Yaşlanmaya Bağlı Translasyon Sonrası Değişiklikleri İncelemek İçin Birden Fazla Fare Dokusundan Ara Filament Proteinlerinin İzolasyonu

Bu biyokimyasal prosedürün genel amacı, farklı dokuya özgü ara filament proteinlerinin translasyon sonrası modifikasyonlarını incelemek için çoklu fare dokusundan ara filamentle zenginleştirilmiş fraksiyonları izole etmektir. Bu yöntem, memeli yaşlanması sırasında bu önemli stres koruyucu hücre iskeleti proteinlerinin işlevinin ve düzenlenmesinin nasıl etkilendiği gibi ara filament alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, otomatik bir doku lizis adımının dahil edilmesinin, kullanıcıların birden fazla doku örneğini hızlı ve verimli bir şekilde işlemesine izin vermesidir.

Başlamak için, proteaz inhibitörleri ile desteklenmiş bir mililitre buz gibi Triton X-100 tamponunu bir cam tüp homojenizatöre ekleyin ve buzun üzerine yerleştirin. Sıvı nitrojen deposundan küçük bir doku parçası çıkarın ve doğrudan cam homojenizatöre yerleştirin. Daha sonra homojenizatörü ve numuneyi her zaman buz üzerinde tutarken, kabarcık oluşumunu en aza indirirken numuneyi homojenize etmek için yaklaşık 50 vuruş politetrafloroetilen pastil kullanın.