Name: Deterjan çözünmez Protein toplamları--dan insan öldükten sonra beyin zenginleştirme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-24T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Öğrenin, insan ölüm sonrası beyin dokusundan deterjan çözünmez protein toplamlarını zenginleştirme yöntemini. Bu teknik, nörodejeneratif hastalıklarda hatalı katlanmış proteinleri hızla izole ederek araştırmacılara değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Drs. Jim Lah ve Allan Levey, Emory sevgi Nöroloji, yazarlar yararlı yorumlar ve öneriler için teşekkür ederiz. Bu eser kısmen finanse edildi hızlanan tıp ortaklık tarafından (U01AG046161-02), Emory Alzheimer'ın hastalığı Araştırma Merkezi (P50AG025688) ve yaşlanma Ulusal Enstitüsü (R01AG053960-01) N.T.S. için erişim izni verme Bu araştırma da kısmen Emory nörolojik NINDS çekirdek İmkanları grant, P30NS055077 nevropatoloji çekirdeği tarafından desteklenmiştir.

etik beyanı: tüm beyin dokuları Emory Alzheimer elde edilmiştir &#39; s hastalığı Araştırma Merkezi (ADRC) beyin banka. İnsan öldükten sonra dokular uygun kurumsal inceleme Kurulu (IRB) protokolleri altında elde.
 1. homojenizasyon ve ayırma <ol><li>doku seçim Not: ölüm sonrası frontal korteks doku sağlıklı kontrol (Ctl) ve patolojik olarak dondurulmuş teyit edilen reklam durumlarda Emory seçildi ADRC beyin banka (n = 2). Alzheimer için bir kayıt defteri kurmak için konsorsiyum göre gerçekleştirilen amiloid plak dağıtım öldükten sonra neuropathological değerlendirilmesi yapıldı. &#39; s hastalığı yarı nicel ölçüt 24, her ne kadar puanlama neurofibrillary dolaştırmak patoloji Braak hazırlama sistemine uygun olarak değerlendirildi. Ölüm sonrası beyin dokusunun sağlıklı kontrol (Ctl) ve patolojik olarak dondurulmuş 16 <ol><li>elde edilir reklam durumlarda doğruladı. Kuru buz, forseps ve jilet konteyner kullanmak, tüketim ~ 250 mg bölümlerini tek kullanımlık şeytan üzerinde her doku örneği üzerinden gri cevherde tartmak tekneler, doku çözdürme gelen önlemek için dikkat çekici. Homojen için her parçası ağırlığı kaydetmek.</li>
		<li>Tüketim ~ gri cevherde forseps ve jilet görsel olarak inceleyerek dış gri madde ve iç beyaz madde arasındaki arabirimi bulmak için kullanarak 250 mg. Beyaz madde ve daha da önemlisi, herhangi bir kaçının büyük kan damarları veya kanlı bölgeler, zarları veya araknoid mater. Hızlı bir şekilde çalışıyor ve sık sık tartı sandala polistren kapları kuru buz ile beyin dokusu ile yerleştirerek kesme işlemi sırasında dondurulmuş doku devam</li>
		<li>Gri madde bir analitik denge kullanarak her dondurulmuş parça eksize tam ağırlığı kaydetmek. Düşük tuz (LS) arabellek hacmi hesaplamak dounce homojenizasyon (5 mL/g veya % 20 w/v) için gerekli (bkz. Tablo 1).</li>
		<li>Hazırlamak 10 mL LS arabellek fosfataz ve proteaz inhibitörü kokteyl ve buz üzerinde sakin x 1</li>
		Bu Tammy'nin gibi <li>tartılır doku ve tartı tekne kuru buz ve kabaca 2 x 2 mm parçalar halinde zar çıkarın. 2 mL önceden soğutulmuş dounce homogenizer Tube transferinde buz</li>
		<li>5 mL/g (% 20 w/v) 1 X fosfataz ve proteaz inhibitörü kokteyl ile buz gibi düşük tuz (LS) tampon ekleyin.</li>
		<li>Homogenize beyin dokusu yüksek izni havaneli A ve düşük giriş izni havaneli d. 15 vuruş yaklaşık 10 vuruş kullanarak buz üstünde</li>
		<li>Tüm homogenate bir cam Pasteur pipet kullanarak 2 mL polipropilen boru için transfer. Tüp ile etiket &#8220; TH &#8221; (Toplam Homogenate), doku olgu sayısı ve homogenate cilt. Aliquot 0.8 mL etiketli 1,5 mL tüp içine. Herhangi bir aşırı homogenate benzer şekilde bölünmemeli ve-80 adlı saklı olabilir ° C.</li>
		<li>Aliquot her 0.8 mL için 5 M NaCl ve % 10 (w/v) sarkosyl her 100 µL 0,5 M ve % 1 w/v, konsantrasyonları sırasıyla ekleyin. Mix tüpler de INVERSION tarafından ve 15 dk. etiket tüpleri ile buz üzerinde kuluçkaya &#34; TH-S &#34; (Toplam Homogenate-homogenates sarkosyl-arabellekte (Tablo 1) olduğunu belirtmek için Sarkosyl).</li>
		<li>Her tüpün üç 5 s bakliyat, buz üzerinde % 30 genlik için solüsyon içeren temizleyicide (maksimum yoğunluk % 40 =) microtip sonda kullanarak</li> <li>bicinchoninic asit (BCA) kullanarak homogenates protein konsantrasyonları tahlil 25 belirlemek yöntemi. 
		Not: 15-20 mg/mL 5 mL LS doku gram başına hazırlanmış TH-S homogenates ortalama protein konsantrasyonu olduğunu. Hemen şeker veya-80 ° C'de kadar kullanmak saklı homogenates.</li>
		<li>10 mg/ml 1 x fosfataz ve proteaz inhibitörleri ile buz gibi sark tampon (Tablo 1) kullanarak seyreltik TH-S homogenates.</li>
		Her TH-S homogenate 500 µL polikarbonat ultracentrifuge tüpler ve Sark'ın arabellek ile çift-denge <li>transfer 5 mg protein (0.5 mL). Yük tüpler içine önceden soğutulmuş rotor ve 180.000 x g 1.5 mL tüpler için 4 ° C. Transfer sarkosyl çözünür supernatants (S1), 30 dk için de ultracentrifuge ve saklamak-80 ° C. 
		Not: (İsteğe bağlı yıkama) eklemek 200 µL sark-arabelleği ultracentrifuge için tüpler deterjan çözünmez kesirler (P1) içeren ve granül (P1) 200 µL pipet ucu kullanarak ultracentrifuge tüpler altından çıkarmak.</li>
		<li>Kısaca nabız-spin ters tüpler için 2-3 s (&#8804; 2500 x g) üzerinde 1,5 mL tüpler aşağıdaki granül (P1) ve arabellek aktarmak için bir microcentrifuge. Pelet bozulur sağlamak için yukarı ve aşağı pipetting tarafından sark arabellekte çözünmez granül (P1) resuspend.</li>
		<li>Çift-denge ve 180.000 x g, santrifüj için ek bir 30 dk 4 ° C.</li>
		<li>İsteğe bağlı yıkama süpernatant (S2) atmak ve sarkosyl çözünmez granül (P2) 50-75 µL üre arabelleği (Tablo 1) 1 ile kuluçkaya x solubilize için oda sıcaklığında 30 dk (proteaz ve fosfataz inhibitörü kokteyl) PIC Pelet. 
		Not: Sıcak üre arabelleğe oda sıcaklığında SDS yağış önlemek için kullanmadan önce. Deterjan duyarlı uygulamalar için üre arabelleğinden SDS atlarsanız, çözünmez Pelet (P2) yıkama düşük tuz arabellekte üre arabellekte resuspending önce düşünün.</li>
		<li>Resuspended granül (P2) 0.5 mL tüpler için transfer edecek ve kısa (1 s) microtip sonication % 20 genlik, (maksimum yoğunluk = % 40) tam granül solubilize için.</li>
