Mukozal astar sıvı noninvaziv örnekleme için In Vivo üst solunum yolu bağışıklık arabulucu düzeyleri miktar

Bu mukozal astar sıvısı örnekleme yönteminin genel amacı, stimülasyon prosedürlerine ihtiyaç duymadan hava yolunun lokal immün imzasını incelemektir. Bu yöntem, enfeksiyonlar, astım ve alerji gibi pediatrik solunum yolu hastalıkları alanındaki temel soruları incelemenizi sağlar. Yöntemin avantajları, uyarılmamış hava yolu mukozasında in vivo olarak çok düşük seviyelerde bağışıklık aracılarını ölçebilmenizdir.

Prosedürün gösterilmesi Dr.Wolsk tarafından yapılacaktır. Yenidoğan numunesi toplamak için, önce lifli hidroksillenmiş polyester filtre tabakalarından en az iki üç x 15 milimetre şerit kesin. Daha sonra, yenidoğanı bir yatağa yerleştirin ve hava yolu enfeksiyonu belirtilerini not edin.

Daha sonra, bebeğin her bir burun deliğinin alt konkasının ön kısmına yaklaşık bir santimetre uzunluğunda bir parça filtre kağıdı yerleştirmek için forseps kullanın ve gerektiğinde rahatlık için yenidoğana şekerli su verin. Örnekleme döneminde meydana gelen herhangi bir hapşırma, kalıcı ağlama veya burun kanamasını not edin. İki dakikalık emilimden sonra, filtre kağıtlarını eksi 80 santigrat derecede hemen saklamak için etiketli bir tüpe aktarın.

Deneysel prosedürü göstermek, laboratuvarımda bir teknisyen olan Lisbeth Rosholm olacak. Hava yolu immün aracısı miktar tayini için, negatif 80 santigrat derece depodan 10 adede kadar numuneyi buz üzerine yerleştirin ve kimlik numaralarını kaydedin. Numuneler çözüldüğünde, her denek için her iki filtre kağıdını da filtre kağıdı başına 150 mikrolitre taze hazırlanmış tampona daldırın ve 25 mililitre tampon stok çözeltisi başına bir tam proteaz inhibitör tableti ile desteklenedin.

Numuneleri beş dakika boyunca 400 rpm'de bir plaka çalkalayıcıya aktarın. Tamponu ve filtre kağıtlarını ayrı ayrı selüloz asetat tüp filtrelerin kaplarına aktarın. Mikrosantrifüj tüplerinin altındaki filtrelenmiş burun ekstraktını toplamak için numuneleri santrifüjleyin.

Ardından bardakları çıkarın ve tüpleri buzun üzerine yerleştirin. Daha sonra, burun ekstraktının 150 mikrolitrelik alikotlarını düşük proteinli bağlayıcı saklama plakalarının ayrı ayrı kuyucuklarına aktarın ve plakaları analize kadar eksi 80 santigrat derecede saklayın. Daha sonra, standart tahlil protokollerine göre yüksek hassasiyetli elektrokemilüminesans tabanlı çoğullanmış bir dizi ile ilgilenilen nazal immün mediyatörlerin konsantrasyonunu ölçün.

620 yenidoğanın bu temsili analizinde, ölçülen immün mediatörlerin çoğu düşük bir tespit seviyesi göstermiştir. IFN gama seviyeleri, örneklerin neredeyse yarısında alt tespit sınırının altındayken, TNF alfa, CCL4 ve TGF beta seviyeleri, örneklerin% 1'inden daha azında alt tespit sınırının altındaydı. Isı haritasında gösterildiği gibi, tespit edilen 20 arabulucu seviyesi için güçlü bir çoklu doğrusallık belirgindi.

Asemptomatik picornavirüs ile enfekte yenidoğanlarda, esas olarak tip 1 immün mediatörlerden ödün veren yukarı regüle bir profil gözlenmiştir, bu da yaşamın en erken döneminde kolonize bakteri ve virüslerin immün tetikleyici rolünü düşündürmektedir. Doğumda hanedeki kardeşlerin varlığı ile spesifik bir Tip 1 Tip 17 yönlendirilmiş mukozal immün yanıt arasında bir ilişki de tespit edildi ve bu fenomenin son doğumdan bu yana geçen süre ile ters orantılı olan bir in utero immün hazırlama etkisi ile korelasyonu için kanıtlarla birlikte belirlendi. Ek olarak, yüksek ve plasebo takviyesi alan annelerden doğan çocuklar, spesifik bağışıklık aracılarında bir yukarı regülasyon ile karakterize edildi, bu da D vitamininin virüs, bakteri, kardeşler veya anne atopisi tarafından indüklenenden bağımsız bir antibakteriyel bağışıklık tepkisini desteklediğini düşündürdü.

Bu mikroörnekleme yöntemi, alt solunum yollarındaki bağışıklık aracılarının incelenmesine izin veren bir bronkoskop aracılığıyla da kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, yenidoğanlarda ve daha büyük çocuklarda in vivo olarak uyarılmamış hava yolu mukozasındaki mediatörlerin nasıl ölçüleceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.