Name: Osmotik Pompalar veya Doğrudan Kas Enjeksiyonu Kullanılarak Subkutanöz Neurotrophin 4 İnfüzyonu, Yaşlanan Farenin Larinks Kaslarını Arttırır (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 50 s
Description: Keşfedin yaşlanan sıçanlarda larenks kaslarını yeniden şekillendirmek için Neurotrophin 4 enjeksiyon protokolünü. Bu yöntem, ses fonksiyonunu iyileştirmek ve yaşlanmaya bağlı kas atrofisini tersine çevirmek için klinik uygulamalara kolayca aktarılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Sağırlık ve Diğer İletişim Bozuklukları Enstitüsünün (R21DC010806&#39;dan CAM ve JCS&#39;ye ve R01DC011285&#39;den CAM&#39;e) hibeleriyle desteklendi.

Bu protokol için 6 ve 30 aylıkken erkek Fischer 344-Brown Norveç sıçanları kullanın. Sıçanlar Ulusal Yaşlanma Enstitüsü&#39;nden kemirgen koloni elde edildi. Bu çalışma için sıçanlar kullandık, çünkü sıçan larenksinin yapısı, havayolu koruması ve türe özgü seslendirme işlevini yerine getiren işlevsel olarak insandakine benzerdi. Bu çalışma, PHS İnsan Gücü Bakımı ve Laboratuar Hayvanları Kullanımı, Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için NIH Rehberi ve Hayvan Refahı Yasası (7 USC ve ark.); Hayvan kullanımı protokolü, Kentucky Üniversitesi&#39;nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1. Sıçan Anestezi <ol><li> Ketamin hidroklorür (dissosiyatif anestetik) ve ksilazin hidroklorür (sedatif ve analjezik) tamponlu salinde karıştırılarak anestezi hazırlayın. Nihai çözeltideki ketamin ve ksilazinin konsantrasyonları kg başına 100 mg / 8 mgVücut ağırlığı. </li><li> 25 G iğneli bir şırınga kullanarak intraperitoneal uygulama vasıtasıyla anestezi fareye enjekte edilir. </li><li> Parmağın ayak parmağını veya ayağı forsepsle tutarak sıçanın yeterince anestezi edildiğini belirleyin. Eğer sıçan sıkışmaya tepki vermezse, ameliyat başlayabilir. Sıçan ayak parmaklarına refleks veya kasılmalar ile tepki verirse, 1-2 dakika bekleyin ve sıkma testini tekrarlayın. Sıçan tekrar tepki gösteriyorsa, sıçanı yeni bir hayvanla değiştirin ve adım 1.2&#39;den başlayarak işlemi yineleyin. </li><li> Sıçanın hareketsiz kaldıktan sonra sıçan gözlerine oftalmik merhem uygulayın, böylece kornealar kurumaz. </li></ol> 2. Osmotik Pompa İmplantasyonu <ol><li> Sıçanın ventralini aseptik cerrahi alana yerleştirin. Bir preanestetik ilaç olarak meloksikam uygulayın. 25 G&#39;lik bir iğneli bir şırınga kullanarak intraperitoneal olarak 1-4 mg / kg vücut ağırlığı dozunda uygulayın. </li><li> Yaklaşık birimi kaldırmak için makas kullanınBoynunun arkasından 1 &quot;x 1&quot; kare kürk ve omuzlar arasında yaklaşık 1 &quot;kaudal alan olabildiğince cildin yakınına tıraş edin. </li><li> Dezenfekte etanol (70%) ile sırt ve boynu ıslatın. </li><li> Tıraştan sonra, boyun dorsal boyasını, alkolle bitirme iyod-alkol art arda 3 fırça ile fırçalayın. </li><li> Sıçanın vücut ısısını, 34 ° C&#39;ye ayarlanmış bir ısıtma yastığı üzerine yerleştirerek koruyun. </li><li> Aseptik olarak hazırlanmış ozmotik pompaları ya sistemik NTF4 tedavisi için 50 μL NTF4 veya tuzlu su ile doldurun ( Şekil 1 ). <ol><li> Deriden yaklaşık 2 cm genişliğinde yatay bir kesi yapmak için bir neşter kullanın, sadece kafa parçalarının arasından skapula arasında boşluk bırakın. Hemostatların ucunu yerleştirirken insizyonun arka kenarını bir elinizle forsepsle kaldırın ve posteri insizyona yavaşça itin. </li><li> Hemostatların ucu yaklaşık 2 cm sonraKesiye giden yolda, hemostatların üzerindeki kolları açın, insizyon bölgesine subkutan içi boş bir &quot;cep&quot; oluşturacak şekilde ipuçlarını genişletin. Bu, pompa için yerleştirme bölgesi olacaktır. </li></ol></li><li> NTF4&#39;ün herhangi bir etkileşimini ve cebin kesilme bölgesinin iyileşmesini en aza indirgemek için, pompa dağıtım portalı ucunu yerleştirdikten sonra yönlendirin. </li><li> 7-14 gün boyunca 50 μL NTF4 salin verin. 