		<li>Sarkosyl çözünür (S1) protein konsantrasyonları belirlemek ve - BCA kullanarak çözünmez (P2) kesirler yöntemini tahlil. Bu kesirler hemen kullanmayın veya saklamayın-80 ° C'de kadar kullanmak.</li>
	</ol></li></ol> 2. Immunoblotting <ol><li>Western Blot Not: Western Blot gerçekleştirilen hafif değişiklikler ile daha önce raporlanmış yordamlara göre belirleme yapılacağı. 5 , 10 <ol><li>Toplam homogenates (TH-S), sark çözünür (S1) ve sark çözünmez (P2) kesirler 1 X Laemmli SDS-sayfa örnek arabelleği 5 mM TCEP pH 7 ile hazırlamak 40 µg örnekleri. Örnekleri 5 dakika süreyle 95 ° C'de kuluçkaya</li>
		<li>Yük örnekleri bir prekast 10-iyi 4-%12 Bis-Tris SDS-sayfa jel. 80 V için ilk santimetre (10 dakika) ve 120 V kalanı (60 dk) için veya izleme boya jel sonuna ulaşana kadar electrophorese.</li>
		<li>Split-önceden döküm jel kaset açık için bir taze jilet ve jel bıçak kullanın. Yavaşça Kes gitsin tarak ve taze bir tıraş bıçağı ile jel çok altında.</li>
		<li>200 µl sark-tampon PIC pipetting tarafından yukarı ve aşağı 1 x ile çözünmez granül (P1) resuspend.</li>
		<li>Transfer blotting bir makinede bir kuru aktarım yöntemini kullanarak bir 0.2 µm nitroselüloz membran için (malzeme tabloya bakın).</li>
		<li>Blok BB ile %0,05 ile takip membran engelleme arabelleği (BB) olmadan ara 20 için 30 dk, 30 dk için ara 20 (BB/T). Engelleme sonra durulama zar TBS/t (% 0,1 ara 20) aşırı engelleme arabellek kaldırmak 5 min için.</li>
		<li>Hazırla 1:1,000 dilutions birincil antikorlar pT231, Tau-2 (pan tau), AT8 ve EEA1 BB/t (% 0.05 arası 20).</li>
		<li>Gecede 4 ° C'de dairesel ajitasyon ile birincil antikor çözümde membranlar kuluçkaya. Membran TBS/T 3 x 15 dk. için durulama</li>
		<li>Sonda membran 1:20,000 seyreltme fluorescently etiketli bir ile en yakın-IR ikincil antikor BB/t shaker üzerinde karanlık oda sıcaklığında 60 dk için. Membran 3 x 10 dk TBS/T ve 2 x 5 dk içinde TBS. durulama</li>
		<li>Membran görüntüleme sistemi uygun uyarma dalga boyu (örneğin 700 nm (kırmızı kanalı) kızılötesi boya 680 keçi Anti-fare IgG (H + L) ikincil ve 800 nm (yeşil kanal) kızılötesi boya 790 eşek Anti-tavşan IgG (H + L için için bir kızılötesi kullanarak tarama ) ikincil).</li>
		<li>Sinyal yoğunluklarda ölçmek ve üretici göre Dansitometresi ölçümleri gerçekleştirmek için görüntüleme yazılımı kullanmanız &#39; s talimatları, tüm arka plan ortalama üzere ayarlanmışsa otomatik arka plan ayarlama sağlanması.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Taylor, J. P., Hardy, J., Fischbeck, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxic+Proteins+in+Neurodegenerative+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Toxic Proteins in Neurodegenerative Disease.</a> Science. 296 (5575), 1991(1991).</li>
<li>Ross, C. A., Poirier, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+aggregation+and+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Protein aggregation and neurodegenerative disease.</a> Nature Medicine. 10, S10-S17 (2004).</li>
<li>Ramírez-Alvarado, M., Merkel, J. S., Regan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+exploration+of+the+influence+of+the+protein+stability+on+amyloid+fibril+formation+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">A systematic exploration of the influence of the protein stability on amyloid fibril formation in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 97 (16), 8979-8984 (2000).</li>
<li>Hamley, I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Amyloid+Beta+Peptide%3A+A+Chemist%27s+Perspective.+Role+in+Alzheimer%27s+and+Fibrillization%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Rev%22%5BJournal%5D)">The Amyloid Beta Peptide: A Chemist's Perspective. Role in Alzheimer's and Fibrillization.</a> Chem Rev. 112 (10), 5147-5192 (2012).</li>
<li>Diner, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregation+Properties+of+the+Small+Nuclear+Ribonucleoprotein+U1-70K+in+Alzheimer+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Aggregation Properties of the Small Nuclear Ribonucleoprotein U1-70K in Alzheimer Disease.</a> J. Biol. Chem. 289 (51), 35296-35313 (2014).</li>
<li>Gozal, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomics+Analysis+Reveals+Novel+Components+in+the+Detergent-Insoluble+Subproteome+in+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Proteomics Analysis Reveals Novel Components in the Detergent-Insoluble Subproteome in Alzheimer's Disease.</a> J. Proteome Res. 8 (11), 5069-5079 (2009).</li>
<li>Hales, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+detergent-insoluble+brain+proteome+linked+to+amyloid+and+tau+in+Alzheimer%27s+Disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22PROTEOMICS%22%5BJournal%5D)">Changes in the detergent-insoluble brain proteome linked to amyloid and tau in Alzheimer's Disease progression.</a> PROTEOMICS. , (2016).</li>
<li>Julien, C., Bretteville, A., Planel, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJulien%2C+C+%22Amyloid+Proteins%3A+Methods+and+Protocols%22">Amyloid Proteins: Methods and Protocols</a>. Sigurdsson, E. M., Calero, M., Gasset, M. , Humana Press. 473-491 (2012).</li>
<li>Nizhnikov, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+Screening+for+Amyloid+Proteins%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Proteomic Screening for Amyloid Proteins.</a> PLoS ONE. 9 (12), e116003(2014).</li>
<li>Seyfried, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+the+detergent-insoluble+brain+proteome+in+frontotemporal+lobar+degeneration+using+SILAC+internal+standards%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of the detergent-insoluble brain proteome in frontotemporal lobar degeneration using SILAC internal standards.</a> J. Proteome Res. 11 (5), 2721-2738 (2012).</li>
<li>Woltjer, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+determination+of+widespread+detergent+insolubility%2C+including+A%CE%B2+but+not+tau%2C+early+in+the+pathogenesis+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Proteomic determination of widespread detergent insolubility, including Aβ but not tau, early in the pathogenesis of Alzheimer's disease.</a> FASEB J. , (2005).</li>
