Yükselen Bulaşıcı Patojenlerin Giderilmesi İçin El Yıkama Etkinliğini Test Etmenin Bir Metodu

Bu deneyin genel amacı, ilgilenilen bir organizma ile deneysel olarak aşılanmış ellerde el yıkama seçeneklerinin karşılaştırmalı etkinliğini test etmektir. Bu yöntem, bulaşıcı hastalıkların önlenmesine yardımcı olmak için temel sorular hakkında bilgi sağlayabilir. Araştırmacıların, ilgilenilen belirli organizmalar için el yıkamanın etkinliğini araştırmasına izin vererek.

Bu tekniğin temel avantajı, esnek olması ve birçok farklı organizmanın araştırılmasına izin verecek şekilde uyarlanabilmesidir. Bu yöntem için ilk olarak, Ebola bağlamlarında el yıkama için klor çözeltilerinin kullanıldığını fark ettiğimizde aklımıza geldi ve o sırada bunun etkinliğine dair bir kanıt yoktu. Uygun denekleri işe aldıktan ve metin protokolüne göre el yıkama solüsyonları hazırladıktan sonra, patojenik olmayan bir E.Coli ipliğini LB agar plakalarına çizerek bakterileri hazırlayın ve tek koloniler elde etmek için kültürleri 24 saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.

Deneyin başlamasından bir gün önce, plakadan tek bir koloniyi almak için steril bir yağ kullanın ve 10 mililitre LB suyunu aşılayın. Kültürleri gece boyunca çalkalayarak 37 santigrat derecede inkübe edin. Deney sabahı, 20 mililitre taze LB suyuna gece boyunca bir mililitre kültür ekleyin.

Mililitre başına 10 ila sekizinci CFU'dan daha büyük bir tuz yoğunluğu elde etmek için kültürleri yaklaşık iki buçuk saat inkübe edin. Ardından, kültürün konsantrasyonunu tahmin etmek için bir spektrofotometre kullanın. Testten hemen önce, %68 bakteri veya viral süspansiyon ve %32 sodyum klorür veya toprak yükünden oluşan bir aşı hazırlayın.

Karıştırmak için girdap veya hafifçe girdap yapın. Gönüllüleri metin protokolüne göre hazırladıktan sonra, işaretçi ile orta parmaklar arasındaki perdeli boşluğa düz uçlu bir cilt pH probu yerleştirerek her gönüllünün cildinin pH'ını test edin. Elektrotun cilde karşı düz olduğundan emin olun ve pH okumasını kaydedin.

Ardından, gönüllü bardağını iki elinizle birleştirin. Ardından, ellerinizi sivri uçlu hale getirmek için her bir avuç içine 750 mikrolitre aşıyı dikkatlice pipetleyin. Gönüllülerin ellerini dikerken, aşıların hiçbirinin dökülmemesi önemlidir.

Gönüllülere bunun önemli olduğunu hatırlatın ve işleme başlamadan önce onlara su ile pratik yapma fırsatı verin. Gönüllülerin, elleri mümkün olduğunca az sürtünmeye maruz bırakırken, elin tüm yüzeyleri aşı ile kodlanana kadar ellerini nazikçe ovmalarını sağlayın. Gönüllülere, aşının kurumasını sağlamak için ellerini 30 saniye daha sabit ve vücutlarından uzak tutmalarını söyleyin.

Ardından, metin protokolünde açıklanan yöntemlerden birini kullanarak ellerinizi yıkayın. Sabunla el yıkamak için, elleri ıslatmak için 10 mililitre Ultra saf su kullanın. Gönüllülerin ellerini sabunla köpürtmelerini ve ardından 20 saniye daha ellerini ovmalarını sağlayın.

Dakikada 1,5 litre akış hızında bir huniden oda sıcaklığında 500 mililitre Ultrapure suyu büyük bir numune toplama torbasına dökerek gönüllünün ellerini durulayın ve numuneyi iki saat içinde işleyin. Tüm klor çözeltileri için, dakikada 1,5 litre akış hızında bir huni vasıtasıyla gönüllünün ellerine 200 mililitre klor çözeltisi dökün ve gönüllülerin ellerini iyice ovmasını sağlayın. Başka bir el yıkama yöntemi olarak, gönüllülerin ellerini yıkamak için el dezenfektanı kullanmalarını sağlayın.

Elin tüm yüzeylerinin nazikçe ovulması önemlidir, katılımcılara ovuştururken her bir parçaya, avuç içlerine, tırnaklara, parmakların arasına odaklanmalarını ve ardından tüm elin durulandığından emin olmalarını söyleyin. Kontrol A için, aşılamadan sonra bir el yıkama adımı gerçekleştirmeyin. Kontrol B için, bilinen bir akış hızına sahip bir huniden el yıkama yapmak için yalnızca oda sıcaklığında Ultra saf su kullanın.