7 günlük grup, toplam 47.04 mg doz için 6.72 mg / gün NTF4 aldı. 14 günlük grup, 94.08 mg NTF4 25 toplam dozu için 6.72 mg / gün aldı. </li><li> Pompa yerleşimi için yapılan kesi kapatmak için 5-0 naylon dikiş ipliği, hemostatlar ve forseps kullanın. </li><li> Anesteziden kurtulduklarından sıçanları en az 30 dakika izleyin. İzlemenin tamamlanması için kriterler, hayvanın faal hale gelmesi, kafesin etrafında hareket edilmesi, içme suyunun alınması ve damat tutumu gibi diğer normal faaliyetlerin başlatılmasıdır. </li><li> Günlük hayvanları izleyinCerrahi alan iyileşmesi, normal yem ve su tüketimi ve idrar / dışkılardan geçme ve stres, ağrı veya diğer ameliyat sonrası komplikasyonların herhangi bir anormal davranış belirtileri gözlenerek ilk hafta için. </li><li> Eğer fare ağrı ya da sıkıntılı görünüyorsa, ağrıdan kurtulmak için her 24 saatte bir 5 mg / kg subkutanöz karprofen enjeksiyonu yaptırınız. </li><li> Bir enfeksiyon var gibi görünüyorsa, yaranın iyileşmesini sağlamak için bir veterinerle görüşün. </li><li> Hangi deney grubuna girildiğine bağlı olarak, ipliğin tahriş olmasını önlemek için ameliyattan 7-10 gün sonra 5-0 naylon dikişini çıkarın. </li></ol> 3. Direkt Enjeksiyonluk Sıçan Anestezisi <ol><li> Prosedürden önceki gece fareden yemek yemeyin. Bu, endoskopu veya enjeksiyon iğnesini bloke edecek yiyecek bulunmamasını sağlar. </li><li> Sıçanları tartın ve acepromaz 1-2 mg / kg vücut ağırlığı hazırlayın. Kas içine enjekte edin (IM konumuSol tiroksinoid kas). </li><li> Sıçanı, indüksiyon kutusuna yerleştirin. İndüksiyon kutusunda% 5 izofluran ve 1 Ç 2 ile anestezi uygulayın. </li><li> Sıçanı,% 2 izofluran ve 600 mL O 2 içeren burun konisine taşıyın. </li><li> Parmağın ayak parmağını veya ayağı forsepsle tutarak sıçanın yeterince anestezi edildiğini belirleyin. Sıçan tutamağa tepki vermezse, enjeksiyon protokolü başlayabilir. Sıçan ayak parmaklarına refleks veya kasılmalar ile tepki verirse, 1-2 dakika bekleyin ve sıkma testini tekrarlayın. Sıçan tekrar tepki gösteriyorsa, sıçanı yeni bir hayvanla değiştirin ve adım 3.4&#39;ten başlayarak yinelemeyi tekrarlayın. </li></ol> 4. Doğrudan Enjeksiyon ve Görselleştirme <ol><li> Enjeksiyondan önce 30 dakika boyunca 25 ° C&#39;ye ayarlanmış bir H20 b banyosunda NTF4 veya salin içeren aseptik olarak hazırlanmış 50-μL dozajlar yerleştirin. </li><li> Sıçanı bir pleksiglas platformda sırtüstü yatırın ve yatırın ( Şekil 2 ). SusSıçanı platformun üst kısmında bulunan bir kılavuz tel vasıtasıyla ön üst kesici uçlarından geri duran duruşta tutun. </li><li> 1.9 mm, 30 ° sinüs endoskopuna 50 mm, 30 gauge, 100 μL şırınga takın ( Şekil 3 ). NOT: Şırınga düzeneği kanülü sıkıca endoskopun dış duvarına tutan bir alet yardımıyla bağlanır. Endoskop vokal kıvrımların görselleştirilmesine ve şırınganın rehberliğine intraoral olarak izin verir. Kanül ucunun konumu, ucun endoskopik görünümü ( Şekil 4 ) aracılığıyla tam ve açık şekilde görülebilmesini sağlamak için her hayvandan önce ayarlanır. </li><li> Dili uzatmak ve yana doğru hareket ettirmek için lastik uçlu bir forseps kullanın. Daha sonra, oral açıklığı korumak için plastik bir spekulum takın. Kesikleri uçları kopararak pürüzsüz cilalanarak, 1.5 ila 2 cm&#39;lik bir uzunluğa kesilen 5 mL&#39;lik bir plastik şırınga varilinden spekulum yapın. </li><li> Işıklardaki ışıkları kapatM ve endoskopa bir halojen ışık kaynağı takın. İşlemi kaydetmek için video kaydediciyi açın. </li><li> Sıçanın ağzına yerleştirildiğinde cam ucu üzerinde yoğuşma gelişimini en aza indirgemek için endoskopun distal ucunu ılık suya birkaç saniye batırın. </li><li> Monitörden gelen görsel geribildirimi kullanarak, iğne dikkatli bir şekilde sol ses katmanının alanına yönlendirilir. </li><li> Vokal katın tümüne erişmek için solüsyonun solunum döngüsünün inspirasyon fazıyla birlikte enjeksiyon zamanı. Solunumun inspiratuar fazı boyunca vokal kat tam olarak açığa çıkar. <ol><li> Ses kıvrımı tamamen görünür hale geldiğinde, iğneyi vokal katın beyaz medyal kenarının yan tarafında bulunan sol tiroarenoid içine yerleştirin. İğne yerinde iken enjektörü şırınganın depresyondan geçirin. </li></ol></li><li> Endoskop ve video oynatıcıdaki halojen ışık kaynağını kapatın ve ro&#39;yu geri çevirinIşıklar. </li><li> Sıçanı evdeki kafese geri getirin ve ısıtma yastığına yerleştirin. </li><li> Isı pedinden çıkarmadan önce sıçanın iyileşmesine izin verin. Kafesdeki yiyecek ve suyu değiştirin. </li><li> Enjeksiyondan sonra sıçanları 7 gün boyunca izleyin ve ardından öksüzleştirin. Kriyoteksiyon için larideleri çıkarın 24 . </li></ol> Sıçanların Euthanizasyonu <ol><li> Sıçanları, ketamin hidroklorür ve ksilazin hidroklorür (100 mg / 8 mg / kg vücut ağırlığı enjekte edilen intraperitoneal enjeksiyon) ile anestezi altına alınız. </li><li> Medial torakotomiyi takiben kanama önleme yöntemiyle euthanize olun. </li></ol>

