Yeni nesne tanıma testi öğrenme ve hafıza farelerde incelenmesi için

Bu davranışsal testin genel amacı, farelerde öğrenme ve hafızanın çeşitli yönlerini test etmektir. Bu yöntem, kemirgen bilişi alanında, daha derin bir anlayış geliştirmenin temellerinden, hafıza ve farelerde öğrenmenin belirli yönlerinin yanı sıra, Alzheimer hastalığı gibi hastalık modelleri de dahil olmak üzere bilişsel bozukluk gibi daha karmaşık konuların yanı sıra, potansiyel bilişsel gelişimin araştırılmasına kadar çok sayıda sorunun yanıtlanmasına yardımcı olabilir. ORT'nin ana avantajı, basitliği, verimliliği ve esnekliği ve farelerde öğrenme ve hafızayı incelemektir.

Bu prosedürü göstermek, laboratuvarımızdan bir laboratuvar teknisyeni olan Andrei Jeltyi olacaktır. Hayvan tarafından kolayca ayırt edilebilen, ancak doku, şekil veya parlaklık gibi özelliklerde benzer derecede karmaşıklığa sahip olan köstebek boyutlu nesneleri seçerek başlayın, sonuçları saptırabilecek herhangi bir potansiyel indüklenmiş nesne tercihini en aza indirmek için. Ek olarak, indüklenen tercihleri daha da azaltmak için, farelerin her iki nesneye veya hiçbir nesneye tırmanabildiğinden emin olun.

Bir nesnenin üzerine tırmanma yeteneği, keşfe olan ilgiyi artırabilir. Ardından, parlak aydınlatmanın stresini en aza indirmek için, labirentin merkezi yaklaşık 20 şans aydınlatılmış olarak etkisiz hale getirilmiş düşük aydınlatma kullanın. Fareleri her gün kullanmadan önce en az bir saat yeni test odalarına alıştırın ve sıcaklık ve nemi normal muhafaza koşullarına benzer tutun.

Farelerin, testten bir ila iki hafta önce en az bir dakika boyunca günde bir ila iki kez kullanılması gerektiğini unutmayın. Son olarak, ana arena için, farenin rengiyle kontrast oluşturan beyaz veya siyah gözeneksiz plastikten yapılmış kare bir oda kullanın. Fareyi ev kafesinden çıkararak ve açık boş arenanın ortasına yerleştirerek başlayın.

Beş dakika boyunca arenanın ücretsiz keşfine izin verin. Ev kafesi boşaldığında, ertesi gün tutma kafesi olarak kullanmak üzere saklayın. Beş dakikanın sonunda fareyi çıkarın ve bir tutma kafesine yerleştirin.

Fareyi orijinal ev kafesine geri koymayın, aksi takdirde bu, test edilecek kalan farelerin davranışını etkileyebilir. Daha sonra, hacim başına% 70 hacim etanol kullanarak fareler arasındaki cihazı iyice temizleyin. Ardından, arenanın zıt dörtlülerine iki özdeş nesne yerleştirerek eğitim aşamasına veya T1'e başlayın.

Örneğin, biri kuzey batı köşesinde, diğeri güney doğu köşesinde. Çıkarma montaj macunu ile çok hafif olan nesneleri zemine sabitleyin. Her bir nesne kümesinin kullanımını ve yeni nesnenin konumunu arenanın dört köşesinin her birine karşı dengeleyin.

Hangi diyagonalin hangi hayvan için kullanıldığını bildiğinizden emin olun, böylece eğitim günündeki diyagonal kullanımı, her fare için test gününde kullanılan şekil olacaktır. Alışkanlıktan 24 saat sonra, fareyi ev kafesinden çıkarın ve eğitime başlamak için iki özdeş nesneden eşit uzaklıkta, arenanın ortasına yerleştirin. Düşük lokomotor veya keşif aktivitesine sahip olduğu bilinen bir fare türünü kaynaştırıyorsanız, en az beş dakika boyunca ücretsiz keşfe izin verin, kohortlardaki tüm fareler için denemeyi 10 dakikaya uzatın.