<li>Miake, H., Mizusawa, H., Iwatsubo, T., Hasegawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+Characterization+of+the+Core+Structure+of+%CE%B1-Synuclein+Filaments%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Biochemical Characterization of the Core Structure of α-Synuclein Filaments.</a> J. Biol. Chem. 277 (21), 19213-19219 (2002).</li>
<li>Hasegawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylated+%CE%B1-Synuclein+Is+Ubiquitinated+in+%CE%B1-Synucleinopathy+Lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Phosphorylated α-Synuclein Is Ubiquitinated in α-Synucleinopathy Lesions.</a> J. Biol. Chem. 277 (50), 49071-49076 (2002).</li>
<li>Neumann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitinated+TDP-43+in+Frontotemporal+Lobar+Degeneration+and+Amyotrophic+Lateral+Sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Ubiquitinated TDP-43 in Frontotemporal Lobar Degeneration and Amyotrophic Lateral Sclerosis.</a> Science. 314 (5796), 130(2006).</li>
<li>Bishof, I., Diner, I., Seyfried, N. <a target="_blank" href="http://www.fasebj.org/content/29/1_Supplement/712.3">An Intrinsically Disordered Low Complexity Domain is Required for U1-70K Self-association.</a> FASEB J. 29 (Suppl 1), (2015).</li>
<li>Braak, H., Braak, E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1759558">Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes.</a> Acta Neuropathol. 82 (4), 239-259 (1991).</li>
<li>Noguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+Patient-derived%2C+Toxic%2C+High+Mass+Amyloid+%CE%B2-Protein+%28A%CE%B2%29+Assembly+from+Alzheimer+Disease+Brains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of Patient-derived, Toxic, High Mass Amyloid β-Protein (Aβ) Assembly from Alzheimer Disease Brains.</a> J. Biol. Chem. 284 (47), 32895-32905 (2009).</li>
<li>Bai, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((U1+small+nuclear+ribonucleoprotein+complex+and+RNA+splicing+alterations+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">U1 small nuclear ribonucleoprotein complex and RNA splicing alterations in Alzheimer's disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 110 (41), 16562-16567 (2013).</li>
<li>Klunk, W. E., Pettegrew, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+%CE%B2-Amyloid+Protein+Is+Covalently+Modified+when+Dissolved+in+Formic+Acid%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's β-Amyloid Protein Is Covalently Modified when Dissolved in Formic Acid.</a> J Neurochem. 54 (6), 2050-2056 (1990).</li>
<li>Yang, L. -S., Gordon-Krajcer, W., Ksiezak-Reding, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tau+Released+from+Paired+Helical+Filaments+with+Formic+Acid+or+Guanidine+Is+Susceptible+to+Calpain-Mediated+Proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Tau Released from Paired Helical Filaments with Formic Acid or Guanidine Is Susceptible to Calpain-Mediated Proteolysis.</a> J Neurochem. 69 (4), 1548-1558 (1997).</li>
<li>Bai, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((U1+small+nuclear+ribonucleoprotein+complex+and+RNA+splicing+alterations+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">U1 small nuclear ribonucleoprotein complex and RNA splicing alterations in Alzheimer's disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (41), 16562-16567 (2013).</li>
<li>Hales, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((U1+small+nuclear+ribonucleoproteins+%28snRNPs%29+aggregate+in+Alzheimer%27s+disease+due+to+autosomal+dominant+genetic+mutations+and+trisomy+21%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">U1 small nuclear ribonucleoproteins (snRNPs) aggregate in Alzheimer's disease due to autosomal dominant genetic mutations and trisomy 21.</a> Mol Neurodegener. 9 (1), 15(2014).</li>
<li>Xiong, L. -W., Raymond, L. D., Hayes, S. F., Raymond, G. J., Caughey, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conformational+change%2C+aggregation+and+fibril+formation+induced+by+detergent+treatments+of+cellular+prion+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Conformational change, aggregation and fibril formation induced by detergent treatments of cellular prion protein.</a> J Neurochem. 79 (3), 669-678 (2001).</li>
<li>Mirra, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Consortium+to+Establish+a+Registry+for+Alzheimer%27s+Disease+%28CERAD%29.+Part+II.+Standardization+of+the+neuropathologic+assessment+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">The Consortium to Establish a Registry for Alzheimer's Disease (CERAD). Part II. Standardization of the neuropathologic assessment of Alzheimer's disease.</a> Neurology. 41 (4), 479-486 (1991).</li>
<li>Smith, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+protein+using+bicinchoninic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Measurement of protein using bicinchoninic acid.</a> Anal. Biochem. 150 (1), 76-85 (1985).</li>
<li>Guo, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+pathological+tau+conformers+from+Alzheimer%27s+brains+transmit+tau+pathology+in+nontransgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Unique pathological tau conformers from Alzheimer's brains transmit tau pathology in nontransgenic mice.</a> J. Exp. Med. 213 (12), 2635-2654 (2016).</li>
<li>Matveev, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+distinct+subfraction+of+A%CE%B2+is+responsible+for+the+high-affinity+Pittsburgh+compound+B-binding+site+in+Alzheimer%27s+disease+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">A distinct subfraction of Aβ is responsible for the high-affinity Pittsburgh compound B-binding site in Alzheimer's disease brain.</a> J Neurochem. 131 (3), 356-368 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada biz tanıtmak ve kütle spektrometresi tabanlı proteomik analizinden deneyleri misfolding fonksiyonel proteini değişen deneysel uygulamalar çok çeşitli için geçerlidir kısaltılmış bir tek adım deterjan-Ayırma Protokolü tartışmak ve western Blot. 5 , 6 , 7 , 10 Bu metodoloji olduğunu Belki de çoğu zaman nörodejeneratif proteinopathies Alzheimer gibi çalışmak için kullanılan etkili, ALS, Hun...