<ol><li>Trupe, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlates+and+consequences+of+eating+dependency+in+institutionalized+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Geriatrics+Society%22%5BJournal%5D)">Correlates and consequences of eating dependency in institutionalized elderly.</a> J. Am. Geriatrics Society. 34 (3), 192-198 (1986).</li>
<li>Ward, P. H., Colton, R., McConnell, F., Malmgren, L., Kashima, H., Woodson, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2498813">Aging of the voice and swallowing.</a> Otolaryngol. Head Neck Surg. 100 (4), 283-286 (1989).</li>
<li>Gay, E. G., Kronenfeld, J. J., Dettmann, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+on+the+effect+of+regulation+on+health+care+for+the+older+American%3A+a+tale+of+two+states%5BTitle%5D)+AND+%22Gerontologist%22%5BJournal%5D)">A comparison on the effect of regulation on health care for the older American: a tale of two states.</a> Gerontologist. 34 (6), 787-796 (1994).</li>
<li>Hagen, P., Lyons, G. D., Nuss, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysphonia+in+the+elderly%3Adiagnosis+and+management+of+age-related+voice+changes%5BTitle%5D)+AND+%22South.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Dysphonia in the elderly:diagnosis and management of age-related voice changes.</a> South. Med. J. 89 (2), 204-207 (1996).</li>
<li>Broniatowski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+evaluation+and+treatment+of+patients+with+swallowing+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol.+Head+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Current evaluation and treatment of patients with swallowing disorders.</a> Otolaryngol. Head Neck Surgery. 120 (4), 464-473 (1999).</li>
<li>Lundy, D. S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10187936">Aspiration: cause and implications.</a> Otolaryngol. Head Neck Surg. 120 (4), 474-478 (1999).</li>
<li>Schindler, J. S., Kelly, J. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12150508">Swallowing disorders in the elderly.</a> Laryngoscope. 112 (4), 589-602 (2002).</li>
<li>Gambino, D. R., Malmgren, L. T., Gacek, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+the+neuromuscular+junctions+in+the+human+posterior+cricoarytenoid+muscles%3A+a+quantitative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in the neuromuscular junctions in the human posterior cricoarytenoid muscles: a quantitative study.</a> Laryngoscope. 100 (3), 262-268 (1990).</li>
<li>Sinard, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+voice%3A+how+to+differentiate+disease+from+normal+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Geriatrics%22%5BJournal%5D)">The aging voice: how to differentiate disease from normal changes.</a> Geriatrics. 53 (7), 76-79 (1998).</li>
<li>Baker, K. K., Olson-Raming, L., Sapir, S., Luschei, E. S., Smith, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+vocal+loudness+in+young+and+old+adults%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Speech+Lang.+Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Control of vocal loudness in young and old adults.</a> J. Speech Lang. Hear Res. 44 (2), 297-305 (2001).</li>
<li>McMullen, C. A., Andrade, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+morphological+evidence+of+age-related+denervation+in+rat+laryngeal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A.+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Functional and morphological evidence of age-related denervation in rat laryngeal muscles.</a> J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 64 (4), 435-442 (2009).</li>
<li>Lai, K., Ip, N. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postsynaptic+signaling+of+new+players+at+the+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Postsynaptic signaling of new players at the neuromuscular junction.</a> J. Neurocytol. 32 (5-8), 727-741 (2003).</li>
<li>Huang, E. J., Reichardt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophins%3A+roles+in+neuronal+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurotrophins: roles in neuronal development and function.</a> Annu. Rev. Neurosci. 24 (1), 677-736 (2012).</li>
<li>Gonzalez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Trkb+mediated+signaling+induces+disassembly+of+postsynaptic+receptor+clusters+at+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Disruption of Trkb mediated signaling induces disassembly of postsynaptic receptor clusters at neuromuscular junctions.</a> Neuron. 24 (3), 567-583 (1999).</li>
<li>Hirano, S., Kishimoto, Y., Suehiro, A., Kanemaru, S., Ito, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19029860">Regeneration of aged vocal folds: first human case treated with fibroblast growth factor.</a> Laryngoscope. 118 (12), 2254-2259 (2008).</li>
<li>Branski, R. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19374154">Effects of transforming growth factor-beta 1 on human vocal fold fibroblasts.</a> Ann. Oto. Rhinol. Laryngol. 118 (3), 218-226 (2009).</li>
<li>Kishimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19746761">Effects of exogenous hepatocyte growth factor on vocal fold fibroblasts.</a> Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 118 (8), 606-611 (2009).</li>
<li>Belluardo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+junction+disassembly+and+muscle+fatigue+in+mice+lacking+neurotrophin-4%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular junction disassembly and muscle fatigue in mice lacking neurotrophin-4.</a> Mol. Cell. Neurosci. 18 (1), 56-57 (2001).</li>
<li>Johnson, A. M., Ciucci, M. R., Connor, N. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23671289">Vocal training mitigates age-related changes within the vocal mechanisms in the old rat.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 68 (12), 1458-1468 (2013).</li>
<li>Roscow, D. E., Parikh, P., Vivero, R. J., Casiano, R. R., Lundy, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+initial+dosing+of+botulinum+toxin+in+treatment+of+adductor+spasmodic+dysphonia%5BTitle%5D)+AND+%22Oto.+HeadNeck+Surg%22%5BJournal%5D)">Considerations for initial dosing of botulinum toxin in treatment of adductor spasmodic dysphonia.</a> Oto. HeadNeck Surg. 148 (6), 1003-1006 (2013).</li>
<li>Benninger, M. S., Hanick, A., Hicks, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cricothyroid+muscle+botulinum+toxin+injection+to+improve+airway+for+bilateral+recurrent+laryngeal+nerve+paralysis%2C+A+case+series%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Voice%22%5BJournal%5D)">Cricothyroid muscle botulinum toxin injection to improve airway for bilateral recurrent laryngeal nerve paralysis, A case series.</a> J. Voice. 30 (1), 96-99 (2016).</li>
<li>Coppoolse, J. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+study+of+composite+microgels+based+on+hyaluronic+acid+and+gelatin+for+the+reconstruction+of+surgically+injured+rat+vocal+folds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Speech+Lang+Hear+Res%22%5BJournal%5D)">An in vivo study of composite microgels based on hyaluronic acid and gelatin for the reconstruction of surgically injured rat vocal folds.</a> J. Speech Lang Hear Res. 57 (2), S658-S673 (2014).</li>
<li>Hertegård, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-linked+hyaluronan+used+as+augmentation+substance+for+treatment+of+glottal+insufficiency%3A+Safety+aspects+and+vocal+fold+function%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Cross-linked hyaluronan used as augmentation substance for treatment of glottal insufficiency: Safety aspects and vocal fold function.</a> Laryngoscope. 112 (12), 2211-2219 (2002).</li>
<li>Walker, W. F. Jr, Homberger, D. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalker%2C+WF+%22Anatomy+and+dissection+of+the+rat%22">Anatomy and dissection of the rat</a>. , Third Edition, W.H. Freeman and Company. New York. (1997).</li>
<li>Ohno, T., Hirano, S., Rousseau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-associated+changes+in+the+expression+and+deposition+of+vocal+fold+collagen+and+hyaluronan%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Oto.+Rhinol.+Laryngol%22%5BJournal%5D)">Age-associated changes in the expression and deposition of vocal fold collagen and hyaluronan.</a> Ann. Oto. Rhinol. Laryngol. 25 (1), 192-197 (2009).</li>
<li>Stemple, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+aging+rat+laryngeal+muscles+with+endogenous+growth+factor+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rep%22%5BJournal%5D)">Enhancement of aging rat laryngeal muscles with endogenous growth factor treatment.</a> Physiol. Rep. 4 (10), e12798(2016).</li>
<li>McMullen, C. A., Andrade, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+dysfunction+and+altered+metabolic+profile+of+the+aging+rat+thyroarytenoid+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">Contractile dysfunction and altered metabolic profile of the aging rat thyroarytenoid muscle.</a> J. Appl. Phys. 100 (2), 602-608 (2006).</li>
<li>Engle, W. K., Cunningham, G. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14079951">Rapid examination of muscle tissue. An improved trichrome method for fresh-frozen biopsy section.</a> Neurology. (13), 919-923 (1963).</li>
<li>Sheehan, D. C., Hrapchack, B. B. Theory and practice of histotechnology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSheehan%2C+DC+%22Battelle%22">Battelle</a>. , Columbus, OH. (1980).</li>
<li>Kulakowski, S. A., Parker, S. D., Personius, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+TrkB+expression+results+in+precocious+age-like+changes+in+neuromuscular+structure%2C+neurotransmission%2C+and+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">Reduced TrkB expression results in precocious age-like changes in neuromuscular structure, neurotransmission, and muscle function.</a> J. Appl. Phys. 111 (3), 844-852 (2011).</li>
<li>Nishida, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23100084">Age-related change in rat intrinsic laryngeal muscles: analysis of muscle fibers, muscle fiber proteins and subneural apparatuses.</a> Eur Arch Otorhinolaryngol. 270 (3), 975-984 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Larinks kasları yaşlanmanın olumsuz etkilerine karşı savunmasızdır. Önceki çalışmalar, kontraktil fonksi- yon ve miyozin izoform değişikliklerine ek olarak lif boyutu, toplam lif sayısı, rejeneratif yeteneği, NMJ boyutu ve miktarı değişikliklerini içeren yaşlanma laringeal kaslarında değişiklikler olduğunu göstermiştir 4 , 11 , 27 , 30 , 31 . Yaşlanma laringe...

