Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem Drosophila melanogaster

Bu davranışsal tahlilin genel amacı, çevresel kuyrukların kur yapma ve çiftleşme gibi üreme davranışları üzerindeki etkisini ölçmektir. Bu yöntem, davranışsal biyoloji ve eurogenetik alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Genetik ve çevresel faktörlerin üreme davranışları üzerindeki çıkarımı ve bu davranışları ılımlı hale getiren mekanizmalar gibi.

Bu teknik, üremeyi etkileyen çok çeşitli çevresel kuyrukların test edilmesinde hız ve esneklik sunar. Ve bu çok iyi sayıda kopya ile. Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan bir yüksek lisans öğrencisi olan Jenke Gorter olacak.

Deneye bir litre zengin sinek ortamı hazırlayarak başlayın. Manyetik karıştırma çubuklu iki litrelik bir cam behere bir litre musluk suyu dökün. Ve kabı manyetik bir sıcak plakaya koyun.

Karıştırmayı kapalı tutun ve kaynama sıcaklığına ulaşılana kadar ısıyı 300 santigrat dereceye kadar çevirin. Karıştırmayı 500 rpm'ye kadar açın ve malzemeleri kaynar suya ekleyin. Mayanın kuvvetlice köpürmesini bekleyin.

Ardından sıcak plaka sıcaklığını 120 santigrat dereceye düşürün. 10 dakika sonra sıcak plakayı 30 santigrat dereceye kadar çevirin. Ve karışımın 48 santigrat dereceye kadar soğumasına izin verin.

Doğrudan yiyeceğe bir termometre yerleştirerek sıcaklığı izleyin. İki gram Tegosept'i 10 mililitre% 96 etanol içinde çözün. Karışımı ve beş mililitre bir molar propiyonik asidi behere birleştirin.

Üç dakika karıştırın. Bir bunsen brülöründe bir iğneyi kızarıklığa ısıtın. Ve 3,5 santimetreye 1,0 santimetre plastik Petri kabının üst tarafında 0,3 santimetre çapında bir delik açın.

Kokulu bileşiklerle yemek ortamı hazırlarken, önce deney yemeklerinin 1 / 2'si için istenen bileşiğin 30 mikrolitresini tabağa pipetleyin. Karşılaştırma için bulaşıkların diğer 1/2'sini boş bırakın. Beş mililitrelik serolojik bir pipet kullanarak, tabağın altını kaplayacak şekilde üç mililitre yiyecek ortamı dökün.

Kirlenmeyi önlemek için üzerini bir tülbentle örtün ve ortamın oda sıcaklığında bir saat katılaşmasına izin verin. Ardından, bulaşıkların üzerine bir kapak yerleştirin ve kapakları iki taraftan bantlayın. Parafin film parçalarını sıfır noktası iki santimetre kalınlığında rulolar halinde yuvarlayarak bulaşıkların deliklerini kapatmak için küçük parafin film tapaları hazırlayın.

Ve sonra onları sıfır nokta beş santimetrelik segmentlere kesin. Dikenli, bölmeli bağlantı parçalarına sıkıca oturması için septumda iki küçük delik açın. Dört nokta beş santimetre şişe kapaklarını sıfır nokta üç iki santimetre kalınlığında Silcone septum ile açın.

Küçük PVC boruyu şişeden çıkan her iki çıkışa ve şişeye giren girişlerden sadece birine takın. Ardından, küçük borular kullanarak her bir YPD kültür şişesinin çıkışına bir cam tüp takın. Tüpü cam elyafı ile doldurun.

Ve kullanmadan önce otoklavlayın. Takılan kapakları ve boruları alüminyum folyoya sarın. Ve onları 120 santigrat derecede ve bir bar basınçta 25 dakika otoklavlayın.

Steril 100 mikrolitrelik bir pipet ucunu YPD Agar plakasındaki maya kolonilerinden birine batırın ve Otoklavlanmış YPD sıvı orta boy şişeye bırakın. Bu maya ve yumurtalı YPD sıvı orta boy şişenin yanı sıra, mayasız, Otoklavlanmış kapaklı, bir prize monte edilmiş bir YPD orta kontrol şişesini kapatın. YPD ortamının mikroorganizmalarla kontaminasyonunu önlemek için, küçük boruyu, bölme boru konektörüne plastik bir itme ile filtreye doğru ilerleyerek sıfır noktası dört beş mikrometre steril şırınga filtresine takın.

Ve filtreden çıkan plastik bölme konektörüne bir vida. Ardından hortumu YPD kültür şişesinin girişine takın. Şişeleri ayrı manyetik plakalara yerleştirin.

Ve çözeltiyi, deneyin başlamasından 24 saat önce oda sıcaklığında 100 rpm'de karıştırın. Her iki şişenin girişlerini basınçlı havaya bağlı bir tüpe bağlayın. Deneye müdahale edilmesini önlemek için deneysel maya şişesinin çıkışını, maya kokusunu deney odasından dışarı atan bir tüpe bağladığınızdan emin olun.

PVC boruyu cam tüpün çıkış tarafına takın ve bunu deney kutusunun alt deliklerine doğru yönlendirin. Dış çapı sıfır nokta beş santimetreye eşit veya daha büyük olan bir T-ayırıcı ve kısa küçük PVC boru parçaları kullanarak, her iki taraftaki iki çıkışın her birine iki serolojik pipet takın. Pipetleri, çelik kutudaki kameraların altındaki beyaz kağıt tabakasına düz bir şekilde bantlayın.

Deney yapan bir dişiyi ZT altıda küçük bir Petri kabına yerleştirmek için bir ağız pipeti kullanın. Ve sineğin bir saat boyunca çiftleşme arenasına alışmasına izin verin. Bir saat sonra, ZT yedide, vahşi tip bir erkeği Petri kabına aktarın.

Ve tıklayın 24 saat İzlemeye Başla. Hava pompası deneyi için, çanağı, çiftleşme arenasının giriş deliğine bir pipet çıkışı bağlanacak şekilde yerleştirin. Çiftin çiftleşme davranışını analiz etmek için, bir görüntü görüntüleme yazılımında tüm resimleri aç seçeneğini seçin.

Ve bunları kronolojik sırayla gözden geçirin. Tarihi, deney numarasını, yemek numarasını ve başlangıç saatini aynı satırdaki bir elektronik tabloya yazın. Web kamerası kamerasının altına yerleştirildiği andan itibaren her arenanın başlangıç zamanını alın.

Resimlerden zaman damgasını kaydedin. Her çiftleştirmenin başlangıç zamanını aynı satırda, elektronik tabloya işaretleyin. Erkeğin dişiye bindiği ve çiftin en az beş ardışık kare boyunca orta derecede sabit ve aynı duruşta kaldığı bir çiftleşmeyi bir olay olarak sayın.

Gıda ortamı için ayrılan maya havasının analizi, çiftleşen bir çiftin, gıda ortamında maya bulunmadığında maya kokularına yanıt vermediğini göstermektedir. Ancak, maya aynı zamanda gıda ortamına eklendiğinde maya havasındaki çiftleşme sıklıklarını arttırırlar. Asetik Asit varlığı üzerine kadın alıcılığı artar.

Ancak yalnızca ortamda Pepton mevcut olduğunda, sineklerin çiftleşme frekanslarını artırmak için Amino Asitleri ve Asetik Asidi aynı anda algılamaları gerektiğini gösterir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik altı saat içinde kurulabilir. Ve davranış analizi, uygun şekilde yapılırsa beş saat içinde gerçekleştirilebilir.