Fare pankreas diseksiyon histolojik analiz ve metabolik profil oluşturma

Bu video makalesinin temel amacı, fare pankreasının diseksiyonuna ilişkin ayrıntılı görsel talimatlar sağlamaktır. Bu talimatlar, insan pankreas hastalıklarının fare modellerini çalışan ve histolojik analiz veya metabolik profilleme için fare pankreasını diseksiyon yoluyla toplamak isteyen araştırmacılar için faydalı olacaktır. Video makalesi ayrıca, kalp ponksiyonu prosedürü kullanılarak terminal kan toplama işleminin nasıl gerçekleştirileceğine dair ayrıntılı talimatlar sunmaktadır.

Gerekli malzemelerin bulunduğu bir ameliyat masası gösterilmektedir. Bunlar; kapaklı bir cam kavanoz, bir adet 15 mL falcon tüp, bir adet cerrahi makas, bir adet 70% ethanol sıkma şişesi, iki adet köpük levha, iki adet pens, iki adet 1 mL 21 gauge şırınga, iki adet 50 mL falcon tüp, bir adet santrifüj tüpü, bir adet kriyoviyel, dört adet cerrahi ped, on adet iğne, bir sterilizasyon mendili dispenseri ve bir kesici/delici alet konteyneri içermektedir. Gerekli malzemelerle birlikte ameliyat sonrası masası gösterilmektedir.

Bunlar arasında bir analitik terazi, dört litrelik bir sıvı azot Dewar kabı, sığ ve geniş ağızlı bir Dewar kabı, yüzer bir mikrotüp rafı, bir çift cerrahi makas, iki pens, beş kriyoviyal ve steril mendil dispenserle yer almaktadır. Ötanazi işlemini gerçekleştirmek için fare, önce birkaç damla izofluran ile ıslatılmış gazlı bez içeren cam kavanoza yerleştirilir ve fare bilinçsiz hale gelene kadar kapakla kapatılır; bu işlem genellikle yaklaşık bir dakika sürer. Ardından fare cam kavanozdan çıkarılır ve farenin herhangi bir rahatsızlık hissetmediğinden emin olmak için ayak kıstırma testi uygulanır.

Ayak sıkıştırma testi başarısız olursa, test başarıyla gerçekleştirilene kadar fare cam kavanoza geri konur ve kapak kapatılır. Fareyi sırt üstü yerleştirin, farenin uzuvlarını cerrahi köpük levhaya sabitleyin ve farenin ventral tarafını %70 etanol ile ıslatın. Üretral açıklığın yakınındaki kürkü pensle sıkıştırın ve hafifçe yukarı doğru çekin.

Üretral açıklıktan başlayarak orta hat boyunca yukarıya, çeneye kadar uzanan bir kesi ile abdominal kaviteyi açın. İlk kesinin başlangıç noktasının yakınında, kürkün bir yanını tutarak arka pençeye doğru aşağıya ve çapraz bir kesi daha yapın. Aynı işlemi karşı taraf için de tekrarlayın.

Terminal kalp ponksiyonunu gerçekleştirmek için kalbin yerini belirleyin. Bunun için, sternumu pensle kavrayın ve diyaframa doğru kesin. Kaburga kafesinin üzerinden hızla yukarıya doğru kesin ve atan kalbi açığa çıkarmak için kesilen kısmı çıkarın.

Kalbin yeri belirlendikten sonra perikard kaldırılır ve şırınga ile terminal kalp ponksiyonu gerçekleştirilir. Optimal kan toplama işlemi için, kanı çok hızlı çekmekten kaçının ve kalbin pompalama hareketini taklit etmek amacıyla iğnenin pistonunu kullanın. Kan santrifüj tüpüne aktarılır ve şırınga tıbbi atık kesici-delici alet kutusuna atılır.

Kalp ponksiyonu gerçekleştirildikten sonra, kalbe bağlanan dokuların uzaklaştırılmasıyla ötanazi uygulanır. Farenin sol tarafındaki mideyi bulun. Pankreas, mide ve duodenumun yanı sıra tüm ince ve kalın bağırsaklar boyunca uzanan ve dalağa tutunmuş, yaygın açık renkli bir doku görünümündedir.

Pens kullanarak pankreası mide ve duodenumdan nazikçe ayırmaya başlayın. Pankreası ince bağırsaktan ayırmaya, jejunum ve ileum bölümlerinden devam ederek son olarak sekum ve kalın bağırsağa kadar ilerleyin. Sekumda pensi yeniden konumlandırın ve pankreası kalan kolon boyunca rektuma doğru ayırmaya devam edin.

Bu aşamada, mide ile rektumdan hemen önceki kolon bölgesi arasındaki kısmı kesip çıkarmak uygundur. Pankreası ve ona bağlı dalağı bulun. Pankreası farenin sağ tarafına doğru kaydırın.

Pankreasi ve ona bitişik dalakı tamamen ayırmak için pankreas ile göğüs boşluğu arasındaki kalan bağlantıları kesin. Pankreasi çıkarın ve incelemek için yayın. İstenirse, bu aşamada diğer organlar da çıkarılabilir.

Ekstraksiyon sonrası numuneler ameliyat sonrası alanına taşınır. Her bir organ tartılır ve ardından ilgili kriyotüpe yerleştirilir. Gözlemlenen tüm düzensizlikler kaydedilir.

Organlar kriyotüplerine yerleştirildikten sonra, önce yüzer mikro tüp rafına ve ardından sıvı azot içeren Dewar kabına yerleştirin. Şok dondurma işleminden sonra, organlar uzun süreli saklama için -80 °C'de depolanmalıdır. Kullanılan tüm diseksiyon aletleri sterilizasyon mendilleri ile sanitize edilmelidir.

İzofluranla ıslatılmış cerrahi pedle kaplanmış falcon tüpünün kapağı kapatılmalıdır. Köpük levha üzerindeki cerrahi ped, taze bir cerrahi pedle değiştirilmelidir. Farenin toplanmayan kısımları, tesisin hayvan imha politikasına uygun olarak atılmalıdır.

Aşağıdaki maddelerin uygun şekilde işlenmesi gerekir. Bu maddeler doğru şekilde saklandığında, floresan mikroskobu, hematoksilin ve eozin histolojisi, immünohistokimya, kütle spektrometrisi ve nükleer manyetik rezonans spektroskopisini içeren ancak bunlarla sınırlı olmayan çok sayıda deney gerçekleştirilebilir. Pankreasın metabolik aktivite ve insülin üretimi için temel bir organ olması nedeniyle, bu prosedür fizyolojik özelliklerin korunmasına olanak tanır.

Pankreas izole edilerek örnek üzerinde gelecek analizler gerçekleştirilebilir. Bu prosedür, aynı organizma içindeki diğer dokulardan gelen etkileşimlerin aynı zaman dilimi içerisinde karşılaştırılmasına ve incelenmesine olanak tanır.