Larinks kasları hızla ve sürekli olarak kasılır ve yaşlanmanın olumsuz etkilerine karşı savunmasızdır. Bu sabit etkinliğin, 65 yaş üzerindeki 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 numaralı kişilerde görülen ses problemlerine veya disfajiye katkıda bulunduğu düşünülmektedir. Birkaç moleküler ve patofizyolojik mekanizma bu yaşla ilişkili disfonksiyona katkıda bulunmaktadır. Bu mekanizmalar laringeal mukozanın yeniden şekillendirilmesi, kas lifi atrofisi veya kaybı, vasküler kıvrımların eğilmesine ve glottis kapanmasının başarısız olmasına neden olan kas lifi rejenerasyonu veya atrofisinin eksikliği içerebilir 8,9,10,11. Şu anda, kanıtlanmış bir tıbbi tedavi yoktur.Bu kaslarda bu yaşa bağlı değişiklikleri kolayca önlemek veya rehabilite etmek. Nöromüsküler bulaşmanın etkinliğinin modülasyonu, nöromotor performansı büyük ölçüde etkiler. Nörotrofinin ailesi, sinir büyüme faktörü (NGF), beyin türevi sinir büyüme faktörü (BDNF), nörotrofin 3 (NTF3) ve NTF4 12 , 13&#39;ü içerir . Nörotrofinlerin sinaptik etkinliği 1 , 4&#39;ü modüle ettiği gösterilmiştir. Hepatosit büyüme faktörü, dönüştürücü büyüme faktörü beta ve fibroblast büyüme faktörü son zamanlarda insanlarda vokal kıvrım skarlanması 15-17 tedavisinde kullanılmıştır. NTF4 ayrıca NMJ etkinliğini düzenler; NTF4&#39;ten yoksun fareler , 11 , 18 , 19 numaralı NMJ&#39;leri parçalamıştır. Bu çalışmalar, tedavi edici etkilere yol açmaktadırLaringeal kas bozukluklarının yaşlanması ve büyüme faktörleri ile denervasyon. Vokal kıvrımların dokularına direkt enjeksiyon tedavileri insanlarda eşi benzeri görülmez. Örneğin, botulinum toksininin lokal enjeksiyonları şu anda spazmodik disfoni ve bilateral tekrarlayan laringeal sinir paralizisi gibi larenks kaslarını etkileyen nörolojik hareket bozuklukları için etkili bir tedavi olarak kullanılmaktadır 20,21. Hyaluronik asit hidrojel, vokal kat korkutma ve glotal yetmezliği tedavi etmek için kullanılan başka bir enjekte edilebilir 22 , 23 . Enjeksiyon larinkoplasti, çeşitli iletişim bozukluklarını tedavi etmek için kullanılabilir 24 . Bu doğrudan enjeksiyon yöntemleri vokal fonksiyonu iyileştirmek ve yaşlanan popülasyonlarda yutmak için söz verir.

