24 Mayıs 2017
Bu protokol, kemirgenleri elektronik sigara buharı (E-buhar) ve sigara dumanına maruz bırakmaya yönelik bir yöntemi açıklamaktadır. Maruz kalma odaları, anestezi odalarını, kemirgenlere E-buhar veya sigara dumanı veren otomatik bir pompalama sistemi ile modifiye ederek yapılır. Bu sistem birçok deneysel son noktayı barındıracak şekilde kolaylıkla değiştirilebilir.
Bu videonun genel amacı, ilgili sağlık sorunlarını incelemek için kolayca ayarlanabilen ve kemirgenlere e-buhar ve tütün dumanı veren e-buhar ve sigara dumanı odalarının inşası ve çalıştırılması için bir yöntem sunmaktır. Bu odalar, özellikle akciğer ve kardiyovasküler hastalıklar alanlarında, e-buhar ve tütün dumanının sağlık üzerindeki zararlı etkilerini belirlememizi sağlayan deneyler yapmamıza yardımcı olur. Kolayca inşa edilen bu odalar ucuzdur ve insan sigara içme alışkanlıklarını simüle etmek için çeşitli soluma veya soluma sürelerine göre kolayca özelleştirilebilir.
Bu odaları kullanarak, nikotinin akciğer kanseri, KOAH, alerji ve astım gibi hastalıklara katılımını incelemek için kemirgenleri nikotinli ve nikotinsiz e-buhara maruz bırakabiliriz. Tütün dumanı odası, abdominal aort anevrizması gibi kemirgenlerde sigara dumanına bağlı hastalık modelleri oluşturmamıza yardımcı olacaktır. Bu, bu hastalığı başlatan biyokimyasal değişiklikleri anlamamıza yardımcı olacaktır.
Bu odalar, e-buhar kullanımının geleneksel tütün dumanından daha güvenli olup olmadığını belirlemeye yardımcı olacaktır. Ardından, çeyrek inç iç çaplı silikon boruyu iki adet 15 santimetrelik parçaya kesin ve uçları bir T-konektörünün her iki tarafına takın. Her iki tüpü de hazne kapağının ön tarafına yakın önceden yapılmış deliklerden geçirin, böylece T-konektörü haznenin içinde olur.
Ardından boruyu kapağa sabitlemek için bant kullanın. Ardından, silikon borunun serbest uçlarını iki mikro hava pompasının çıkış uçlarına bağlayın ve pompaları haznenin kapağına monte etmek için çift taraflı yapışkan bant kullanın. Dört santimetrelik bir silikon boru parçasını kesin ve bir ucunu hava pompalarından birinin giriş tarafına takın.
Haznenin kullanımı sırasında e-sigaranın yerleştirileceği yer burasıdır. Tüpün çapının e-sigaranın ucuna tam oturmasına izin verdiğinden emin olun. Ardından, yeni bir silikon tüpün bir ucunu diğer hava pompasının giriş tarafına takın.
Bu pompa, oda havasını hazneye sokacaktır. Bu nedenle, tüpün ucu çeker ocakın dışına yerleştirilmelidir. Tüpün uzunluğu kritik değildir, ancak hava akışı direncini sınırlamak için mümkün olduğunca kısa olmalıdır.
Haznenin içinde, oksijen ve karbon monoksit gazı monitörlerini tutacak iki küçük kancayı takmak için çift taraflı yapışkan bant kullanın. Tütün sigara dumanı haznesini inşa etmek için, e-sigara haznesine benzer, ancak bazı değişiklikler yapılmış bir hazne hazırlayarak başlayın. İlk olarak, ekteki metin protokolünde açıklandığı gibi bir sigara aydınlatma cihazı oluşturun.
Yeni bir silikon tüpün bir ucunu sigara aydınlatma cihazına ve diğer ucunu hava pompasının giriş tarafına takın. Daha sonra sigara aydınlatma cihazını çeker ocak içine, ancak kullanımı sırasında haznenin dışına yerleştirin. Ardından, yeni bir silikon tüpün bir ucunu diğer hava pompasına takın.
