Amiloid-β ve Tau Nöropatolojisinin Transgenik Fare Modellerinde Spontan Dalgalanmanın Değerlendirilmesi, Yeni Nesne Tanıma ve Limb Klapması

Bu prosedürün genel amacı, Alzheimer hastalığının fare modellerinde yaygın olan anormal davranışları, yararlı etkilere sahip olabilecek bileşikleri taramak için standart bir şekilde ölçmektir. Bu yöntem, Alzheimer hastalığı için klinik öncesi ilaç keşfi alanında, bir bileşiğin etkili olup olmadığı veya bir bileşiğin nasıl çalışabileceği gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hem hassas hem de spesifik olan aşamalı bir yaklaşım kullanarak bir dizi farklı davranışı izlemesidir.

Bu yöntem Alzheimer hastalığı için etkili tedaviler hakkında fikir verebilse de, frontotemporal demans, travmatik beyin hasarı veya otizm gibi diğer demans veya bilişsel işlev bozukluğu fare modellerine de uygulanabilir. Y labirentini kullanmadan önce, kokusuz bir çamaşır suyu mikrop öldürücü mendil ile iyice temizleyin. Daha sonra %70 etanol ile silin ve suyla durulayın.

Labirentte koşarken fareleri düzgün bir şekilde izlemek için veri toplama sistemini veya video kameraları hazırlayın. Bu işlem sırasında, bulundukları mesafeleri kalibre etmek için labirentteki bir ölçüm çubuğunun görüntüsünü kaydedin. Şimdi, fare kafesini çok nazikçe labirente yakın bir masaya aktarın.

Fareyi kafesten çıkarın ve yavaşça Y labirentinin merkeze bakan bir koluna yerleştirin. Ardından labirentten farenin sizi göremeyeceği kadar uzaklaşın ve hemen video kaydını başlatın. Fareyi 10 dakika boyunca kaydedin.

10 dakika sonra fareyi nazikçe çıkarın ve ev kafesine geri koyun. Bir sonraki fareye geçmeden önce, üç aşamalı yıkama prosedürünü kullanarak Y labirentini tekrar iyice yıkayın. Bu testten önce, açık alan arenasını tıpkı Y labirentinde olduğu gibi yıkayın.

Nesneye maruz kalmadan bir gün önce, fareleri arenaya alıştırın. İzleme sisteminin çalıştığından emin olun. Ve daha önce olduğu gibi bir ölçüm çubuğu kullanarak mesafeleri kalibre edin.

Ayrıca etiketleme yazılımında arenanın köşelerini işaretleyin. Şimdi, farenin kafesini yavaşça arenaya yakın bir masaya yerleştirin. Fareyi çıkarın ve yavaşça arenanın ortasına yerleştirin.

Ardından kaydı hızlı bir şekilde başlatın ve farenin yarım saat boyunca arenayı keşfetmesine izin verin. Hayvanın görüş alanından uzakta olduğunuzdan emin olun ve test sırasında onu rahatsız etmeyin. Alışkanlık seansından sonra fareleri ev kafesine geri koyun.

Ve bir sonraki fareyi alışkanlık haline getirmeden önce arenayı eskisi gibi iyice temizleyin. İki ila üç saat sonra, bellek testinin örnek aşamasını yürütün. Arenayı, her ikisi de tek bir duvara eşit şekilde hizalanmış iki özdeş nesne yerleştirerek değiştirin.

Nesneleri montaj macunu ile yerine sabitleyin. Yazılımda, iki nesnenin konumlarını ve arenanın köşelerini not edin. Bir fare sunulmadan önce nesneleri ve arenayı her zamanki gibi yıkayın.

Testi, alışma seansı gibi yapın, fareyi arenaya nesnelere bakacak şekilde yerleştirin. Şimdi, farenin arenayı sadece 15 dakika keşfetmesine izin verin. İki ila üç saat sonra, hafıza testinin son aşamasını gerçekleştirin.