<table><tbody><tr><td>Nörotrofin 4</td><td>Pepro Tech</td><td>450-04</td><td>50 &mu'da 200 ng; L</td></tr><tr><td>Alzet Ozmotik Pompa</td><td>DURECT Corporation</td><td>2001D</td><td></td></tr><tr><td>30 & deg; endoskop</td><td>Stoltz</td><td>61029D</td><td></td></tr><tr><td>50 mm 30 ölçer 100-&mu; L şırınga</td><td>Hamilton</td><td>84850 ve 201812</td><td></td></tr><tr><td>salin (sodyum klorür çözeltisi)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>ketamin hidroklorür</td><td>Henry Schein</td><td>56344</td><td></td></tr><tr><td>ksilazin hidroklorür</td><td>Henry Schein</td><td>33198</td><td></td></tr><tr><td>25 G 5/8 iğne</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305901</td><td></td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>Becton-Dickinson</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>oftalmik merhem</td><td>Henry Schein</td><td>8897</td><td></td></tr><tr><td>makası</td><td>Oster</td><td>44-018</td><td></td></tr><tr><td>etanol</td><td>Decon</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>iyot (Betadine)</td><td>Purdue Pharma LP</td><td></td><td></td>606404</tr><tr><td>ısıtma yastığı</td><td>Sunbeam</td><td>731-5</td><td></td></tr><tr><td>5-0 naylon sütür ipliği</td><td>AD Cerrahi</td><td>PMN-518R6</td><td></td></tr><tr><td>kıvrım kanama</td><td>durdurucu Güzel Bilim Araçları</td><td>13005-14</td><td></td></tr><tr><td>hassas sütür bağlama forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11063-07</td><td></td></tr><tr><td>meloksikam</td><td>Henry Schein</td><td>49756</td><td></td></tr><tr><td>carprofen</td><td>Merritt Veteriner Malzemeleri</td><td>148700</td><td></td></tr><tr><td>antibiyotik merhem</td><td>Henry Schein</td><td>57110</td><td></td></tr><tr><td>asepromizin Aceproject</td><td>Henry Schein</td><td>3845</td><td></td></tr><tr><td>izofluran İzotezi</td><td>Henry Schein</td><td>50033</td><td></td></tr><tr><td>indüksiyon kutusu (anestezi kutusu)</td><td>Harvard Aparatı</td><td>50-0116</td><td></td></tr><tr><td>oksijen sıkıştırılmış tank</td><td>Scott Brüt</td><td>UN1072</td><td></td></tr><tr><td>pleksiglas platform</td><td>Small Parts Inc (Amazon)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>kauçuk uçlu forseps</td><td>İnce bilim araçları kauçuk</td><td>11075-00</td><td></td></tr><tr><td>Lowe's</td><td>42518</td><td></td>plastik spektrumun<td>üzerindeki forseps için sıvı kauçuk</td></tr><tr><td>(BD şırınga boyuna kesilmiş)</td> <td>Becton-Dickinson</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>halojen ışık kaynağı gergedan stroboskop</td><td>Kay-Pentax</td><td>RLS 9100 B</td><td></td></tr><tr><td>video kaydedici</td><td>Kay-Pentax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sükroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389-500G</td><td></td></tr><tr><td>fosfat tamponlu salin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>kriyostat Mictotom HM525</td><td>Thermo Scientific</td><td>HM 525</td><td></td></tr><tr><td>Solungaç 1 hematoksilen</td><td>VWR</td><td>10143-142</td><td></td></tr> Tavşan <tr><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0819'da</td><td></td>üretilen Shandon eozin-Y alkolik Thermo Fisher Scientific 6766007<td>anti-sodyum kanalı Nav1.5 antikoru</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> Sigma-Aldrich T7471 alfa-bungarotoksin alexa fluor 488 konjuge Thermo Fisher Scientific B-13422 Küçük hayvan anestezisi <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> makine</td><td>Smiths Medikal</td><td>CDS 9000</td><td></td></tr></tbody></table>

