Name: Beyin Ekstraselüler Alanının Hacim Fraksiyonu ve Kıvrımını Nicelleştirmek için Tetrametilamonyum ile Gerçek Zamanlı İyontoforez (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 45 s
Description: Öğrenin beyin ekstraselüler alanının hacim fraksiyonu ve kıvrımını tetrametilamonyum ile gerçek zamanlı iyontoforez kullanarak nasıl nicelleştirilir. Bu yöntem, beyin fizyolojisi ve hastalıklarındaki dinamik değişiklikleri anlamak için araştırmacılara değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışma, NIH NINDS hibe R01 NS047557 tarafından desteklendi.

<ol><li>Sykova, E., Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+in+brain+extracellular+space%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Diffusion in brain extracellular space.</a> Physiol Rev. 88 (4), 1277-1340 (2008).</li>
<li>Nicholson, C. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/230904011_Diffusion_and_related_transport_mechanisms_in_brain_tissue">Diffusion and related transport mechanisms in brain tissue.</a> Rep Prog Phys. 64 (7), 815-884 (2001).</li>
<li>Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-selective+microelectrodes+and+diffusion+measurements+as+tools+to+explore+the+brain+cell+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Ion-selective microelectrodes and diffusion measurements as tools to explore the brain cell microenvironment.</a> J Neurosci Methods. 48 (3), 199-213 (1993).</li>
<li>Nicholson, C., Phillips, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+diffusion+modified+by+tortuosity+and+volume+fraction+in+the+extracellular+microenvironment+of+the+rat+cerebellum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ion diffusion modified by tortuosity and volume fraction in the extracellular microenvironment of the rat cerebellum.</a> J Physiol. 321, 225-257 (1981).</li>
<li>Nicholson, C., Sykova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+space+structure+revealed+by+diffusion+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Extracellular space structure revealed by diffusion analysis.</a> Trends Neurosci. 21 (5), 207-215 (1998).</li>
<li>Xie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+drives+metabolite+clearance+from+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sleep drives metabolite clearance from the adult brain.</a> Science. 342 (6156), 373-377 (2013).</li>
<li>Hrabetova, S., Nicholson, C. Biophysical properties of brain extracellular space explored with ion-selective microelectrodes, integrative optical imaging and related techniques. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Biophysical+properties+of+brain+extracellular+space+explored+with+ion-selective+microelectrodes%2C+integrative+optical+imaging+and+related+techniques">Electrochemical Methods for Neuroscience Neuroscience</a>. Michael, A. C., Borland, L. M. , CRC press. 167-204 (2007).</li>
<li>Rice, M. E., Okada, Y. C., Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisotropic+and+heterogeneous+diffusion+in+the+turtle+cerebellum%3A+implications+for+volume+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Anisotropic and heterogeneous diffusion in the turtle cerebellum: implications for volume transmission.</a> J Neurophysiol. 70 (5), 2035-2044 (1993).</li>
<li>Vargova, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+parameters+of+the+extracellular+space+in+human+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Diffusion parameters of the extracellular space in human gliomas.</a> Glia. 42 (1), 77-88 (2003).</li>
<li>Haack, N., Durry, S., Kafitz, K. W., Chesler, M., Rose, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Double-barreled+and+concentric+microelectrodes+for+measurement+of+extracellular+ion+signals+in+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Double-barreled and concentric microelectrodes for measurement of extracellular ion signals in brain tissue.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li>
<li>Xiao, F., Hrabetova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enlarged+extracellular+space+of+aquaporin-4-deficient+mice+does+not+enhance+diffusion+of+Alexa+Fluor+488+or+dextran+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enlarged extracellular space of aquaporin-4-deficient mice does not enhance diffusion of Alexa Fluor 488 or dextran polymers.</a> Neuroscience. 161 (1), 39-45 (2009).</li>
<li>Sherpa, A. D., Pvan de Nes,, Xiao, F., Weedon, J., Hrabetova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gliotoxin-induced+swelling+of+astrocytes+hinders+diffusion+in+brain+extracellular+space+via+formation+of+dead-space+microdomains%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Gliotoxin-induced swelling of astrocytes hinders diffusion in brain extracellular space via formation of dead-space microdomains.</a> Glia. 62 (7), 1053-1065 (2014).</li>
<li>Kume-Kick, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independence+of+extracellular+tortuosity+and+volume+fraction+during+osmotic+challenge+in+rat+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Independence of extracellular tortuosity and volume fraction during osmotic challenge in rat neocortex.</a> J Physiol. 542 (Pt 2), 515-527 (2002).</li>
<li>Saghyan, A., Lewis, D. P., Hrabe, J., Hrabetova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+diffusion+in+laminar+brain+structures+exemplified+by+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Extracellular diffusion in laminar brain structures exemplified by hippocampus.</a> J Neurosci Methods. 205 (1), 110-118 (2012).</li>
<li>Fedirko, N., Svichar, N., Chesler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+and+use+of+high-speed%2C+concentric+H%2B-+and+Ca2%2B-selective+microelectrodes+suitable+for+in+vitro+extracellular+recording%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Fabrication and use of high-speed, concentric H+- and Ca2+-selective microelectrodes suitable for in vitro extracellular recording.</a> J Neurophys. 96 (2), 919-924 (2006).</li>
<li>Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+from+an+injected+volume+of+a+substance+in+brain+tissue+with+arbitrary+volume+fraction+and+tortuosity%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Diffusion from an injected volume of a substance in brain tissue with arbitrary volume fraction and tortuosity.</a> Brain Res. 333 (2), 325-329 (1985).</li>
<li>Nicholson, C., Tao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindered+diffusion+of+high+molecular+weight+compounds+in+brain+extracellular+microenvironment+measured+with+integrative+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Hindered diffusion of high molecular weight compounds in brain extracellular microenvironment measured with integrative optical imaging.</a> Biophys J. 65 (6), 2277-2290 (1993).</li>
<li>Thorne, R. G., Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+diffusion+analysis+with+quantum+dots+and+dextrans+predicts+the+width+of+brain+extracellular+space%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In vivo diffusion analysis with quantum dots and dextrans predicts the width of brain extracellular space.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (14), 5567-5572 (2006).</li>
<li>Wolak, D. J., Thorne, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+of+macromolecules+in+the+brain%3A+implications+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Diffusion of macromolecules in the brain: implications for drug delivery.</a> Mol Pharm. 10 (5), 1492-1504 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden mali çıkarlarının olmadığını beyan ettiler.