Egzersiz denemesinin sonunda fareyi çıkarın ve tutma kafesine yerleştirin. Ev kafesi boşaldığında, test gününde tutma kafesi olarak kullanmak üzere saklayın. Fareler arasındaki aparatı ve nesneleri temizlediğinizden emin olun.

Ardından, eğitim sırasında kullanılan tanıdık nesneyi ve bir yeni nesneyi arenanın zıt dörtlüsüne yerleştirerek test aşamasına veya T2'ye başlayın. Her fare için eğitim sırasında kullandığınız konumların aynısını kullanın. Seçilen T1 ila T2 aralığında, fareyi ana kafesinden çıkarın ve tanıdık nesneden ve yeni nesneden eşit uzaklıkta orta arenaya yerleştirin.

10 dakika boyunca ücretsiz keşfe izin verin. Son olarak, test denemesinin sonunda fareyi çıkarın ve tutma kafesine yerleştirin. Analiz için keşif, aktif titreşimli süpürme ile iki ila üç santimetre içinde nesneye doğru yönlendirilen burun olarak tanımlanır.

Ancak, nesnenin üzerinde oturan fare, keşif süresine dahil edilmez. Hem T1 hem de T2 için ilk beş dakikayı puanlayın ve her oturum için her iki nesne için toplam keşif süresini hesaplayın. Fare her iki nesne için de minimum 20 saniyelik keşif süresini karşılamıyorsa, toplam keşif 20 saniyeyi aşana kadar beş dakikayı geçmeye devam edin.

Düşük keşfe sahip ve pilot test sırasında gözlemlendiği gibi bu minimum kriteri karşılamayan fare suşları için T1 ve T2 süresini 10 dakikaya kadar uzatın. Son olarak, fareler 10 dakikada T1 veya T2 için her iki nesne için minimum 20 saniyelik bir keşif süresine ulaşmazlarsa, hayvanın öğrenmek ve ayırt etmek için yeterli zaman harcadığı doğrulanamayacağı için onları analizden çıkarın. Nesne tanıma görevi, farelerde öğrenme ve hafızayı incelemek için verimli ve esnek bir yöntemdir ve fosfodiesteraz 2 inhibitörlerinin bu görev sırasında geliştiği gösterilmiştir.

Araçla karşılaştırıldığında, PDE2 inhibitörleri bölmeleri 60-7550 veya ND7001'in uygulanması, eğitimden 30 dakika önce verildiğinde, doza bağlı bir şekilde hafızayı önemli ölçüde artırdı. Farklı zaman noktalarında uygulandığında, eğitim ve testlere göre, PDE2 inhibitör bölmesi 60-7550, eğitimden 30 dakika önce, eğitimden hemen sonra ve hatırlamadan 30 dakika önce verildiğinde hafızasını önemli ölçüde geliştirdi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde uygulanırsa iki ila üç gün içinde tamamlanabilir.

Bu prosedürü denerken, pilot çalışmaları yürütmeyi ve T1 ila T2 aralığını dikkatli bir şekilde seçmeyi unutmamak önemlidir, çünkü yanlış bir aralık seçmek yanlış bir etkiye neden olabilir. Bu prosedürü takiben, nesne tanıma testleri kullanılarak tam olarak ele alınamayan öğrenme farklılıkları gibi ek soruları yanıtlamak için Ahırın labirenti gibi diğer yöntemler de gerçekleştirilebilir. Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, öğrenme ve hafıza alanındaki araştırmacıların, hafızanın temel biyolojik mekanizmalarını keşfetmelerinin yanı sıra, kemirgenlerde çeşitli bilişsel eksikliklerin potansiyel mekanizmalarını keşfetmelerinin yolunu açtı.

Bu videoyu izledikten sonra, pilot çalışmaların yürütülmesi, nesnelerin seçilmesi ve uygun T1 ila T2 aralığının seçilmesi dahil olmak üzere, nesne tanıma testini kullanarak uygun bir deneyin nasıl kurulacağını ve tasarlanacağını iyi bir şekilde anlamış olmalısınız. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde iyi şanslar.