osmotik pompalar veya doğrudan kas enjeksiyonu kullanılarak subkutanöz neurotrophin 4 İnfüzyonu, yaşlanan farenin larinks kaslarını arttırır

Subcutaneous Neurotrophin 4 Infusion Using Osmotic Pumps or Direct Muscular Injection Enhances Aging Rat Laryngeal Muscles

Yaşlılarda laringeal işlev bozukluğu, ses bozukluklarından disfajiye ve hava yolu koruyucu reflekslerde azalmaya neden olan önemli bir sakatlık nedenidir. Yaşa bağlı laringeal kas disfonksiyonunu hedef alan az sayıda, varsa, terapiler mevcuttur. Nörotrofinler, kas innervasyonu ve nöromüsküler kavşakların (NMJ&#39;lerin) farklılaşmasına katılırlar. Nörotrofinlerin nörotransmitter salınımını arttırarak nöromüsküler iletimi arttırdığı düşünülmektedir. Nöromusküler kavşaklar (NMJ&#39;ler) fonksiyonel denervasyon bulguları ile sıçan laringeal kas yaşlanmasında daha küçük ve daha az miktarda bulunur. İnsanın laringeal kas yaşlanmasında fonksiyon geliştirmek için NTF4&#39;ün ileride klinik kullanıma yönelik terapötik olarak etkilerini araştırdık. Burada, sıçan laringeal kasının yaşlanması NTF4 uygulamasına tepki olarak yeniden şekillenme yeteneğini araştırmak için sistemik uygulama ve doğrudan NTF4 enjeksiyonu için ayrıntılı protokolü sunuyoruz. Bu yöntemde, sıçanlar NTF4&#39;ü ya sistemik olarak oSmotik pompa veya vokal kıvrımlar yoluyla doğrudan enjeksiyon yoluyla uygulanabilir. Larinks kasları ayrıldı ve morfolojinin histolojik incelenmesi ve yaşla ilişkili denervasyon için kullanıldı.

Sıçanlar, 2 hafta ozmotik pompa infüzyonundan sonra veya NTF4&#39;ün doğrudan enjeksiyonundan 1 hafta sonra ötenazi yapıldı. Larenjler hasat edildi, kriyoprotektan (% 30 sükroz ve% 70 fosfat tamponlu salin) içine yerleştirildi ve daha sonra bir kriyostat ile 10 um&#39;lik genişlikte kesit olarak kesildi. Yaşlanma laringeal kasları, NTF4 25&#39;in uygulanmasından etkilenir. Genç ve yaşlı sıçanın yanısıra, tiroidenoid kasların enjekte edilen ve enjekte edilmeyen tar...

Burada, sistemik olarak ve direkt olarak sıçan yaşlanmasına bağlı laringeal kasların yeniden şekillendirilmesi için nevrotropin 4&#39;ü (NTF4) tanımlamak için bir protokol sunuyoruz.

Osmotik Pompalar veya Doğrudan Kas Enjeksiyonu Kullanılarak Subkutanöz Neurotrophin 4 İnfüzyonu, Yaşlanan Farenin Larinks Kaslarını Arttırır

Laryngeal dysfunction in the elderly is a major cause of disability, from voice disorders to dysphagia and loss of airway protective reflexes. Few, if ...

