyxovirusler Immunomodulation tümör hedefli için: tasarım ve değerlendirme Ex Vivo

Burada, sitotoksisik T lenfosit (CTL) yanıt olarak bir model tümör antijeni için immundominance muayene sağlayan bir akış sitometri tabanlı in vivo öldürme tahlil tarif. Biz bu zarif tahlil mekanik çalışmalar için ve ilaç etkinliği test için istihdam olabilir nasıl örnekler sunuyoruz.

Tümör-spesifik CD8+ T hücre tepkiler Immunodominance çalışması Için In vivo sitotoksisite assays terzilik

Greft-versus-host hastalığı allojenik kemik iliği transplantasyonu sonrası önemli bir komplikasyondur. Dendritik hücreler greft-versus-host hastalığının patogenezinde kritik bir rol oynarlar. Bu makalede, dendritik hücrelerin greft-versus-host hastalığı nın gelişimindeki rolünü ve greft-versus-lösemi etkisinin araştırılması için yeni bir kemik iliği transplantasyon platformu açıklanmaktadır.

Kemik İliği Transplantasyon Platformu Greft-versus-Host Hastalığında Dendritik Hücrelerin Rolünü Araştırmak Için

Çalışma, epikütan (EC) bağışıklama yoluyla farelerde bağışıklık tepkilerini modüle etmede cildin rolünü göstermektedir. Bir protein antijeni ile EC bağışıklaması, patojenle ilişkili moleküler paternlerle birleştirildiğinde temas aşırı duyarlılığında veya ters cilt kaynaklı baskılamada bağışıklık tepkilerini baskılayabilir. EC bağışıklaması, immünoterapiye etkili, iğnesiz bir yaklaşım olarak umut vaat etmektedir.

Epikütan İndüklenen İmmünomodülasyonun Murin Modeli

Bu protokol, düzenleyici T hücrelerinin efektör T hücre çoğalması ve farklılaşması üzerindeki etkilerini araştırmak için in vitro bir ortak kültür stratejisi sunar.

In Vitro Düzenleyici T Hücrelerinin Fonksiyonel Analizi: Proliferasyon ve Farklılaşmaya Odaklanma

Keşfedin in vitro ve in vivo yöntemlerle T, B ve myeloid hücrelerin süpresif kapasitesini değerlendirme tekniklerini. Bu protokol, sıçanlarda transplantasyon toleransı indüksiyonu ve bağışıklık yanıtlarının analizi için kullanılır.

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

Daha fazla video keşfet