Allojeneik trombosit açısından zengin plazma (PRP) kesitli Aşil tendon sıçan iyileşme süreci üzerine etkileri: metodolojik bir açıklama

Bu prosedürün genel amacı, tek bir Trombositten Zengin Plazma veya PRP enjeksiyonunun, çeşitli zaman noktalarında cerrahi olarak kesilmiş sıçan Aşil tendonlarının direnci ve iyileşme süreci üzerindeki etkilerini gözlemlemektir. Bu yöntem, tendon lezyonları hakkında kas-iskelet sistemi alanındaki hızlı soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, cerrahi, biyomekanik ve PRP ilerleme prosedürlerinin iyi standardize edilmiş olmasıdır.

Bu tekniklerin etkileri, insanlarda PRP kullanımına kadar uzanır, çünkü bu tür lezyonlar ve tendon iyileşme süreci sıçanlar ve insanlar arasında benzerdir. Bu yöntem kas-iskelet sistemi yaralanmaları için PRP hazırlığı hakkında fikir verebilse de, bu enjeksiyon tekniği kalp veya cilt hastalığı gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Yöntemin görsel olarak gösterilmesi çok önemlidir, çünkü cerrahi ve biyomekanik adımlar, optimal sonuçlar elde etmek için tutarlı bir tekrarlanabilirlik gerektirir.

Fareyi tartarak ve kulaklarını etiketleyerek başlayın. Ayak parmağınızı sıkıştırarak uygun sedasyon seviyesini onayladıktan sonra, hayvanın kornealarına su damlaları uygulayın ve kılları sol arka bacaktan çıkarın. Maruz kalan cildi bir ila 10 seyreltme izo-Betadin çözeltisi ile dezenfekte edin ve hayvanı, sol arka bacak üstün pozisyonda olacak şekilde, lateral dekübit pozisyonunda bir diseksiyon mikroskobu altında 20 derecelik bir ısıtma yastığına yerleştirin.

Sol arka bacak pençesini forseps ile kavrayın ve Aşil tendonu çevresinde 20 ila 25 milimetre yanal deri kesisi yapın. İnce makas kullanarak, Aşil tendon kompleksini ortaya çıkarmak için fasyayı inceleyin ve plantaris tendonunu çıkarın. Aşil tendonunu enlemesine kesin, kalkaneal girişine beş milimetre proksimaldir ve beş milimetre uzunluğunda bir kısmı çıkarın.

Daha sonra emilebilir iplik kullanın ve fasyayı ve cildi kapatmak için dikişlerle devam edin ve fareyi tam iyileşme olana kadar izleme ile bir ısı kaynağının altına yerleştirin. Alıcı hayvanlar iyileşirken, deney hayvanı başına bir donör sıçan kalbinden 20 mililitre tam kanı% 3.2 tamponlu sodyum sitrat içeren ayrı tüplere toplayın. Trombositten zengin plazmayı elde etmek için, kanı santrifüjleyin ve üst PRP içeren fazı ikinci bir plastik tüpe dikkatlice çıkarmak için plastik bir transfer pipeti kullanın.

Toplanan PRP'nin hacmini belirleyin ve bir hematoloji analizöründe trombosit sayısını ölçün. PRP'yi tekrar santrifüjleyin ve süpernatanı dikkatlice yeni bir plastik tüpe aktarın. PRP tüpünde kalan hacim, mikrolitre başına 10 ila altıncı trombositlerin 2,5 katı elde etmek için gereken hacmin yaklaşık 2 / 3'ü kadar olmalıdır.

Ardından, trombosit peletini pipetleme ile nazikçe yeniden askıya alın. Bu konsantre trombositten zengin plazmanın trombosit sayısını ölçün ve gerektiği gibi hedef konsantrasyona ulaşmak için uygun hacimde otolog trombositten fakir plazmayı geri ekleyin. Trombositleri mililitre PRP'ye 50 mikrolitre kalsiyum klorür ile oda sıcaklığında yaklaşık bir saat boyunca aktive edin.

Daha sonra trombositleri 21 gauge iğne ile donatılmış bir mililitrelik bir şırıngaya yükleyin ve 50 mikrolitre trombositleri doğrudan her hayvanın dikiş bölgesine enjekte edin. Uygun deney bitiş noktasında, anestezi uygulanmış deney hayvanının sol arka bacakını tıraş edin ve fareyi az önce gösterildiği gibi bir diseksiyon mikroskobu altında konumlandırın. Pençeyi parmaklarınızla tutarak, triceps suralis'i ortaya çıkarmak için cerrahi bölgede 10 milimetrelik bir kesi yapın.

Aşil tendonunu çıkarmak için, kalkaneal kemiği enlemesine kesin, ekinin beş ila 10 milimetre distalinde kesin ve kriyo-çeneye sığacak kadar büyük bir triceps suralis parçasını inceleyin. Numuneyi hemen kriyo çenesinin üst çenesine yerleştirmek için forseps kullanın ve cihazı kapatın. Kriyo-çeneyi dikey olarak evrensel bir test makinesine yerleştirin ve kalkaneal kemiği alt kelepçeler arasına sabitleyin.

Kesit alanını hesaplamak için kameraları birbirine dik olarak yerleştirin. Kasları tendondan daha sert bir büyüklük sırasına kadar dondurmak için her iki üst çene havzasına sıvı nitrojen ekleyin, böylece çekme testi sırasında deforme olmaz. Donma bölgesi metal kelepçe sınırına ulaştığında, makinenin yer değiştirme hızını kopana kadar saniyede bir milimetre sabit bir hızda ayarlayın ve nihai çekme mukavemetini Newton cinsinden kaydetmek için bir bilgisayar kullanarak çekme testine başlayın.

İyileşen tendonların kesit alanlarındaki farklılıkları hesaba katmak için, nihai gerilme mukavemetini, doku tarafından yaşanan mekanik stresi temsil eden bir birim alana normalleştirin. Daha sonra tendon yırtıldığında, yırtılmış tendon örneklerini sıvı nitrojen içinde dondurun ve RNA ekstraksiyonu ve RTPCR analizine kadar eksi 80 santigrat derecede saklayın. Bu temsili deneyde, PRP enjekte edilen grupta tendon yırtılmasını indüklemek için, test edilen her zaman noktasında kontrol salin ile tedavi edilen gruba göre daha büyük bir kuvvet gerekliydi, bu da PRP ile tedavi edilen hayvanlarda daha sağlam bir iyileşme süreci veya daha iyi mekanik özellikler olduğunu düşündürdü.

PRP grubu, salin grubuna göre daha yüksek bir grup içi dağılım göstermesine rağmen, lezyon indüksiyonundan 15. ve 30. günlerde PRP enjekte edilen grupta tendonların kesit alanının daha büyük olduğu belirlendi. Ayrıca, Masson'un trikrom boyaması, PRP ile tedavi edilen hayvanlarda beşinci ve 15. günlerde tendon morfolojisi ve gücünde önemli bir bileşen olan fibriller kollajen varlığının daha yüksek olduğunu ortaya çıkardı ve enjeksiyondan 30. gün sonra her iki grupta da benzer bir boyama yoğunluğu gözlendi. Bu videoyu izledikten sonra, bir sıçan standart lezyonunun nasıl indükleneceğini iyi anlamalı ve bir PRP enjeksiyonundan sonra iyileşme süreçlerini değerlendirmek için tendonu örneklemelisiniz.