Bu protokolün genel amacı, yaşlı sıçan laringeal kas yeniden şekillenmesini indüklemek için Neurotrophin 4 iletimini sağlamaktır. Bu yöntem, laringeal kas fonksiyonuyla ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Örneğin, yaşa bağlı kas atrofisi vokal fonksiyonu iyileştirmek için geri çevrilebilir mi.Bu tekniğin temel avantajı, ses yaşlanmasının insan modellerine kolayca uyarlanabilmesidir. Ses fonksiyonlarını iyileştirmek için gerekli olan çözeltileri enjekte etmek amacıyla, kulak burun boğaz uzmanlarının insanlarda yaygın olarak kullandığı enjeksiyon yöntemlerini kullanabiliriz. Genellikle bu yöntemde yeni olan kişiler, implantasyon ve enjeksiyon prosedürlerinin hassasiyeti nedeniyle zorluk yaşayacaklardır.Prosedürü, her ikisi de Kentucky Üniversitesi'nden olan, fizyoloji departmanı teknisyeni Tanya Seward ve iletişim bilimleri ve bozuklukları doçenti Richard Andreatta gerçekleştirecektir. Pompayı implante etmek için, öncelikle sıçanı aseptik bir cerrahi alanda ventral pozisyonda yerleştirin. Sırt ve boyun bölgesini iyotla ıslatın.Ardından, boynun dorsal kısmını %70 etanol ile temizleyin. Sonrasında hayvanı 34 °C'lik bir ısıtma pedine yerleştirin ve pre-anestezik ilaç uygulamasını yapın. Aseptik olarak hazırlanan osmotik pompalara 50 µL Neurotrophin 4 doldurun.Ardından, skapula arasındaki boşluğun hemen posteriorundaki deriden iki santimetre genişliğinde, yatay bir insizyon yapmak için bir bistüri kullanın. İnsizyonun posterior kenarını pensle kaldırın ve hemostat uçlarını nazikçe insizyonun posterioruna yerleştirin. Uç insizyonun yaklaşık iki santimetre posterioruna ulaştığında, insizyon bölgesinin subkütanesinde boş bir cep oluşturmak için hemostat kollarını açın.Pompayı, tedavi ile cep insizyon bölgesinin iyileşmesi arasındaki diğer tüm etkileşimler minimize edilecek şekilde, iletim portalının ucunu yönlendirerek cebe yerleştirin. Ardından, pompa yerleştirme insizyonunu kapatmak için 5-0 naylon sütür ipi, hemostat ve forseps kullanın ve hayvan tamamen uyanık ve hareketli hale gelene kadar izleyin. Enjeksiyondan 30 dakika önce, aseptik olarak hazırlanmış 50 µL'lik Neurotrophin veya salin dozlarını 25 °C'lik bir su banyosunda ısıtın.İşlemler hazır olduğunda, anestezi altındaki bir sıçanı pleksiglas bir platform üzerinde sırtüstü pozisyonda yatırın ve hayvanı üst ön kesici dişlerinden asmak için kılavuz teli kullanın. Ardından, 30 gauge, 50 mm, 100 µL'lik bir şırıngayı 1,9 mm'lik 30 derecelik bir sinüs endoskopuna takın. Şırınga düzeneğini, endoskopun dış duvarındaki bir sabitleyiciye monte edin.Şırınga sabitlendiğinde, tedaviyi yükleyin ve endoskop düzeneğini kameraya bağlayın. Ardından, dili yana doğru açmak için kauçuk uçlu forseps kullanın ve ağız açıklığını korumak için plastik bir spekulum yerleştirin. Ve endoskopa yönelik halojen ışık kaynağını açın.Video kaydedici açıkken, cam uçta yoğuşma oluşumunu en aza indirmek için endoskobun distal ucunu birkaç saniye boyunca ılık suya daldırın. Ardından, monitörden gelen görsel geri bildirimi rehber olarak kullanarak iğneyi sol ses teli bölgesine dikkatlice yerleştirin. Ses teli tamamen görünür olduğunda, iğneyi ses telinin beyaz, medial kenarının yan tarafındaki sol tiroid arytenoid bölgesine enjekte edin.Ve tedaviyi uygulamak için pistonu aşağı bastırın. Eğer epiglot kapalı kalmışsa ve laringisin net görülmesini engelliyorsa, dokuyu nazikçe açmak için şırınga ucuyla yukarı doğru süpürme hareketi yapın. Ardından iğneyi geri çekin ve hayvan tam anestezi altında yatana kadar ısıtma pedli ev kafesine yerleştirin.Genellikle, Neurotrophin 4 ile tedavi edilen hayvanlarda yaşla birlikte fiber boyutunda bir değişiklik gözlemlenir. Yaşlı Neurotrophin ile tedavi edilen hayvanlarda daha düşük düzeyde fibrozis ve fiber üretimi de gözlemlenir. Öte yandan, nöromüsküler kavşak miktarı artmıştır.Osmotik pompa ve enjeksiyon prosedürü, uygun şekilde uygulandıkları takdirde, uzmanlaşıldığında her biri bir saat içinde tamamlanabilir. Bu prosedür uygulanırken, laringeal bölge çevresindeki çizilmeleri ve yaralanmaları önlemek için iğneyle yavaş ve nazik hareket edilmesinin önemli olduğunu hatırlamak gerekir. Bu yöntem, yaşlanma sürecinde ses telleri fonksiyonunun mekanizmaları hakkında bilgi sağlayabildiği gibi, farenks ve yutma ile ilgili bozukluklar gibi diğer sistemlere de uygulanabilir.

subcutaneous-neurotrophin-4-infusion-using-osmotic-pumps-or-direct

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Merkezi sinir sistemi içine yenidoğan farelerin beyin (intraserebroventriküler) ve (intravenöz) 2) sistemik tedavi ajanları tanıtmak içine 1): Bu makale, enjeksiyon iki çok farklı yöntemler göstermektedir.

Fare intraserebroventriküler sayesinde Terapötik Ajanlar teslimi (ICV) ve intravenöz (IV) Enjeksiyon

Levator auris longus (LAL) genç erişkin farelerin kas muskarinik sinyalizasyon inhibitörleri tekrarlanan yönetim ve wholemounts nöromüsküler kavşak sonraki immün (NMJs) için prosedürleri açıklar. LAL kas ifşa ettiği için benzersiz avantajları vardır.