Bu oturum için, tanıdık bir nesneyi aynı konumda tutun ve diğer tanıdık nesneyi kaldırın, yerine yeni tanıtılan yeni bir nesne koyun. Farelerin nesneleri her açıdan özgürce keşfetmesi için duvarlar ve nesneler arasında yeterli mesafe bırakın. Ve daha önce olduğu gibi, nesneleri macunla sabitleyin.

Çalışmadaki tüm test gruplarında, yeni ve tanıdık nesneler için bir konum dengesine sahip olduğunuzdan emin olun. Son oturumu diğer iki oturumda olduğu gibi gerçekleştirin, ancak farenin davranışını yalnızca 10 dakika boyunca kaydedin. Uzuv tokası, kortikospinal fonksiyondaki eksiklikleri ölçen fonksiyonel bir motor testtir.

Bu test için, tüm oturumu videoya kaydetmek için elde taşınan bir cihaz kullanın. Ev kafesini temiz bir masanın üzerine yerleştirerek ve hayvanın kimliğini belgeleyerek başlayın.Ardından fareyi kafesinden nazikçe çıkarın ve videoyu hayvanın arka pençe ve ön pençe hareketlerine odaklarken beş ila 10 saniye boyunca kuyruğundan asılı tutun. Fareyi kaçmaya teşebbüs etmeyecek şekilde kullanmak pratik gerektirir.

En az beş saniyelik video çektikten sonra, fareyi ev kafesine geri koyun. Ve kafesi rafa geri koyun. Ardından, işlemi bir sonraki farede tekrarlamadan önce tabloyu temizleyin.

Daha sonra videolardaki davranışı sıfırdan dörde kadar bir ölçekte puanlayın. Y-labirent testini kullanarak, Alzheimer hastalığı benzeri patoloji sergileyen yaşlı bir transgenik fare hattı, beklenen bir spontan değişim kusurunu ortaya çıkardı. Buna karşılık, başka bir Alzheimer model fare hattı, hattaki aşırı hiperaktivite ve stereotiplemeye bağlı olarak artan spontan değişim gösterdi.

Bu davranışlar, spontan değişimin ölçülmesine önemli ölçüde müdahale eder. Yeni nesne testinde, alışkanlık sırasında hiperaktivite ve diğer stereotip davranışlar değerlendirilebilir. Numune aşaması sırasında, nesne yanlılığı olmayan hayvanları tanımlamak için her nesnenin keşfi ayrı ayrı ölçüldü.

Açık daireler, önyargı gösteren ve test aşamasından çıkarılan hayvanları gösterir. Test aşaması üç farklı şekilde analiz edildi. Toplam keşif süresi gruplar arasında karşılaştırılabilir olduğunda, her nesnenin ham keşif süresi analiz edildi.

Karşılaştırılan gruplar farklı süreler boyunca araştırma yaptığında, testi puanlamak için ya yenilik tercihi ya da bir ayrımcılık indeksi kullanıldı. Bilişsel bir ölçü olmayan uzuv kenetlenmesi, birkaç transgenik kuyruk faresi modelinde gözlenmiştir. Bu davranış, geç evre Alzheimer hastalığında gözlenen bazı fonksiyonel motor eksiklikleri özetler.

Bu prosedürü denerken, fareleri nazikçe tutmayı ve test ortamındaki yüksek sesler veya yeni kokular gibi rahatsızlıkları en aza indirmeyi unutmamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, bir bileşiğin hipokampusun işlevini spesifik olarak etkileyip etkilemediği gibi ek soruları yanıtlamak için uzamsal su labirenti veya bağlamsal korku koşullandırma gibi diğer yöntemler de gerçekleştirilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, Alzheimer hastalığının fare modellerinde Y-labirent testi, yeni nesne tanıma testi ve uzuv kenetleme testi kullanılarak bileşiklerin etkinliğinin nasıl taranacağını iyi anlamalısınız.