<img alt="Şekil 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55755/55755fig10.jpg" /> Şekil 10: Ortak Teknik Konuları Gösteren İdeal Olmayan Veriler. ( A ) İyontoforez mikroelektrodlarıyla ortak teknik konuların diyagramları: Üç kaynaktan oluşan, teknik bir sorun gösteren, işleyen bir iyontoforez mikroelektrodunun TMA&#39;nın normal salınımının karşılaştırılması. [Yüksek büyütme, a1] İdeal bir iyontoforetik kaynaktaki akım, TMA salınımı ve klorür alımıyla eşit şekilde taşınır. Düşük ...

<html> Ekstrasellüler boşluk (ECS), tüm beyin hücrelerinin dışındaki birbirine bağlı kanalların ağıdır ve hem interstisyel sıvı hem de hücre dışı matris içerir ( Şekil 1a ve Şekil 1b ). Besin maddeleri, hormonlar ve nörotransmitterler de dahil olmak üzere beyin hücresi fonksiyonu için gerekli birçok maddenin dağılımı ECS yoluyla difüzyon yoluyla gerçekleşir. Hacim, geometri ve hücre dışı matris de dahil olmak üzere bu alanın fiziksel parametrelerindeki değişiklikler, beyin hücresi fonksiyonu 1 , 2 üzerinde derin bir etkisi olan beyin hücrelerini içine alan ECS ve yerel iyon konsantrasyonları ile difüzyonu önemli ölçüde etkileyebilir. Bir beyin bölgesinin iki yapısal özelliğini belirlemek için gerçek zamanlı iyontoforez (RTI) kullanılır: hacim fraksiyonu ve kıvırcıklık 3 , 4 ,&quot;Xref&quot;&gt; 5. Hacim fraksiyonu ( α ), temsili bir temel hacimdeki toplam doku hacmine ( V doku ) göre ECS tarafından işgal edilen doku hacminin ( V ECS ) oranıdır; <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55755/55755eq1.jpg" /> Kıvrılma ( λ ), herhangi bir engel bulunmayan bir ortamla karşılaştırıldığında, bir maddenin beyin bölgesi boyunca difüze ederken karşılaştığı göreli engeldir; <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55755/55755eq2.jpg" /> Burada D * (cm 2 s -1 ), maddenin beyindeki etkin difüzyon katsayısıdır ve D (cm 2 s -1 ), maddenin seyreltilmiş agaroz jel gibi bir serbest ortamdaki serbest difüzyon katsayısıdır. Bugün, R için en çok kullanılan prob maddesiTI yöntemi, küçük katyon tetrametilamonyumdur (TMA). TMA, 74 g / mol&#39;lük bir moleküler ağırlığa sahiptir, çözeltide tamamen ayrışır ve bir pozitif yüke sahiptir. RTI iyonu ile yapılan çalışmalar, α <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55755/55755eq3.jpg" /> 0.2 ve λ <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55755/55755eq3.jpg" /> 1.6 1 , 2 . Bu, ECS toplam beyin hacminin kabaca% 20&#39;sidir ve küçük, inert bir molekülün difüzyonunun, ECS&#39;de engeller olmadan bir ortamdan yaklaşık 2.5 kat daha yavaş gerçekleştiği anlamına gelir 3 . Bununla birlikte hem α hem de λ , beyin yaşı, bölge ve durumuna ve patolojik koşullara göre değişir 1 . Bu parametrelerin değişimleri beyin gelişimi, yaşlanma, uyku, epilepsi ve beynin diğer birçok temel süreci ve hastalığı ile bağlantılıdır 1, 6 . Diğer teknikler α ve λ değerlerini ölçmekle birlikte , RTI, gerçek zamanda canlı doku lokalize bölgelerinde hem de ölçebilir. Bu nedenle, RTI, akut ve geri dönüşümlü zorluklar sırasında α ve λ&#39;daki değişiklikleri araştırmak için vazgeçilmez bir araç haline gelmiştir. RTI destek teori başlangıçta Nicholson ve Phillips tarafından doğrulandı ve teknik o zaman 4, 7 beri yaygın olarak kullanılmaktadır. RTI&#39;yi kullanan deneyler, bir kaynak mikroelektrodundan İyontoforez ile bir seyreltilmiş agaroz jeline TMA darbesinin salınması ile başlar. Bir kez atılırsa, iyonlar potansiyel olarak sonsuz sayıda rastgele yol seçerek nokta kaynağından serbestçe dağılırlar ( Şekil 1d ). İyonun değişen konsantrasyonu, kabaca konumlandırılmış bir iyon seçici mikro elektrot (ISM) kullanılarak zaman içinde ölçülür100 um uzakta ( Şekil lc ). TMA konsantrasyonundaki değişiklikler, hem D&#39;yi hem de iyonforez mikroelektrodunun taşıma numarasını (Protokol&#39;de tartışılan parametreleri) hesaplamaya olanak tanıyan bir eğride gösterilir. Bu değerler ile, D * elde etmek ve hem α hem de λ hesaplamak için prosedür beyin bölgelerinde tekrarlanır. İyontoforez mikroelektrodunun kontrolü, veri toplama, TMA konsantrasyon eğrisinin grafiklenmesi ve uyumu ve deneysel parametrelerin hesaplanması, tipik olarak bu amaç için tasarlanmış Wanda ve Walter programları tarafından yapılır (yazılım ve kılavuzları şunlardır: Istek üzerine yazarlar tarafından ücretsiz olarak temin edilebilir). Bu derlemenin Protokol bölümü, kemirgen beyin dilimlerini RTI&#39;yi tasarlamak ve gerçekleştirmek için gerekli olan temel işlemleri anlatmaktadır. Teknik, aynı zamanda çubuk olmayan çubuktaInsan beyni dilimleri ve in vivo beyin preparatları dahil 1 , 4 , 6 , 8 , 9 modelleri. Temsilci Sonuçlar bölümü, veri yorumlamadaki nüansları vurgulamak için hem ideal hem de ideal olmayan sonuçlar sunar. Son olarak, Tartışma bölümü, sorun giderme teknikleri, RTI sınırlamaları, ECS&#39;yi incelemek için kullanılan alternatif teknikler ve RTI&#39;nin gelecekteki uygulamaları kısaca anlatılmaktadır. <img alt="Şekil 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55755/55755fig1.jpg" /> Şekil 1: ECS aracılığıyla Difüzyon Diyagramları. ( A ) ECS Diyagramı: Tipik bir beyin bölümünde ECS&#39;nin boyut ve yerini gösterir. Sarı, gri beyin hücresi süreçleri arasındaki ECS&#39;yi işaretler. ECS hacmi, toplam doku hacminin kabaca% 20&#39;sidir ( yani, hacim fraksiyonu = 0.2) fizyolojik koşullar altında. ( B ) ECS&#39;nin büyütülmüş şeması: Beyin hücresi geometrisi (gri) ve hücre dışı matris (çok renkli glikozaminoglikanlar ve proteoglikanlardan oluşan bir örgü şeklinde diyagramlanmış) dahil olmak üzere kıvırcıklığa neden olan fiziksel parametreleri vurgulamaktadır. ( C ) Nokta kaynağından difüzyonun 3D diyagramı: İyontoforetik bir kaynaktan bir ISM&#39;ye atıl moleküllerin net hareketi gösterir. Difüzyon bariyerleri ve hücresel alımını hariç tutarak, moleküller her yöne doğru dışarı doğru yayılır, bu da küresel bir konsantrasyon önü üretir. ISM, iyontoforetik kaynaktan salınan atıl moleküllerin yerel konsantrasyonunu nicelendirir. ( D ) Beynin ECS&#39;sinde difüzyonun bilgisayar simülasyonu: [Sol sol] Monte Carlo simülasyonu için kurulum; Yeşil küreler beyin hücresi süreçlerini temsil eder ve kırmızı kros bir nokta kaynağını temsil eder. Bu kurulum, Şekil 1a&#39;da çizilen beyin dokusunu modeller. [Orta resimler] 3 ve6 molekül, rastgele hareketler yaparak beynin hücre dışı alanına yayılırken, 2 boyutta gösterilir. [Sağ-sağ] Noktasal kaynaktan salınan birçok molekülün rastgele yürüyor. Noktasal kaynaktan tüm moleküllerin net hareketi Şekil 1c&#39;de gösterildiği gibi dışarıya doğrudur . Kümülatif rasgele yürüyüşler, hücreler arasındaki boşlukları ( yani, ECS, daha fazla açıklama için referans 5&#39;e bakınız) özetler. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55755/55755fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a>