Nörodejeneratif hastalıklar Alzheimer hastalığı (Ah), Parkinson hastalığı (PD), Huntington hastalığı (HD), amyotrofik lateral skleroz (ALS) ve yakından ilgili prion hastalıkları gibi yavaş yavaş birikimi ile karakterize proteinopathies vardır deterjan çözünmez protein toplamları ile bilişsel birlikte beyin reddedin. 1 , 2 bu paylaşılan patolojik özellik etyoloji ve bu nörodejeneratif hastalıklar Patofizyoloji merkezi bir rol oynadığı düşünülmektedir. 2 bu toplamları liflerinin misfolded protein βsergilenmesi birim yinelenen oluşan polimer amiloid, genellikle-yapısı. 1 , 2 , 3 , 4 biyokimyasal olarak, amiloid toplamları kimyasal veya termal denatürasyon ve solubilization, onların arıtma, analiz için benzersiz zorluklar sunar3 son derece dayanıklıdır ve geleneksel biyokimyasal teknikleri ile çalışma. 2 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 şaşırtıcı olmayan bir şekilde, deterjan çözünmez protein fraksiyonu nörodejeneratif hastalıklar misfolded proteinleri birikimi ile ilgili Patofizyoloji içine çok araştırma odağı olmuştur. 6 , 12 , 13 , 14
Biyokimyasal ayırma teknikleri kez ölüm sonrası beyin homogenates dan deterjan çözünmez kesir zenginleştirmek için kullanılmıştır. 6 , 12 , 13 , 14 en yaygın yöntemlerden birini doku homogenates ile tampon sıralı çıkarma ve sıkılık çözünür ve çözünmez kesirler bölme ultrasantrifüj tarafından takip, artan deterjanlar içerir. Yaygın olarak kullanılan sıralı Ayırma Protokolü6,14 donmuş doku örnekleri bir deterjan-Alerjik düşük tuz (LS) arabelleği homojenizasyon içerir ve sonuç çözünmez granül sonra sırayla ile ayıklanır yüksek tuz, non-iyonik deterjanlar, yüksek Sükroz içeren arabellekleri, üre iyonik deterjanlar ve nihayet chaotropes gibi. 6 , 14 önemli ölçüde zaman ve emek taahhüt bunları tamamlamak için gereken böyle bir sıralı ayırma iletişim kuralları belli bir dezavantajı var. Homojenizasyon ve ultrasantrifüj de dahil olmak üzere, tipik beş adım Ayırma Protokolü saat veya bile birkaç alabilir gün tamamlamak için. 4 , 6 , 7 , 10 , 15 , 16 , 17 , 18 Ayrıca, çok sayıda patolojik protein toplamları kalır en sert koşullar19,20 hariç hepsi çözünmez oluşturulan kesirler çoğu sınırlı değeri. Böylece, yüksek tuz konsantrasyonları ve non-iyonik deterjanlar kullanarak daha az sıkı ayırma adımları büyük ölçüde gereksizdir.
Önceki çalışmalarda iyonik deterjan N-loril-sarcosine (sarkosyl) basitleştirilmiş tek adım deterjan Ayırma Protokolü için mükemmel bir aday olduğunu göstermiştir. 5 , 6 , 12 , 13 , 14 , 21 , 22 , 23 denaturing bir deterjan olarak sarkosyl beta-amiloid (Aβ),6,11 oluşan misfolded protein toplamları çözücü olmadan yerel olarak katlanmış proteinlerin beyinde büyük çoğunluğu solubilize için sıkı fosforile tau (pTau),6 TAR DNA'ya bağlanıcı protein 43 (TDP-43),14 Alfa-synuclein,12,13 büyük,23 veya U1 küçük nükleer ribonucleoproteins (U1 snRNPs) gibi U1 - 70 K. 5 , 21 , 22 Sarkosyl her yerde Anyonik deterjan Sodyum Lauryl Sülfat (SDS) daha az sıkı olduğu için daha az sağlam oligomeric formları SDS tedavi dayanıklı olamaz misfolded protein toplamları korur. 9
Daha önce biz sonuçları daha zahmetli sıralı ayırma yöntemleri için karşılaştırılabilir elde kısaltılmış bir deterjan-Ayırma Protokolü nitelendirdi. 5 daha az sıkı ayırma adımları ihmal olarak, deterjan çözünmez protein toplamları üzerinden öldükten sonra insan beyni zenginleştirme için facile tek adım Ayırma Protokolü geliştirmeye başardık. 5 burada açıklanan bu ayrıntılı iletişim kuralı deneysel uygulamalar Western Blot arasında değişen geniş bir yelpazesi için son derece uygundur ve kütle spektrometresi tabanlı proteomik fonksiyonel proteini misfolding ve tohum toplama deneyleri. 5 , 6 , 21