Elde yıkadıktan sonra, test için seçilen her gönüllünün elini hemen bileğe kadar 75 mililitre Leeuwin içeren bir numune torbasına koyun. Çantanın üst kısmını bileğinizin etrafında sıkıca tutun. Gönüllülerin ellerini solüsyonda 30 saniye boyunca nazikçe ovmalarını, parmakların arasına ve tırnakların altına ulaşmaya özen göstermelerini sağlayın.

Tüm elin Leeuwin'de bileğe kadar iyice durulanmasını sağlamak için elinize çantanın dışından 30 saniye boyunca nazikçe masaj yapın. Torbayı kapatın ve uygun makaleye göre işleyin. İşlemi her el yıkama yöntemiyle tekrarlamadan önce, gönüllülerin ellerini lavaboda iyice yıkamak için ılık suda sabun kullanmalarını sağlayın.

Son olarak, gönüllünün ellerine her iki tarafı kaplanana kadar püskürtmek için %70 etanol kullanın ve kurumasını bekleyin. Numuneleri analiz etmek için, steril filtreleme hunileri ve vakum bağlantısı olan bir alev ve bir filtreleme manifoldu kurun. Forsepsleri etanole batırarak ve ateşleyerek sterilize edin.

Izgara yukarı bakacak şekilde filtrasyon manifolduna 0.45 mikronluk bir filtre yerleştirmek için forsepsleri kullanın. Ardından filtreyi ıslatmak için az miktarda steril PBS kullanın. Huniyi tabana yerleştirin ve pipetleyin veya numuneyi doğrudan filtrenin üzerine dökün.

Numunenin tamamı zardan geçene kadar vakumu çalıştırın. Ardından, huninin kenarlarını durulamak için steril PBS kullanın ve vakumu tekrar devreye sokun. Ardından, huniyi çıkarın, forsepsleri alevle sterilize edin ve filtreyi tabandan kaldırın.

Ardından filtreyi, ızgara yukarı bakacak şekilde bir petri kabına yavaşça ortamın üzerine yerleştirin ve filtrenin yüzeye karşı aynı hizada durduğundan emin olun. Plakaları ters çevirin ve 24 saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Kuluçka işleminden sonra E.Coli kolonilerini sayın ve verileri kaydedin.

Metin protokolüne göre veri analizi yapın. Bu videoda açıklanan protokol, E.Coli ve Phi6 ile test edilen 18 gönüllü ile tamamlandı, toprak yükü olmadan E.Coli için, HTH, NaDCC ve stabilize NaOCl ile el yıkama, hepsi sadece su ile el yıkamadan önemli ölçüde daha fazla log azalması ile sonuçlandı. Toprak yükü ile HTH, E.Coli'nin sadece sabun ve ABHS ile su ile el yıkamasından önemli ölçüde daha fazla log azalmasına neden oldu.

Toprak yükü olmayan Phi6 için yöntemler arasında anlamlı bir fark yoktu. Bununla birlikte, toprak yüküne sahip Phi6 için, su tek başına ABHS'den veya stabilize NaOCl'den daha büyük bir log azalmasına ve sabunla el yıkamanın ABHS'den daha büyük bir log azalmasına, stabilize NaOCl'ye ve üretilen NaOCl'ye neden oldu. HTH ayrıca ABHS'den daha büyük bir log azalmasına sahipti ve stabilize NaOCl ve NaDCC, stabilize NaOCl ve ABHS'den daha büyük bir log azalmasına neden oldu.

Bu grafiklerde gösterildiği gibi, klor, durulama suyunda sabunla elde yıkamaya göre önemli ölçüde daha fazla E.Coli azalması ile sonuçlanmıştır. Son olarak, aynı model, tüm klor çözeltileri ile toprak yükü olmadan Phi6'da bulundu ve bu da durulama suyunda sabunla el yıkamaya göre önemli ölçüde daha fazla Phi6 azalmasına neden oldu. Phi6 ile durulama suyunda ve toprak yükünde önemli bir azalma olmamıştır.

Bu prosedürü denerken, her koşul için etkinlik sonuçlarının iki kontrol için sonuçlar karşılaştırılarak hesaplandığını hatırlamak önemlidir. Bu, her el yıkama seçeneği için adımları tutarlı bir şekilde gerçekleştirmenin çok önemli olduğu anlamına gelir.