<table><tbody><tr><td>A/D ve D/A dönüştürücü</td><td>National Instruments Corporation</td><td>NI USB-6221 DAQ</td><td>NI USB-6221, NI tarafından hala bir 'Eski' cihaz olarak satılmaktadır. Yeni kurulumlar için NI USB-6341 X Serisi DAQ'ların kullanılmasını tavsiye ediyorlar, ancak daha yeni üniteleri test etmedik. NI USB-6221'in MATLAB ve Windows 7 (32 bit) ile kullanımını açıklıyoruz. Alternatifler: BNC-2090 BNC konektör paneli ve SH68-68-EP kablosu ile çok daha eski PCI-MIO-16E-4 A/D dönüştürücü (Yalnızca Windows XP veya daha eski işletim sistemlerinde kullanılır). Wanda Kılavuzunda belirtildiği gibi, Axon Binary Dosyalarını kullanmak için deneysel bir MATLAB programı mevcuttur.</td></tr><tr><td>agarose</td><td>Lonza</td><td>NuSieve GTG Agarose # 50081</td>, <td>RTI ölçümleri için seyreltik agaroz jel hazırlamak</td></tr><tr><td>için ISM</td><td>Dagan</td><td>Model IX2-700 için amplifikatör Çift Hücre İçi Preamplifikatör</td><td>N = 0.1 (referans namlu için) ve N = 0.001 (iyon namlusu için) ile iyon ve referans voltaj amplifikatörü Headstages</td></tr><tr><td>biyolojik bileşik miskroskopu (4x ve 10x objektif ile)</td><td></td><td></td><td>mikroelektrot uçlarını yontmak ve mikroelektrotları incelemek için; çeşitli tedarikçiler, ör AmScope</td></tr><tr><td>borosilikat teta kılcal cam boru</td><td>Harvard Aparatı</td><td>Warner Instruments modeli TG200-4; sipariş # 64-0811</td><td>iyon seçici mikroelektrotlar ve iyontoforetik mikroelektrotlar için çift namlulu cam boru; OD 2.0 mm, ID 1.4 mm, septum 0.2 mm, uzunluk 10 cm</td></tr><tr><td>fırça</td><td>Winsor & Newton</td><td>University Series 233, boyut 0</td><td>yuvarlak shoft saplı fırça, Amazon</td></tr><tr><td>bunsen brülöründen</td> temin edilebilir <td>Mikropipetleri</td> görselleştirmek için Fisher <td></td><td></td></tr><tr><td>kamera</td><td>Olympus</td><td>OLY-150</td><td>monitör gerektirir, alt sahne aydınlatıcısındaki IR filtresi isteğe bağlı grafik</td></tr><tr><td>kaydedicidir</td><td></td><td></td><td>tetrametilemonyum standartlarında kalibrasyon sırasında ve RTI deneyi sırasında iyon seçici mikroelektrot üzerindeki voltajları sürekli olarak kaydetmek; ör Kipp & Zonen tipi BD112 çift kanel tablosu kaydedildi, mevcut</td></tr> yenilenmiş <tr><td>klorotrimetilsilan, saf., silanizasyon için > %99</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>kataloğu # 92360</td><td>; DİKKAT: yanıcı, akut toksisite (oral, dermal, soluma), cilt aşınması, göz hasarı, su ile şiddetli reaksiyona girer, tam açıklama için Sigma-Aldrich Güvenlik Bilgilerine bakın</td></tr><tr><td>Ticari Yazılım</td><td>MathWorks</td><td>MATLAB, Wanda</td><td>ve Walter programlarını kullanarak veri toplama ve analiz için veri toplama araç kutusu. Akademik bir lisansın mevcut olduğunu unutmayın.</td></tr><tr><td>göz koruyucu gözlükler</td><td>Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sabit kademeli bileşik mikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td>, cam kılcal damarı kırmak için sabit aşamalı forseps Fine Science Tools # 11251-10 <td>ile diğer bileşik mikroskopları kullanabilir</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>; Dumond # 5, tercihen kullanılır ve artık ince iş için gerekli değildir</td></tr><tr><td>silanizasyon ve iyon seçici namlunun ucunu sıvı iyon değiştirici ile doldurmak için davlumbaz; çeşitli tedarikçiler, örn. Erlab</td><td></td> cam mikroskop slaytı Fisher # 12-550A tarafından satılan uygun filtreli Captair mikroelektrot uçlarını çiplemek için ısıtıcı / karıştırıcı Fisher Corning PC-420D <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>seyreltik agaroz jeli hazırlamak ve çözeltileri karıştırmak için</td></tr><tr><td>iyontoforetik ünite</td><td>Dagan</td><td>ION-100 ve PS-100</td><td>ION-100, tek kanallı bir iyontoforez ünitesidir +/- 130 V uyumluluk; PS-100 harici bir güç kaynağıdır; alternatifler: örn. Axon Instruments (şimdi Molecular Devices) tarafından üretilen Axoprobe-1A, üretim dışı, yenilenmiş ünitelerin (eBay ve diğer siteler) mevcudiyetini kontrol edin</td></tr>) <tr><td>tetrametilamonyum için sıvı iyon değiştirici (LIX)</td><td>World Precision Instruments</td><td>IE190 Potasyum İyon Değiştirici</td><td>Not: Bu, orijinal Corning potasyum değiştiriciye eşdeğerdir 477317 tetrafenliborat bazlıdır - nötr taşıyıcı potasyum değiştirici ile karıştırmayın tetrametilamonyum algılamayan ve Fluka tarafından satılan Dr. Simon, ETH, Zürih'in laboratuvarından geliyor. Tetrametilamonyum için sıvı iyon değiştiriciyi kendiniz de yapabilirsiniz: ağırlıkça %3 potasyum tetrakis = (p-klorofenil) borat 2,3-dimetilnitrobenzen içinde çözülür. Fluka'dan (şimdi Sigma'nın bir parçası) kimyasallar satın alın. Bkz. Oehme ve Simon (1976) Anal. Elçilerin 86:21-25; DİKKAT: Bu sıvı iyon değiştiricinin toksikolojik özellikleri tam olarak belirlenmemiştir. Yutulması veya insan vücudu ile temas zararlı olabilir. Gereken özeni gösterin! Sıvı iyon değiştiriciler doğrudan güneş ışığından uzak, serin bir yerde saklanmalıdır.