<table><tbody><tr><td>Proteaz ve fosfataz inhibitör kokteyli, EDTA içermeyen (100X)</td><td>Thermo Fisher</td><td>78441</td><td>proteaz ve fosfataz inhibitörü kokteyli</td></tr><tr><td>Sonic Dismembrator System (ultrasonicator)</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB505110</td><td>mikrotip ultrasonicator</td></tr><tr><td>Optimax TLX Ultrasantrifüj</td><td>Beckman Coulter</td><td>361545</td><td>soğutmalı ultrasantrifüj</td></tr><tr><td>TLA120.1 rotor</td><td>Beckman Coulter</td><td>362224</td><td>ultrasantrifüj rotor</td></tr><tr><td>500 ul (8 x 34 mm) polikarbonat tüpler, kalın duvar</td><td>Beckman Coulter</td><td>343776</td><td>TLA120.1 rotor için ultrasantrifüj tüpleri</td></tr><tr><td>4X SDS numune tamponu</td><td>Ev yapımı</td><td>N/A</td><td>SDS-PAGE</td></tr><tr><td>TCEP çözeltisi, nötr pH</td><td>Thermo Fisher</td><td>77720</td><td>indirgeyici ajan</td></tr> <tr><td>(TBS) bloke edici tampon</td><td>Thermo Fisher</td><td>37542</td><td>engelleme tamponu</td></tr> <tr><td>(TBS) engelleme tamponu +% 0.05 Tween 20</td><td>Thermo Fisher</td><td>37543</td><td>engelleme tamponu ve antikor seyreltici</td></tr><tr><td>% 4-12 Bolt Bis-Tris Plus jelleri, 10 kuyulu</td><td>Thermo Fisher</td><td>NW04120BOX</td><td>prekast SDS-PAGE jelleri</td></tr><tr><td>MES SDS Koşu Tamponu (20X)</td> <td>Thermo Fisher</td><td>B0002</td><td>SDS-PAGE çalışma tamponu</td></tr><tr><td>N-Lauroylsarcosine sodyum tuzu (sarkosil)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L5777-50G</td><td>deterjan</td></tr><tr><td>Anti-Tau-2 (pan tau) antikoru</td><td>Chemicon</td><td>MAB375</td><td>antikorları</td></tr><tr><td>Anti-fosfo-treonin 231 Tau antikoru</td><td>Millipore</td><td>MAB5450</td><td>antikorları</td></tr><tr><td>Anti-fosfo-seroin 202 ve treonin 205 Tau antikoru (AT8)</td><td>Thermo Fisher</td><td>MN1020</td><td>antikorları</td></tr><tr><td>Anti-erken endozom antijen 1 (EEA1) antikoru</td><td>abcam</td><td>ab2900</td><td>antikorları</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 680 keçi anti-fare IgG (H + L) ikincil antikor</td><td>Thermo Fisher</td><td>A21058</td><td>antikorları</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 790 eşek anti-tavşan IgG (H + L) ikincil antikor</td><td>Thermo Fisher</td><td>A11374</td><td>antikorları</td></tr><tr><td>iBlot2 Kuru Kurutma Sistemi</td><td>Thermo Fisher</td><td>IB21001</td><td>Jel transferi</td></tr><tr><td>iBlot2 Transfer Yığınları, Nitroselüloz, mini</td><td>Thermo Fisher</td><td>IB23002</td><td>Jel transferi</td></tr></tbody></table>

