Grip özgü antikor titreleri ölçmek için bir en iyi duruma getirilmiş hemaglütinasyon inhibisyon (hı) tahlil

Bu hemaglutinasyon inhibisyon testinin genel amacı, ilgilenilen spesifik virüslere karşı antikor titrelerini ölçmektir. Bu yöntem, aşı bilimi alanında, farklı popülasyonlarda ve çeşitli yaş ve hasta gruplarında aşı aracılı bağışıklık ve koruma ile ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajları, doğru olması ve nötralize edici antikorların varlığının hızlı titre belirlenmesine izin vermesidir.

Bu yöntem insan antikor titreleri hakkında bilgi sağlayabilse de, fare serumu için antikor titreleri, ayrıca kültür süpernatanları gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. 96 kuyulu mikrotitre plakasını uygun deneysel bilgilerle etiketleyerek başlayın. Ardından plakayı dikey yönde çevirin ve çok kanallı bir pipet kullanarak alt arka titrasyon sırasının ilk oyuğu hariç her oyuğa 25 mikrolitre PBS ekleyin.

Arka titrasyon sırasının ilk oyuğuna 50 mikrolitre taze hazırlanmış ilgilenilen antijen çözeltisi ekleyin, ardından ilk on sıranın ilk oyuklarına 25 mikrolitre RDE ile muamele edilmiş serum numunesi ilave edin. Pozitif kontrol olarak 11. sıranın ilk kuyucuğuna 25 mikrolitre uygun antiserum ekleyin. Seri, iki katlı seyreltmeler gerçekleştirmek için her sıranın ilk kuyusundan 25 mikrolitreyi ardışık kuyucuklarına aktarır.

Her seyreltme adımı için 10 ila 15 kez yukarı ve aşağı pipetleyin, son 25 mikrolitreyi son kuyucuklardan atın. Daha sonra, bir ila 11 arasındaki sıraların her bir oyuğuna 25 mikrolitre antijen çözeltisi ve sadece arka titrasyon sırasının her bir oyuğuna 25 mikrolitre PBS ekleyin. Karıştırmak için plakayı dört tarafına da dikkatlice 10 kez vurun.

Ardından plakayı oda sıcaklığında 30 dakika örtün. Kuluçka süresinin sonunda, her bir oyuğa 50 mikrolitre kırmızı kan hücresi çözeltisi ekleyin ve plakayı daha fazla dokunarak karıştırın. Daha sonra plakayı tekrar örtün ve kırmızı kan hücrelerini tabloda belirtildiği gibi kullanılan türlere göre inkübe edin.

Kırmızı kan hücrelerini plakaya ekledikten sonra, tahlilde kullanılan kan türü için uygun inkübasyon süresine uyun. Çok kısa veya çok uzun bir inkübasyon, sonuçların yanlış yorumlanmasına yol açacaktır. İnkübasyonun sonunda, plakayı 25 saniye boyunca 90 derece eğerek hemaglutinasyonu değerlendirin ve plaka hala eğikken, 96 oyuklu plakanın basılı bir şemasında her bir kuyucuk için sonuçları işaretleyin.

Bu deneyde, aşının neden olduğu antikor tepkisi, 24 2015 grip sezonundan önce influenza A / H1N1 / California / 2009, A / H3N2 / Texas / 2012 ve B / Massachusetts / O2 / 2012 içeren inaktive edilmiş, üç değerlikli bir grip aşısı alan 2012 sağlıklı gönüllüde değerlendirildi. A / H3N2 / İsviçre / 2013 ve A / H3N2 / Texas / 2012 virüs suşları için çapraz reaktif bir bağışıklık tepkisi gözlendi, önemli ölçüde daha düşük geometrik ortalama hemaglutinasyon inhibisyon titreleri ve influenza A / H3N2 / İsviçre / 2013'e karşı indüklenmiş seroproteksiyon ile influenza A / H3N2 / Texas / 2012 ile karşılaştırıldığında. Aşılamadan sonra, A / H3N2 / İsviçre / 2013 suşu aşıda bulunmamasına rağmen, her iki suşa karşı antikor titreleri arttı.

Viral hemaglutinin, eritrosit hemaglutinasyonu için türe bağlı bir potansiyel gösterir. İlgi çekici olan, kobay kanı influenza B ile düzgün bir şekilde hemaglutinasyon yapmaz ve hindi kanı, yüksek titreler ve düşük çapraz reaktivite ile hemaglutinasyon potansiyeline sahiptir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde uygulanırsa üç saat içinde tamamlanabilir.

Bu prosedürü denerken, virüsün hemaglutinasyonu sırasında spesifik olmayan inhibitörleri ve spesifik olmayan bağlanmayı inaktive etmek için RDE ile serum kullanmayı unutmamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, bireysel patojene özgü immünoglobulinlerin rolü hakkında ek soruları yanıtlamak için ELISA gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Geliştirilmesinden sonra bu teknik, viral immünoloji alanındaki araştırmacıların, farklı yaş gruplarındaki sağlıklı ve bağışıklığı baskılanmış hastalarda aşı ile ilişkili bağışıklığı daha iyi anlamamızın yolunu açtı.

Bu videoyu izledikten sonra, influenza suşuna özgü antikor titrelerini büyük ölçekte ölçmek için bir hemaglutinasyon inhibisyon testinin nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız. Viral antijenler, hayvan kanı ve insan serum örnekleri ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman bir BSL2 laboratuvarında çalışmak gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.