</td></tr><tr><td>mikroelektrot tutucu</td><td>WPI</td><td>M3301EH,</td><td>silanizasyon ve iyon seçici namlunun ucunu sıvı iyon değiştirici ile doldurmak için iyon seçici mikroeletrod prefabrike tutmak; WPI, bu tutucunun şeffaf M3301EH ve siyah M3301EH olmak üzere iki versiyonunu satmaktadır. Deneyimlerimize göre, berrak M3301EH siyah M3301EH göre daha sağlam görünüyor.</td></tr><tr><td>mikromanipülatör</td><td>Narishige</td><td>MM-3</td>, <td>silanizasyon sırasında iyon seçici mikroelektrot prefabrike konumlandırmak ve iyon seçici namlunun ucunu sıvı iyon değiştirici ile doldurmak için; iyi çalışır durumda herhangi bir üç eksenli mikromanipülatör ile ikame edilebilir</td></tr><tr><td>Mikropipet Çektirme</td><td>Sutter Aletleri</td><td>Model P-97</td><td>çift namlulu cam boruyu çekmek için; diğer çektirmeler, büyük çaplı çift namlulu cam borulu mikroprob termometresini barındırabildikleri sürece kullanılabilir</td></tr>, <tr><td></td><td>Physiotemp</td><td>Model BAT-12R</td>, <td>bu termometrenin ince probu, kayıt yeri iğnesine yakın yerleştirilir</td></tr> BD <tr><td></td><td></td><td>Şırıngaları ve İğneleri # 305122 (25 gauge)</td> <td>silanizasyon için; BD PrecisionGlide iğneleri 25 G x 5/8 inç (0,5 mm x 16 mm)</td></tr><tr><td>objektif 5X kuru</td><td>Olympus</td><td>MPlan N</td><td></td></tr><tr><td>objektif 10X suya daldırma</td><td>Olympus</td><td>UMPlan FL N</td><td>10X objektif suya daldırma, sayısal açıklık 0,3, çalışma mesafesi 3,3 mm</td></tr><tr><td>plastik kaplar (kapaklı)</td><td>Fisher</td><td>#14-375-148</td><td>tetrametilamonyum standart çözeltilerini ve mikroelektrotları</td></tr> <tr><td>saklamak içinsabit aşamalı mikroskop için platform ve XY çeviri aşaması</td><td>EXFO</td><td>Cebelitarık Burleigh</td><td>platformu dilim haznesini, mikromanipülatörleri ve aksesuarları, XY translasyon aşaması mikroskobu kayıt stabilitesinden ödün vermeden hareket ettirir</td></tr><tr><td>seyreltik bir agaroz jelde RTI ölçümleri için</td><td>gözenekli mini kap</td><td></td><td></td>; ev yapımı</tr><tr><td>yeniden kullanılabilir yapıştırıcı</td><td>Bostik</td><td>Blu-Tack</td><td>mikroelektrotları tutma kabına ve diğer kullanımlara sabitlemek için; </td></tr><tr><td>Hassas x, y, z konumlandırmalı Amazon robotik mikromanipülatörden</td> temin edilebilen çeşitli tedarikçiler <td>Sutter Instruments</td><td>MP-285</td><td>iyon seçici mikroelektrot ve iyontoforetik mikroelektrotu ayrı ayrı tutmak için iki mirkomanipülatöre ihtiyaç vardır. Mikropipetleri aralıklı bir dizide yapıştırmak da mümkündür (metne bakın).</td></tr><tr><td>Alçak geçirgen filtreli sinyal koşullandırma ünitesi</td><td>Axon Instruments</td><td>CyberAmp 320 veya 380</td><td>artık üreticiden temin edilememektedir, ancak E-Bay'den temin edilebilir; alternatifler: ör. Cygnus Technology'den FLA-01 Filtre/Amplifikatör. Bu, çok kutuplu bir Bessel filtresi kullanarak 10 Hz'de minimum kesmeye sahip tek kanallı bir cihazdır, ancak şirket gerekirse daha düşük bir kesme frekansı (2 Hz) için değiştirmeye istekli olabilir.</td></tr><tr><td>gümüş tel</td><td>A-M Sistemleri</td> <td># 7830</td><td>çap 0.015 ", çıplak (kaplamasız)</td></tr> <tr><td>dilim odası</td><td>Harvard Aparatı</td><td>Warner Modeli RC-27L</td><td>bu daldırma dilim odasıdır;</td></tr><tr><td>silanizasyon ve iyon seçici namlunun ucunu sıvı iyon değiştirici ile doldurmak için</td>arayüz dilim odası<td>stereomikroskop</td><td></td><td></td> kullanmayın; yatay olarak monte edilmiş; çeşitli tedarikçiler</tr><tr><td>şırınga, 10 mL</td><td>BD</td><td>Şırıngalar ve İğneler #309604</td><td>mikroelektrotları doldurmak ve silanizasyon için; BD Luer-Lok uçlu</td></tr><tr><td>şırınga filtresi 0.22 ve mikro; Dolgu çözümlerini filtrelemek için m gözenekli</td><td>Whatman</td> <td># 6780-1302</td><td>; Fisher</td></tr><tr><td>şırınga iğnesi, 28 gauge, 97mm</td><td>World Precision Instruments</td><td>MicroFil MF28G-5'ten</td> temin edilebilir, <td>mikroelektrotları doldurmak için</td></tr><tr><td>Teflon (= PTFE) boru Bileşen</td><td>Temini</td><td>STT-28 PTFE tüp ışık duvarı (28 gauge)</td><td>iyon seçici namlunun silanizasyonu için; BD PrecisionGlide iğnelerine uyar 25 G x 5/8 inç. Not: Teflon esastır, PVC borular sıcak balmumu ile erir.</td></tr><tr><td>sıcaklık kontrol sistemi</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Warner Modelleri TC-344B ve SH-27A</td><td>TC-344B, çift otomatik bir sıcaklık kontrol cihazıdır, SH-27A sıralı bir ısıtıcıdır; kontrolör ve ısıtıcı Warner dilim odaları</td></tr><tr><td>tetrametiamonyum (TMA) klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-3411</td><td>5 M çözeltisi ile çalışır; DİKKAT: akut toksisite (oral, dermal, soluma), kanserojenlik, su ortamı için tehlikeli, tam açıklama için Sigma-Aldrich Güvenlik Bilgilerine bakın</td></tr><tr><td>titreşimli bıçak mikrotomu</td><td>Leica</td><td>beyin</td><td>dilimlerini kesmek için</td>VT1000S</tr><tr><td>ksilenler</td><td>Fisher</td><td>X5-1</td><td>silanizasyon için; DİKKAT: yanıcı, akut toksisite (oral, dermal, soluma), cilt aşınması, göz hasarı, kanserojenlik, tam açıklama için Fisher Güvenlik Bilgilerine bakın</td></tr></tbody></table>