deterjan çözünmez protein toplamları--dan insan öldükten sonra beyin zenginleştirme

Enrichment of Detergent-insoluble Protein Aggregates from Human Postmortem Brain

Bu çalışmada, deterjan çözünmez protein toplamları--dan insan öldükten sonra beyin zenginleştirme için bir kısaltılmış tek adım Ayırma Protokolü açıklar. İyonik deterjan N-loril-sarcosine (sarkosyl) etkin bir şekilde beyin dokusu gibi deterjan çözünmez protein toplamları nörodejeneratif proteinopathies, geniş bir dizi zenginleştirme sağlayan yerel olarak katlanmış proteinlerin solubilizes Alzheimer hastalığı (Ah), Parkinson hastalığı ve amyotrofik lateral skleroz ve prion hastalıkları. İnsan kontrolü ve reklam ölüm sonrası beyin dokuları ultrasantrifüj patolojik fosforile tau, neurofibrillary temel bileşenidir dahil olmak üzere deterjan çözünmez protein toplamları zenginleştirmek için sarkosyl huzurunda tarafından homojenize ve posalı düğüm reklam. Western Blot toplanan fosforile tau ve deterjan çözünür protein, erken Endosome antijen 1 (EEA1) kontrolü ve reklam beyin farklı çözünürlük gösterdi. Proteomik çözümleme Ayrıca βzenginlik ortaya-amiloid (Aβ), tau, snRNP70 (U1 - 70 K) ve apolipoprotein E (APOE) bu kontrol, önceki doku ayırma stratejileri ile tutarlı göre reklam beyin sarkosyl çözünmez kesirler . Böylece, bu basit zenginleştirme Protokolü deneysel uygulamalar Western Blot ve fonksiyonel proteini ortak toplama deneyleri kütle spektrometresi tabanlı proteomik kadar geniş bir yelpazede için idealdir.

Deterjan çözünmez protein toplamları kontrol ve AD ölüm sonrası beyin (şekil 1) zenginleştirmek için kullanılan kısaltılmış tek adım sarkosyl-ayırma protokol. Proteinler üzerinden TH-S, S1, S2 ve P2 kesirler SDS-sayfa, 15 dk Coomassie nazik Coomassie parlak mavi G-250 boyama arabellek ile boyama tarafından mavi sabitleştirici arabellek takip için sabit tarafından çözüldü. Protein S2 kesir tespit edilemez seviyede olduğundan resuspension isteğe bağlı bir adımd...

Deterjan çözünmez protein toplamları--dan insan öldükten sonra beyin zenginleştirme için bir kısaltılmış Ayırma Protokolü tanımlanır.

Deterjan çözünmez Protein toplamları--dan insan öldükten sonra beyin zenginleştirme

In this study, we describe an abbreviated single-step fractionation protocol for the enrichment of detergent-insoluble protein aggregates from human ...