Subkutan Muskarinik Antagonistleri Yönetim ve Farelerde levator Auris longus&#39;un Triple-immün

Kaynak: Andreatta, RD ve diğerleri, Ozmotik Pompalar veya Doğrudan Kas Enjeksiyonu Kullanılarak Deri Altı Nörotrofin 4 İnfüzyonu Yaşlanma Sıçan Laringeal Kaslarını Geliştirir. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, yaşlanmaya bağlı denervasyon ve azalmış nöromüsküler kavşaklardan etkilenen laringeal kas fonksiyonunu eski haline getirmek için yaşlı bir sıçan modelinde nörotrofin 4 (NTF4) infüzyonunu göstermektedir. NTF4, sinir rejenerasyonunu tetikler ve nöromüsküler kavşak oluşumunu teşvik ederek...

Yaşlı Bir Sıçanda Laringeal Sinir Rejenerasyonu için Nörotrofin 4 İnfüzyonu

Koku ensheathing hücreleri (OECS), birincil koku nöronların büyümesine izin vermek nöral tepe hücreleri bulunmaktadır. Bu özel özellik, hücresel nakli için de kullanılabilir. Burada bir gırtlak sinir yaralanması modelinde OECS kullanımına göre hücre transplantasyonu bir model mevcut.

Periferik Sinir Hasarı Sonrası Fonksiyonel Kurtarma Değerlendirmesinde Koku Ensheathing Hücre Nakli

Moleküllerin intramüsküler alımının ve karşılık gelen motor nöronlara retrograd taşınmasının etkinliği, enjeksiyon bölgelerinin motor uç plakalarına (MEP'ler) göre konumuna bağlıdır. Burada, izleyicilerin motor nöronlara retrograd taşınmasını optimize etmek için MEP'lerin iskelet kaslarına nasıl yerleştirileceğini açıklıyoruz.

Motor End Plates boyunca İntramüsküler Enjeksiyonlar: Doğrudan Motor Nöronlar içine Servis Tarayıcıları Bir Minimal İnvaziv Yaklaşım

Ozmotik pompalar deri altından implantasyonu bileşiklerinin uzun süreli ve tutarlı bir teslimat için uygun bir yaklaşım sağlar. Bu yaklaşım, farelerde abdominal ve torakal aort anevrizması, hem incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır.

Ozmotik kullanarak Subkutan Anjiotensin II İnfüzyon Farelerde İndükler Aort anevrizmaları Pompalar

Burada, otolog kas kaynaklı kök hücre tekrarlayan gırtlak sinir bir mesafede bir elektriksel sinir Stimülatörü yardımıyla enjekte için bir protokol mevcut. Bu roman tekniği at tekrarlayan gırtlak nöropati tedavisinde yararlı olabilir.

Otolog kök hücre yakınındaki at sol tekrarlayan gırtlak sinir sinir Stimülatörü güdümlü enjeksiyon

Burada uyarılmış ve spontan elektromiyografik potansiyellerin in vivo kronolojik kayıt için implante edilebilir bir sistemin üretimi için bir protokol sunulmaktadır. Sistem sinir yaralanması sonrasında laringeal kasların reinnervasyon araştırılması için uygulanır.

Vivo Elektromiyografide Kronik İçin İmplante Edilebilir Bir Sistem

Bu protokol, histokimyasal nöromüsküler çalışma için sıçan vokal kıvrımları hazırlamak için kullanılan yöntemleri açıklar.

Nöromüsküler Analizler için Sıçan Vokal Kıvrımının Hazırlanması

Burada, kraniyal levator auris longus (LAL) kasının in vivo elektroporasyonu ve denervasyonunu birleştiren bir protokol sunuyoruz. Bu prosedür, kas kaynaklı proteinlerin nöromüsküler sinapsın rejenerasyonundaki potansiyel rolünün incelenmesini sağlar.

Kranial Levator Auris Longus İskelet Kasının Kombine İn Vivo Elektroporasyonu ve Kısa Süreli Reinnervasyonu

Sıçanlarda doğrudan vagus siniri enjeksiyonu için bir protokol sunuyoruz ve enjeksiyon sonrası komplikasyonlar olmadan doğrudan sinir içine ilaç verilmesini sağlıyoruz. Bu yöntem, otonom sinir sistemi manipülasyonunu içeren klinik öncesi nörolojik çalışmalar için geçerlidir. Sıçanlarda ve diğer türlerde diğer sinirler için gerekli modifikasyonlarla doğrudan sinir enjeksiyonu için kullanılabilir.

Sıçanlar İçin Doğrudan Vagus Sinir Enjeksiyon Protokolü

Keşfedin yaşlanan sıçanlarda larenks kaslarını yeniden şekillendirmek için Neurotrophin 4 enjeksiyon protokolünü. Bu yöntem, ses fonksiyonunu iyileştirmek ve yaşlanmaya bağlı kas atrofisini tersine çevirmek için klinik uygulamalara kolayca aktarılabilir.

Osmotik Pompalar veya Doğrudan Kas Enjeksiyonu Kullanılarak Subkutanöz Neurotrophin 4 İnfüzyonu, Yaşlanan Farenin Larinks Kaslarını Arttırır (Video) | JoVE Journal

Osmotik Pompalar veya Doğrudan Kas Enjeksiyonu Kullanılarak Subkutanöz Neurotrophin 4 İnfüzyonu, Yaşlanan Farenin Larinks Kaslarını Arttırır

Daha fazla video keşfet