beyin ekstraselüler alanının hacim fraksiyonu ve kıvrımını nicelleştirmek için tetrametilamonyum ile gerçek zamanlı İyontoforez

Real-time Iontophoresis with Tetramethylammonium to Quantify Volume Fraction and Tortuosity of Brain Extracellular Space

Bu derlemede, yaşayan beynin hücre dışı alanını (ECS) araştırmak ve ölçmek için altın standart olan gerçek zamanlı iyontoforez (RTI) yöntemini gerçekleştirmek için temel kavramlar ve protokol açıklanmaktadır. ECS tüm beyin hücrelerini çevreler ve hem interstisyel sıvı hem de hücre dışı matris içerir. Nörotransmitterler, hormonlar ve besinler dahil olmak üzere beyin aktivitesi için gerekli olan birçok maddenin taşınması, ECS yoluyla difüzyon yoluyla gerçekleşir. Bu alanın hacmi ve geometrisindeki değişiklikler, uyku gibi normal beyin süreçleri ve iskemi gibi patolojik koşullar sırasında ortaya çıkar. Bununla birlikte, özellikle hastalıklı ülkelerdeki beyin ECS&#39;sinin yapısı ve düzenlenmesi, büyük ölçüde keşfedilmemiş olarak kalmaktadır. RTI yöntemi canlı beyindeki iki fiziksel parametreyi ölçer: hacim fraksiyonu ve kıvırcıklık. Hacim fraksiyonu, ECS tarafından işgal edilen doku hacminin oranıdır. Kıvrımlanma, bir maddenin bir beyin yoluyla difüze ederken karşılaştığı göreli engelin bir ölçüsüdür.Engelsiz bir ortamla karşılaştırıldığında. RTI&#39;de, atıl bir molekül, bir kaynak mikro elektrottan beyin ECS&#39;ye palslanır. Moleküller bu kaynaktan uzaklaştıkça, iyonun değişen konsantrasyonu, yaklaşık olarak 100 um uzaklığa yerleştirilmiş bir iyon seçici mikroelektrod kullanarak zamana göre ölçülür. Elde edilen difüzyon eğrisinden hacim fraksiyonu ve kıvrımlılık hesaplanabilir. Bu teknik, birden fazla türün (insan dahil) beyin dilimlerinde ve in vivo olarak ECS&#39;de akut ve kronik değişiklikler üzerinde çalışılmıştır. Diğer yöntemlerin aksine, RTI, gerçek zamanlı olarak beyindeki ECS&#39;de geri döndürülebilir ve geri dönüşü olmayan değişiklikleri incelemek için kullanılabilir.