Bu fraksiyonlama protokolünün genel amacı, insan postmortem beyin dokusundan deterjanla çözünmeyen protein agregatlarını zenginleştirmektir. Bu yöntem, hastalıklarda yanlış katlanmış protein agregatlarının tanımlanması ve karakterizasyonu gibi nörodejenerasyon alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, deterjanla çözünmeyen protein agregatlarının beyin dokusundan kısa bir süre içinde hızlıca zenginleştirilmesi ve izole edilmesidir.Bu prosedürü, laboratuvarımdan teknisyen Tram Nguyen uygulamalı olarak gösterecektir. Sağlıklı kontrol grubundan ve patolojik olarak doğrulanmış AD'den dondurulmuş postmortem beyin dokusu temin edin. Her bir doku örneğinden yaklaşık 250 mg gri madde parçası çıkarmak için pens ve jilet kullanın. Beyin segmentinin bir dakika boyunca çözünmesini bekleyin.Şimdi, doku parçası çözülürken yaklaşık iki milimetreküplük parçalar halinde doğrayın. Buz üzerinde, önceden soğutulmuş iki mililitrelik bir Dounce homojenizatör tüpüne aktarın. Beyaz cevherden ve büyük kan damarlarından kaçınmayı unutmayın.Hızlı çalışın ve dokuyu DARALAMİŞ tek kullanımlık tartım kaplarına yerleştirin. Beyin dokusu içeren tartım kabını sık sık kuru buzlu polistiren kaplara yerleştirerek dokunun çözülmesini önlemeye dikkat edin. Gerekli tüm doku parçalarını diseke edip tarttıktan sonra, içinde bir doku parçası bulunan tartım kabını kuru buzdan çıkarın.Ardından, doku gramı başına protease ve phosphatase inhibitör kokteyli içeren beş mililitre buz gibi soğuk düşük tuzlu tampon ekleyin ve yaklaşık 10 darbe yüksek boşluklu havan eli A ve 15 darbe düşük boşluklu havan eli B kullanarak buz üzerinde homojenize edin. Daha sonra, her bir homojenatı etiketli iki mililitrelik polipropilen tüplere aktarmak için dokuz inçlik cam Pasteur pipeti kullanın. Kalan homojenatı, -80 °C'de saklamak üzere benzer şekilde ek etiketli 1.5 mililitrelik tüplere alikotlayın. Fraksiyonasyona devam etmek için, her 0.8 mililitrelik alikota 100 mikrolitre beş molar sodyum klorür ve 100 mikrolitre %10 sarkozil ekleyin.Altüst ederek iyice karıştırın. Ardından 15 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edin. İnkübasyonun ardından, mikro uçlu bir proba sahip sonikatör kullanarak %30 genlikte, beşer saniyelik üç darbe uygulayın.Homojenatların protein konsantrasyonlarını belirlemek için bisinkinoninik asit yöntemini kullandıktan sonra, her örneğe proteaz ve fosfataz inhibitörleri içeren buz gibi soğuk sark tamponu, mililitre başına 10 miligram nihai konsantrasyona ulaşana kadar ekleyin. Ardından, her örnekten 500 mikrolitreyi 500 mikrolitrelik polikarbonat ultrasantrifüj tüplerine aktarın. Tüpleri önceden soğutulmuş bir rotora yerleştirin ve dört santigrat derecede, 30 dakika boyunca 180.000 ×g hızında ultrasantrifüjleyin.Santrifüj işleminin ardından, S1 sarkozil-çözünür süpernatanları 1,5 mililitrelik tüplere aktarın ve minus 80 degrees Celsius'ta saklayın. Deterjanla çözünmeyen P1 fraksiyonlarını içeren ultrasantrifüj tüplerine 200 microliters sark tamponu ekleyin ve pelletleri ultrasantrifüj tüplerinin tabanından ayırmak için pipet ucunu kullanın. Ardından, yeniden süspanse edilen P1 pelletlerini yeni 500 mikrolitrelik ultrasantrifüj tüplerine aktarın, çiftler halinde dengeleyin ve four degrees Celsius'ta 30 dakika daha 180,000 times g hızında santrifüjleyin.S2 süpernatantını atın. Ardından, sarkozil-çözünmez peletlere 50 ila 75 µL proteaz ve fosfataz inhibitör kokteyli içeren üre tamponu ekleyin ve P2 peletini çözünür hale getirmek için oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. İnkübasyon sonrası, yeniden süspande edilen P2 peletlerini etiketlenmiş 0,5 mL'lik tüplere aktarın ve %20 amplitudda bir saniyelik kısa bir mikro-uç sonikasyonu kullanarak peletleri tamamen çözünür hale getirin.BCA analiz yöntemi kullanılarak sarkozil-çözünür ve sarkozil-çözünmeyen fraksiyonların protein konsantrasyonlarını belirleyin. Toplam homojenat, sarkozil-çözünür S1 ve sarkozil-çözünmeyen P2 fraksiyonlarının 40 µg'lık örneklerini, pH 7'de 5 mM TCEP içeren 1x Laemmli SDS-PAGE örnek tamponu içerisinde hazırlayın. Örnekleri 95 °C'de beş dakika boyunca inkübe edin.Numuneleri, önceden hazırlanmış 10 kuyucuklu %4 ila %12'lik Bis-Tris SDS-PAGE jellerine yükleyin. İlk bir santimetre için 80 volt ve yaklaşık bir saat boyunca veya takip boyası jelin altına ulaşana kadar 120 volt ile elektroforez yapın. Önceden hazırlanmış jel kasetlerini distile suyun içine batırın ve ardından açmak için yeni bir jilet ve jel bıçağı kullanın.Her bir jelin taraklarını ve en alt kısmını yeni bir jiletle nazikçe kesin. Bir blotting cihazı üzerinde kuru transfer yöntemi kullanarak 0,2 mikron nitroselüloz membranlara aktarın. Transferden sonra, membranları önce Tween-20 içermeyen bloklama tamponunda 30 dakika, ardından yüzde 0,5 Tween-20 içeren bloklama tamponunda 30 dakika boyunca bloklayın.Bloke etme işleminden sonra, fazla bloke etme tamponunu uzaklaştırmak için membranları 0,1 yüzde Tween-20 içeren TBS ile beş dakika boyunca durulayın. Birincil antikorların 1:1.000 seyreltmelerini, 0,5 yüzde Tween-20 içeren bloke etme tamponunda hazırlayın. Burada Phospho-Tau pT231 ve EEA1 kullanılmaktadır.Membranları, primer antikor çözeltisi içinde dört derece santigrat sıcaklıkta, dairesel ajitasyonla gece boyunca inkube edin. Ertesi gün, membranları %0,1 Tween-20 içeren TBS ile 15'er dakikalık üç kez yıkayın. Membranları, 1:20.000 dilüsyonda floresan işaretli yakın kızılötesi sekonder antikor ve %0,5 Tween-20 içeren bloklama tamponu ile oda sıcaklığında, karanlıkta, bir çalkalayıcı üzerinde 60 dakika boyunca probe edin.İnkübasyonun ardından, membranı 0,1 yüzde Tween-20 içeren TBS ile 10 dakika boyunca üç kez ve TBS ile beşer dakika boyunca iki kez yıkayın. Membranı, kullanılan sekonder antikor için uygun eksitasyon dalga boyunda bir kızılötesi görüntüleme sistemi kullanarak tarayın. Bu Coomassie ile boyanmış jel; TH-S, S1, S2 ve P2 fraksiyonlarından 20 mcg protein göstermektedir.Western blot analizi, AD beyninde patolojik yüksek molekül ağırlıklı fosforile Tau'nun sarkozil-çözünmez şekilde kümelendiğini ve sarkozil fraksiyonlarında çok az miktarda fosfo-Tau kaldığını açıkça göstermektedir. EEA1, hem kontrol hem de AD beyninde doğal olarak sarkozil-çözünür olan ve S1 fraksiyonuna ayrılan çoğu yerli nonpatolojik protein için genel bir markör olarak kullanılmıştır. Özellikle, çözünür fraksiyonda EEA1 için TH-S fraksiyonuna kıyasla biraz daha az sinyal görülmüştür; bu durum, EEA1'in küçük bir havuzunun muhtemelen sarkozil-çözünmez olduğunu ancak bu özel antikor ile western blot tespit sınırının altında kaldığını göstermektedir.Bu şekil, tek adımlı veya çok adımlı bir fraksiyonlama protokolü kullanılarak patolojik AD proteinlerinin proteomik analizini göstermektedir. Genel örnek kaybı önemli ölçüde azaldığı için tek adımlı fraksiyonlama tekniği düşük bolluktaki proteinler için avantajlı olabilir. Bu prosedürü uygularken, beyin dokusundan mümkün olduğunca fazla beyaz madde çıkarılması gerektiğini unutmamak önemlidir.Bu prosedürün ardından, dejeneratif hastalıklardaki patolojik agregatların temel protein bileşenlerini belirlemek ve karakterize etmek amacıyla kütle spektrometrisi tabanlı proteomik gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

enrichment-detergent-insoluble-protein-aggregates-from-human

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Beyin dokusunda hücresel heterojenite testlerin çoğu tek hücreli çözünürlük eksikliği nedeniyle kromatin epigenetik işaretlerin çalışma için önemli bir sınırlama teşkil etmektedir. Nöronlar genellikle glia ve diğer non-nöronal hücreler ile iç içe. Biz özü ve insan beyninin nöron çekirdekleri toplamak için bir protokol sağlar.