Bu pompa hazneye oda havası vereceğinden, bu borunun ucunu davlumbazın dışına yerleştirin. Ardından, odanın ön duvarında beş milimetre genişliğinde dikey yarıklar kesin ve bu açıklığı kapatacak şekilde dışarıya bir bilgisayar fanı monte edin. Fanın ön tarafının hazneye doğru baktığından emin olun, böylece fan açıklıktan hazneye hava üfler.
Burada gösterilene benzer bir mikro denetleyici kullanarak fanı ve hava pompalarını kontrol edin. Ekteki metin protokolündeki ayrıntılı talimatları izleyerek mikro denetleyiciyi monte edin ve mümkünse çeker ocakların dışına yerleştirin. 450 ila 520 gram ağırlığındaki yetişkin sıçanları kullanın ve alacakları maruziyet türüne göre gruplandırın.
Kuyruk damarından 500 mikrolitre kan toplayın ve serumu izole etmek için dört santigrat derecede 30 dakika boyunca 20.000 kez g'de döndürün. Bu işlem boyunca numunelerin buz üzerinde soğutulduğundan emin olun. Üreticinin protokolünü takiben, hayvanların her birinde temel serum kotinin konsantrasyonunu ölçmek için bir Cotinine ELISA Kiti kullanın.
E-sigara haznesinin günlük çalışması için, haznenin içini %70 etanol ve ardından deiyonize su ile temizleyerek başlayın. Hazne tamamen kuruyana kadar kurumaya bırakın, bu yaklaşık 30 dakika sürmelidir. Ek olarak, temizlikten sonra haznenin dibine temiz bir emici ped yerleştirilmelidir.
Ardından, gaz monitörlerini kalibre edin ve tüm monitörü odanın içindeki duvara monte edin. Temizlendikten ve kalibre edildikten sonra, odanın içine bir grup fare yerleştirin. E-sigaranın tamamen şarj olduğundan emin olun ve ardından e-sigarayı giriş tüpüne yerleştirin.
90 dakikalık maruz kalma süresi boyunca pil ve e-sıvı seviyelerini izleyin. Hazır olduğunuzda hava pompalarını açın ve zamanlayıcıyı başlatın. Maruz kalma sırasında, oksijen seviyelerinin %20'nin altına düşmediğinden ve sıfır ppm karbon monoksit olmadığından emin olmak için gaz monitörlerini gözlemleyin.
Maruz kalma süresi 90 dakikaya ulaştığında, e-sigarayı çıkarın ve kalan buharı boşaltmak için gaz pompalarını çalıştırmaya devam edin. Buhar temizlendiğinde, fareleri çıkarın ve odayı temizleyin. Deney protokolünün sonunda maruziyetten yaklaşık bir saat sonra her bir sıçanın kuyruk damarından 500 mikrolitre kan toplayın ve her hayvandaki kotinin seviyelerini ölçün.
Tütün sigarasına maruz kalmaya başlamadan önce, hazneyi daha önce olduğu gibi temizleyin, monitörleri yeniden kalibre edin ve her seferinde üçe kadar uygun hayvanları haznenin içine yerleştirin. Sigara aydınlatma cihazına bir sigara yerleştirin ve sigaranın ucu ısıtma elemanına dayanacak şekilde yerleştirin. Ardından sigara izmariti yanmaya başlayana kadar sigara aydınlatma cihazını açın.
Sigara yandıktan sonra pompalama sistemini açın, zamanlayıcıyı başlatın ve sigara yanığının tamamlanmasını gözlemleyin. Ardından, kullanılmış sigarayı bir çift forseps kullanarak sigara aydınlatma cihazından dikkatlice çıkarın. Karbon monoksit ve oksijen seviyelerini izleyin.
Karbon monoksit seviyelerinin 1.000 ppm'nin üzerine çıkmadığından ve oksijen seviyelerinin %20'nin altına düşmediğinden emin olunGerekirse, bilgisayar fanını ayarlayın, çünkü uygun zamanlama ve çalışma süresi karbon monoksit birikimini önlemek için kritik öneme sahiptir. Dört dakika sonra, pompalama sistemini kapatın ve işlemi tam 90 dakikalık bir tütün dumanına maruz kalma süresi boyunca tekrarlayın. Maruz kalma tamamlandığında, kalan dumanı havalandırmak için pompalama sistemini açık bırakmaya devam edin.