Rti tekniğin yardımcı a değişiklikleri ölçmek için tasarlanmış bir deneyde bir hypoosmolar cebine (Şekil 8 ve Şekil 9) sırasında gösterilmiştir. Daha önce, hipotonik ACSF ile yıkanarak ECS ozmolaritesini indirgeme a bir azalma ve A 13 bir artış üretecektir gösterilmiştir. Bu deneyde, RTI her iki kontrol koşulunda sıça...

Bu protokol, canlı beyinlerin hücre dışı alanının (ECS) fiziksel parametrelerini ölçen bir yöntem olan gerçek zamanlı iyontoforez&#39;i tanımlamaktadır. ECS hacim fraksiyonunu ve kıvırcıklığı hesaplamak için, ECS&#39;ye salınan atıl bir molekülün difüzyonu kullanılır. Beyindeki ECS&#39;de akut geri dönüşümlü değişikliklerin incelenmesi için idealdir.

Beyin Ekstraselüler Alanının Hacim Fraksiyonu ve Kıvrımını Nicelleştirmek için Tetrametilamonyum ile Gerçek Zamanlı İyontoforez

This review describes the basic concepts and protocol to perform the real-time iontophoresis (RTI) method, the gold-standard to explore and quantify the ...

Bu prosedürün genel amacı, beyin dokusundaki hücre dışı boşluğun hacim, fraksiyon ve kıvrımlılığını ölçmektir. Bu yöntem, hücre dışı boşluk ile fizyoloji ve hastalık arasındaki ilişkiye ilişkin temel soruları yanıtlar. Bu tekniğin temel avantajı, hücre dışı boşluğun iki önemli parametresinin gerçek zamanlı karakterizasyonuna izin vermesidir.Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler, iyontoforetik mikroelektrotun deneyler sırasında özelliklerini değiştirme eğilimi göstermesi ve deneyler sırasında sıklıkla sorun giderme gerektirmesi nedeniyle mücadele edecektir. Başarılı bir kayıt elde etmek için iyon seçici bir mikroelektrotun, bir iyontoforetik elektrotun birden fazla adımda hassas bir şekilde manipüle edilmesi gerektiğinden, bu yöntemin görsel gösterimi kritik öneme sahiptir. Bu işleme başlamak için, tetrametilamonyum veya TMA içeren ACSF'yi daldırma odasından dakikada iki mililitre hızla geçirin.Sıcaklık kontrol cihazını istenen bir sıcaklığa ayarlayın ve deney süresince ACSF'yi %95 oksijen, %5 karbondioksit ile köpürtün. Ardından, toprak elektrodunu bir tutucuya monte edin ve ucunu daldırma odasından geçen ACSF'ye daldırın. Daha sonra gözenekli kabı daha önce hazırlanmış %0.3 agaroz içeren TMA ile doldurun ve daldırma odasına yerleştirin.Şimdi, bir mikromanipülatörün pipet tutucusuna bir iyontoforez mikroelektrodu sabitleyin. İyontoforez mikroelektrot telini iyontoforez ünitesinin baş aşamasına bağlayın. Ardından, kalibre edilmiş bir ISM'yi ikinci mikromanipülatöre sabitleyin ve ISM'yi baş aşamalarına bağlayın.Daha sonra Wanda ve Walter programlarının bulunduğu bilgisayarı açın. Wanda GUI'de Kalibre Et'e tıklayın. Ardından, Kalibrasyon kutusunda, ISM kalibrasyonu sırasında ölçülen voltajları doldurun ve Verileri Sığdır'a tıklayın.Bunu takiben, tıklayın Kabul etmek içinde Kalibre et Oluşturulan eğimi ve paraziti otomatik olarak ana GUI'ye aktarmak için kutu. GUI'nin sol tarafında, tüm deneysel parametrelerin ilgili girişlerde ayarlandığından emin olun. Ardından, agar kabına bir sıcaklık probu yerleştirin.Ölçülen sıcaklığı, GUI'nin Ölçüm Elektrodu kutusundaki Sıcaklık girişine kaydedin. Ardından, mikroelektrotları agarozun en az 1.000 mikrometre derinliğine indirin ve kabın içinde ortalayın. 10X objektif kullanarak bunları mikroskop altında görselleştirin.İki kanallı amplifikatörde, referans ve ISM kanalları arasında çıkarmayı ayarlamak için ISM kanal konektörünü manuel olarak voltaj çıkarma çıkışına getirin. Uçları üç yönlü eksende de birbirinin üzerine ortalayın. Ardından, mikromanipülatör kontrol kutuları üzerindeki her iki mikroelektrotun göreceli konumlarını sıfırlayın ve mikroelektrotların doğru ve hassas bir şekilde ortalandığından emin olun.Ardından, ISM 120 mikrometreyi iyontoforez mikroelektrodundan bir eksende uzaklaştırın. Ardından, GUI'de Al'a tıklayarak bir kayıt başlatın ve programın tam bir kayıt için çalışmasına izin verin. Bu prosedürde, bilgisayarda Walter programını açın.Zero Records From (Şuradan Sıfır Kayıt) menüsünde, Wanda tarafından oluşturulan kayıtları okumak için Wanda Voltoro düğmesine tıklayın. Bir sonraki açılır pencerede, okunacak bir veya daha fazla kaydı seçin ve Aç'a tıklayın. One Write Excel menüsünde, Sayfa 1.3'e tıklayın ve kayıtların grafiği otomatik olarak çizilene kadar istemleri izleyin.Montaj prosedürüne başlamak için, İki Seçenek menüsünde, kayıt seç düğmesine tıklayın. Ardından, şekil iki açılır penceresinde, artı işaretlerini işlenecek ilk kaydın üzerine getirmek için fareyi kullanın ve kaydı seçmek için farenin herhangi bir düğmesine basın. Bundan sonra, menüdeki fit eğrisine tıklayın ve verilerin doğru bir şekilde oturmasını sağlamak için en az 20 uydurma yinelemesi kullanın.Ardından, tüm veri noktalarını sığdırmak için tümünü seçin ve devam'ı seçin. Program görüntülenen eğriye uyacaktır. Ardından, yedi sonuç menüsünde Excel'i tıklatarak sonucu uygun elektronik tablo programına yazma seçeneğini belirleyin.Excel dosyasına bir ad verin. İyontoforez mikroelektrodunun işlevselliğini