İnsan Postmortem Beyin Dokusu Nöronal Çekirdekler İzolasyon

Biz insan kortikal homojenatlarında açıklık, SDS-PAGE ile protein ayırma, antijen alımı ve Aβ peptid antikor immunoblotting hazırlanması için kullanılan bir tekniktir açıklar. Bu protokolü kullanarak, biz sürekli olarak insanlarda Alzheimer patolojisi olan kortikal doku monomerik ve multimer Aβ algılar.

İnsan Kortikal Doku Aβ multimerlerin SDS-PAGE/Immunoblot Algılama Antijen-epitop Alma kullanarak homojenatlarında

Hücresel prion proteini yeni bir tür...

Normal İnsan Beyin Çözünür ve çözünmez PrP Oligomerleri İzolasyonu

Bu video, yoğunluk gradyanlı santrifüjleme ve amiloid olmayan proteinlerin sindirimi kullanılarak fare beyin dokusu ekstraktından amiloid fibrilleri izole etme protokolünü göstermektedir.

Beyin Dokusu Ekstraktından Amiloid Fibrillerin İzolasyonu

Bu videoda, donmuş ölüm sonrası insan beyni dokusundan deterjanda çözünmeyen protein agregatlarının izole edilmesi ve zenginleştirilmesi süreci açıklanmaktadır. Çözünmeyen agregaları ayırmak ve saflaştırmak için homojenizasyon, deterjan arıtma, sonikasyon ve ultrasantrifüjleme dahil olmak üzere temel adımları gösterir. Son adım, daha fazla analiz için agregaların üre tamponu içinde çözündürülmesini içerir.

İnsan Postmortem Beyin Dokusundan Deterjanda Çözünmeyen Protein Agregatlarının İzolasyonu

İnsan ve fare beyin dokusu için üre / tiyoüre / SDS tamponu kullanılarak ortak bir protein ekstraksiyon protokolü sağlar: 2D-dige ve mini 2DE immunoblotting kendi müteakip özellik tayini ile protein indentification. Bu yöntem, insan biyopsi ve deneysel modellerden gerçekleştirilen daha güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için bir olanak sağlar.

Konsensus Beyin kaynaklı protein, 2D-DIGE ve Mini 2DE İmmünoblotting Hem kullanma İnsan ve Kemirgen Beyin proteomun Çalışmaları Ekstraksiyon Protokolü

Burada, ölüm sonrası insan beyin dokusundan giderek çözünmeyen/kümelenmiş alfa-sinükleinin (α-syn) izolasyonu için bir protokol sunuyoruz. Deterjan mukavemeti arttırılmış tamponların ve yüksek hızlı ultrasantrifüj tekniklerinin kullanılmasıyla, hastalıklı ve hastalıksız dokularda α-syn agregasyonunun değişken özellikleri incelenebilir.

Parkinson Brains gelen Çözünür ve çözünmez alfa-sinüklein Sıralı Ekstraksiyon

Kemirgenlerin ve insan deneklerin beyin dokularından alınan ex vivo biyolojik örneklerde aksin filamentlerinin nicelleştirilmesi için basit, zaman verimli ve yüksek verimli floresan spektroskopi tabanlı bir tahlil rapor ediyoruz.

Kemirgen ve İnsan Beyin Dokularında Aktüer Polimerizasyon Durumunu Değerlendirmek için Zaman Verimli Floresan Spektroskopi Tabanlı Bir Tahlil

Kütle spektrometrisine dayalı proteomik analiz ile bu biyokimyasal saflaştırma yöntemi, Alzheimer hastalığını önleme hedeflerinin belirlenmesini hızlandırabilecek amiloid fibril çekirdeklerinin sağlam karakterizasyonunu kolaylaştırır.

Beyinden Amiloid Fibril Çekirdeklerinin Biyokimyasal Saflaştırılması ve Proteomik Karakterizasyonu

Bu çalışma, GFAP ve hastalık neden olan mutasyonlarını biyokimyasal olarak karakterize etmek için filament montajı, toplama ve translasyon sonrası modifikasyona odaklanan deneysel yöntemleri ortaya koymaktadır. Yüksek saflıkta GFAP proteinleri analiz edildi ve Alexander hastalığı mekanizmalarına dair bilgiler ortaya çıkarıldı; bu da potansiyel terapötik hedefleri incelemek ve GFAP mutasyonları ile ilgili bozuklukları anlamak için bir çerçeve sağlayabilecektir.

Glial Fibriller Asitli Protein ve Hastalıkla İlgili Varyantlarının Biyokimyasal Analizi İçin Deneysel Yaklaşımlar

Öğrenin, insan ölüm sonrası beyin dokusundan deterjan çözünmez protein toplamlarını zenginleştirme yöntemini. Bu teknik, nörodejeneratif hastalıklarda hatalı katlanmış proteinleri hızla izole ederek araştırmacılara değerli bilgiler sunar.

Deterjan çözünmez Protein toplamları--dan insan öldükten sonra beyin zenginleştirme

Daha fazla video keşfet