Karbon monoksit 100 ppm'nin altına düştüğünde, fareleri çıkarın ve hazneyi temizleyin. Maruz kaldıktan yaklaşık bir saat sonra sıçanların kuyruk damarından 500 mikrolitre kan toplayın ve her hayvandaki kotinin seviyelerini ölçün. Odadaki karbon monoksit konsantrasyonu, 1R6F sigaralardan duman çıkarken her 30 saniyede bir kaydedildi.
Burada gösterilen sonuçlar, art arda üç dört dakikalık döngünün ortalamalarıdır. Test sırasında, karbon monoksit konsantrasyonları milyonda 1.000 parçayı geçmedi. Buna karşılık, elektronik sigara maruziyet sisteminde, karbon monoksit konsantrasyonları maruziyet boyunca tespit edilemedi.
Nikotinin ana metaboliti olan kotinin, burada hem maruziyet öncesi hem de maruziyetten bir saat sonra hayvanların serumundan ölçüldüğü gösterilmiştir. Bu çalışma, benzer maruziyet öncesi sayıları göstermektedir ve e-sigara buharına ve sigara dumanına maruz kalan hayvanlar, klinik olarak anlamlı bir aralıkta serum kotinin seviyelerine sahipti. Bu odalar, kemirgenlere tutarlı, klinik olarak ilgili e-buhar ve sigara dumanı sağlamaya yardımcı olacak ve e-sigaraların ve sigara dumanının olumsuz sağlık etkilerini belirlemeye yönelik araştırma çabalarına yardımcı olacaktır.
Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde uygulanırsa yaklaşık iki saat içinde tamamlanabilir. Bu odacıkların en büyük avantajlarından biri, herhangi bir marka e-sigara veya e-sigara likitinin kullanımına izin veren çok yönlülüktür. Bu odaları, farklı tatlardaki nikotinsiz e-buharların herhangi bir olumsuz sağlık sorunu olup olmadığını incelemek için kullanabiliriz.
E-buhar ve dumanın neden olduğu kemirgen hastalık modelleri, bu hastalıklar için daha iyi terapötik ajanlar sunmamıza yardımcı olacaktır. Sigara aydınlatma cihazını çalıştırmanın son derece tehlikeli olabilecek bir ısıtma elemanı içerdiğini unutmayın. Laboratuvar alanının uygun güvenlik gereksinimlerine sahip olduğundan emin olmak için itfaiye şefinize danışmalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu makale, kemirgenler için elektronik sigara (e-buhar) ve sigara dumanı maruziyet odalarının kurulumu ve işletilmesine yönelik ayrıntılı bir yöntem sunmaktadır. Sistem, hem e-buhara hem de tütün dumanına kontrollü ve klinik olarak anlamlı maruziyet sağlanmasına olanak tanıyarak, özellikle pulmoner ve kardiyovasküler araştırmalarda bu iki faktörün sağlık üzerindeki etkilerinin doğrudan karşılaştırılmasını kolaylaştırmaktadır.
Kemirgenlerde elektronik sigara buharı ve sigara dumanı maruziyetlerinin doğrudan ve kontrollü karşılaştırılması, preklinik toksikoloji ve solunum araştırmalarındaki kritik bir boşluğu doldurmaktadır. Bu maruziyet sistemi; standartlaştırılmış, klinik olarak anlamlı nikotin dozajlamasına ve kantitatif biyobelirteç ölçümüne olanak tanıyarak, pulmoner ve kardiyovasküler hastalık modelleri için mekanistik risk azaltma ve hedef doğrulamayı destekler. Bu yaklaşım, solunum ve kardiyovasküler terapötik geliştirme süreçlerindeki erken aşama portföy kararları için öngörü güvenilirliğini artırır.
Bu maruziyet sistemi, solunan toksik maddelerin standardize ve kantitatif in vivo modellemesini sağlayarak erken keşif, hedef doğrulama ve preklinik etkinlik iş akışları arasında köprü kurar.