belirlemek için kullanılacak olan üretilen verileri not edin ve kaydedin. İyontoforez mikroelektrodu deney için uygun görülürse, Wanda GUI'deki TransportNum uç alanındaki tüm denemelerden elde edilen ortalama taşıma sayısını kaydedin.Bu prosedürde, kayıt odasına 400 mikrometre kalınlığında bir beyin dilimi yerleştirin ve akan ACSF'ye tamamen daldırıldığından emin olun. Ardından, hem iyontoforez mikroelektrodunu hem de ISM'yi beyin dilimindeki ilgi alanının üzerine taşıyın. Her iki elektrotu da akan ACSF'ye, ancak dilimin üzerine daldırın.Ardından, hem referans hem de iyon algılama kanallarının voltajını sıfır milivolta ayarlayın. Her iki kanaldaki voltajın stabilize olmasını bekleyin. Grafik kaydedicide, ISM'nin iyon algılama kanalında ölçülen voltajı işaretleyin.Ardından, ISM ve iyontoforez mikroelektrotlarını dilimin 200 mikrometre derinliğine ve birbirinden 120 mikrometre uzağa yerleştirin. Akan ACSF'de ve beyinde ölçülen TMA sinyalleri arasındaki voltaj farkını hesaplayın ve bu değeri Wanda GUI'nin Ölçüm Elektrodu kutusundaki Temel Volt Milivolt alanına girin. GUI'nin sol tarafında, tüm deneysel parametrelerin doğru girildiğinden emin olun.Tıkla kaydı başlatın Satın almak ve tam bir kayıt almasına izin verin. Her iki mikroelektrotu da dilimden çıkardıktan sonra, şimdi ölçülen voltaj ile önceki ölçümü arasındaki herhangi bir değişikliği belirlemek için grafik kaydediciyi kullanın. Beyinden gelen kayıtları analiz etmek için, Walter programını kullanarak agaroz veri analizi prosedürlerini tekrarlayın.Walter menüsünde Excel'i tıklatarak verileri elektronik tablo programına yazın. Ardından, beyin ECS'sinin hacim fraksiyonunu, beyin ECS'sinin kıvrımlılığını ve spesifik olmayan boşluğu kaydedin. Taşıma numarasını kontrol etmek için agarozda yeni kayıtlar alın ve taşıma numarasını almak için Walter programındaki prosedürleri tekrarlayın.Elektronik tabloyu inceleyin ve taşıma numarasının, beyin ölçümlerinden önce elde edilen taşıma numarasından %10'dan fazla değişip değişmediğini kontrol edin. Eğer öyleyse, iyontoforetik mikroelektrot ile elde edilen veriler güvenilir değildir. Bu adımda ölçülen taşıma numarası, beyin ölçümlerinden önce elde edilenle yakından eşleşmelidir, aksi takdirde hacim fraksiyonu doğru olarak kabul edilemez.Wanda Kalibrasyonu kutusunda girdi olarak yeni elde edilen ISM kalibrasyon verilerini kullanın ve eğim değerinin önceki kalibrasyondan %10'dan daha az farklı olup olmadığını kontrol edin. Burada gösterilen, agarda elde edilen ve TMA'nın konsantrasyon eğrisini gösteren tek bir denemeden elde edilen temsili verilerdir. Ve bu, Walter'daki veri işlemeden elde edilen uygun bir eğridir.Takılan eğrideki verilerin örtüşmesi, Walter tarafından yapılan eğri uydurmanın bu denemede difüzyonu doğru bir şekilde modellediğini göstermektedir. İşte beyinde deney yapmadan önce agar ölçümlerinin tablosu. İşte kontrol ve deneysel koşullar altında bir fare beyin diliminde alınan ölçümlerin bir özeti.Hipoosmolar bir zorluk sırasında alfa azalırken, kıvrımlılık beklendiği gibi arttı. Alfa, geri kazanım koşullarında kontrol değerlerini aştı. Ve işte beyinde yapılan deneylerden sonra yapılan agra ölçümlerinin tablosu.Deneyden önceki ve sonraki ortalama taşıma sayıları birbirlerinin %10'u içindeydi ve bu da beyinde kaydedilen değerlerin güvenilir olduğunu gösteriyordu. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu prosedür iki gün boyunca 14 saat içinde gerçekleştirilebilir. Birinci gün, BGY'ler üretilir ve kalibre edilir.İkinci günde, ISM'ler yeniden kalibre edilir ve gerçek zamanlı iyontoforez gerçekleştirilir. Bu prosedürü denerken, öncelikle elektrotlarınızın aralıklarında kesin olmak önemlidir. İkinci olarak, bir deneyi yalnızca iyontoforetik mikroelektrotun taşıma sayısı deney boyunca sabit kalırsa kabul etmek önemlidir.Hücre dışı boşlukta küçük katyonların difüzyonunu karakterize eden bu prosedürü takiben, hücre dışı boşlukta büyük mikromoleküllerin nasıl hareket ettiği sorusuna cevap vermenizi sağlayan bütünleştirici optik görüntüleme yöntemi gibi diğer teknikleri uygulamaya devam edebilirsiniz. Bu videoyu izledikten sonra, sağlık ve hastalıkta canlı beyinde beyin hücre dışı boşluk hacmini ve kıvrımlılığını ölçmek için gerçek zamanlı iyontoforez yönteminin nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız. İzlediğiniz için teşekkür ederiz ve deneylerinizde iyi şanslar.

real-time-iontophoresis-with-tetramethylammonium-to-quantify-volume

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Video, fare koronal hipokampal beyin dilimlerinin elektriksel stimülasyonu üzerinde uyarılmış potasyum iyonu konsantrasyon dinamiklerini göstermektedir. Hipokampustaki CA3 bölgesinin stratum radiatumuna bir bipolar uyarıcı elektrot yerleştirilir ve CA1 stratum radiatumuna bir potasyum iyonu seçici elektrot yerleştirilir. Elektriksel stimülasyon, potasyum iyonu salınımına neden olan bir aksiyon potansiyeline neden olur. Son olarak, bir inhibitör molekülün varlığında uyarılmış potasyum iyonu...

Koronal Hipokampal Dilimlerde Uyarılmış Potasyum İyonu Konsantrasyon Dinamiğinin Ölçümü

Bu video, elektrik sinyallerini ölçmek ve karşılaştırmak için iyon seçici ve iyontoforez mikroelektrotları kullanarak bir beyin dilimindeki hücre dışı boşluğun nasıl karakterize edileceğini gösterir. Bu işlem, boşluğun hacim fraksiyonunu ve bükülme derecesini belirlemeye yardımcı olur.

İyon Seçici ve İyontoforez Mikroelektrotları Kullanılarak Bir Beyin Dilimindeki Hücre Dışı Boşluğun Karakterize Edilmesi

Kaynak: Moye, S. L., et.al.  Lucifer Sarı İyontoforezi Kullanarak Astrosit Morfolojisinin Görselleştirilmesi. J. Vis. Uzm.  (2019).  Bu video, sabit beyin dilimlerinde astrosit morfolojisini incelemek için floresan boya iyontoforezinin kullanımını göstermektedir. Düşük voltajlı bir akım altında sitoplazmaya anyonik, hidrofilik bir boya vermek için astrosit soma'nın bir elektrotla delinmesini detaylandırır, bu da boyanın soma ve dalları yaymasını ve etiketlemesini sağlar. Konfokal mikroskopi...

Sabit Bir Fare Beyin Diliminde Floresan Boya İyontoforezi Kullanılarak Astrosit Morfolojisinin Görselleştirilmesi

Bu yazıda yüksek uzaysal ve zamansal hassasiyetle postsinaptik sinyal entegrasyonu araştırmak için bir teknik olarak nörotransmitterlerin hızlı mikro-iyontoforez tanıtmak.

Glutamat ve GABA hızlı Micro-iyontoforez: Synaptic Entegrasyon Araştırma yararlı bir araç

Beyin dokusundaki iyon konsantrasyonlarının ölçümü için iki tip iyon seçici mikroelektrotun (çift namlulu ve eş merkezli) üretimini, kalibrasyonunu ve özelliklerini gösteriyoruz. Bunlar daha sonra uyarıcı aktivitenin hem hücre dışı potasyum hem de sodyum konsantrasyonlarını değiştirdiğini göstermek için fare hipokampal dilim hazırlığında kullanılır.

Beyin Dokusu Ölçme Ekstraselüler Ion Sinyalleri için Çift namlulu ve Konsantrik Mikroelektronlar

Uyanık farelerde hücre dışı nöral aktiviteyi aynı anda kaydetmek ve kayıt bölgelerinin yakınında birden fazla nöroaktif madde salmak için elektrotların yapımı için yöntemler sunuyoruz. Bu teknik, ilgilenilen nörona varsayılan yerel sinaptik girdilerin ayrıntılı analizine izin verir.

Uyanık Farelerde Nöroaktif Maddelerin Microiontophoretic Uygulaması ile birlikte Nöronal Faaliyet dışı Kaydı

Burada, in vivo microdialysis EEG kayıtları ile birlikte epileptik ve sigara-epileptik sıçan ventral hipokampus glutamat ve aspartat sürümde analiz etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Ekstraselüler glutamat ve aspartat konsantrasyonu hastalık farklı aşamalarında ile ilişkili.

Microdialysis fareler serbestçe hareket EEG kayıtları sırasında eksitatör Amino asit

Bu makalede küçük hayvan beyin mikro-CT görüntüleme, hangi lezyonlar sayılabilir ve tüm beyin bağlamında yüksek hassasiyetle yer alan elektrotlar hazırlamak için basit bir yöntem.

Lezyonlar karakterize ve küçük hayvan beyinlerinde elektrot bulmak için bir mikro-CT-esaslı Yöntem

Astrositler morfolojik olarak karmaşık hücrelerdir, çoklu süreçleri ve gür bölgeleri ile örneklenirler. Ayrıntılı morfolojilerini analiz etmek için, hafifçe sabit dokuda hücre içi Lucifer sarı iontoforezi gerçekleştirmek için güvenilir bir protokol salıyoruz.

Lucifer Sarı İontoforez kullanarak Astrosit Morfolojisini Görselleştirme

Bu protokol, kan-beyin bariyer geçirgenliğini artırmak için odaklanmış ultrason ve mikrobubble tedavileri sırasında kemirgen beyninin gerçek zamanlı in vivo multifoton floresan görüntülemesini sağlayan cerrahi ve teknik prosedürleri açıklar.

Kan-Beyin Bariyer Geçirgenliğini Artırmak için Odaklanmış Ultrason ve Mikrobubble Tedavilerini Görselleştirmek için Gerçek Zamanlı Intravital Multifotoğraf Mikroskopisi

Beyin elektriksel alan ölçümleri ve ilgili bir biyobelirteç-serebral kan akışı açısından ekstrakraniyal stimülasyon için doz-yanıt eğrilerini değerlendirmek için bir protokol tanımladık. Bu protokol beyne invaziv elektrot yerleştirilmesini içerdiğinden, kontrollü solunum yerine spontan solunum tercih edilerek genel anestezi gerekir.

Anestezi Uygulanmış Farelerde Ekstrakraniyal Uyarıcı Elektrotların Yerleştirilmesi ve Serebral Kan Akımı ve İntrakraniyal Elektrik Alanlarının Ölçülmesi

Öğrenin beyin ekstraselüler alanının hacim fraksiyonu ve kıvrımını tetrametilamonyum ile gerçek zamanlı iyontoforez kullanarak nasıl nicelleştirilir. Bu yöntem, beyin fizyolojisi ve hastalıklarındaki dinamik değişiklikleri anlamak için araştırmacılara değerli bilgiler sunar.

Beyin Ekstraselüler Alanının Hacim Fraksiyonu ve Kıvrımını Nicelleştirmek için Tetrametilamonyum ile Gerçek Zamanlı İyontoforez

Daha fazla video keşfet